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融合His标签的HCV包膜糖蛋白E2的真核表达及意义
目的构建HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合的真核表达载体并在CHO细胞中表达,为研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定基础.方法利用PCR技术从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E2的基因,将其插入原核表达载体pET28(a)载体中,构建pET28(a)-HCVE2,从pET28(a)-HCVE2上获得His-HCVE2融合基因,插入pcDNA3.1,构建表达HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1-His-E2.用脂质体介导法将pcDNA3.1-His-E2转染CHO细胞,通过间接免疫荧光、Western blot检测融合蛋白在CHO细胞内的表达.结果转染HCV E2与His融合基因的真核表达载体的CHO细胞内有融合蛋白的表达.结论与His标签融合的HCV包膜糖蛋白E2能够在CHO细胞内表达.
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丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E2与CD81分子的研究进展
丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus;HCV)是黄病毒家族中的一种正链RNA病毒,全球大约有一亿七千万人慢性感染HCV.HCV的感染可导致慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌等肝部疾病,而且大多数HCV感染的病例还与冷球蛋白血症、B淋巴细胞增殖疾病相关.虽然目前对HCV的基因组及蛋白结构认识的比较清楚,但由于尚未建立一个完善的HCV体外培养系统,使得对HCV生活周期的认识停滞不前,HCV的致病机制也就成为期待解决的一个难题.
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庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达
用PCR扩增出HGV E2全基因,克隆进杆状病毒表达载体pFASTBACHTa中,构建成重组转座载体pFASTBAC-E2,转化DH10BAC大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得含HGV E2基因的重组杆状病毒穿梭载体,转染昆虫草地夜蛾Sf9细胞,出现细胞病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾Sf9单层细胞及甜菜夜蛾幼虫,分别收集Sf9细胞和甜菜夜蛾幼虫体内的血淋巴细胞,进行12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见表达的融合蛋白带,经亲和层析进行蛋白纯化,用ELISA方法检测各类血清标本,初步研究HGV E2糖蛋白的抗原性.
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HCV结构蛋白E2在果蝇S2细胞中的稳定表达
目的 获得在果蝇S2(S2)细胞中稳定表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白2(rE2).方法 PCR 扩增截短型E2基因,克隆至pCR2.1-T载体,将测序正确的基因亚克隆至表达载体pMT/Bip/VS-HisC,构建重组表达载体pMT-E2.用FuGENE HD转染试剂将pMT-E2转染至S2细胞,并筛选抗性细胞,然后诱导目的蛋白表达；以Western-blotting法鉴定表达产物与HCV感染者血清反应性.结果 成功构建截短型HCV E2表达载体pMT-E2,并获得到稳定表达rE2蛋白的S2细胞株,Western-blotting法证明rE2具有良好的免疫学活性.结论 在S2细胞成功表达的HCV rE2蛋白可用于HCV感染者血清的鉴定,为HCV诊断性抗原的优化和重组疫苗的研发提供了实验材料.
