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胃癌组织UHRF1表达与预后相关性分析
目的 探讨泛素样含PHD和环指域1(ubiquitinlike with PHD and ring finger domain 1,UHRF1)表达在胃癌发生发展过程中的作用及其预测胃癌患者预后的价值.方法 采用免疫组织化学法检测2002-02-01-2004-05-31手术切除106例胃癌组织和72例正常胃黏膜组织中UHRF1的表达情况,统计分析其表达与临床病理特征及预后的关系.结果 胃癌组织中UHRF1阳性表达率为84.0％(89/106),癌旁正常胃黏膜组织阳性率为48.6％(35/72),差异有统计学意义,x2 =35.220,P＜0.001.UHRF1表达与胃癌分化程度(P＜0.05)、TNM分期(P＜0.01)、是否淋巴结转移(P＜0.05)和是否远处转移(P＜0.05)密切相关,而与年龄(P=0.351)、性别(P=0.427)无关.单因素和多因素分析结果均提示,UHRF1高表达患者生存时间短于低表达患者,P＜0.001.结论 UHRF1与胃癌的发生发展密切相关,其表达强度可以作为患者预后的重要指标.
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西洋参-白花蛇舌草药对联合化疗治疗晚期食管腺癌临床疗效及对UHRF1表达的影响
目的 观察FOLFOX4方案联合西洋参-白花蛇舌草药对治疗晚期食管腺癌的临床疗效及对UHRF1表达的影响.方法 将60例晚期食管腺癌患者随机分为化疗组(A组)、药对化疗组(B组)各30例,另选30例拒绝化疗并单纯予中药治疗者作为单纯药对组(C组).A组给予FOLFOX4方案化疗;B组在A组的基础上给予西洋参-白花蛇舌草汤药(西洋参20 g,白花蛇舌草15 g)100 mL口服,早晚各1次;C组给予西洋参-白花蛇舌草汤药100 mL口服,早晚各1次.方案均为双周治疗方案,连续治疗4周以上,4周后评价1次疗效.观察3组临床疗效、生活质量、毒副反应发生情况,检测治疗前后UHRF1表达情况.结果 治疗后B组有效率和KPS评分均明显高于其他2组(P均<0.05).A组、B组毒副反应发生率明显高于C组(P均<0.05),但B组毒副反应发生率明显低于A组(P<0.05).3组治疗后食管腺癌黏膜中UHRF1表达均较治疗前明显减少(P均<0.05),其中B组与其他2组对比UHRF1表达减少更加显著(P均<0.05).结论 西洋参-白花蛇舌草药对联合化疗治疗进展期晚期食管腺癌能改善患者的生活质量,减轻化疗毒性反应,并能降低UHRF1的表达.
关键词： 食管腺癌 西洋参-白花蛇舌草药对 FOLFOX4 UHRF1 -
低氧微环境对小鼠皮肤成纤维细胞HIF-1、Oct4、Uhrf1表达的影响
目的 探讨低氧条件下小鼠皮肤成纤维细胞内低氧调节关键转录因子HIF-1、多潜能转录因子Oct4及表观遗传调控因子Uhrf1的表达,为低氧微环境影响细胞重编程效率的机制研究奠定基础.方法 将体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞分为低氧(2％O2+5％CO2+93％N2) 6h、12h、24h、48h组和常氧(20％O2+5％CO2)对照组.用免疫荧光化学方法和RT-PCR检测小鼠皮肤成纤维细胞中HIF-1,Oct4和Uhrf1的表达,在蛋白和mRNA水平对其进行分析.结果 成纤维细胞内HIF-1、Oct4、Uhrf1蛋白的阳性表达率随着低氧时间的延长逐渐增多,常氧组均未见表达.低氧6h、12h、24h组 HIF-1、Oct4、Uhrf1 mRNA表达量均比常氧组高,但差异不显著(P＞0.05);而低氧48h组三个基因mRNA表达明显高于常氧组(P＜0.01).结论 低氧微环境HIF-1,Oct4和Uhrf1在成纤维细胞内表达水平上调,提示它们在其中发挥了重要作用.
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DNMT1与UHRF1基因在胃癌细胞系中的表达特点及其与癌细胞DNA甲基化的关系
[目的]探讨DNMT1和UHRF1在胃癌的形成和转化中的表达特点和可能的生物学作用.[方法]提取CIMP型H(High)的胃癌细胞系HGC-27和CIMP型为L(low)的胃癌细胞系MGC803,BGC823及AGS的核酸样品进行UHRF1和DNMT1表达的分析.[结果]DNMT1在MGC823和HGC-27表达水平明显高于其他胃癌细胞系(P<0.01);UHRF1在HGC-27中有表达水平高于其他3个胃癌细胞系(P<0.01).[结论]胃癌细胞DNA的甲基化不但和DNMT1有关而且和UHRF1也有着密切关系.
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UHRF1在结肠癌中的表达及其与细胞增殖的关系
目的:探讨UHRF1 (Ubiquitin-like with plant homeodomain and ring finger domains1)在结肠癌组织中的表达,及其与结肠癌细胞增殖的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测62例结肠癌组织和癌旁正常对照组织的UHRF1表达,统计分析其表达和临床病理资料和预后关系.采用siRNA抑制UHRF1表达,分析其与细胞增殖的关系.结果:结肠癌组织中UHRF1高表达,癌旁正常组织低表达.62例结肠癌组织中33例UHRF1阳性,阳性率为53.2％.UHRF1表达与淋巴结转移、远处器官转移和Dukes'分期相关(P＜0.05).高表达UHRF1结肠患者的生存时间明显较低表达者短(P＜0.05).单因素分析显示淋巴结转移、远处器官转移、UHRF1和Dukes'分期与患者累积生存率相关(P＜0.05).多因素分析显示UHRF1可作为结肠癌患者预后的独立危险因子(P.＜0.05).采用siRNA转染HCT116后,UHRF1表达显著降低,细胞增殖被抑制.结论:UHRF1参与结肠癌细胞增殖,与结肠癌患者预后密切相关.
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UHRF1通过调控细胞自噬抑制肺腺癌细胞增殖的分子机制研究
目的 探讨泛素样含PHD和环指结构域1(Ubiquitin like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1)在肺腺癌(Lung adenocarcinoma)细胞的增殖、自噬中的作用及其潜在机制.方法 通过生物信息学网站( TCGA)检测UHRF1在肺腺癌组织中的表达. qRT-PCR和Western blot检测肺腺癌细胞系(PC-9、A549和H1299)以及人支气管上皮细胞(16HBE)中UHRF1的表达.转染UHRF1-shRNA后,采用CCK-8、克隆形成以及Ki-67检测肺腺癌A549细胞活性和增殖能力的改变;蛋白免疫印记检测自噬相关LC3-I/II、Beclin-1蛋白以及增殖相关蛋白CDK6、Rb和PCNA蛋白的变化;透射电镜观察敲除UHRF1后A549细胞中对于自噬小体的影响.结果 在肺腺癌患者组织中UHRF1表达明显高于癌旁组织,而相对于正常的支气管上皮细胞16HBE,肺腺癌细胞系A549与H1299中UHRF1的mRNA和蛋白水平均明显升高.此外,CCK-8法和克隆形成实验表明沉默 UHRF1 能够降低肺腺癌细胞系 A549 的生长效率. Ki-67 免疫荧光法检测结果显示敲除UHRF1后A549细胞增殖能力相对于正常对照组明显降低.此外我们发现,敲除UHRF1导致CKD6和PCNA蛋白水平相对于Control-siRNA组表达升高,而Rb蛋白表达下调.我们同时还发现,沉默UHRF1后能够提高LC3-II/LC3-I的比例,诱导Beclin-1的表达上调.沉默UHRF1促进A549细胞中自噬小体的形成.结论 UHRF1在肺腺癌中高表达,沉默UHRF1能够发挥抑制增殖的作用.而这种作用可能是通过促进细胞自噬产生的.
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沉默UHRF1对乳腺癌细胞增殖和转移的影响
目的 探讨UHRF1对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖以及侵袭的影响及其相关机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测沉默UHRF1基因后对乳腺癌MDA-MB-231细胞活力的影响;应用克隆形成实验检测沉默UHRF1后对乳腺癌MDA-MB-231细胞存活的影响;吖啶橙-溴乙锭(AO/EB)检测沉默UHRF1后对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响;Caspase-3活性试剂盒检测沉默UHRF1后乳腺癌细胞Casapse-3活性的变化;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、p-Bad、XIAP、p53、p21Cip1/Waf1和p16INK4a的表达;应用Transwell实验研究沉默UHRF1对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;Wound Healing实验研究沉默UHRF1后对其迁移能力的影响.结果 沉默UHRF1使乳腺癌MDA-MB-231细胞活力降低;克隆形成实验结果显示沉默UHRF1后MDA-MB-231细胞存活能力降低,AO/EB染色显示沉默UHRF1促进MDA-MB-231细胞凋亡.同时Caspase-3活性实验结果显示沉默UHRF1后乳腺癌MDA-MB-231细胞Caspase-3的活性增加;West-ern blot结果显示,沉默UHRF1后,能够使凋亡蛋白Bad、XIAP和Bax的表达上调,同时抗凋亡蛋白p-Bad,Bcl-2的表达下调,也使p53,p21Cip1/Waf1,p16INK4a蛋白表达升高;Transwell以及Wound Healing实验证明沉默UHRF1能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移.结论 沉默UHRF1能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞活力和存活,并抑制乳腺癌MDA-MB-231的侵袭和迁移.沉默UHRF1通过调控p53,p21Cip1/Waf1,p16INK4a信号发挥作用.
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RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用脂质Attractene reagent将靶向沉默UHRF1的质粒LV-UHRF1-shRNA和阴性对照质粒LV-scramble-shRNA分别转染至U251细胞(LV-UHRF1-shRNA组和LV-scramble-shRNA组),以仅转染脂质体的细胞为对照组;采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组转染48 h后的UHRF1 mRNA水平,采用MTT法检测各组转染24、48、72 h的增殖情况,BrdU染色法检测转染12、24、48、72h后的BrdU阳性率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测转染48、72 h后的凋亡率,Western blotting检测转染72 h后的凋亡相关蛋白(Bax、caspase-3和Bcl-2)水平.结果 QPCR检测结果显示对照组、LV-scramble-shRNA组和LV-UHRF1-shRNA组的UHRF1水平分别为1.098±0.136、1.127±0.193和0.309±0.073,LV-UHRF1-shRNA组的UHRF1水平低于对照组和LV-scramble-shRNA组(P＜ 0.05).与对照组和LV-scramble-shRNA组相比,LV-UHRF1-shRNA组在以上时间点细胞增殖率和BrdU阳性率均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);LV-UHRF1-shRNA组的凋亡率为(25.71±1.87)％,均高于对照组的(7.73±0.66)％和(7.86±0.59)％,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blotting检测结果显示与对照组和LV-scramble-shRNA组相比,LV-scramble-shRNA组的Bax、caspase-3水平升高,而Bcl-2水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组和LV-scramble-shRNA组以上指标的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 在U251细胞中的下调UHRF1可抑制增殖并诱导凋亡,UHRF1发挥类似癌基因的作用,可作为脑胶质瘤的治疗的候选基因.
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UHRF1在宫颈癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨宫颈癌组织中的UHRF1表达及其临床意义.方法 收集本院2013年1月至2016年6月经手术切除的宫颈癌组织89例、正常宫颈组织68例及宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织109例(CINI 29例、CINⅡ 33例和CIN Ⅲ47例),采用实时定量PCR(QPCR)法检测以上组织中UHRF1的表达情况,分析其表达与宫颈癌临床病理参数的关系(年龄、淋巴结转移、FIGO分期、肿瘤大小、组织学分级和病理类型),采用受试者工作曲线(ROC)分析UHRF1诊断不同宫颈病变的效能.结果 宫颈癌组织中的UHRF1水平为3.086±2.327,均高于正常宫颈组织和CIN组织,差异有统计学意义(P<0.05). UHRF1表达与年龄、淋巴结转移及病理类型无关(P>0.05),与FIGO分期和组织学分级有关(P<0.05),其中Ⅱ、Ⅲ期的 UHRF1表达水平为3.793±2.410,高于I期的1.764±1. 443,而G2、G3级的UHRF1表达水平为3.811±2.330,高于G1级的1.230±0.784,以上差异有统计学意义(P<0.05).ROC曲线分析显示UHRF1区分宫颈癌与正常宫颈、区分宫颈癌与CIN及从所有受试者中区分出宫颈癌的AUC分别为0.803(灵敏度69.66％、特异度85.29％),0.734(灵敏度66.29％、特异度73.39％)和0.760(灵敏度29％、特异度79. 10％).结论 宫颈癌组织中UHRF1为高表达,与组织学分级和FIGO分期有关,且诊断宫颈癌的效能较好,可能成为宫颈癌诊断和病情预测的新型分子标记物.
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辐射敏感性新基因 UHRF1真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建UHRF1的真核表达载体,并验证其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达.方法 采用RTPCR方法,从乳腺癌细胞MCF-7的总cDNA中扩增出2.3kb 的 UHRF1基因的cDNA片段,经限制性内切酶Kpn I与Xho I双酶切,定向克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pcDNA3(+)-UHRF1,利用限制性内切酶双酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;构建成功的重组质粒,经脂质体Lipofactamin2000介导转染MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆,以RT-PCR 和 Western blot 检测 UHRF1 的mRNA和蛋白的表达.结果 获得全长约为2.3kb的UHRF1基因片段;重组质粒经限制性内切酶Xho I和Kpn I酶切、电泳后显示2.3kb的UHRF1目的片段和5.4kb的pcDNA3载体片段,即UHRF1基因的cDNA已正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中;UHRF1转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后的RT-PCR和Western blot的结果显示:UHRF1的mRNA和蛋白水平均呈现高表达.结论 成功构建UHRF1基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定基础.
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UHRF1在膀胱癌中的表达及临床意义
[目的]研究UHRF1在膀胱癌中的表达及临床意义.[方法]采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法分别检测58例膀胱癌组织和20例相应正常组织中UHRF1的表达,并分析表达的差异与临床病理特征的关系.[结果]UHRF1 mRNA在膀胱癌中的表达量(107.0±24.3)高于正常组织的表达量(1.9±0.4),差异有显著统计学意义(P＜0.001);免疫组化显示UHRF1蛋白在膀胱癌组织中的阳性表达率为53.4％,正常组织中未见表达,两种组织的表达有明显差异(P＜0.001).UHRF1蛋白的表达与肿瘤分级(P=0.026)和分期(P=0.017)有关,与性别、年龄、肿瘤大小、数目无明显相关性(P＞0.05).[结论]UHRF1的表达在肿瘤组织中明显高于正常组织,且与病理分级、临床分期有关,UHRF1的过表达可能促进膀胱癌的进展.
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UHRF1在胃癌侵袭和转移中的作用及其机制
目的 探讨甲基化调节因子UHRF1在胃癌转移过程中的作用及其调控机制.方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌高低转移细胞系中UHRF1的表达,应用UHRF1的siRNA和质粒改变UHRF1的表达,Transwell及体内转移实验检测胃癌转移能力的变化.甲基化特异性PCR和Westem blot检测UHRF1表达改变后p16INK4A和RB1的甲基化状态及蛋白表达.结果 UHRF1在高转移潜能的胃癌细胞系GC9811-P中的表达显著高于低转移潜能的细胞系GC9811.下调UHRF1的表达抑制胃癌细胞的体外和体内转移能力,同时减弱p 16INK4A甲基化,增加p16INK4A蛋白表达.上调UHRF1的表达可见相反结果.结论 UHRF1可能通过调控p16INK4A和RB1的甲基化促进胃癌细胞的侵袭和转移,其有望成为胃癌转移预警和治疗的新靶点.
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肺癌患者胸腔积液中UHRF1 mRNA的表达和临床意义
目的 探讨肺癌患者胸腔积液中脱落细胞的泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)mRNA表达水平及临床诊断价值.方法 选取2015年10月至2017年2月南京医科大学附属江宁医院收治的胸腔积液患者124例,根据病理学诊断结果分为恶性胸腔积液组(60例)和良性胸腔积液组(64例),采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测两组U HRF1 mRNA表达水平,分别与胸腔积液中脱落细胞学检查结果、癌胚抗原(CEA)和DNA异倍体细胞检测结果进行比较,并分析其与临床病理因素的关系.结果 恶性胸腔积液组中U HRF1 mRNA相对表达量为(4.53±4.33),明显高于良性胸腔积液组(1.61±1.56),差异有统计学意义(t=5.057,P=0.000).受试者工作特征曲线分析显示,U HRF1 mRNA、CEA单独检测及联合检测的曲线下面积分别为0.753、0.879、0.861,灵敏度分别为53.48%、78.18%、74.42%,特异度分别为88.24%、93.44%、86.27%.在不同年龄、性别、肿瘤定位、组织学分型、CEA水平及有无吸烟史患者的胸腔积液中,UHRF1 mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);脱落细胞阳性和异倍体细胞阳性患者胸腔积液中UHRF1 mRNA相对表达量高于阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05).结论 U HRF1 mRNA对恶性胸腔积液具有较高的临床诊断价值.
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泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)的功能及其参与肿瘤发生发展机制的研究进展
泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)是UHRF家族的重要成员.生理情况下,UHRF1参与调节淋巴细胞的发育和功能,并在维持子细胞的甲基化状态、细胞生长以及维持基因组稳定等方面也发挥重要作用.UHRF1在多种肿瘤中呈高表达,且其表达与患者的临床病理特征及不良预后密切相关.UHRF1可通过表观遗传学机制对多种肿瘤抑制基因的表达调控而实现对肿瘤细胞的生长、侵袭转移、氧化应激及DNA损伤修复等特性的调节.鉴于UHRF1在肿瘤中的特异性高表达及对细胞生长的重要作用,UHRF1有望作为抗肿瘤治疗的有效靶点.
关键词： 泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1) UHRF1 肿瘤 综述 -
UHRF1检测在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的研究
目的 探讨泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like with PHD and ringfinger domains 1,UHRF1)在良恶性胸腔积液中的表达及临床意义.方法 收集南京市江宁医院2015年11月～2017年2月入院的130例胸腔积液患者,其中肺癌引起的恶性胸腔积液54例,肺部良性病变胸腔积液76例.肺部良性病变胸腔积液中,结核性胸腔积液36例,炎症性胸腔积液40例.采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测各组UHRF1水平,并分析其与临床病理的关系.结果 肺癌患者胸腔积液UHRF1水平(437.28±140.05 ng/L)高于肺部良性病变者(338.47±163.72 ng/L),两组比较差异有统计学意义(t=3.596,P=0.0005).非腺癌患者UHRF1水平(470.59±127.74 ng/L)高于腺癌患者(377.78±145.81 ng/L),差异有统计学意义(t=2.329,P=0.023).良性病变组中结核性胸腔积液UHRF1水平为365.51±167.54 ng/L,与炎性胸腔积液(314.13±158.34 ng/L)相比较,差异无统计学差异(t=1.374,P=0.174).良恶性胸腔积液UHRF1水平均与年龄、性别及吸烟史无关.结论 UHRF1是诊断良恶性胸腔积液一个潜在指标.
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UHRF1蛋白在结直肠癌中的表达情况及其预后判断价值
目的：探讨泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)蛋白在结直肠癌中表达及其预后判断价值。方法：采用组织微阵列联合免疫的组织化学(TMA-IHC)技术检测201例结直肠癌中UHRF1蛋白的表达情况，分析其与临床病理指标及术后生存时间之间的相关性。结果：UHRF1蛋白在结直肠癌组织中的表达阳性率为54.2%(109/201)，显著高于配对的手术切端形态学正常的组织(P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析显示，UHRF1蛋白表达阳性患者术后生存时间短于表达阴性的患者(P=0.023)。Cox回归分析结果表明，UHRF1蛋白是结直肠癌患者根治术后的一个独立预后因素(P=0.008)。结论：UHRF1蛋白可能作为结直肠癌患者术后预后判断的分子标志。
