首页 > 文献资料
-
mda-7/IL-24腺病毒对小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的抑制作用研究
目的构建mda-7/IL-24腺病毒,检测其对小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的影响.方法将mda-7/IL-24 cDNA亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,在大肠杆菌BJ 5183中将重组病毒穿梭质粒和骨架质粒重组.在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,用PCR方法鉴定后,通过TCID50法测定病毒滴度.用滴度为50pfu/细胞的重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24感染NCI-H446细胞72h后,经MTT实验检测其对细胞增殖的影响,并用Western blot方法检测mda-7/IL-24在NCI-446中的表达.结果核酸序列测定和PCR鉴定表明成功构建Ad.mda-7/IL-24;TCID50法测定扩增的腺病毒滴度为2×1010pfu/ml.Ad.mda-7/IL-24在NCI-H446细胞中表达MDA-7/IL-24,MTT检测表明Ad.mda-7/IL-24明显抑制NCI-H446细胞生长,抑制率为21.37%.结论重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24能显著抑制NCI-H446细胞增殖,为研究mda-7/IL-24的作用机制及将其用于小细胞肺癌的基因治疗提供了条件.
-
人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用
目的: 研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用.方法:用半定量RT-PCR方法检测 10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/ IL-24的表达情况.用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24.经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株.转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达.通过MTT法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用.结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P《0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义.裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P《0.05).结论: mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用, 为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路.
关键词： 黑素瘤分化相关基因-7 IL-24 淋巴瘤 基因治疗 -
黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24抑制肺癌细胞增殖
目的:探讨黑素瘤分化相关基因-7/细胞介素-24(mda-7/IL-24)对非小细胞肺癌细胞系H460增殖的影响.方法:将mda-7/IL-24插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组表达载体pcDNA 3-mda-7/IL-24.按照DNA和脂质体(Lipofectamine)的不同比例,将重组表达载体瞬时转染H460细胞,用RT-PCR检测mda-7/IL-24在不同转染条件下的表达,用MTT法检测转染重组表达载体后对H460细胞增殖的影响.结果:成功构建了mda-7/IL-24的重组表达载体,用SP6引物和mda-7/IL-24上游引物进行RT-PCR分析,在DNA和Lipofectamine的比例为1 μg:2μl～1 μg:4μl时有目的基因表达.按照1μg:2 μl的比例瞬时转染重组表达质粒72h后进行MTT分析,结果表明,与未转染细胞和转染空质粒细胞相比,重组质粒pcDNA3-mda-7/IL-24对肺癌细胞H460的增殖有明显抑制作用,抑制率为18.4%.结论:mda-7/IL-24对非小细胞肺癌细胞系H460增殖具有明显的抑制作用.
关键词： 白细胞介素-24 黑素瘤分化相关基因-7 细胞增殖 肺癌 基因表达 -
过表达MDA-7/IL-24蛋白的亚细胞定位
目的了解标签蛋白GFP的位置对过表达的MDA-7/IL-24融合蛋白亚细胞定位的影响.方法分别构建在MDA-7/IL-24 cDNA的5' 端和3' 端带有GFP- tag的重组表达质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3- mda-7/IL-24,瞬时转染猴胚肾Cos7细胞,48h后用Hoechst 33258染核,在荧光显微镜下观察GFP- MDA-7/IL-24融合蛋白在Cos7细胞的亚细胞分布.结果测序表明重组质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24构建正确;分别转染Cos7细胞后,在氨基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光均匀分布于胞浆和胞核,但在羧基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光则分布于核膜外侧和胞浆.结论 GFP-tag位置的不同对过表达融合蛋白MDA-7/IL-24的亚细胞定位有显著的影响.
关键词： 黑素瘤分化相关基因-7 人白细胞介素-24 绿色荧光蛋白
