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胆固醇侧链裂解酶CYP11A1基因多态性与多囊卵巢综合征发病的相关性
目的 探讨胆固醇侧链裂解酶CYP11A1基因多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的相关性.方法 收集2005年5月-2008年12月于安徽医科大学第一附属医院妇产科门诊就诊的PCOS患者290例为PCOS组,同期就诊的安徽籍非PCOS患者344例为对照组,从人类基因组单体型图谱(HapMap)11期汉族数据库中选择CYP11A1基因覆盖区域的r~2>10.8的7个标签单核苷酸多态性(tSNP)位点(rs12438594、rs4077582、rs9806234、rs16968477、rs4887139、rs1843090、rs11632698)和3个微卫星位点(D15S1547、D16S520、D15S1546);采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析两组患者的基因型和等位基因频率,并进行多个位点联合分析(即单体型分析).结果 7个tSNP和3个微卫星位点中,两组患者的ra4077582、D15S1547、D15S1546和rs11632698位点的基因型频率比较,差异均有统计学意义(P=0.010、0.044、0.018和0.026);两组患者的rs4077582、rs4887139、rs1843090、D15S1547和D16S520位点的等位基因频率分别比较,差异均有统计学意义(P=0.002、0.048、0.030、0.001和0.024).ACGCA13/6/9AG、ACGTA16/6/11AA、GCACG12/8/8AA、GTACA14/4/7GG、GTGCA13/6/7AG 5种常见的CYP11A1基因单体型中,PCOS组患者的GTACA14/4/7GG和ACGCA13/6/9AG单体型频率分别为7.8%(45/580)和25.3%(147/580),分别与对照组(11.9%和19.6%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).两组rs4077582位点不同基因型患者血浆雄激素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CYP11A1基因多态性与PCOS有一定的相关性,但与PCOS患者高雄激素水平之间的相关性需通过对tSNP及微卫星覆盖区域的序列进行进一步分析确定.
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CYP11A1基因单核苷酸多态性与多囊卵巢综合征的关系
目的： CYP11A1基因单核苷酸多态性(SNP)与多囊卵巢综合征(PCOS)的关系。方法选择2005年10月至2010年3月于南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科就诊的289例PCOS患者为研究对象,并纳入PCOS组；选择同期于本院参加健康体检的220例健康妇女纳入对照组。采用放射免疫法(RIA)检测患者血清中黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、雌二醇及睾酮水平等。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法对两组受试者CYP11A1基因 SNP rs4077582和 rs11632698位点进行基因分型,分析两组受试者的等位基因型频率及等位基因频率,并对年龄、人体质量指数(BMI)及血清性激素水平在不同基因型受试者中进行比较。本研究遵循的程序符合南京大学医学院附属鼓楼医院医学伦理委员会制定的伦理学标准,本研究得到该委员会批准,分组征得受试者本人及其家属的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书。结果①两组受试者的年龄、BMI等基本资料和 FSH、LH、LH/FSH、雌二醇和睾酮等激素水平比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。②CYP11A1基因 SNP rs4077582等位基因型(CC、CT和 TT)在 PCOS组患者中的分布分别为24.9%、49.8%和25.3%,而在对照组中分别为34.5%、46.4%和19.1%,二者比较,差异有统计学意义(χ2=6.399,P=0.041)。等位基因T在PCOS组中的频率显著高于对照组(χ2=6.263,P=0.012)。而CYP11A1基因SNP rs11632698的等位基因型分布在两组受试者中比较,差异无统计学意义(χ2=3.416,P=0.181)。③血清学检测结果显示,PCOS 组中,CYP11A1基因 SNP rs4077582位点3个不同基因型 PCOS患者的年龄、BMI等基本资料和各性激素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。而在对照组中,LH 与 LH/FSH 在3个不同基因型受试者(CC、CT、TT)间比较,差异有统计学意义(F=9.362、21.046,P<0.001)。结论 CYP11A1基因 SNP rs4077582位点与PCOS的易感性有关,其作用机制可能是通过调节个体的 LH 水平终影响雄激素合成速率,而SNP rs11632698则与PCOS发病无关。
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膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞中类固醇急性调节蛋白和睾酮合成相关酶表达的影响
目的:研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响.方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞24 h后,用10-9 mol/L的annexin 5处理间质细胞12 h和24 h,分别提取细胞总RNA和总蛋白;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测类固醇急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氧酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)、17α-羟化酶(17α-hydroxylase,CYP17A)、17β-羟基类固醇脱氢酶X型(17β-HSD10)mRNA表达的改变,并用蛋白免疫印迹方法(Western blotting)检测蛋白表达水平的变化.结果:与对照组相比,在mRNA水平上,annexin 5处理细胞12 h后,只有17β-HSD10的表达升高了26%(P＜0.05),其他差异均无统计学意义,而处理24 h后,StAR、P450scc和3β-HSD 的表达分别升高55%、69%和59%(P＜0.05),17β-HSD10升高了104%(P＜0.01),17α-hydroxylase表达则无显著差异;在蛋白水平上,annexin 5处理细胞12 h后,17β-HSD的表达升高了39%(P＜0.05),而处理24 h后发现,除StAR表达无显著变化外,P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达分别升高了35%、88%(P＜0.05)和47%(P＜0.01).结论:Annexin 5对睾酮合成具有调节作用,这种作用是通过在基因水平和蛋白水平上影响P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达而实现的.
关键词： 膜联蛋白5 睾丸间质细胞 胆固醇侧链断裂酶 17-羟甾类脱氢酶类 -
吗啡依赖大鼠脑组织神经甾体合成酶基因表达的变化
目的研究吗啡依赖大鼠额叶皮质、杏仁核、海马、纹状体和中脑组织胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、17α-羟化酶(P450c17)、3β-羟基甾醇脱氢酶(3β-HSD)基因表达的变化,探讨神经甾体在吗啡依赖中的作用.方法21只雄性SD大鼠,随机分为3组:生理盐水对照组(C组)、吗啡依赖组(D组)和吗啡戒断组(W组),D、W组采用剂量递增法腹腔注射吗啡制备吗啡依赖模型,连续注射7d,每日2次,剂量分别为5、10、15、20、30、40、50mg·kg-1,C组给予相应体积的生理盐水.C、D组在末次给药1h后断头处死大鼠,迅速分离出额叶皮质、杏仁核、海马、纹状体和中脑组织.W组在末次给药1h后注射纳洛酮(2mg·kg-1),观察大鼠戒断症状,30min后取不同脑区组织.RT-PCR方法检测大鼠不同脑区三种神经甾体合成酶mRNA的表达.结果与C组相比,D组脑组织P450scc mRNA在纹状体表达降低,3β-HSD mRNA在额叶皮质、纹状体和杏仁核表达降低,W组3β-HSD mRNA在额叶皮质、杏仁核表达降低(P＜0.05).与D组相比,W组P450scc、3β-HSD mRNA在纹状体表达升高(P＜0.05).结论内源性神经甾体可能与大鼠吗啡依赖的形成有关.
