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肝细胞癌患者肿瘤循环DNA的变异检测及其临床意义
肿瘤循环DNA的变异检测可分为定量和定性两种:前者主要检测循环DNA(血清或血浆)的总量,后者主要检测血清或血浆中肿瘤特异性基因的改变,如基因突变、抑癌基因的甲基化及微卫星变异等.两者均可反映肿瘤的存在和严重程度.本文现就肝细胞癌患者肿瘤循环DNA的变异检测及有关临床意义作一简要综述.
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结直肠癌TNM分期与循环DNA水平关系的临床研究
目的 探讨结直肠癌TNM分期与循环DNA水平的关系. 方法 选择2010年3月～2011年9月42例结直肠癌患者,术前检测循环DNA和癌胚抗原(CEA)水平,术后病理确定TNM分期；同期检测14例健康人循环DNA水平作为对照组. 结果 健康人循环DNA水平(22.14±16.16) μg/L,结直肠癌循环DNA水平:Ⅰ期(79.85±53.08) μg/L,Ⅱ期(77.21±40.46)μg/L,Ⅲ期(85.66±39.87) μg/L,Ⅳ期(145.52±51.72)μg/L.结直肠癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期循环DNA水平明显高于健康人(P＜0.05)；结直肠癌Ⅳ期明显高于其他各期,差异有显著性(P＜0.05)；Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期之间循环DNA水平差异无显著性(P＞0.05)；循环DNA水平在不同年龄段、性别、肿瘤部位间差异无显著性(P＞0.05).CEA与循环DNA水平之间无直线相关关系(r =0.153,P=0.333). 结论 循环DNA水平检测具有微创、标本获取容易、可重复检测的优点,它有可能在结直肠癌早期诊断方面成为有价值的肿瘤标志物.
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食管鳞癌患者血清RUNX3基因甲基化检测及临床意义
目的 检测食管鳞癌患者血清中RUNX3基因启动子区域甲基化状态,探讨用于食管鳞癌早期诊断和预后评估的临床意义.方法 留取70例食管鳞癌,20例食管良性病变及10例健康志愿者血清标本,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)分析RUNX3基因启动子区域甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的相关性.结果 70例食管鳞癌患者血清RUNX3基因启动子区域异常甲基化36例,检出率为51.4%,20例食管良性病变患者中有2例为不完全甲基化(10%),而10例健康志愿者中检出率为0,差异有统计学意义(P<0.001);RUNX3基因启动子甲基化与患者临床分期和淋巴结转移相关.结论 RUNX3基因启动子甲基化在食管鳞癌患者血清中有着较高的检出率,可望成为食管鳞癌早期诊断和预后评估的分子标志物.
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循环中的核酸作为肺癌检查新手段的研究进展
循环核酸是指存在于血液(血浆或血清)中的细胞外游离DNA和RNA.血液循环联系了全身各个器宫,因此,在物理检查尚不能发现肺癌的时候,血液检测可发挥意想不到的作用.和健康人相比,肿瘤患者循环DNA水平相对较高,虽然二者之间也存在交集[1].PCR技术可以检测到血浆中各个肿瘤特异性基因序列的改变.这些改变包括基因突变,微卫星改变,肿瘤相关基因启动子区DNA.
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qPCR-HRM法检测NSCLC血清循环EGFR突变
目的 探讨利用qPCR-HRM法检测血清循环EGFR突变的可能性并与组织检测结果比较.方法 收集北京协和医院胸外科2010年6月至2011年7月收治的42例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的石蜡标本及术前静脉血样,用qPCR-HRM法分别检测其EGFR突变情况.结果 42例血样中EGFR突变率35.7％ (15/42),肿瘤组织则为33.3％ (14/42).统计表明血浆和组织中的EGFR突变的检测结果未见差别(P＞0.05).k值为0.842 (P＜0.001).结论 使用qPCR-HRM法检测NSCLC患者血清与肿瘤组织的EGFR突变具有极好的一致性.
关键词： 肺癌 循环DNA 高分辨率熔解曲线分析 表皮生长因子受体 -
循环DNA在胰腺癌临床应用中的研究进展
目的 血液循环DNA(cell-free DNA,cfDNA)是循环核酸中的一种,现已证实肿瘤患者外周血中cfDNA的含量增高且具有肿瘤细胞DNA的特征.本研究探讨cfDNA在胰腺肿瘤中的研究进展及其在临床中的应用.方法 利用PubMed、Medline等全文数据库,以“循环DNA、胰腺癌”为关键词,检索2011 01 2016 08相关文献.纳入标准:(1) cfDNA监测与胰腺癌;(2)胰腺癌cfDNA临床应用.根据纳入标准,符合分析的文献42篇.结果 胰腺癌cfDNA检测作为一种微创、较高特异度的“液体活检”技术,不仅提供了肿瘤特异性的遗传信息的变化,还在临床应用方面有显著意义.可以通过检测胰腺癌患者的cfDNA对疾病进行早期辅助诊断、近期疗效的评价、靶向用药和预后评估等.虽然在标本的处理和提取方面尚需要规范,检测灵敏性有待提高,但希望随着创新性检测技术的发展、检测成本的降低和科研人员的进一步研究,能为疾病的早期诊断和患者的预后提供实质性的帮助.结论 cfDNA在胰腺癌的辅助诊断、评价疗效和预后评估方面有着重要的临床意义和广阔的应用前景.
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血液循环DNA与肿瘤基因突变检测研究现状
目的 总结血液循环DNA(cell-free,efDNA)的研究进展及其在肿瘤基因突变检测方面的应用情况.方法 利用PubMed、Medline和CNKI等全文数据库,以“循环DNA,基因突变”为关键词,检索2010-2015年的相关文献.纳入标准:1)cfDNA基因突变检测;2)cfDNA检测与肿瘤.根据纳入标准,符合分析的文献43篇.结果 cfDNA基因突变检测作为一项非侵入式检测肿瘤的“液体活检”技术,相对于组织活检技术简单、易行,更容易被患者接受.目前,cfDNA基因突变的检测方法有基于聚合酶链式反应的技术和与下一代测序技术相关的方法.其中BEAMing技术和数字PCR技术有较高的灵敏度.cfDNA基因突变检测在临床应用广泛,可以通过cfDNA基因突变检测对肿瘤进行诊断,还在肿瘤的指导治疗和预后监测等方面有显著意义.但因其检测过程尚未被标准化,标本分析前处理、DNA提取和检测方法等各方面都会导致结果偏差,所以仍需要进行大量研究,使其尽快服务于临床.结论 cfDNA用于肿瘤基因突变检测在临床应用方面有重要价值,但需要规范检测方法和检测流程,提高突变检测的敏感性和特异性.
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非小细胞肺癌患者血清EGFR基因突变循环DNA检测
目的:探讨循环DNA测定表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变的可行性；旨在提供更方便、快捷、无创的分子生物检测手段,指导晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者靶向治疗.方法:收集石河子大学医学院第一附属医院2011-09-21-2012-09-30接受靶向治疗(吉非替尼或厄洛替尼)的48例晚期NSCLC患者血清及相应石蜡组织标本DNA,采用直接测序法检测EGFR基因19和21外显子的突变情况,应用SPSS17.0软件进行统计学分析.结果:48例患者循环DNA中EGFR基因突变检出率为14.583％(7/48),且与组织DNA检测出EGFR突变类型一致,即19外显子突变型为19 DelK746～A750、19 DelK745～E749和19 DelK745～A750; 21外显子突变类型分别为21 L858R和21 L861Q. EGFR突变主要发生在女性及不吸烟的患者中;且EGFR基因突变型者PFS明显优于野生型患者,x2 =11.287,P=0.001.以组织DNA检测为准,循环DNA中EGFR基因突变检测的特异性为97％,并且与组织DNA检测EGFR基因突变具有一定的一致性,Kappa=0.433.结论:血清循环DNA可用于EGFR基因突变检测,为肺癌靶向治疗提供实验依据.
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肿瘤患者循环DNA的定量研究
目的建立纳克水平DNA定量方法,并探讨循环DNA检测在肿瘤诊断中的应用价值.方法对483例恶性肿瘤患者以微量基因组抽提试剂盒抽提血清DNA,以SYBR green Ⅰ荧光染色法行DNA定量;BRCA1(D17S579、D17S855)和p53(TP53,D17S786)微卫星位点的杂合性丢失检测采用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染的方法进行.同时与150例健康人血清的检测结果进行对照.结果 SYBR green Ⅰ荧光染色可精确定量2～10ngDNA.483例恶性肿瘤患者血清DNA平均水平为(81.3±98.3)ng/ml,150例健康人血清DNA平均水平为(22.2±13.4)ng/ml,两者间差异有显著性(P＜0.001);50例良性肿瘤患者血清DNA未见显著升高.在33例血清DNA含量增高的卵巢癌患者中,27例(81.8%)能测及BRCA1和p53微卫星标记中至少1个位点的杂合性丢失.结论循环DNA的定量有可能成为一种新的恶性肿瘤标志物.
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肝细胞癌患者血浆循环DNA微卫星变异的研究
目的探讨肝细胞癌(HCC)患者血浆循环DNA微卫星变异的特点及其与肿瘤组织的一致性.方法选择位于染色体8p上3个具有高度多态性的微卫星标记,对62例肝细胞癌血浆、组织标本的DNA进行了杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定(MSI)检测.结果在联合检测的3个微卫星位点上,39例发生了LOH的组织标本其对应的血浆标本中有33例在相应位点检测到了相同的改变,一致性为84.6%;在19例MSI阳性的组织标本中,其对应的血浆中有14例检测到了相同的MSI,一致性为73.7%;62例HCC血浆DNA在至少一个位点的LOH阳性率(58.1%,36/62)明显高于MSI(29.0%,18/62)(P＜0.01);HCC组织、血浆DNA在D8S277位点的MSI阳性率皆明显高于其他两个位点(P均＜0.05).结论HCC血浆循环DNA与肿瘤组织微卫星变异有较高的一致性变化,血浆循环DNA可以用来反映肿瘤组织的微卫星变异;LOH方式在HCC的发生发展过程中起着重要作用,MSI的作用次之;D8S277是HCC中对MSI敏感的一个检测位点.
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外周血循环DNA在卵巢癌中研究进展
循环DNA是游离于人体细胞外的DNA ，经研究与多种疾病有着密切的关系，本文对近年来游离循环DNA在卵巢癌中研究进展做了简单的回顾。
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急性脑梗死患者血浆循环DNA测定的意义
目的 探讨循环DNA在急性脑梗死患者中的应用价值.方法 采集20例急性脑梗死患者(研究组)发病后24 h内静脉血2 ml,采用双重荧光定量PCR技术检测血浆DNA水平,同时检测血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP).采集同期20例健康体检者静脉血为对照组.结果 治疗前研究组血浆循环DNA水平显著高于对照组(t=5.237,P=0.000),研究组hs-CRP显著高于对照组(t=4.890,P=0.000);治疗后循环DNA显著下降(t=4.461,P=0.000);hs-CRP治疗前后差异有统计学意义(t=3.964,P=0.000).脑梗死患者血浆循环DNA水平与其血清hs-CRP水平呈正相关(r=0.613,P=0.022).结论 循环DNA可作为反映脑梗死后脑组织细胞出现损伤及严重程度的一项指标.
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血浆循环DNA水平与颅脑损伤严重程度的关系
目的 探讨脑外伤患者的严重程度与血浆循环DNA水平的关系.方法 40例颅脑损伤患者按照格拉斯哥昏迷分级(GCS)评分分为轻度12例、中度17例和重度11例,分别采集其受伤48 h内静脉血和30例正常人静脉血各2 ml,提取血浆循环DNA,采用双重荧光定量PCR技术检测血浆DNA水平.结果 颅脑损伤组显著高于对照组且颅脑损伤轻度组、中度组和重度组之间差异有统计学意义(P<0.05);血浆循环DNA水平与GCS评分呈负相关(r=-0.887,P=0.036).结论 血浆循环DNA水平不但对于诊断颅脑损伤有一定诊断价值,而且与其损伤严重程度显著相关.
关键词： 循环DNA 颅脑损伤 格拉斯哥昏迷分级评分 -
卵巢上皮性癌患者循环DNA的定量研究
目的通过对患者血浆游离DNA的定量检测,探索一种可用于卵巢上皮性癌早期诊断和疗效监控的新方法. 方法 2001年4月至2003年2月上海市肿瘤研究所等单位以微量基因组抽提试剂盒抽提血浆DNA,以SYBR Green I斑点荧光染色法分别检测93例卵巢上皮性癌、25例卵巢良性肿瘤及100例健康对照标本血浆游离DNA含量.结果卵巢上皮性癌血浆游离DNA质量浓度为 (82.1±60.6)μg/L,卵巢良性肿瘤为 (21.1±17.6) μg/L,健康对照组为 (14.9±8.2)μg/L,卵巢上皮性癌患者血浆游离DNA质量浓度明显高于正常对照及卵巢良性肿瘤,差异有显著性(P<0.001).血浆游离DNA质量浓度与病理类型及组织学分级无关,但与临床分期相关,IV期癌较其他三期升高明显(P＝0.016).在I期卵巢上皮性癌患者中,血浆游离DNA质量浓度已达 (68.8 ± 46.1)μg/L,显著高于卵巢良性肿瘤和健康对照人员(P<0.001).结论卵巢上皮性癌游离DNA定量检测有可能成为一种新的卵巢上皮性癌血浆标志物检测方法.
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血浆循环DNA定量检测在乳腺癌患者诊断与预后中的意义
目的:建立一种荧光定量PCR方法用于血浆循环DNA定量,并讨论血浆循环DNA检测在乳腺癌诊断及预后中的意义.方法:以61例乳腺癌患者、33例乳腺良性病变患者和25例健康对照者血浆为材料,用Qiagen纯化柱提取血浆DNA,采用荧光定量PCR技术(SYBR Green Ⅰ染料法)对血浆DNA水平进行检测,DNA水平用临界域值时的循环数(Ct值)表示,并应用ROC曲线分析血浆循环DNA定量在乳腺癌诊断中的价值.结果:乳腺癌血浆循环DNA水平(27.71±1.41)显著高于健康对照(30.37±1.32)和良性对照(29.7±1.12)(P＜0.001),ROC曲线下面积分别为0.921和0.837.循环DNA水平与分期、淋巴结转移、肿瘤大小、年龄及雌激素受体状况均无相关性(P＞0.05).术后乳腺癌患者血浆循环DNA水平显著下降,其中复发患者血浆循环DNA水平显著高于未复发者.结论:血浆循环DNA水平对于乳腺癌诊断和预后均具有一定临床意义.
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HTERT DNA血浆检测诊断HCC的临床价值探究
检测血浆人端粒酶逆转录酶DNA在肝细胞癌(HCC)患者体内的存在水平,并具体分析Htert DNA在临床方面的重要意义.
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儿童白血病患者血浆循环DNA定量分析
目的:通过对儿童白血病患者血浆循环DNA定量检测,分析血浆循环DNA含量用于儿童白血病诊断的价值.方法:用血液微量DNA抽提试剂盒提取血浆循环DNA,以SYBR GreenI荧光染色法分别检测46例儿童急性白血病患者、20例健康对照标本血浆循环DNA含量;利用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆循环DNA对儿童白血痛的诊断价值.结果:儿童白血病患者血浆循环DNA含量为(30.04±15.13)ng/mL,高于对照组(12.22±7.10)ng/mL,二者差异有统计学意义(P＜0.05);循环DNA含量16.31 ng/mL为诊断儿童白血病佳临界值,敏感性和特异度分别为86.96%和75.00%,ROC曲线下面积(AUC)为0.879.结论:血浆循环DNA定量检测有可能成为一种新的用于儿童白血病诊断方法.
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血循环DNA在淋巴瘤中的研究进展
近年来血循环DNA用于基因诊断已成为研究热点,血循环DNA是指血浆中具有DNA双螺旋结构的核苷酸片段,逐渐成为一项新的肿瘤标记物.研究发现肿瘤患者血循环DNA较正常人有很大差异,不同疾病条件下其含量有不同程度的升高,且逐渐成为替代当前需采集肿瘤组织作为标本的无创方法.尽管血循环DNA的来源尚不清楚,通过监测血循环DNA总水平变化及相关肿瘤基因的异常改变,可以实现恶性肿瘤的早期诊断及预后评估.特别是许多国外文献报道,它与淋巴瘤的关系非常密切,无论血循环DNA的定性或定量研究,包括淋巴瘤常见的基因重排或者病毒相关血浆DNA,与淋巴瘤的诊断、治疗反应及预后直接相关.现将近几年国内外血循环DNA在淋巴瘤中的应用进行综述,对研究前景做简单展望.
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肿瘤循环DNA的研究进展
肿瘤患者循环DNA不仅在数量上明显高于健康人,而且还可以出现与肿瘤DNA相同的性质改变.肿瘤循环DNA的特征性变化在肿瘤的早期诊断、疗效评价以及肿瘤随访观察等方面有一定临床意义.本文就循环DNA的来源、释放机制、基因修饰变异、水平变化、完整性,以及循环DNA的研究方法和局限性等方面进行综述.
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分支链DNA Alu技术定量检测败血症患者血浆循环DNA的表达
目的 探讨血浆循环DNA(cf-DNA)水平定量检测在败血症诊断和败血症与全身炎症反应综合征(SIRS)鉴别诊断中的价值.方法利用分支链DNA Alu技术定量检测24例败血症患者、43例SIRS患者和73名健康人血浆cf-DNA的表达水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血浆cf-DNA的临床价值.结果 正常对照组血浆cf-DNA表达水平为68.56(12.56~309.78) ng/mL,SIRS组为609.67(15.98~2 596.87) ng/mL,败血症组为1 398.96(19.28~2 987.56) ng/mL,败血症组明显高于正常对照组(P<0.001)和SIRS组(P<0.001).SIRS组与正常对照组、败血症组与正常对照组、败血症组与SIRS组的曲线下面积(AUC)分别为0.763 (0.661~0.865)、0.955 (0.884~1.025) 和0.777 (0.663~0.891).结论 血浆cf-DNA具有作为新的败血症诊断标志物的临床应用价值.
关键词： 循环DNA 分支链DNA Alu技术 标记物 败血症 诊断
