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Itk及Syk在外周T细胞淋巴瘤组织中的表达及意义
目的 探讨外周T细胞淋巴瘤(PTCL)组织中Itk及Syk的表达及与临床病理特征间的关系.方法 选择并收集55例PTCL患者的肿瘤组织及普通淋巴结炎组织,采用免疫组化法检测肿瘤组织及淋巴结炎组织的Itk及Syk的表达阳性率,并分析不同肿瘤组织病理参数的阳性率情况.结果 (1)肿瘤组织的Itk表达阳性率高于淋巴结炎组织(P<0.01),而Syk的表达阳性率均低于淋巴结炎组织(P<0.01);(2)Itk表达阳性肿瘤组织的"++++"阳性细胞数和"+++"染色强度均高,而Syk表达阳性肿瘤组织的"+"阳性细胞数和"+"染色强度均高;(3)Syk和Itk蛋白表达与患者性别、年龄无关(P>0.05),而与恶性程度、临床分期及远处转移有关(P<0.05).结论 PTCL组织中Itk及Syk的表达阳性率均与淋巴结炎组织有差异,其与肿瘤组织的恶化以及浸润情况有关,其水平可用于PTCL的病例诊断.
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脾酪氨酸激酶在子宫内膜癌中的表达及意义
目的：探讨脾酪氨酸激酶（Syk）在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理因素的关系，分析其在子宫内膜癌中的诊断价值。方法：采用荧光定量PCR（real time-PCR）及免疫组织化学方法检测Syk mRNA及蛋白在正常子宫内膜组织、不典型增生子宫内膜组织及子宫内膜癌中的表达情况。结果：Syk在子宫内膜癌中的表达低于不典型增生及正常子宫内膜组织，其差异有统计学意义（P＜0．05）；Syk的表达与子宫内膜癌的组织学分级、浸润深度、淋巴转移及临床分期有关（P＜0．05）。结论：Syk可能与子宫内膜癌的发生发展及侵袭转移有关，检测Syk有助于判断子宫内膜癌的恶性程度。
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NK/T细胞淋巴瘤中SYK的表达变化及意义
目的 探讨酪氨酸激酶(SYK)在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学(SP)法检测SYK在外周NK/T细胞淋巴瘤组织标本中的表达情况,并分析其表达与年龄、性别、分期及细胞增殖指数等临床病理参数的关联性.结果 SYK在NK/T细胞淋巴瘤中高表达率为27.27%(15/55);低表达率为72.73%(40/55),且与临床分期和细胞增殖指数有关.SYK高表达者具有较高的肿瘤分期和增殖指数.结论 NK/T细胞淋巴瘤中SYK表达上调与细胞增殖及临床分期有关,是其潜在的诊断和预后标记.
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SYK调控缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元凋亡及其机制
目的 探讨抑制脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)对缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元的凋亡的影响及相关机制.方法 分离培养10只SD怀孕大鼠(190 ～230 g,胎龄16d)胎鼠的大脑皮质神经元细胞并用MAP2免疫荧光法进行鉴定.建立缺氧/缺糖损伤的体外模型,caspase-3荧光检测试剂盒检测caspase-3活性,Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡,qRT-PCR检测SYK和凋亡相关的原癌基因Fra-1 mRNA的表达,Western Blot检测SYK、Bcl-2和Fra-1蛋白的表达.Control组:无转染处理的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK siRNA组:转染SYK siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK-Fra-1 siRNA组:同时转染SYK siRNA和Fra-1 siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;non-specific siRNA组:转染non-specific siRNA的氧/缺糖损伤的神经元.结果 MAP2免疫荧光鉴定为神经元细胞.缺氧/缺糖损伤诱导神经元SYK表达(P＜0.01),RNA干扰抑制SYK表达后caspase-3活性(P＜0.05)和细胞凋亡(P＜0.01)均显著降低,但是Fra-1 mRNA (P ＜0.01)和蛋白(P＜0.05)表达量明显上升.用RNA干扰技术同时抑制SYK和Fra-1后,caspase-3活性(P＜0.01)显著上升但Bcl-2蛋白表达(P＜0.01)显著降低.结论 Fra-1介导了SYK对缺氧/缺糖损伤诱导的神经元凋亡的调节,为脑卒中所致的神经元缺血性损伤的治疗提供了新的靶点.
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关键分子SYK和BTK活性的动态调节控制B细胞受体信号转导过程
目的 建立B细胞受体信号途径的动力学模型,通过模型仿真揭示B细胞受体信号途径各分子间的动态调控过程.方法 根据数据库KEGG及相关中英文文献,提取B细胞受体信号转导各条通路相关分子作用的方式及数量关系,利用Matlab7.0的Simulink工具箱构建信号途径的动力学模型并仿真.结果 模型仿真结果能够从数量上反映B细胞受体信号途径中各分子间复杂的调控关系,并能通过模型仿真发现和验证该信号途径中的关键分子.结论 关键分子SYK和BTK活性的动态调节机制控制着B细胞受体信号途径的动力学过程.
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syk真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响
目的:构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在细胞中稳定表达,以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响.方法:以RTPCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO中.对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后,以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,经G418筛选,构建syk基因稳定表达的细胞株,通过Western blot、RT-PCR和流式细胞术检测转染乳腺癌细胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAM-Ⅰ的表达.结果:构建了hsyk真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,并在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得稳定表达.表达Syk的MDA-MB-231细胞同时可以高表达MHC-Ⅰ和ICAM-Ⅰ.结论:成功地构建了syk真核表达载体并在真核细胞中表达,为进一步的肿瘤免疫研究奠定了实验基础.
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兔抗Syk抗体制备和在乳腺癌诊断中的应用
目的:制备兔抗小鼠脾酪氨酸激酶(Syk)抗体,分析其在乳腺癌诊断中的价值.方法:应用重组小鼠Syk蛋白,常规免疫雄性家兔制备抗Syk抗体.用免疫印迹法检测Syk抗体的纯度和特异性.应用免疫组化法,检测乳腺组织中Syk蛋白的表达.结果:用重组小鼠Syk蛋白免疫家兔6 wk后,静脉血中抗Syk抗体效价为1∶6 400(A450=1.03).将Syk经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为72 000的蛋白条带,与理论值相符.用抗Syk血清做免疫印迹证实,在Mr为72 000处有1条明显的带,证明是抗Syk特异性抗体.乳腺组织切片经抗Syk抗体免疫组化染色,在正常乳腺组织细胞胞浆中可见棕黄色颗粒,而浸润性乳腺导管癌组织的细胞浆不着色.结论:制备了高效价、特异性的兔抗Syk抗体.用该抗体检测证实,Syk在正常乳腺组织细胞中呈高表达,在乳腺癌组织细胞中表达缺失. 有可能用于乳腺癌的临床诊断.
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非受体型酪氨酸激酶-Syk蛋白的提取与纯化
目的:从转染syk基因的Sf21细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白.方法:将syk基因转染Sf21细胞,于28℃培养48 h,收集细胞,用超声波破碎仪裂解细胞,提取裂解液中总蛋白,用Yellow-3凝胶和Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析柱分离、纯化.层析液中的Syk蛋白存在和性质,用SDS-PAGE、免疫印迹实验和等电聚焦实验鉴定.结果:从25亿个Sf21细胞裂解液中提取了含有Syk的225 mg蛋白质.经Yellow-3凝胶层析分离,得到两个亚种的Syk蛋白,相对分子质量(Mr)均为72×103.进一步用Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析纯化后,得到两个纯的Syk蛋白,SDS-PAGE、免疫印迹实验结果显示,两种Syk的Mr均为72×103,与Syk的理论相对分子质量吻合.但等电聚焦实验显示,这两种Syk蛋白成分具有不同的pI值.结论:从25亿个转染syk基因的Sf21细胞中纯化出8 mg Syk蛋白,纯度高于95%.这两种Syk的Mr虽然相同,但具有不同的pI值,是两个亚种.这些Syk可用于研究Syk的作用机制、抗Syk抗体的制备和Syk诊断试剂盒的制备等.
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血清SYK水平和肺腺癌淋巴结受累的关系
目的:探讨血清脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)水平与肺腺癌淋巴结受累的关系.方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测160例不同程度淋巴结受累的肺腺癌患者和40例健康体检者血清SYK水平.结果:肺腺癌患者血清SYK水平低于正常人(P=0.000);血清SYK 水平在患者性别、年龄方面无统计学差异(P>0.05),与淋巴结受累程度成负相关,淋巴结受累程度越高者血清SYK水平越低(P<0.01).结论:肺腺癌患者血清SYK水平降低,可能与肺腺癌的淋巴结受累有关.血清SYK水平可作为评估肺腺癌淋巴结受累程度的参考指标.
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蟾蜍灵联合ATRA诱导HL-60细胞分化并上调Syk表达
目的:观察低剂量蟾蜍灵、全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)单药或联合应用对HL-60细胞增殖及分化的影响,同时检测上游通路Syk表达的变化.方法:流式细胞仪技术检测CD11b表达;Western Blot检测Syk和Tubulin表达.结果:与对照组相比,低剂量蟾蜍灵、ATRA或联合用药不同程度地抑制HL-60细胞增殖,同时蟾蜍灵联合ATRA以时间依赖性的方式诱导HL-60细胞分化,并伴有Syk表达上调,但是Syk的酪氨酸磷酸化并未受影响.结论:Syk表达上调可能参与调节低剂量蟾蜍灵联合ATRA对HL-60细胞的分化诱导作用.
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三氧化二砷抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞生长及其机制的研究
背景与目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌MDA-MB-468细胞的生长抑制作用及其对syk表达的影响.材料与方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度As2O3作用MDA-MB-468细胞不同时间后,对细胞增殖的抑制作用;显微镜观察细胞的形态变化;As2O3作用细胞后用流式细胞术检测细胞周期及Syk蛋白表达变化;RT-PCR检测syk mRNA的表达变化.结果:As2O3可显著抑制MDA-MB-468细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);As2O3,可使细胞周期阻滞在S+G2/M期;候选抑癌基因syk在乳腺癌MDA-MB-468细胞中表达,经As2O3作用后,MDA-MB-468细胞syk mRNA和Syk蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论:As2O3可能通过上调候选抑癌基因syk的表达,抑制MDA-MB-468细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用.
关键词： As2O3 人乳腺癌细胞 MDA-MB-468细胞 细胞凋亡 Syk -
Syk对三氧化二砷诱导脑瘤细胞周期阻滞的影响
背景与目的:探讨Syk(Spleen tyrosine kinase)的表达对As2O3在诱导脑瘤细胞周期阻滞过程中的作用.材料与方法:将syk基因整合至逆转录病毒载体pIND,与载体pVgRXR协同转染携带突变P53基因的脑瘤细胞U373,诱导Syk表达.用Western blot法分析Syk诱导细胞周期负性调控因子P21的表达;用流式细胞仪分析细胞DNA含量,用共聚焦显微镜观察Syk的表达对As2O3在诱导脑瘤细胞周期阻滞过程中的调节作用.结果:转染syk基因的U373细胞(U373 Syk-ind)在诱导剂PonA的作用下表达Syk蛋白.As2O3可使U373细胞周期停滞于G2/M期,而表达Syk的U373细胞被As2O3阻滞于G2/M期的细胞比例下降.Syk的表达可上调P21的表达.结论:As2O3可影响脑瘤细胞U373的细胞周期发展,将其阻滞于G2/M期,但在诱导癌细胞凋亡的同时也产生了致瘤性,而Syk蛋白的表达可以使被阻滞的细胞比例下降,减少了As2O3治疗肿瘤中的副作用.
