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Syk表达对胃癌细胞凋亡的影响
背景与目的:肿瘤的信号传导途径中,脾酪氨酸蛋白激酶Syk起着重要的作用.有研究认为Syk是与癌基因Her-2功能相反的候选抑癌基因.我们研究Syk的表达与胃癌细胞转移、凋亡的关系,探索胃癌治疗新靶位.方法:RT-PCR检测检测44例胃癌及癌旁正常胃组织标本中Syk mRNA的表达情况,分析其与胃癌病理学特征及p53的关系,并用流式细胞仪检测44例胃癌组织肿瘤细胞凋亡,分析Syk表达与胃癌组织肿瘤细胞凋亡的情况.结果:所有癌旁正常胃组织都有Syk基因的表达,而44例胃癌组织中只有10例有表达,癌旁正常胃组织与胃癌组织中Syk基因表达率差异有显著性(χ2=9.14,P＜0.05).有淋巴结转移的35例胃癌组织中,2例有Syk基因表达,无淋巴结转移的9例胃癌组织中有8例检测到Syk mRNA的表达,有淋巴结转移的胃癌组织中Syk mRNA的表达率显著降低(χ2=23.66,P＜0.05).Syk阳性表达的10例胃癌组织的凋亡率为(27.4±4.5)%,34例Syk阴性的胃癌组织的凋亡率为(3.5±2.2)%,Syk阳性表达的胃癌组织的凋亡率显著高于Syk表达阴性组(t=3.47,P＜0.05).结论:Syk对胃癌的生长和转移可能有抑制作用,诱导胃癌组织肿瘤细胞凋亡可能是其抑癌作用的主要原因之一.
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天花粉蛋白抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长及逆转syk基因甲基化的研究
目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导细胞凋亡过程中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)基因甲基化状态的改变,以寻找新的去甲基化药物.方法:采用MTT法分析TCS对MDA-MB-231细胞增殖的影响,Giemsa染色法观察TCS作用后细胞形态学的变化,FCM检测不同浓度TCS作用48 h后MDA-MB-231细胞凋亡和细胞周期分布情况,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测MDA-MB-231细胞经TCS作用前后syk基因甲基化状态的改变,RT-PCR方法分析TCS作用后MDA-MB-231细胞中syk、Dnmts和MBD2 mRNA表达量的变化,比色法检测TCS对MDA-MB-231细胞DNA甲基转移酶活性的影响.结果:TCS体外对MDA-MB-231细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性;TCS可诱导MDA-MB-231细胞出现空泡样变性、核固缩和核碎裂等细胞凋亡形态学改变,能使MDA-MB-231细胞凋亡并可诱导细胞生长周期阻滞,凋亡率明显高于对照组(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性.TCS可以逆转MDA-MB-231细胞syk基因启动子区甲基化状况;MDA-MB-231细胞syk mRNA表达阴性,经TCS作用后,syk mRNA表达阳性;MDA-MB-231细胞经TCS作用48 h前后Dnmts和MBD2 mRNA表达量没有明显变化(P>0.05),但Dnmts活性降低.结论:TCS在抑制MDA-MB-231细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中对syk基因具有明显的去甲基化作用,因而可能成为新型的去甲基化药物.
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候选抑癌基因Syk启动子甲基化与胃癌转移相关
目的:探讨Syk(spleen tyrosine kinase)基因启动子甲基化在胃癌发生、转移过程中的作用及其临床意义.方法:采用RT-PCR检测61例胃癌组织、癌旁组织中Syk mRNA的表达,并用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子甲基化情况.结果:61例癌旁组织均检测到Syk基因的表达,胃癌组织有14例检测到Syk基因的表达,Syk基因在胃癌组织中表达率显著降低(P＜0.05).61例胃癌旁组织未发现有Syk基因启动子的甲基化,而61例癌组织中有21例检测到Syk基因启动子的甲基化,癌组织Svk基因启动子甲基化率显著高于癌旁组织(P＜0.05).有淋巴结转移的31例胃癌组织中,有17例Syk基因启动子甲基化,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05).结论:Syk基因启动子甲基化是导致Syk基因失活的原因之一,Syk基因启动子的甲基化可能与胃癌的发生、转移有关.
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乳腺癌和非癌组织中Syk、survivin和Ki-67的表达及其相关性
目的 探讨乳腺癌和非癌组织中Syk、survivin和Ki-67的表达及其相互关系.方法 应用免疫组化SP法检测52例乳腺浸润性导管癌和39例非癌组织(包括癌旁乳腺组织17例和乳腺纤维腺瘤组织22例)中Syk、survivin和Ki-67的表达.结果 39例非癌组织中Syk均呈阳性表达,而survivin及Ki-67均呈阴性表达.52例乳腺癌组织中,Syk阳性22例(42.3%),survivin阳性36例(69.2%),Ki-67阳性32例(61.5%).乳腺癌中Syk阳性表达率低于非癌组织(χ2=31.01, P＜0.01);乳腺癌中survivin(χ2=41.82,P＜0.01)和Ki-67(χ2=34.37,P＜0.01)阳性表达率均高于非癌组织.相关分析显示,Syk与survivin的表达呈负相关(r=-0.53,P＜0.01);Syk与Ki-67的表达相关系数呈负值(r=-0.22,P=0.12);survivin与Ki-67的表达呈正相关(r=0.33,P＜0.05).结论 Syk可能有抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡的功能,提示Syk可能是一种抑癌基因,可作为乳腺癌新的分子标记物.联合检测Syk、survivin和Ki-67在乳腺癌中的表达,有望成为估价乳腺癌生物学行为的参考指标.
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肥大细胞的酪氨酸激酶与抗过敏药物的分子靶向
肥大细胞脱颗粒为过敏反应中的重要环节，其中 Src家族激酶（Src family kinase，SFKs）参与激活肥大细胞脱颗粒的起始信号。SFKs 中的 Lyn、Fyn、Syk 等在肥大细胞脱颗粒过程中发挥重要调节作用。调节 SFKs 可抑制肥大细胞脱颗粒过程，并抑制过敏反应的发生。因此，SFKs 抑制剂可以作为过敏性疾病的潜在药物。针对于 SFKs 的靶向药物的研发将是抗过敏药物发展的新方向之一。
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B细胞受体信号及其靶向抑制剂在恶性淋巴瘤中的作用
淋巴瘤是来源于成熟淋巴细胞的恶性肿瘤,B细胞受体( B cell receptor,BCR)信号通路在B细胞的发育和维持中起重要作用。恶性B细胞的生长和存活由BCR及其信号通路介导。目前,已相继研发了针对通路的各种靶酶如Syk、Btk及PI3K的抑制剂。该文对BCR信号通路及其靶向抑制剂在恶性淋巴瘤中作用的研究进展做一综述。
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siRNA抑制syk基因对外周T细胞淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨siRNA抑制脾酪氨酸激酶(syk)基因后对外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78细胞增殖与凋亡的影响.方法 针对syk基因特异靶点设计3条siRNA(siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3),采用电穿孔法转染外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78,同时设Mock组和siRNA-NC组,转染48 h后,分别用RT-PCR和Western blot技术检测syk mRNA和蛋白的表达水平,筛选出有效的syk siRNA;syk siRNA转染HUT-78后分别用软琼脂克隆形成实验检测syk下调后HUT-78细胞的克隆形成能力,MTT法检测干扰24、48、72 h后细胞增殖情况,流式细胞术检测syk下调后HUT-78细胞的凋亡情况.结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与Mock组和siRNA-NC组相比,3条siRNA均能有效降低HUT-78细胞中syk mRNA和蛋白的表达,其中syk siRNA-1抑制效果明显.克隆形成实验显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的克隆形成能力与Mock组相比明显下降(P<0.05);MTT实验结果显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的增殖能力与Mock组相比显著下降(P<0.05);流式细胞术结果显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的凋亡比例明显高于Mock组(P<0.05).结论 siRNA下调syk基因表达后可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖、克隆形成,促进凋亡,推测syk基因在外周T细胞淋巴瘤的发生发展中发挥重要作用,有可能成为外周T细胞淋巴瘤基因治疗的新靶点.
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Syk、PI3K、Akt在外周T细胞淋巴瘤中的表达及其意义
目的 探讨脾酪氨酸激酶(Syk)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)在外周T细胞淋巴瘤(PTCL)组织中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学法检测84例PTCL组织及30例反应性淋巴组织增生(RLH)中的表达.结果 Syk、PI3K、Akt在84例PTCL组织中阳性表达率分别是73.81％、41.67％和36.90％,在30例RLH中的阳性表达率是13.33％、33.33％和23.33％,Syk蛋白在PTCL中的表达明显高于RLH(P ＜0.05),PI3K与Akt蛋白在PTCL及RLH中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).Syk表达与血清乳酸脱氢酶(LDH)水平、临床分期相关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿块大小、B症状、一般状况(PS)评分和国际预后指数(IPI)评分无关(P＞0.05);PI3K及Akt表达与患者性别、年龄、肿块大小、B症状、PS评分、临床分期、LDH水平和IPI指数均无关(P＞0.05).Syk与PI3K在PTCL中的表达有相关性(r=0.229,P＜0.05).结论 Syk在PTCL的发生发展中具有重要作用,可能与PI3K信号通路有关,与Akt的表达无直接关系.
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DNA甲基化和Syk基因甲基化与消化系肿瘤相关性的研究进展
消化道恶性肿瘤在所有恶性肿瘤的发病和死亡率中占居首位,其中一些肿瘤如肝癌、胰腺癌的预后非常差,严重威胁着人们的健康.脾酪氨酸激酶(spleentyrosine kinase,Syk)是一种非受体型蛋白酪氨酸激酶,对B细胞激活信号转导至关重要[1].近年来对Syk与肿瘤相关性研究证实,Syk可以抑制多种恶性肿瘤的生长[2],从而使非受体酪氨酸激酶在肿瘤发生、发展和转移过程中作用的研究日益成为热点.许多学者认为Syk在多种恶性肿瘤的发生、发展过程中起着极为重要的作用[2-3].
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SYK启动子甲基化与肿瘤关系的研究进展
DNA甲基化是一种发生在CpG二核苷酸上对胞嘧啶的共价修饰,由S-腺苷蛋氨酸提供甲基,在细胞内DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DN-MT)催化作用下,于DNA复制后形成5-甲基胞嘧啶的反应[1].该反应是对基因的转录和拼接具有重要影响的一种新的调控机制,其在细胞增殖,分化发育及基因突变方面等都起着重要作用.新研究表明,DNA甲基化也参与肿瘤的机制,有关基因启动子异常甲基化与肿瘤发生之间关系的研究,目前主要集中在以下4类基因:抑癌基因、DNA修复基因、肿瘤分子侵袭转移相关基因及代谢酶基因.
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Syk与NF-κB在直肠癌组织中的表达及意义
目的 检测Syk与NF-κB在直肠癌组织中的表达情况,探讨Syk在直肠癌演进过程中的可能作用机制.方法 应用免疫组化SP法检测Syk及NF-κB在50份直肠癌组织(直肠癌组)及10份癌旁正常组织(对照组)中的表达情况,采用四格表法及x2检验进行统计学分析.结果 直肠癌组NF-κB阳性表达33例(66.0％)、Syk表达缺失(阴性)20例(40.0％)；对照组NF-κB表达均为阴性,而Syk表达均为阳性,组间比较P分别＜0.01或＜0.05；直肠癌标本中Syk的表达在淋巴结转移情况及肿瘤细胞分化程度不同者中存在显著差异,Syk与NF-κB表达存在负相关关系(P＜0.05),而在性别、年龄组中表达无显著差异.结论 Syk表达的缺失与直肠癌的发生、转移存在密切关系,以Syk作为靶点进行干预对于疾病的控制和治疗存在一定的临床价值.
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李斯特菌溶血素诱导THP-1细胞产生IL-1β的分子机制的研究
目的 探讨李斯特菌溶血素LLO诱导THP-1细胞产生IL-1β的分子机制.方法 将THP-1细胞随机分为Syk处理组、未处理组及阴性对照组.Westem blot检测不同LM菌株感染巨噬细胞不同时相点Syk的磷酸化水平;免疫荧光法观察细胞内炎症复合体的关键蛋白组分ASC-speck的形成情况;实时荧光定量PCR法检测白细胞介素(IL)-1β表达.结果 WT和△hly∶∶hly菌株感染THP-1细胞0 min、15 min、30 min时,Syk磷酸化水平均较△hly明显升高;Syk处理组胞内ASC-speck阳性的细胞百分比明显低于未处理组(P＜0.01),△hly菌株感染组的ASC-speck阳性细胞百分比也明显低于WT、hly菌株感染组(P ＜0.01);Syk处理组产生的IL-1β明显低于未处理组,并且△hly菌株感染THP-1细胞产生的IL-1β较WT和△hly∶∶hlyLM感染组明显降低(P＜0.05).结论 Syk介导的信号通路参与调控LM感染过程中LLO介导的炎症复合体的形成.
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芪莲舒痞方影响CAG癌前病变大鼠突变型p53、Syk、 Survivin表达的实验研究
目的 观察芪莲舒痞方对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠突变型p53、脾酪氨酸激酶(Syk)、Survivin表达的影响,探讨芪莲舒痞方的作用机理.方法 采用“MNNG+雷尼替丁+乙醇+饥饱失调”的综合方法复制Wistar大鼠CAG癌前病变模型,按随机数字表法分为正常组、模型组、芪莲舒痞(QLSP)大、中、小剂量组和胃复春(WFC)组,分别给予药物干预后,免疫组化S-P法检测突变型p53、Syk、Survivin的表达.结果 (1)突变型p53表达:除QLSP大剂量组外,其余各组突变型p53蛋白阳性表达率较正常组均显著增强(P＜0.01);QLSP大剂量组、WFC组突变型p53蛋白阳性表达率较模型组显著降低(P＜0.01或P＜0.05).(2) Syk表达:模型组、WFC组、QLSP中、小剂量组Syk阳性表达率较正常组显著减少(P＜0.01);QLSP大剂量组Syk阳性表达率较模型组显著增多(P＜0.01).(3)Survivin表达:胃复春组、QLSP大剂量组Survivin阳性表达率较模型组显著减弱(P＜0.05或P＜0.01).结论 芪莲舒痞方能抑制突变型p53、Survivin的表达,增强Syk的表达,这可能是其逆转CAG癌前病变的作用机制之一.
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Syk和SYK-mRNA在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与腋窝淋巴结转移的关系
目的 探讨Syk及其编码基因SYK-mRNA在乳腺癌中的表达及其与腋窝淋巴结转移的相关性.方法 分别采用免疫组化SP法和原位RT-PCR方法 同步检测52例乳腺浸润性导管癌(其中有腋窝淋巴结转移者32例)和39例乳腺非癌组织中Syk蛋白和SYK-mRNA的表达.结果 Syk 和SYK-mRNA在乳腺癌中的阳性表达率分别为42.3%(22/52)和38%(20/52),均显著低于非癌组织.Syk和SYK-mRNA表达的一致率为91%.无淋巴结转移组的乳腺癌Syk和SYK-mRNA阳性表达率均显著高于有淋巴结转移组的乳腺癌,但两组的Syk和SYK-mRNA表达量差异均无统计学意义.结论 Syk(SYK-mRNA)的表达缺失与乳腺癌腋窝淋巴结转移有关,SYK-mRNA基因可能是乳腺癌的一种候选抑癌基因.
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脾源性酪氨酸激酶基因的再表达对乳腺癌细胞生长、转移的影响
目的探讨脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因的再表达对裸鼠乳腺癌肿瘤生长和转移的影响.方法 5-氮-2'-脱氧胞苷处理人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s,甲基化特异性PCR(MSP)检测Syk基因的甲基化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Syk基因的再表达,并用此处理过的细胞株和未经处理的细胞株分别接种于10裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤率及肿瘤转移情况.结果 MSP检测用5-氮-2'-脱氧胞苷处理过的人乳腺癌MDA-MB-435s细胞株,Syk基因启动子没有甲基化,RT-PCR可检测到Syk基因,用有Syk基因再表达的MDA-MB-435s细胞株接种于10只裸鼠皮下,8周后有2只形成肿瘤,无1例肺部转移,而无Syk基因表达细胞株10只都形成肿瘤,并在肺部形成转移灶.对照组的成瘤率及肺转移率显著高于治疗组.结论 5-氮-2'-脱氧胞苷通过去甲基化使MDA-MB-435细胞株中Syk基因再表达,Syk基因的再表达可抑制荷瘤裸鼠乳腺癌的生长和转移.
关键词： 5-氮-2'-脱氧胞苷 Syk 乳腺癌 甲基化特异性PCR -
芦丁联合奥沙利铂激活FKN/SYK/p38通路促进胃癌细胞凋亡
目的 探讨芦丁联合奥沙利铂对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响及机制.方法 采取对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901作为研究对象,采用MTT、流式细胞术、Western blot等方法检测细胞活力、细胞周期和相关蛋白表达的变化.结果 p38抑制剂可促进SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05);而芦丁、奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞的增殖,联合组对SGC-7901细胞的抑制作用更显著;p38抑制剂组FKN、SYK、p-p38、cleaved-caspase3、7、8、9蛋白表达与阴性对照组相比明显降低(P＜0.05);芦丁与奥沙利铂联合作用后,以上蛋白均不同程度的升高.结论 芦丁与奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与FKN/SYK/p38通路的激活有关.
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p15、syk基因启动子甲基化与直肠癌关系及预后的研究
目的：探讨直肠癌组织中p15、syk基因启动子甲基化状态与临床病理及预后之间的关系。
方法：采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）联合检测直肠癌组织及相应癌旁正常组织中p15及syk基因启动子甲基化状态，并分析两者间的关系、及其与临床病理资料之间和预后的关系。
结果：在55例直肠癌组织中，p15、syk基因启动子甲基化发生率分别为56.4%（31/55）、36.4%（20/55），对应癌旁正常组织中发生率分别为16.4%（9/55）、0%（0/55），两者间均有统计学差异（χ2=19.01， P<0.05；χ2=24.44，P<0.05)；在癌组织中检测到p15启动子甲基化的31例中10例术后癌复发转移，发生率为32.2%（10/31），在癌组织中检测到syk基因甲基化的20例中7例术后发生复发转移，发生率为35.0%（7/20）。p15基因启动子甲基化状态与直肠癌分化程度有关（P<0.05）；syk基因启动子甲基化状态与区域淋巴结转移及TNM分期有关（P<0.05）。p15基因启动子甲基化的31例中，syk基因启动子甲基化17例，p15与syk之间的甲基化状态有关（χ2=10.48，P<0.05)。
结论：直肠癌组织中p15、syk基因启动子高度甲基化，且两者具有协同性；p15、syk基因启动子高度甲基化与直肠癌的发生及术后复发转移密切相关，联合检测两者表达及基因启动子甲基化状态或有助于直肠癌的早期诊断及预后评估。 -
SYK基因启动子甲基化对肝细胞癌侵袭力的影响
目的 探讨肝癌细胞中SYK基因启动子甲基化的状态及其对肝细胞癌侵袭力的影响.方法 分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测SYK基因在肝(癌)细胞系L02、HepG2、MHCC97H、MHCC97L中的表达和甲基化状态;对SYK基因甲基化阳性的MHCC97H和HepG2细胞株利用TRANSWELL小室检测去甲基化药物5-氮杂-2＇-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后肝癌细胞穿膜的细胞数,作为评价肝癌细胞体外浸润能力的指标.结果 L02、MHCC97L表达SYK mRNA,MHCC97H、HepG2不表达SYK mRNA;L02、MHCC97L细胞SYK基因甲基化阴性,MHCC97H、HepG2细胞SYK基因甲基化阳性.甲基化阳性的MHCC97H、HepG2细胞经5-Aza-CdR处理后,SYK基因异常甲基化状态得到逆转,体外浸润能力显著下降(P＜0.001).结论 肝癌细胞中SYK基因的表达与启动子甲基化有关,SYK基因可抑制肝癌细胞的体外浸润能力.
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宫颈鳞癌中p33ING1b与Syk基因表达及临床意义
目的 探讨p33ING1b与Syk基因在宫颈鳞癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化S-P法检测60例宫颈鳞癌及其相应的癌旁组织中p33ING1b、Syk的基因蛋白的表达.结果 宫颈鳞癌组织中的p33ING1b和Syk的表达均低于宫颈癌旁组织;在有淋巴转移和低分化的宫颈鳞癌组织中的表达,要低于无淋巴转移和高分化的宫颈鳞癌组织,差异有统计学意义(p<0.05).与FIGO宫颈癌分期无关(p＞0.05).结论 在宫颈鳞癌组织中p33ING1b和Syk的表达降低或缺失,与宫颈鳞癌的发生、发展和转移有关,对判断宫颈鳞癌的预后和浸润转移潜能有一定的参考价值.
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脾酪氨酸激酶与肿瘤
脾酪氨酸激酶(spleen tyosine kinase,Syk)在较长时间里被认为是造血细胞特有的信号分子,在淋巴细胞的成熟和免疫细胞的激活中起重要作用.近年来发现Syk在多种非造血细胞也有表达.初观察到Syk在乳腺癌的演进中显著降低,后来发现Syk异常表达也见于其它许多肿瘤.研究表明,Syk有抑制肿瘤发生和转移的功能,但Syk抑癌的分子机制仍大部分未明.Syk基因启动子超甲基化是其沉默的机制之一.日益增多的临床研究显示,Syk的低表达与肿瘤转移形成呈正相关,表明Syk可能是一个潜在的肿瘤抑制因子.
