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骨髓源性肝干细胞的确认及定向分化的实验研究
目的确定骨髓源性肝干细胞的表面标记,体外培养诱导其分化为肝细胞. 方法采用流式细胞仪检测多种大鼠肝损伤模型骨髓中干细胞标记的细胞群体的数量变化,寻找可能的肝干细胞,免疫磁珠分离各骨髓干细胞标记的细胞群体,进行体外培养诱导分化,观察细胞形态的变化,免疫组化技术检测清蛋白(白蛋白),AFP,CK8/18等肝细胞标记的表达. 结果各模型大鼠骨髓内β2微球蛋白阴性(β2m-)细胞显著增高,体外培养经诱导后呈多角形细胞表现,清蛋白,AFP,CK8/18表达阳性.其他干细胞类型细胞数量变化小,体外培养未见肝细胞样变化. 结论β2m-细胞的数量随肝损伤而变化,在体外具有向肝细胞分化的能力,可能成为肝干细胞的标记物.
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用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU-GM和HPP-CFC
利用大于10 kD组分的小鼠骨髓内皮细胞条件培养液(mBMEC-CM)作刺激物体外琼脂培养CFU-GM,与rmGM-CSF合用培养HPP-CFC获得成功.就培养CFU-GM和HPP-CFC而言,用细胞因子作刺激物与并用大于10 kD组分的mBMEC-CM作刺激物相比较,以后者的CFU-GM及HPP-CFC产率高.
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人类K-562细胞系实验条件的稳定性研究
对人类CML-K-562细胞系生长状态的测定、集落培养、细胞形态学进行观察及染色体分析.结果表明:所用的K-562细胞系与建系时的报道基本一致,证实本室所用的K562细胞生长状态和有关实验条件均较稳定.
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人肝癌细胞系BEL-7402的放射敏感性
目的评估人肝癌细胞系BEL-7402的放射敏感性.方法体外培养人肝癌细胞系BEL-7402,应用集落形成法测定经0～10 Gy 6 MV X线照射后细胞的存活率并计算细胞放射敏感性参数.结果BEL-7402的D0为1.6 Gy,Dq为1.3Gy,n为24,SF2为(0.63±0.05)Gy.结论BEL-7402具有较高的放射敏感性.
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加热对骨肉瘤细胞系OS-9901和SOSP-M3的体外灭活作用
目的探讨两株不同转移性成骨肉瘤细胞系的体外灭活佳温度与时间. 方法不同温度不同时间对OS-9901和SOSP-M3细胞系加热作用后,用MTT法测定琥珀酸脱氢酶(SDH)活性以及用肿瘤干细胞集落形成法测定集落形成能力. 结果①两株不同转移性的成骨肉瘤细胞系对热的敏感性是一致的. ② SDH的活性随温度升高和时间延长而降低. ③随着加热温度升高及加热时间延长肿瘤干细胞的集落形成能力不断下降,45℃ 60 min或46℃ 30 min以上时细胞基本无集落形成能力. 结论 50℃ 30 min可以作为成骨肉瘤的热疗温度、时间.
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CD47在初诊正常核型急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义
目的 探讨CD47在初诊正常核型急性髓系白血病(AML)患者中的表达水平及临床意义.方法 选取137例初诊正常核型AML患者及3名健康志愿者.采用流式细胞术及实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)对健康志愿者骨髓造血干细胞(HSC)和造血祖细胞(MPP)及AML患者骨髓单个核细胞(MNC)和白血病干细胞(LSC,Lin-CD34+CD38-CD90-)的CD47表达水平进行检测;采用基因组分析平台检测患者FMS样酪氨酸激酶3内部串联重复(FLT3-ITD).采用超高速流式分选系统分选CD34+CD38-CD47lo和CD34+CD38-CD47hi细胞.将两组细胞均用MethoCult H4445培养液培养接种于含有琼脂糖的甲基纤维素板,12 d后计数MPP集落形成单位(CFU),同时将1×105个CD34+CD38-CD47lo和CD34+CD38-CD47hi细胞分别移植到经280 cGy照射的NSG(NOD-SCID IL-2Rγnull)小鼠,8周后处死小鼠,流式细胞术检测人CD45+细胞比例.结果 CD47的表达在初诊正常核型AML患者中高于健康志愿者,CD47在AML各法、美、英协作组(FAB)亚型中均有表达,相对表达量比较差异无统计学意义(F=0.545,P>0.05).137例患者中CD34+CD38-CD47hi 37例,其中17例(46%)FLT3-ITD阴性,20例(54%)为FLT3-ITD阳性;CD34+CD38-CD47lo的患者100例,其中63例(63%)FLT3-ITD阴性,37例(37%)FLT3-ITD阳性,CD34+CD38-CD47hi与CD34+CD38-CD47lo患者相比较,FLT3-ITD阳性率差异无统计学意义(χ2=3.79,P>0.05).将FACS分选的CD34+CD38-CD47lo和CD34+CD38-CD47hi接种于含有琼脂糖的甲基纤维素板12 d后,仅CD34+CD38-CD47lo细胞可以形成CFU.NSG小鼠移植实验显示CD34+CD38-CD47lo细胞可重建造血,CD34+CD38-CD47hi植入失败.结论CD34+CD38-CD47hi富集LSC,可作为AML患者化疗后微小残留病的监测指标.
