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清热散结片对豚鼠支气管平滑肌的影响
清热散结片是用于缓解支气管哮喘、慢性支气管炎等气道阻塞性疾病所致的呼吸困难的一种中成药,且对中心气道以及末梢气道狭窄均有改善作用[1].1 材料1.1 药品 清热散结片;磷酸组织胺;氯化乙酰胆碱;卵白蛋白;地塞米松;百日咳菌疫苗.
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胸腺免疫抑制提取物对豚鼠支气管平滑肌的影响
目的:研究胸腺免疫抑制提取物(TISE)对正常及致敏豚鼠支气管收缩的影响及平喘作用.方法:通过离体和整体实验,观察TISE对组胺和乙酰胆碱引起正常豚鼠支气管的收缩和以卵白蛋白诱发的致敏豚鼠支气管收缩的影响.结果:离体实验,TISE760,380mg·L~(-1)对组胺致正常豚鼠气管片的收缩具有对抗作用,对卵白蛋白所致的致敏豚鼠支气管平湍肌收缩有极显著的抑制作用(P＜0.01).
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吡布特罗胶囊对豚鼠支气管平滑肌的影响
目的:研究吡布特罗胶囊(Pirbuterol Capsules)对正常及致敏豚鼠支气管收缩的影响及平喘作用.方法:通过离体和整体实验,观察Pributerol Capsules对以组胺和乙酰胆碱引起正常豚鼠支气管的收缩和以卵白蛋白诱发的致敏豚鼠支气管收缩的影响.结果:离体实验,PirbuterolCapsules 52mg·L-1对组胺致正常豚鼠气管片的收缩具有对抗作用,对卵白蛋白所致的致敏豚鼠支气管平滑肌收缩有极显著的抑制作用(P＜0.01).对乙酰胆碱所致气管片收缩作用明显;整体实验,Piibuterol Capsules 18mg·kg-1可显著延长卵白蛋白所致的致敏豚鼠呼吸困难,抽搐和跌倒的潜伏期(P＜0.01).结论:Pirbuterol Capsules能拮抗组胺刺激引起的正常豚鼠和卵白蛋白引起的致敏豚鼠离体气管片的收缩,抑制致敏豚鼠哮喘的发生.
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消咳喘片对豚鼠支气管平滑肌的影响
目的:研究消咳喘片(Xiaokechuan Tablets)对正常及致敏豚鼠支气管收缩的影响及平喘作用.方法:通过离体和整体实验,观察消咳喘片对以组胺和乙酰胆碱引起的正常豚鼠支气管的收缩和以卵蛋白诱发的致敏豚鼠支气管收缩的影响.结果:离体实验,消咳喘片52mg·L-1对组胺致正常豚鼠气管片的收缩具有对抗作用,对卵白蛋白所致的致敏豚鼠支气管平滑肌收缩有极显著的抑制作用(P＜0.01).对乙酰胆碱所致气管片收缩作用明显;整体实验,消咳喘片18mg·kg-1可显著延长卵白蛋白所致的致敏豚鼠呼吸困难,抽搐和跌倒的潜伏期(P＜0.01).结论:消咳喘片能拮抗组胺刺激引起的正常豚鼠和卵白蛋白引起的致敏豚鼠离体气管片的收缩,抑制致敏豚鼠哮喘的发生.
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不同给药途径对灯盏花素注射液主动全身过敏性的试验研究
目的 采用腹腔致敏静脉激发、口鼻雾化致敏激发两种不同给药途径观察动物给予灯盏花素注射液后,是否产生竖毛、咳嗽、呼吸困难甚至死亡等全身过敏反应.方法 将豚鼠分为阴性吸入组、阴性注射组、阳性吸入组、阳性注射组,灯盏花素注射液0.32和1 mg/kg吸入组、注射组.致敏阶段,灯盏花素注射液吸入组动物分别吸入不同浓度等体积的药液,隔日给药,共3次;同时注射组动物分别腹腔注射与上述浓度、体积相同的药液.激发阶段,吸入组动物于末次致敏后第14、21天吸入不同浓度的灯盏花素注射液,注射组动物经静脉注射上述浓度、体积相同的溶液,观察并记录主动全身过敏性反应情况.阳性对照组分别采用2.0和4.0 mg/ml卵蛋白(OVA)溶液致敏和激发.阴性对照组均采用氯化钠注射液.激发后各组动物眼眶取血并采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清组胺(HIS)含量.结果 阳性对照组动物阳性反应发生率为100％,阴性对照组和灯盏花素注射液0.32和1 mg/kg组动物均未见明显过敏反应.阳性组所有动物血清HIS含量较阴性组均升高,差异有统计学意义(P＜0.01),灯盏花素注射液1 mg/kg吸入组动物血清HIS含量较阴性吸入组亦升高,差异有统计学意义(P＜0.05)、较阳性吸入组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经口鼻吸入灯盏花素注射液l mg/kg可能存在潜在过敏反应.
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建立同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法测定烘焙食品中来源于鸡蛋的3种主要致敏蛋白
目的 建立用于测定烘培食品中来源于鸡蛋的3种主要致敏蛋白溶菌酶、卵转铁蛋白、卵白蛋白的超高效液相色谱-串联质谱法.方法 筛选溶菌酶、卵转铁蛋白、卵白蛋白的特异水解肽段,合成特异肽段及其同位素标记肽段,样品用200 mmol/L Tris-HCl(pH=8.0)匀浆提取2～3次,提取液与胰蛋白酶混匀(胰蛋白酶与蛋白质的质量比为1:50),37℃振摇酶解12h,采用电喷雾正离子模式下多反应监测(MRM),同位素内标法定量.结果 9条特异水解肽段标准溶液在1～100 nmol/L范围内线性良好,相关系数(r2)均＞0.995,烘培食品中3种致敏蛋白的定量限为0.4～ 10.0 μg/g,回收率在65.0％～108.5％之间,相对标准偏差(RSD)＜ 15.0％.结论 方法灵敏度和特异性高,适用于烘培食品中来源于鸡蛋的3种致敏蛋白的检测.
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复方川贝颗粒对OVA介导的豚鼠过敏性哮喘模型的平喘作用机制研究
目的:探讨复方川贝颗粒对豚鼠哮喘模型的平喘作用机制.方法:70只豚鼠,随机分为7组,每组10只,雌雄各半,即模型组,复方川贝颗粒(0.67,1.34,2.68)g·kg-1组,二陈丸组(2.325 g·kg-1),地塞米松组(9.30×10-4 g·kg-1),正常对照组；试验开始第1天,豚鼠ip10％卵白蛋白(OVA)生理盐水溶液致敏,致敏后第13天灌胃给药,每日1次,给药7d,各组均按体重ig,模型组和正常对照组给予等容积蒸馏水,15 d后用1％卵白蛋白生理盐水溶液激发5次,每日1次,建立豚鼠过敏性哮喘模型,观察复方川贝颗粒对哮喘豚鼠血清中血栓素B2(TXB2)、白三烯B4(LTB4)的含量、哮喘潜伏期及肺部病理切片嗜酸粒细胞(EOS)计数.结果:与正常对照组比较,模型组豚鼠血清中的TXB2,LTB4含量明显升高(P＜0.01),EOS明显增多(P＜0.01).与模型组比较,复方川贝颗粒(1.34,2.68 g·kg-1)均能降低哮喘豚鼠血清中的TXB2,LTB4含量(P ＜0.05,P＜0.01)；复方川贝颗粒(0.67,1.34,2.68 g·kg-1)剂量均能减少哮喘豚鼠小气道周围EOS总数(P＜0.01),延长豚鼠哮喘潜伏期(P ＜0.05,P＜0.01).结论:复方川贝颗粒对OVA介导的豚鼠过敏性哮喘模型的平喘作用机制与调节血清炎性介质和减少EOS浸润有关.
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黄龙舒喘颗粒平喘机理的实验研究
黄龙舒喘颗粒是中日友好医院晁恩祥治疗支气管哮喘的经验方,具有疏风解痉、宣肺平喘的功效,临床应用取得了一定的疗效[1].为了进一步阐明其平喘作用机理,我们观察了黄龙舒喘颗粒对卵白蛋白、磷酸组胺诱发豚鼠过敏性哮喘的影响.现将研究方法与结果报告如下.
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呼吸道合胞病毒对致敏小鼠T辅助细胞相关细胞因子表达的作用
目的探讨经卵白蛋白(OVA)雾化致敏的小鼠受呼吸道合胞病毒(RSV)感染后肺内炎症发展的特点及与T辅助细胞有关的细胞因子的反应.方法 40只小鼠随机分成4组,每组10只.对照组:磷酸盐缓冲液(PBS)雾化10天,HEP-2细胞液滴鼻;RSV组:PBS雾化,RSV滴鼻;OVA组:OVA致敏,HEP-2细胞液滴鼻;OVA+RSV 组:OVA致敏,RSV滴鼻.第16天,每组各6只大鼠肺泡灌洗作细胞计数及分类,酶链免疫吸附试验(ELISA)测定白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的含量;余4只取肺组织用于病理分析和提取总RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测IL-4、IL-5、IFN-γ的mRNA表达量.结果 (1)肺泡灌洗液中细胞总数:单纯RSV组为(14.5±5.4)×106/ml、OVA+RSV组为(16.8±4.9)×106/ml与对照组(7.7±2.4)×106/ml比较差异有显著性(P<0.05);淋巴细胞:RSV组为(0.63±0.05)、OVA+RSV组为(0.77±0.09),与OVA组(0.36±0.03)、对照组(0.28±0.05)比较差异有显著性(P<0.05);嗜酸细胞:OVA+RSV组为(0.069±0.010)与其它三组(0.003±0.001、0.009±0.005、0.010±0.004)比较差异也有显著性(P均<0.05).(2)肺病理:RSV组和OVA+RSV组炎症浸润与对照组比较差异有显著性(P<0.05).(3)肺组织中细胞因子mRNA的表达:RSV组(1.05±0.12)IFN-γ mRNA与对照组(0.00±0.00)比较(P<0.05),IL-4 mRNA几乎不表达,IL-5 mRNA表达极少;OVA+RSV组IFN-γ mRNA表达较RSV组少,但IL-4 、IL-5 mRNA表达非常显著.(4)肺泡灌洗液中细胞因子的含量:RSV组IFN-γ与对照组比较差异有显著性(P<0.05), 但IL-4无变化, 呈Th1反应.OVA+RSV组[(24.0±1.5) ng/ml] IFN-γ与RSV组[(33.8±1.1) ng/ml] 比较明显减少,但IL-4的含量较其余各组明显增加, 呈Th2反应.结论单纯RSV感染后肺组织炎症T辅助细胞因子改变呈Th1反应, 但经卵白蛋白致敏后再感染RSV, 肺组织呈Th2反应.
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口服卵清蛋白和滋养细胞膜抗原诱导小鼠妊娠免疫耐受效果的观察
目的观察口服卵清蛋白(OVA)和滋养细胞膜抗原(TMA)诱导小鼠妊娠免疫耐受效果,探讨原因不明复发性自然流产的口服免疫疗法.方法建立自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2,分不同剂量观察经口服途径给妊娠CBA/J小鼠OVA和TMA1、TMA2 3种抗原后胚胎丢失率的变化.实验分为4组:(1)口服抗原(即OVA、TMA1和TMA2)免疫组:分为低剂量单次(即OVA 20 μg×1次,TMA1和TMA2均为500 μg×1次)、低剂量5次(即OVA 20 μg×5次、200 μg×5次、2 mg×5次,TMA1和TMA2均为500 μg×5次、1 mg×5次、2 mg×5次)和高剂量单次(即OVA 20 mg×1次,TMA1和TMA2均为8 mg×1次);(2)另设3个对照组,即未免疫组(未予任何处理)、主动免疫组(腹腔注射雄性BALB/c小鼠脾细胞)和空白对照组(口服生理盐水).结果 4组小鼠的胚胎丢失率分别为:未免疫组29%,主动免疫组8%,空白对照组28%;口服抗原免疫组中,口服OVA 20 μg×1次、20 μg×5次、200 μg×5次、2 mg×5次、20 mg×1次者分别为26%、6%、10%、4%和10%,口服TMA1及TMA2 500 μg×1次、500 μg×5次、1 mg×5次、2 mg×5次、8 mg×1次者分别为22%及26%、23%及4%、27%及11%、27%及3%、24%及4%.口服OVA和TMA2后,除低剂量单次者外,其他剂量的小鼠胚胎丢失率均有较大幅度下降,分别与未免疫组、空白对照组比较,差异均有显著性(P<0.05),与主动免疫组比较,差异无显著性(P>0.05),其中以口服OVA 2 mg×5次(4%)和TMA2 2 mg×5次(3%)者下降显著;口服TMA1后,无论低剂量单次、低剂量5次还是高剂量单次小鼠的胚胎丢失率与未免疫组、空白对照组比较,差异均无显著性(P>0.05).结论经口服途径给自然流产小鼠模型以适当剂量的抗原OVA和TMA2后,能有效诱导小鼠妊娠免疫耐受形成,降低小鼠的胚胎丢失率.
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外源性硫化氢对哮喘大鼠肺Muc5ac表达的影响
目的 观察卵白蛋白(ovalbumin,OVA)诱导建立的急性支气管哮喘大鼠模型,探讨气体信号分子硫化氢(H2S)在哮喘发病中的作用.方法 选取26只健康SD大鼠,按随机数字表法将其分为哮喘组(n=9)、NaHS干预组(n=9)和对照组(n=8).激发后24 h解剖大鼠、取肺,观察大鼠支气管周围炎性细胞浸润程度,并进行评分.采用免疫组化染色法测定外源性硫氢化钠(NaHS)、硫化氢为供体处理后的大鼠肺部黏蛋白基因Muc5ac的表达情况.结果 光镜下支气管周围炎性细胞浸润程度评分(中位数表示),哮喘组为4分,NaHS组为2分,对照组为1分,三组间比较,差异有显著意义(H＝13.75,P<0.05).哮喘组、NaHS干预组及对照组肺muc5ac蛋白含量(阳性面积表示)分别为(1 330.22±662.87) μm2,(715.88±282.49) μm2及(501.75±270.58) μm2,三组间比较,差异有显著意义(F=11.82,P<0.01). 结论哮喘组大鼠黏蛋白基因Muc5ac表达增加,外源性硫化氢可减轻哮喘气管炎症,对哮喘急性发作起保护作用.
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母鼠妊娠期卵清蛋白暴露时机对仔鼠成年免疫反应的作用
目的 观察雌鼠妊娠期卵清蛋白(OVA)暴露对仔鼠OVA再暴露的免疫反应作用.方法 采用前瞻性对照研究,将雌鼠不同孕期OVA暴露的仔鼠分为孕早期组、孕中期组、孕晚期组及平行对照组,各孕期组仔鼠于6~8周龄时多次OVA再暴露,观察记录小鼠症状并评分.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测仔鼠血清OVA特异性IgE及脾脏原代淋巴细胞体外OVA培养上清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)表达水平,进行单因素方差分析或秩和检验.结果 各孕期组仔鼠均发生急性腹泻但程度不同,孕晚期组仔鼠早(2 d)出现腹泻,症状表现及评分亦突出,孕早期组、孕中期组、孕晚期组分别为(7.0±1.0)、(7.1±1.1)、(9.9±2.2)分(P<0.01);各孕期组仔鼠OVA特异性IgE升高,以孕晚期组仔鼠为著,吸光度(A)值:对照组、孕早期组、孕中期组、孕晚期组分别为0.27±0.06、0.51±0.13、0.50±0.09、0.63±0.13(P<0.01);各组仔鼠脾脏淋巴细胞培养上清IFN-γ无明显改变,对照组、孕早期组、孕中期组、孕晚期组分别为(133±7)、(133±4)、(134±6)、(132±4)pg/ml(P均>0.05);各孕期组仔鼠IL-4表达均升高,对照组、孕早期组、孕中期组、孕晚期组分别为(25.3±2.4)、(32.4±4.4)、(35.0±5.4)、(47.1±5.8)pg/ml(P均<0.01),以孕晚期组为著(P均<0.01).结论 雌鼠孕晚期OVA暴露仔鼠生后OVA再暴露的过敏反应更严重,提示孕晚期是仔鼠宫内致敏的高危时机,或为"窗口期".
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金银花水提物对卵清蛋白致敏小鼠的免疫调控作用
目的研究中药金银花水提物(以下简称金银花)对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠的免疫调控作用,探索中药治疗食物过敏的可行性.方法取BALB/c小鼠40只,均分为5组,每组8只,按照肠道激发后灌服不同浓度的金银花水提物分为100 mg/100 ml(H)、50 mg/100 ml(M)、25 mg/100 ml(L)浓度组,激发后不给药组(Ch),以及正常生理盐水(NS)对照组.取空肠行HE及甲苯胺蓝染色;组织荧光法测定小肠组胺含量;ELISA法测定外周淋巴组织单个核细胞(PLNMC)培养上清液中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)及血清OVA特异性IgE(OVA-sIgE)水平;RT-PCR测定PLNMC中IL-12p40 mRNA表达;足垫肿胀实验检测迟发型超敏反应.结果 H、M组浓度的金银花水提物可缓解过敏小鼠小肠绒毛炎症,减轻肥大细胞聚集和脱颗粒,提高固有层完整肥大细胞比率,减轻过敏小鼠肠道组胺释放,降低过敏小鼠体内IL-4、OVA-sIgE水平及IL-4/IFN-γ比值,抑制PLNMC中IL-12 mRNA表达;三种浓度金银花可缓解OVA介导的小鼠足垫迟发性超敏反应(DTH).结论证实金银花水提物可参与OVA致敏小鼠的免疫调控,对缓解OVA介导的小鼠IgE及细胞介导的变态反应有利,用于食物过敏治疗具有潜在研究价值.
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呼吸道变应性炎性反应小鼠模型的建立
目的 探讨建立呼吸道变应性炎性反应小鼠模型的方法.方法 采用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)作为变应原,对模型组(5只)BALB/c小鼠腹腔注射OVA与免疫佐剂(氢氧化铝)致敏,空气雾化吸入联合鼻腔滴注OVA试剂激发的方法构建模型.另设对照组(5只),用磷酸盐缓冲液(PBS)替代OVA进行致敏和激发.末次激发后对小鼠鼻部症状进行评分,评估小鼠鼻黏膜嗜酸粒细胞浸润、肺组织支气管周围炎性反应细胞浸润和支气管上皮杯状细胞增生等病理学改变情况,检测小鼠血浆OVA特异性IgE抗体浓度,检测小鼠肺泡灌洗液中白细胞介素(interleukin,IL)4和IL-5细胞因子水平.结果 模型组小鼠能够成功模拟出打喷嚏、鼻痒挠鼻等症状,并且成功诱导出鼻中隔黏膜下嗜酸粒细胞及其他炎性反应细胞的浸润,肺部小支气管和小血管周围炎性反应细胞的浸润,以及支气管上皮杯状细胞的增生等病理生理学改变.模型组、对照组小鼠血浆OVA特异性IgE抗体质量浓度分别为(1237.00±153.20)、(191.90±43.20) pg/ml；模型组、对照组小鼠肺泡灌洗液中IL-4分别为(46.50±10.15)、(7.96±1.80)pg/ml,IL-5分别为(50.81±11.41)、(7.53±2.23) pg/ml,两组差异均有统计学意义(t值分别为6.569、3.738、3.724,P值均＜0.05).结论 采用OVA致敏和激发的造模方案,建立一种同时了解上下呼吸道的变应性炎性反应的小鼠模型,为研究发病机制和药效评估提供了一种可行的研究方法.
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细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4胞外区蛋白阻断小鼠变应性鼻炎的研究
目的探讨变应性鼻炎免疫治疗的新方法. 方法构建细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,CTLA4)胞外区蛋白的酵母表达系统,以获取具有生物学活性的CTLA4胞外区蛋白;采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎.CTLA4胞外区蛋白组在每次激发前予以CTLA4胞外区蛋白200 μg/只腹腔注射,观察小鼠变应性鼻炎相关症状和鼻黏膜形态学改变.结果通过CTLA4胞外区蛋白的酵母表达系统可获得相对分子质量为28 000、经蛋白免疫印迹(Western blot)鉴定的CTLA4胞外区蛋白.该纯化蛋白能显著抑制混合淋巴细胞反应中T细胞的增殖,抑制率为95.4%.变应性鼻炎组小鼠在OVA激发后出现流涕、喷嚏等症状;鼻黏膜出现组织水肿、充血、炎性细胞渗出等形态学改变.CTLA4胞外区蛋白组小鼠鼻部症状不明显,鼻黏膜无明显形态学改变.结论 CTLA4胞外区蛋白可阻断小鼠变应性鼻炎的发生,其作用机理可能与其抑制T细胞活化有关.
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不同剂量变应原免疫对新生小鼠成年后免疫状态的影响
目的 研究小鼠生命早期不同剂量变应原免疫干预对将来免疫功能状态的影响.方法 50只新生小鼠分完全随机为4组,出生后第1、8、15天给予不同剂量卵清蛋白(ovalbumin,OVA)或生理盐水及佐剂皮下注射.NS组:10只,皮下注射生理盐水；NS+ AL组:10只,皮下注射生理盐水+ Al(OH)3；小剂量组:15只,皮下注射10 μg OVA +AL(OH)3;大剂量组:15只,皮下注射1000 μg OVA +Al(OH)3.5周龄时尾静脉注射激发,其中NS组及NS+ AL组给予生理盐水激发,小剂量组及大剂量组予100 μg OVA激发,1周后收集血清,检测OVA特异性IgE、IgG1及IgG2a含量.行脾单个核细胞培养后检测上清中白细胞介素(interleukin,IL)4、γ干扰素(interferon,IFN-γ)、IL-10水平.流式细胞术检测脾单个核细胞中CD4+ IL4+、CD4+ IFN-γ+、CD4+ IL-10+细胞表达情况.结果 小剂量组血清OVA特异性IgE为(0.33 ±0.18),高于NS组的(0.07 ±0.01)、NS+ AL组的(0.09 ±0.04)、以及大剂量组的(0.17±0.10),差异有统计学意义(t值分别为-3.46、-3.21、2.58,P值分别＜0.01,＜0.01,＜0.05).大剂量组OVA-IgE高于NS组(t=-2.53,P＜0.05)但与NS+ AL组间差异无统计学意义(t=-2.04,P＞0.05).小剂量组及大剂量组OVA特异性IgG1及IgG2a均高于NS及NS+ AL组(P值均＜0.05).脾细胞培养细胞因子检测结果显示,小剂量组IL-4、IFN-γ及IL-10均高于NS及NS+ AL组(P值均＜0.01).但小剂量组IFN-γ/IL-4比值低于NS及NS+ AL组(t值分别为2.14、3.44,P值均＜0.05),而大剂量组IFN-γ/IL-4比值高于NS及NS+ AL组(t值分别为-2.14、-1.61,P值均＜0.05).流式检测结果表明,大剂量组CD4+ IL-4+细胞较小剂量组明显减少(P＜0.05),与NS组及NS+ AL组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 生命早期小剂量OVA干预,可使小鼠机体形成Th2方向为主导的特异性免疫反应；而大剂量OVA干预时,则可使其形成Th1方向为主导的特异性免疫反应.
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肠球菌属益生菌对实验性变应性鼻炎的抗变态反应作用研究
目的 探讨经热处理及酶裂解的肠球菌faecalis FK-23菌株(简称LFK)和经热处理的肠球菌faecium sp.TN-3菌株(简称TN)对实验性变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的抗变态反应作用.方法 BALB/c小鼠24只完全随机分为4组:阳性对照组、LFK组、TN组、阴性对照组.采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)腹腔注射及鼻腔激发建立AR小鼠模型,阴性对照组以生理盐水代替OVA进行腹腔注射及鼻腔激发.LFK组和TN组分别给予相应的益生菌制品对小鼠进行经口灌胃,每次0.5 ml(60 mg),每日1次,共计42 d；阳性和阴性对照组用生理盐水灌胃处理.观察经灌胃干预后第21、27、35天小鼠搔鼻和喷嚏次数.第42天取小鼠鼻部组织进行HE染色,观察鼻黏膜嗜酸粒细胞的浸润程度.采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清和脾细胞培养液中γ干扰素(interferon,IFN)、白细胞介素(interleukin,IL)4和OVA特异性IgE水平.结果 ①在27 d,LFK组小鼠的搔鼻次数与阳性对照组相比明显减少,差异有统计学意义(=2.95,P=0.028)；在35 d,LFK组、TN组小鼠的搔鼻次数(f值分别为3.75和3.06,P值分别为0.005和0.011)和喷嚏次数(t值分别为2.56和3.35,P值分别为0.038和0.01)均明显减少,与阳性对照组相比差异有统计学意义.②在42 d,小鼠鼻黏膜组织切片HE染色显示,LFK组、TN组的嗜酸粒细胞计数与阳性对照组相比均明显减少(t值分别为3.44和2.97,P值分别为0.014和0.025),但两组的嗜酸粒细胞计数仍明显高于阴性对照组(t值分别为2.54和3.39,P值分别为0.044和0.015).③在42 d,LFK组小鼠的血清IL-4和OVA特异性IgE水平、脾细胞培养液中IFN-γ和IL-4水平与阳性对照组相比,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).TN组小鼠血清IFN-γ水平为(27.07 ±3.83) pg/ml,明显高于LFK组的(14.83 ±0.99) pg/ml,差异有统计学意义(Z=2.49,P=0.016),但与阴性对照组的(37.12±1.65) pg/ml相比差异无统计学意义(Z=1.18,P=0.343).TN组小鼠血清IL-4水平为(34.48±7.53) pg/ml,明显低于阳性对照组的(58.68±6.59) pg/ml,差异有统计学意义(Z=2.11,P=0.035),但明显高于阴性对照组的(20.22±1.75) pg/ml,差异有统计学意义(Z=2.31,P=0.021).TN组小鼠脾细胞培养液中IFN-γ水平明显高于LFK组(Z=2.72,P=0.03)和阳性对照组(Z =2.30,P=0.029),而IL-4水平(Z=2.12,P=0.034)以及血清OVA特异性IgE水平(Z=2.31,P=0.021)明显低于阳性对照组,差异均有统计学意义.结论 在AR小鼠模型,经口给予益生菌制品LFK或TN均可减轻鼻部变应性症状,减少鼻黏膜组织的嗜酸粒细胞浸润.TN具有显著的调节细胞因子IFN-γ和IL-4水平的作用,且对抗原特异性IgE水平具有明显的抑制作用.
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人重组白细胞介素-1受体拮抗剂对豚鼠离体气管平滑肌的影响
目的观察人重组白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)对豚鼠离体气管平滑肌(TSM)的影响.方法用离体器官装置、张力换能器、MedLab记录系统测定TSM张力.结果 IL-1ra对正常TSM和卵白蛋白致敏TSM有直接舒张作用,EC50分别为8.06×10-8和5.88×10-7mol*L-1.IL-1ra可剂量依赖性抑制或拮抗His,ACh和5-HT引起的气管收缩.但低浓度却增强ACh收缩作用.IL-1ra亦能显著抑制或对抗卵白蛋白致敏豚鼠的气管收缩,IC50为4.48×10-7 mol*L-1.结论在一定浓度范围内,IL-1ra对正常、痉挛和致敏的豚鼠离体气管平滑肌都有松弛作用.
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沙丁胺醇与色甘酸钠对大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒过程中磷脂酶D活性的影响
采用主动致敏的大鼠腹腔肥大细胞(RPMC)为实验材料,细胞脱颗粒以β-氨基己糖苷酶释放率为指标,细胞磷脂酶D(PLD)活性采用酶联化学发光法检测. 结果发现,卵白蛋白(4 mg*L-1)攻击主动致敏的RPMC 120 s后,细胞PLD活性与β-氨基己糖苷酶释放率均明显增加,分别为对照组的2倍及8倍以上. 1%正丁醇,10 mmol*L-1 2,3-二磷酸甘油酸能显著抑制PLD活性,且使PLD活性及细胞β-氨基己糖苷酶释放率均降低到对照水平. Wortmannin, 300 nmol*L-1能显著抑制PLD活性,并减少细胞β-氨基己糖苷酶释放. 1,10 μmol*L-1的沙丁胺醇与色甘酸钠均能部分抑制PLD活性,并减少细胞β-氨基己糖苷酶的释放. 结果表明, PLD在主动致敏的RPMC脱颗粒过程中起一定作用;沙丁胺醇(1,10 μmol*L-1),色甘酸钠(1,10 μmol*L-1)抑制主动致敏的RPMC脱颗粒的作用机理与抑制PLD有关.
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大鼠被动皮肤过敏反应实验条件的优化
目的：通过卵白蛋白（OVA）致敏大鼠优化被动皮肤过敏反应（PCA）的实验条件。方法1~2月龄SD大鼠ip给予OVA（每只0.2，1.0和5.0 mg）与弗氏完全佐剂的混合乳液，隔日1次，共3次，进行致敏。分别于末次致敏后1，3，5，7，10，12，14，16和18 d用ELISA检测血清总IgE（T-IgE）水平和OVA特异性IgE （OVA-sIgE）水平。大鼠致敏后12~16 d制备致敏血清。大鼠皮内注射致敏血清被动皮肤致敏后，于0.5，1.5，3，6，12，24，36，48和60 h后iv给予同等剂量OVA和伊文思蓝激发，于激发后10，30和60 min测量大鼠皮肤蓝斑直径。结果 OVA致敏大鼠血清T-IgE和OVA-sIgE水平分别于末次致敏后3~7 d和12~16 d达高峰；在OVA 0.2~5.0 mg剂量范围内，OVA-sIgE与T-IgE水平无明显关联性；OVA 1.0和5.0 mg致敏大鼠血清能诱发大鼠PCA；皮内注射致敏血清0.5~3 h后激发的皮肤蓝斑形态规则，范围大；激发后30~60 min检测的皮肤蓝斑范围大，界线清晰，形状规则，且着色较深。结论 PCA优化条件为1~2月龄大鼠隔日每只ip给予OVA 1.0~5.0 mg，共致敏3次，致敏后12~16 d制备致敏血清。在被动皮肤致敏0.5~3 h后，进行激发，30~60 min后检测皮肤内层蓝斑直径。
