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Bim与p-Bad蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义
目的:探讨仅含BH3区域蛋白(BH3-only proteins)家族中Bim与p-Bad蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学方法和免疫印迹法(Western blot)对55例子宫内膜癌、13例子宫内膜非典型增生组织中的Bim及p-Bad蛋白表达进行检测,并以11例正常子宫内膜组织作对照组.结果:Bim蛋白阳性表达在对照组多(x-=1.67),在子宫内膜非典型增生(x-=1.29)及癌组织中(x-=0.71)明显减少,3组比较差异有统计学意义,F=10.829,P<0.01;p-Bad蛋白阳性表达在对照组中表达量低(x-=0.11),在子宫内膜非典型增生(x-=1.24)及癌组织中(x-=2.05)明显增加,3组比较差异有统计学意义,F=12.444,P<0.01.在高中分化腺癌中,p-Bad表达显著增加(x-=2.28),与对照组相比,差异有统计学意义,P<0.01.Bim和p-Bad的表达在子宫内膜癌各临床分期及肌层浸润之间的差异均无统计学意义.结论:Bim表达减少可能是子宫内膜癌发生过程中的早期事件;Bad促凋亡活性减弱是导致子宫内膜癌发生的原因之一;提示仅含BH3区域蛋白家族中Bim、Bad与子宫内膜癌的发生关系密切.
关键词： 蛋白质类/遗传学 子宫内膜肿瘤/病理学 基因表达 脱噬作用 -
宫颈癌组织TGF-β1、TGF-βR1和p27kipl表达及临床意义
目的:研究p27 Kip在宫颈癌中的表达与TGF-β1配体和TGF-β1受体表达之间的关系.方法:选择63例宫颈标本,包括28例良性宫颈内膜腺体,8例宫颈原位腺癌和27例宫颈腺癌,采用S-P方法检测多克隆抗体TGF-β1、 TGF-β1受体和单克隆抗体p27 Kip表达情况.结果:正常的子宫颈内膜标本中,TGF-β1显示出弱的胞质染色,而p27 Kip显示胞核强阳性,与正常宫颈组织相比,随着肿瘤恶性程度的增加,TGF-β1配体和TGF-β1受体胞质染色随之增强.在腺癌中TGF-β1的表达比原位宫颈癌中表达变弱,但比正常的子宫内膜仍有显著性增强,p27 Kip蛋白的表达随着肿瘤恶性程度增加而下降,而正常的子宫内膜则显示出强的p27 Kip蛋白的表达.结论:子宫内膜的肿瘤转化可能与TGF-β1和p27 Kip的异常表达有关.
关键词： 转化生长因子β/分析 蛋白质类/遗传学 宫颈肿瘤/病理学 基因表达 免疫组织化学 -
肥胖症患者瘦素受体基因外显子4变异特征
目的:探讨瘦素受体基因外显子4变异情况及是否与肥胖症相关.方法:选择肥胖症患者[体质量指数(BMI)≥28 kg/m2]和正常人(18.5≤BMI＜23 kg/m2)各50例,运用PCR-SSCP方法,检测瘦素受体基因外显子4的变异情况.结果:50例肥胖症患者瘦素受体基因外显子4未发现碱基改变.结论:瘦素受体基因外显子4中519位点变异不是肥胖症的遗传因素.
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神经巢蛋白抗原在兔骨髓源神经干细胞分化各阶段的表达
目的:检测神经巢蛋白抗原在兔骨髓基质细胞 (bone marrow stromal cell,BMSCs)向神经细胞方向分化不同阶段的表达情况,为寻找骨髓基质细胞源性神经干细胞移植修复神经损伤佳阶段提供体外实验依据. 方法:以免 BMSCs为实验对象,以" CYTOKINE·神经干细胞培养基"培养,并分作对照组胶质源性神经营养因子( GDNF,1 μ g /L)+维甲酸( 0.5 mg/L)组及"碱性成纤维细胞生长因子( bFGF,10 μ g /L)组.免疫荧光细胞化学鉴定神经干细胞神经巢蛋白抗原,以流式细胞仪 (FCM)鉴定分化各阶段表达神经巢蛋白的细胞比例. 结果:部分兔 BMSCs在相应培养条件下分裂增殖为含粗大胞质颗粒的大圆形细胞,这些细胞表达神经巢蛋白,并能进一步分化成神经组织样细胞. FCM检测结果:经纯化的 BMSCs中神经巢蛋白 (+ )细胞占了 5.52%,随着分化的进行,在对照组分化第 8 天为 1.56%,第 16 天为 0.47%. GDNF+维甲酸组第 8 天为 1.84%,第 16天降至 0.31%.而 bFGF组,分化第 8 天神经巢蛋白 (+ )细胞比例升至 6.18%,第 16 天则降至 1.33%. 结论:在以上实验条件下可诱导兔 BMSCs向神经干细胞及神经组织样细胞转化的功能.在 BMSCs向神经组织样细胞方向分化过程中,神经巢蛋白的表达呈下降趋势.而 bFGF可使表达神经巢蛋白的细胞比例增高,可用于体外富集神经干细胞.
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靶向干预N-WASP蛋白功能区对大肠癌细胞侵袭转移能力的影响
目的 研究靶向干预N-WASP蛋白的VCA功能区对大肠癌细胞侵袭转移能力的影响.方法 构建含有N-WASP蛋白CA结构区域信息但缺乏V结构区域信息的重组表达质粒(CA质粒),脂质体转染法将重组质粒及空质粒导入人高侵袭性大肠癌细胞株LoVo细胞内,G418筛选获得稳定转染的细胞株.采用Transwell侵袭小室和制备裸鼠结肠癌肝转移模型检测转染后LoVo细胞侵袭转移能力的变化. 结果 Transwell侵袭小室实验结果显示,重组质粒转染组LoVo细胞的穿膜细胞数量较空质粒转染组及未转染组明显减少(P＜0.05).动物实验结果显示,重组质粒转染组的裸鼠肝脏表面的转移瘤结节数较空质粒转染组及未转染组明显减少,生存率明显提高,差异均具有统计学意义(P＜0.05);而空质粒组和未转染组两者无明显差别(P＞0.05).结论 靶向干预N-WASP蛋白的VCA功能区能有效抑制大肠癌细胞的侵袭转移能力.
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肿瘤分子预测诊断新技术及其进展
恶性肿瘤是严重影响人类健康和生命的重大疾病,每年新发病1 090万人,死亡670万人.及早预测诊断肿瘤及其转移潜能是提高肿瘤治疗效果的关键.几十年来,科研工作者从临床到基础对肿瘤的发生发展规律进行了深入细致的探索,肿瘤的预测诊断技术也得到了飞速发展,已从较早的组织细胞水平发展到分子水平.特别是为适应人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)的需要,近年先后涌现了一系列包括比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)、mRNA差异展示技术(mRNA differential display)、基因表达系列分析技术(serial analysis of gene expression,SAGE)、基因芯片技术(genechips)以及蛋白质芯片技术(protein chips)等在内的高新分子生物学和遗传学技术,肿瘤的分子诊断预测研究达到了一个前所未有的高水平.
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HIWI在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨人HIWI基因在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR法(quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测HIWI在子宫内膜癌细胞株(HEC-1B,RL95-2)及66例子宫内膜癌组织中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果 HI-WI mRNA在子宫内膜癌细胞株(HEC-1B,RL95-2)及癌组织标本中的表达较正常子宫内膜细胞株(ESC,NSC)及组织增高(均P＜0.叭),HIWI的表达在肿瘤肌层浸润深度、子宫颈浸润、淋巴血管侵犯、淋巴结转移和临床分期方面差异均有统计学意义(均P＜0.01),在患者的年龄及组织病理分化程度方面差异均无统计学意义(均P＞0.05).高表达HIWI的患者生存时间较低表达者缩短(P＜0.01).HIWI可作为预测子宫内膜癌无进展生存时间(HR=5.18,95％ CI:2.380 ～ 12.41,P＜0.01)和总生存时间(HR=3.27,95％ CI:1.68 ～ 5.46,P＜0.01)的独立预后因子.结论 HIWI参与调节子宫内膜癌的发生、发展,可作为子宫内膜癌诊断和预后评估的分子标志物.
关键词： 子宫内膜肿瘤/病理学 基因表达 蛋白质类/遗传学 聚合酶链反应 预后 -
前体mRNA可变剪接调节因子NSSR1在大肠癌中的表达
目的:研究神经系统显著表达的前体mRNA可变剪接调节因子NSSR1在大肠癌中的表达.方法:应用RT-PCR、Western blot以及免疫组织化学染色方法观测小鼠肠道等组织和人类大肠癌中NSSR1的mRNA和蛋白的表达以及分布.结果:NSSR1的mRNA在小鼠的大脑、小脑、心脏、肝脏、大肠以及肺等组织中均有表达,而蛋白只在神经系统表达,在肠道中无表达.在人体正常肠道组织中,NSSR1只在肠黏膜上皮细胞中表达；而在大肠癌细胞中,NSSR1存在显著表达且主要分布在细胞核中.结论:NSSR1在大肠癌中高表达,这可能与NSSR1在大肠癌发生发展中的生物学功能有关.
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Sedlin突变体S124A对其与PAM14相互作用的影响
目的 构建Sedlin的点突变体,研究其与PAM14在酵母中的相互作用,寻找其相互作用的位点.方法 用蛋白质在线序列分析软件CPHmodels预测Sedlin蛋白的磷酸化位点,可能的磷酸化位点主要有S2、S30、S119、S124、Y115,针对其中一个磷酸化位点(S124)设计定点突变引物;以pAS-Sedlin为模板,以两条含有突变位点的互补序列为引物进行PCR扩增,将得到的PCR产物用Dpn Ⅰ酶切除去模板,消化产物转化大肠杆菌感受态DH5α,对得到的阳性克隆进行测序;将构建的定点突变质粒pAS-sedIins与pACT2-PAM14共转化至酵母Y190中,并对生长至合适大小的克隆进行B-半乳糖苷酶活性分析.结果 构建了pAS-Sedlin的定点突变质粒pAS-SedlinS,其与pACT2-PAM14共转克隆的β-半乳糖苷酶活性反应呈阳性,并且Sedlin S124A蛋白与PAM14蛋白的相互作用比野生型Sedlin蛋白与PAM14蛋白相互作用强.结论 成功构建了Sedlin S124A,Sedlin蛋白的S124并不是其与PAM14在酵母中相互作用的特异性结合位点.
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多发性肌炎并肺间质病变血清蛋白质组学研究
目的：寻找可预测多发性肌炎（PM ）及合并肺间质病变（ILD）发生、发展的血清蛋白质。方法收集PM、PM＋ILD患者及正常人（对照组）各3例，用双向电泳分离血清蛋白质点。凝胶经考马斯亮兰染色后，采用Analysis 2D 7．0软件进行分析，光密度差异（ratio）＞2且差别具有统计学意义（P＜0．05）的蛋白质点为差异表达蛋白。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定；ELISA方法进行验证。结果通过2‐DE图谱分析发现，15个差异表达蛋白质点，质谱鉴定出9种蛋白质。与对照组比较，PM组表达上调的蛋白为血清淀粉样蛋白A、载脂蛋白A1、凝集素、血清白蛋白；PM组表达下调的蛋白为转铁蛋白（TRF）；PM＋ ILD组表达下调的蛋白为锌‐a2‐糖蛋白、T RF、a2‐H2‐糖蛋白、a1‐β‐糖蛋白。与 PM 组比较，PM ＋ ILD组表达下调的蛋白为 T RF、β2‐糖蛋白1。ELISA进一步验证显示，TRF在各组间表达差别无统计学意义（P＞0．05）。结论 PM 组、PM＋ ILD组及对照组3组间存在8种差异表达的蛋白，这些蛋白可能是PM及ILD发病的相关蛋白，参与了疾病的进程。
