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索拉菲尼对COC1DDP细胞增殖凋亡及血管形成影响的研究
卵巢癌是女性生殖器管发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌的常见肿瘤之一,但是其死亡率却占女性各类生殖器官疾病之首.目前的综合治疗手段有化疗、手术、放疗、靶向治疗等.手术及化疗对进展期的卵巢癌治疗效果并不理想,而目前靶向治疗正逐渐成为抗肿瘤药物治疗的重点和热点.索拉菲尼是一种新型的多靶点的生物靶向药物,临床前研究和临床试验的结果都提示索拉菲尼具有抗肿瘤的作用.我们观察索拉菲尼对人体卵巢癌细胞株COC1/DDP的抑制作用,以期为使用索拉菲尼等靶向型药物治疗女性卵巢癌提供试验依据.
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凋亡相关基因及蛋白的表达与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系
目的 探讨COC1/DDP和COC1中凋亡相关基因及凋亡相关蛋白的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系.方法 采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用于COC1及COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率;RT-pCR及western blot法检测凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Caspase-3、Smac和Survivin在COC1和COC1/DDP中的表达.结果 DDP作用于COC1和COC1/DDP细胞48h后细胞随着DDP浓度的升高,凋亡率也相应增高.COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bd-2、Survivin的表达明显高于COC1.COC1/DDP中促进凋亡的基因及蛋白Smac、Caspase-3的表达明显低于COC1.结论 在COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的高表达以及促进凋亡的基因及蛋白Smac和Caspase-3的低表达可能参与COC1/DDP对DDP耐药的发生机制.
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姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究
目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系.方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达.结果:顺铂的浓度在1.25～5 μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5 μg/mL顺铂和20 μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05).结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关.
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姜黄素对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用及其机制的研究
目的:探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用并探讨其机制.方法:采用MTT法检测姜黄素对COC1/DDP细胞的增敏作用;用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48 h后的细胞凋亡率;Western blot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达.结果:姜黄素浓度在15～35 μmol/L以内时以一定的剂量-效应关系对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用.顺铂的浓度在1.25～5 mg/L时加入20 μmol/L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显(P＜0.05),尤以2.5 mg/L顺铂和20 μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比,凋亡率明显增加(P＜0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低(P＜0.05),Caspase-3蛋白的表达明显增高(P＜0.05).结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达,增加Caspase-3蛋白的表达有关.
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葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用
目的 观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthoeyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72 h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变.流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高.Western blot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加.结论 原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COCl/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.
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马蔺子素对COC1/DDP的逆转作用研究
目的:建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨马蔺子素对COC1/DDP的逆转作用.方法:采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;以CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测马蔺子素对COC1/DDP细胞增殖的抑制作用;以GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平;以高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量.结果:历时5个月建立COC1/DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素均有不同程度的交叉耐药性,马蔺子素对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.44倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降,但经马蔺子素干预后,COC1/DDP胞内的GSH的水平降低,顺铂的含量增加(P＜0.01).结论:马蔺子素对COC1/DDP有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关.
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姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索
目的 研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理.方法 用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物[顺铂(DDP),紫杉醇]及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48 h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率.RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48 h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA) mRNA的表达.结果 不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48 b后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疔药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P＜0.05).顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3KCA mRNA的表达降低(P＜0.05).结论 姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3KCA基因的表达.
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人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及耐药机制研究
目的:建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨其耐药的机制.方法:采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测各种抗癌药对COC1和COC1/DDP细胞增殖的抑制作用,并计算耐药指数;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量.结果:历时5个月建立COC1/DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9.44;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降(P<0.01).结论:人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP耐药性稳定,耐药机制可能与GSH/GST-π解毒系统活性增强,减少细胞内顺铂含量有关.
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姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究
目的:探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制.方法:采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达.结果:姜黄素浓度在(15～35)μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂-效应关系.顺铂的浓度在(1.25～5)μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显(P＜0.05),尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加(P＜0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低(P＜0.05),Caspase-3 mRNA的表达明显增高(P＜0.05).结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关.
