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双参通脉颗粒对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:研究双参通脉颗粒对大鼠心肌缺血的可能保护机制.方法:SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham)、模型组(MIRI)、西药组(DH)、中药低、中、高剂量组(GSG-L、GSG-M、GSG-H),灌胃4周结扎左冠状动脉前降支造模,测定心功能、病理变化、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、内皮素(ET)、髓过氧化物酶(MPO)含量变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色评估心肌细胞凋亡指数,Western检测心肌核转录因子-κB(NF-κB)、Iκκβ蛋白表达.结果:DH组、GSG各剂量组与MIRI组比较,心功能改善明显,DH组、GSG各组血清ET、MPO水平、心肌NF-κB蛋白表达明显低于MIRI组,GSH-PX、CAT水平、心肌Iκκβ蛋白表达明显高于MIRI组.结论:GSG可抑制大鼠心肌缺血氧化损伤,其机制可能与减少ET、MPO含量,抑制NF-κB蛋白表达,增加GSH-PX、CAT含量,提高Iκκβ蛋白表达有关.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎NF-κB信号传导通路的影响
目的:研究NF-κB信号传导通路在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制.方法:采用免疫蛋白质印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中框神经组织中NF-κBp65、1κB-α蛋白表达的变化.结果:中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率(P＜0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P＜0.05).与模型组相比,激素组、中药组、中药加激素组NF-κBp65表达水平明显降低.hB-α表达水平明显升高(P＜0.05).结论:在EAE中,NF-κB介导的炎性级联反应是EAE小鼠CNS炎性浸润、轴索损伤的重要原因；中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤；中药益肾达络饮干预EAE的作用机制与对NF-κB信号通路的调节密切相关.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 NF-κB 益肾达络饮 -
芒针促进急性脊髓损伤恢复的机制研究
目的:应用改良Allen's造模法制备大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型,观察芒针(elongated needle)对大鼠急性脊髓损伤后促炎性因子表达及神经细胞凋亡的影响,并探讨与NF-κB信号通路的可能作用机制.方法:成年雄性SD大鼠36只,按随机数字表法分为假手术组、模型组、芒针组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性因子肿瘤环死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量和核转录因子(NF-κB)含量的变化,用原位末端标记法(TUNEL)检测脊髓损伤后神经元细胞凋亡情况,用HE染色观察脊髓组织细胞形态变化.结果:脊髓损伤后7d,模型组与假手术组比较受损脊髓组织中NF-κB和促炎性因子含量显著升高,且TUNEL凋亡率增加,芒针组大鼠受损脊髓组织中NF-κB和促炎性因子含量及TUNEL凋亡率较模型组显著降低.结论:芒针可抑制NF-κB信号通路的激活,从而降低大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织中炎性因子的表达及神经细胞凋亡的发生.
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穴位贴敷联合穴位注射乌体林斯对OVA哮喘模型大鼠气道炎症和气道高反应的影响
目的:使用穴位贴敷及穴位注射乌体林斯治疗慢性持续期OVA哮喘大鼠并探讨其作用机制.方法:卵蛋白(OVA)致敏并连续激发制作哮喘Wistar大鼠模型,大鼠按随机数字表法分为正常组、哮喘组、贴注组、布地奈德雾化组、联合组5组,治疗1个月后ELISA法测定血清中lgE,放射免疫法测定肺组织中IL-4、IL-5、ET-1,免疫组化法测定肺组织NF-κB表达,并分析NF-κB的IOD值.结果:模型组血清lgE,肺组织IL-4、IL-5、ET-1水平,肺组织NF-κB/p65活化情况、IOD值均高于正常组,各治疗组以上指标均低于模型组,联合组较2单独治疗组降低明显.结论:穴位贴敷联合穴位注射可能通过两方面作用抑制NF-κB的活化,进而抑制下游细胞因子IL-4、IL-5的活性来抑制哮喘炎症的发生,降低ET-1的产生来降低气道高反应性.
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核因子在慢性肾脏病中的作用及中医药调控
肾脏纤维化是慢性肾脏病的病理基础,而ECM的异常聚集是肾脏纤维化的主要原因.NF-κB具有影响机体内细胞分化、免疫反应、炎症反应、细胞凋亡等多种细胞功能.TGF-β1作为肾脏纤维化中重要的细胞因子之一,通过调控下游的Smad/ILK信号通路参与ECM聚集.研究证实,NF-κB可以与TGF-ii1发生作用,故就NF-κB通过TGF-β1/Smad信号通路延缓肾脏纤维化进行论述,并对中医药通过NF-κB调控TGF-β1/Smad信号通路达到减缓ECM、延缓肾脏纤维化进展的作用进行论述.
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肾敷灵外敷配合雷公藤多甙对难治性肾病大鼠肾组织炎症因子NF-κB及TGF-β的影响
目的 观察肾敷灵外敷配合雷公藤多甙对难治性肾病大鼠的炎症因子NF-κB及TGF-β的影响.方法 按照随机化的原则分为4组:正常组、模型组、对照组、治疗组,实验第7天开始灌胃,正常组、模型组每天灌胃生理盐水;对照组每天灌胃雷公藤多甙混悬液;治疗组在对照组治疗基础上外敷肾敷灵于大鼠神阙、肾腧、脾腧穴位.实验前和实验开始后2周、4周收集大鼠24小时尿液检测24小时尿蛋白定量;实验结束后Western Blot方法检测肾组织中NF-κB、TGF-β的水平.结果 实验第14天、28天,模型组、对照组及治疗组大鼠24h尿蛋白显著高于正常组;与模型组相比,对照组及治疗组24h尿蛋白量均显著受到抑制(P＜0.01);治疗组24h尿蛋白量28天低于对照组(P＜0.01);实验第28天,与正常组相比,模型组、对照组、治疗组大鼠肾组织中NF-κB、TGF-β的表达明显上调(P＜0.01);与模型组相比,对照组及治疗组明显降低(P＜0.01);其中NF-κB3的水平治疗组则明显低于对照组(P ＜0.01).结论 肾敷灵外敷配合雷公藤多甙可通过抑制NF-κB、TGF-β表达,减轻难治性肾病大鼠肾小球的炎症反应,从而抑制肾小球的损伤.
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电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB表达的影响
目的 通过观察电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响,研究电针对缺血性脑损伤的保护机制.方法 采用大脑中动脉线栓法制作模型,电针大鼠的水沟、内关,运用TUNEL法观察各组大鼠皮质神经细胞凋亡,免疫组化法观察各组大鼠缺血区皮质NF-κB蛋白表达.结果 电针组缺血皮质中神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达与模型组相比均降低.结论 电针通过抑制NF-κB蛋白表达减少神经细胞凋亡来对抗缺血再灌注脑组织神经损伤.
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苦参素对感染性休克大鼠肺组织NF-κB等细胞因子的影响
目的:观察苦参素(oxymatrine,OMT)对感染性休克大鼠肺组织NF-κB等细胞因子的影响.方法:采用大鼠盲肠节扎穿孔法(CLP)复制大鼠感染性休克模型,随机将56只大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型(CLP)组、CLP+OMT高、中、低剂量组、阳性对照(CLP+地塞米松)组.采用免疫组化法检测肺组织NF-κB(p65)及IkB-α的活性;放射免疫分析法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的含量改变.结果:OMT能显著抑制肺组织NF-κB(p65)及IkB-α的活性(P<0.05),降低肺组织匀浆中TNF-α及IL-6的含量(P<0.05),并提高动脉血PaO2,SaO2含量,降低PaCO2,HCO3;含量;降低肺组织W/D比值及肺系数(PWI).结论:OMT能通过抑制诱导NF-κB的激酶(NF-κB-inducing Kinase,NIK)的活化从而抑制细菌、病毒等对NF-κB的激活作用,减少TNF-α,IL-6等促炎因子的表达,进而对感染性休克大鼠肺损伤性病变发挥治疗作用.
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山茱萸提取物对脑梗死大鼠大脑皮层一氧化氮与核转录因子-κB表达的影响
目的:观察光化学法诱导脑梗死大鼠大脑皮层一氧化氮(NO)与核转录因子-κB(NF-κB)含量的变化,以及中药山茱萸提取物(主要成分为环烯醚萜苷)对其的影响.方法:大鼠预先灌胃给药7 d后,制作光化学致脑梗死模型,采用分光光度法检测脑组织中NO和一氧化氮合酶(NOS)的变化,免疫组织化学方法检测NF-κB阳性细胞数量的变化.结果:模型组与对照组相比,出现了明显的梗死灶,脑皮层NO含量与NOS活性增加,NF-κB阳性细胞数量增多.与模型组相比,山茱萸提取物能明显减小脑梗死面积,降低脑皮层NO含量和NOS活性,并显著减少NF-κB阳性细胞数量.结论:山茱萸环烯醚萜苷可通过影响脑内NO,NF-κB的水平发挥对脑梗死的治疗作用.
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青蒿琥酯对Con A诱导小鼠自身免疫性肝损伤的保护作用研究
免疫性肝病是临床上难治性疾病,目前没有特效性药物,因此,研发新的有效干预药物,对防治免疫性肝病有重要的临床价值.为探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对免疫性肝损伤的保护作用,该研究采用不同质量浓度(27,54,108 mg·kg-1)Art灌胃小鼠连续7 d,然后尾静脉注射伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导小鼠肝损伤模型.于造模后8 h采血液和肝组织进行血清转氨酶(ALT,AST)、组织病变、炎性细胞因子以及NF-κB关键蛋白表达水平的检测.结果表明,与模型组相比,Art高浓度组显著降低了模型小鼠的肝指数、ALT和AST水平(P<0.01),组织病变也明显减轻,同时降低了促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-17的水平而增加了炎性抑制因子IL-10的表达(P<0.05),并呈现明显的剂量-效应关系.Western blot法检测结果显示108 mg·kg-1 Art可显著抑制NF-κB关键蛋白p-p65和p-IκBα的表达(P<0.01).NF-κB特异阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)也可显著抑制p-p65和p-IκBα表达并减轻肝损伤.以上结果说明Art主要通过抑制NF-κB信号通路而对ConA诱导的小鼠免疫性肝损伤发挥保护作用.该研究为青蒿琥酯用于自身免疫性肝损伤的防治提供了参考.
关键词： 青蒿琥酯 ConA诱导小鼠免疫性肝损伤 细胞因子 NF-κB -
葛根素预处理对LPS诱导RAW264.7细胞活化的影响
目的:观察葛根素预处理对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7活化和分泌细胞因子的影响,探讨其抗炎机制.方法:取对数期生长良好的RAW264.7细胞,随机分为空白对照组、LPS组、葛根素预处理+LPS组.CCK-8法检测葛根素对RAW264.7的细胞毒性作用,Giemsa染色法观察细胞形态学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的变化,实时荧光定量PCR( qRT-PCR)动态测定NF-κB p65 mRNA的表达.结果:当葛根素的浓度为100,200,400 μmol·L-时,与1 mg·L-1LPS共培养均未显示出细胞毒性作用(P＜0.05)；与空白对照组相比,LPS组可明显改变RAW264.7细胞的形态(胞体增大,形态不规则,伪足大量伸出),葛根素100 μmol·L-1组干预后可明显抑制LPS导致的细胞形态学变化,葛根素200,400 μmol· L-1干预组的抑制效果更显著,但2组之间无明显差异；葛根素预处理可使细胞上清液中TNF-α,MIP-2以及细胞内NF-κB p65 mRNA的表达受到抑制(P＜0.05),并随着葛根素浓度的增加,抑制效果逐渐增加(P＜0.05),但未达到对照组水平.结论:葛根素是一种安全有效的天然抗炎药物,可显著下调炎症细胞因子(如TNF-α,MIP-2)的表达,其作用机制可能与下调NF-κB p65 mRNA的表达有关.
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SIRT6/NF-κB信号轴在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老中的作用
目的:探讨SIRT6/NF-κB信号轴在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老中的作用,为寻找延缓HSC/HPC衰老途径提供理论和实验依据.方法:免疫磁性分选法分离纯化Sea-1+ HSC/HPC后分为:正常对照组、衰老组、阳性对照组、Rg1延缓衰老组、Rg1治疗衰老组.衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+ HSC/HPC衰老生物学作用.荧光定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6,NF-κB mRNA及蛋白的表达.结果:与衰老组相比,Rg1延缓及治疗衰老组SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成CFU-Mix数量增加,SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1延缓衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显.结论:Rg1可能通过调控SIRT6-NF-κB信号通路发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+ HSC/HPC衰老的作用.
关键词： 人参皂苷Rg1 SIRT6 NF-κB Sca-1+ HSC/HPC 衰老 -
补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响
探讨补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响.BALB/C裸鼠60只随机分为空白对照组、荷瘤对照组、顺铂组和补中益气汤高剂量+顺铂组(高联组)、补中益气汤中剂量+顺铂组(中联组)、补中益气汤低剂量+顺铂组(低联组),培养A549/DDP细胞(浓度为5×106个/mL),接种于各组,观察各组成瘤情况.给予相应治疗,14 d后取瘤组织固定、切片,免疫组织化学方法、Real-time PCR方法检测各组裸鼠移植瘤中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR蛋白和mRNA的表达水平.结果显示补中益气汤联合顺铂可降低移植瘤体积,中联组和高联组的抑瘤率与顺铂组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与荷瘤对照组比较,中联组和高联组Bad,NF-κB,Survivin,mTOR的蛋白和mRNA的表达明显减少(P＜0.05),caspase-9的蛋白和mRNA在中联组和高联组的表达逐渐增多,与荷瘤对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Bad,NF-κB,caspase-9的mRNA,中联组和高联组与顺铂组、低联组、荷瘤对照组比较有统计学意义(P＜0.05),低联组、顺铂组、荷瘤对照组两两比较,无统计学差异,各因子蛋白和mRNA的表达中联组和高联组比较,无统计学意义.结果表明补中益气汤与顺铂联合作用可抑制A549/DDP移植瘤的生长,补中益气汤抑制A549/DDP移植瘤的作用可能是通过调节Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR,促进细胞凋亡实现的.
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虎杖苷对小鼠糖尿病心肌肥厚的保护作用及机制研究
观察虎杖苷(PD)对小鼠糖尿病心肌肥厚的保护作用,并探讨其可能机制.利用小剂量STZ连续5d腹腔注射建立小鼠糖尿病模型,以心肌肥厚指数(LVHI,左心室/右心室+室间隔)、左心室/体重(LV/BW)、组织学检查和心房利钠因子(ANF) mRNA表达为心肌肥厚指标;监测空腹血糖值(FBG),并检测血清胰岛素含量、血浆糖化血红蛋白(HbA1c)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOME.IR);分别用qRT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白表达.结果显示,模型组小鼠FBG持续超过11.1 mmol·L-,BW明显降低,胰岛素含量、HbA1c和HOME.IR明显升高,提示糖尿病模型建立且保持稳定;糖尿病小鼠LVHI,LV/BW及ANF mRNA均增加,细胞表面积增大,提示小鼠出现心肌肥厚.同时,模型组PPARβ mRNA和蛋白表达降低,NF-κB p65,COX-2及iNOS表达则明显增加.给予PD(50,100 mg·kg-1·d-1)治疗后,糖尿病小鼠BW增加,FBG,胰岛素及HbA1c含量降低,胰岛素抵抗改善,心肌肥厚指标亦明显好转,提示PD具有保护糖尿病心肌肥厚的作用.同时,PD使PPARβ的表达上调,并抑制NF-κB p65,COX-2及iNOS的表达,提示PD的保护作用可能与其激活PPARβ,抑制NF-κB及COX-2,iNOS信号通路有关.
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黄芪甲苷调控STAT1/IκB/NF-κB信号通路抑制γ-干扰素诱导BV-2细胞激活
目的:研究黄芪甲苷(ASI)对γ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞激活的抑制作用及机制.方法:不同浓度的ASI(25,50,100 μmol·L-1)预处理BV-2小胶质细胞2h后,以IFN-γ刺激1.5h或24h,分别收集细胞培养基上清和细胞.分别以Griess和ELISA法检测培养基中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;qPCR法检测细胞中CD11b,TNF-α,白介素1β(IL-1β)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA水平;Western blot法检测细胞STAT1/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达.结果:ASI能显著抑制IFN-γ诱导BV-2细胞NO和TNF-α水平的升高(P＜0.001);进一步研究表明,50 μmol·L-1ASI能够显著抑制细胞IL-1β和TNF-α的mRNA表达(P＜0.01,P＜0.05),并表现出下调iNOS mRNA表达的趋势,但对BV-2细胞CD11b的mRNA水平无显著影响;同时,ASI显著抑制IFN-γ诱导上调的pSTAT1,pIκB和pNF-κB的蛋白表达.结论:ASI能够抑制IFN-γ诱导的小胶质细胞的激活,其机制与其抑制STAT1/IκB/NF-κB信号通路的激活,降低炎症状态下小胶质细胞IL-1β,TNF-α以及iNOS的基因表达,从而减少NO和TNF-α的生成有关.
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肉苁蓉低分子糖对巨噬细胞激活作用的研究
探究肉苁蓉低分子糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞的激活作用及潜在机制.该实验将RAW264.7细胞分为正常对照组、细菌脂多糖(LPS)阳性对照组、肉苁蓉低分子糖处理组,其中肉苁蓉低分子糖的给药浓度为3.91～62.5 g· L-1.采用中性红法检测巨噬细胞吞噬活性,一氧化氮(NO)试剂盒检测NO的释放量,Western blot法检测巨噬细胞激活相关蛋白(TNF-α,IL-6,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα,NF-κB,p-NF-κB)的表达.结果显示,肉苁蓉低分子糖对巨噬细胞具有激活作用,具体表现在:其可显著提高RAW264.7细胞NO的释放量,并促进细胞因子TNF-α和IL-6的表达.同时,其还可显著提高NF-κB的磷酸化及其上游关键信号蛋白IKKβ和IκBα的磷酸化水平.另外,低分子糖中的甘露醇可以使巨噬细胞的吞噬活性显著提升.以上结果表明,肉苁蓉低分子糖对巨噬细胞具有激活作用,其潜在机制是通过NF-κB信号通路来实现的,甘露醇可能是其中的一种关键活性单体成分.
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NF-κB在马钱子碱抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2生成中的作用研究
目的:探讨马钱子碱抑制环氧化酶2(COX-2),从而诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制.方法:构建COX-2启动子若干转录因子缺失突变体与含COX-2 mRNA3′-UTR的报告质粒,与Renillia共转染至非小细胞肺癌A549细胞,测报告基因luciferase活性研究COX-2启动子受马钱子碱抑制的小顺式作用元件;采用蛋白质免疫印迹法研究马钱子碱对IκBα磷酸化与p65进核的影响.结果:马钱子碱显著性抑制LPS诱导的COX-2启动子的激活,而对COX-2 mRNA转录后调控影响不大,COX-2启动子-262位附近NF-κB是马钱子碱抑制COX-2启动子活性的重要顺式作用元件.马钱子碱能抑制IκBα的磷酸化,并能抑制p65的进核.结论:马钱子碱抑制NF-κB的激活,进而从转录水平COX-2的基因表达,促进A549细胞凋亡.
关键词： 马钱子碱 非小细胞肺癌细胞A549 环氧化酶2 NF-κB -
琼玉膏延缓衰老作用的候选靶蛋白分析
采用iTRAQ技术研究琼玉膏干预衰老大鼠模型的下丘脑蛋白,寻找候选靶蛋白,探索琼玉膏延缓衰老的作用机制.结果表明,琼玉膏可以提高大鼠血清GSH-Px及肝脏SOD活力.iTRAQ技术鉴定到的总蛋白为3 522个,FDR＜ 1％.通过数据分析,鉴定出琼玉膏组与模型组比较,具有295种差异蛋白;模型组与空白组比较,具有20种差异蛋白;其中与空白组相比,模型组中下调而琼玉膏组中上调的蛋白有14种.在琼玉膏组和模型组的295种差异蛋白中,差异倍数≥1.30的差异蛋白有40种,高为1.47.查阅文献及基因功能检索,筛选出琼玉膏延缓衰老的候选靶蛋白12种:ST18,Ptprc,PSMB8,INPP4B,Shc3,Pik3r1,PIP5 K1C,Nampt,Rasgrp2,Asah2,Pdpk1,Map2k7.Western blot法检测下丘脑炎症通路NF-κB蛋白,模型组(0.96)相对空白组(0.85)表达量升高;而琼玉膏组(0.89)相对模型组则下降.Q-PCR检测PIP5K1C,Ptprc等与炎症相关的候选靶蛋白,与空白组相比,模型组中mRNA相对表达量显著下降(P＜0.01),而琼玉膏组中则显著升高(P＜0.01),与蛋白质组学数据分析一致.琼玉膏可能通过调节下丘脑炎性反应而延缓衰老的发生.
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独活寄生汤延缓人椎间盘髓核细胞退变机制的研究
探讨独活寄生汤(Duhuo Jisheng decotion,DHJSD)延缓人椎间盘退变的作用及其可能的分子机制.术中摘取人椎间盘标本,根据磁共振Pfirrmann退变程度分为正常组和退变组.Western blot和Real-time PCR法检测椎间盘组织中炎症因子TNF-α,IL-1β和胞外基质分解酶MMP-3,MMP-13的表达.体外培养人髓核细胞,用CCK-8法测定在基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1,10 μg-L+1)和各种不同浓度的DHJSD共同处理下,髓核细胞的活力情况,并筛选出DHJSD合适的作用浓度.随后分为3组:对照组、SDF-1组、DHJSD+ SDF-1组,检测各组细胞TNF-α,IL-1β,Agg,colⅡ,MMP-3,MMP-13的表达情况.为进一步探讨其分子机制,采用NF-κB抑制剂(BAY1 1-7082)或CXCR4-siRNA转染髓核细胞,检测CXCR4,NF-κB主要基团P65磷酸化水平(p-P65)以及P65核转移情况,细胞炎症因子和细胞外基质的表达情况.通过检测2组椎间盘组织发现退变髓核组织中TNF-α,IL-1β,MMP-3,MMP-13的表达明显升高(P＜0.05).而体外细胞实验发现,CCK-8法检测显示当DHJSD质量浓度为300 mg·L-1时髓核细胞的活力明显增加.将实验分为3组后,检测发现与单独SDF-1组相比,用DHJSD处理后TNF-α,IL-1β,MMP-3,MMP-13含量明显降低,而Agg和coIⅡ表达明显上升.采用CXCR4-siRNA转染髓核细胞后发现,SDF-1可以明显提高CXCR4和p-P65的表达,促进P65向核内转移,而给予DHJSD或CXCR4-siRNA处理后其作用明显被抑制.进一步采用BAY 11-7082处理髓核细胞后发现,能明显降低髓核细胞炎症因子TNF-α和IL-1β,以及胞外基质分解酶MMP-3和MMP-13的表达.独活寄生汤可抑制炎症因子表达,促进胞外基质合成,其潜在机制与SDF-1/CXCR4/NF-κB信号通路有关.
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越南人参皂苷R7抑制LPS及TNF-α联合诱导大鼠星形胶质细胞C6的激活作用研究
该研究旨在探讨越南人参皂苷R7(R7)对LPS及TNF-α联合诱导下大鼠星形胶质细胞C6的激活抑制作用及机制.取对数生长的C6细胞,在无血清的DMEM培养基中饥饿培养24h后,使用0.25％胰酶将其消化收集,按1.5×106个/mL密度接入培养板中培养过夜.实验分组如下:对照组(无药物处理),模型组(LPS1 mg·L-1,TNF-α 10 μg·L-1处理24 h),给药组(分别用6.25,12.5,25,50,75 μmol·L-1 R7,4μmol·L-1 L-NMMA预处理2h后,再经过LPS 1 mg· L-1,TNF-α 10μg·L-1刺激24 h).处理之后,CCK-8法检测细胞活力,Griess法检测培养基中NO含量,ELISA法检测培养基中IL-6,TNF-α浓度,实时定量PCR法检测细胞中相关炎症基因的表达,双荧光素酶报告基因法检测细胞中NF-κB信号分子的激活.研究发现,与模型组相对比,R7量效相关性降低C6细胞的NO释放水平,其IC50约为34 μmol·L-1;同时,R7减少LPS及TNF-α刺激造成的细胞增殖.50 μmol·L-1 R7可以显著降低iNOS (P ＜0.001),TNF-α(P＜0.001),IL-1β(P＜0.05)以及COX-2(P ＜0.001)的基因表达,不能下调IL-6的基因表达,但可以减少TNF-α (P＜0.001)及IL-6 (P ＜0.001)的释放.进一步的研究表明,不同剂量R7(25,50,100 μmol·L-1)均可显著抑制NF-κB转录活性(P＜0.05,P＜0.01及P＜0.001).研究表明,R7可以抑制LPS及TNF-α联合诱导炎症因子基因表达及分泌,其作用可能与其抑制NF-κB转录活性相关,提示其在神经炎症相关中枢神经系统疾病中可能的治疗作用.
