超临界流体萃取-高效液相色谱法测定总合草苔虫中草苔虫内酯4含量

目的建立超临界流体萃取(SFE)和高效液相色谱(HPLC)的联用技术测定总合草苔虫中抗癌活性成分的方法.方法正交设计法考察了影响草苔虫内酯4 (bryostatin 4)超临界流体萃取效率的主次效应及佳萃取条件,并以HPLC 定量检测bryostatin 4.结果 SFE萃取的佳条件为:压力40 MPa,温度45℃,改性剂量1 mL,萃取体积15 mL.结论 SFE-HPLC可用于检测总合草苔虫中的草苔虫内酯成分,该方法快速、简便.

草苔虫内酯冻干脂质体的制备及质量评价

目的:制备草苔虫内酯冻干脂质体,建立该脂质体的质量标准.方法: 采用经典的旋转薄膜分散法制备草苔虫内酯脂质体,以氯仿为脂质溶媒,旋转蒸发挥干有机溶剂,水化后探针超声乳化,加入支撑剂后冻干即得.采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定草苔虫内酯冻干脂质体的含量,以Agilent C18为色谱柱,以甲醇-水75:25(0～38 min),73.7:26.3(38～45 min),79:21(45～48 min)为流动相;柱温为25℃;流速为1.5 ml/min;紫外检测波长为228 nm.采用Zetasizer粒径测定仪测定脂质体粒径;采用离心超滤法测定脂质体的包封率.结果:草苔虫内酯冻干脂质体粒径大小均匀,平均粒径0.423 μm;RP-HPLC法测定,在44～220 μg/ml浓度范围内线性关系良好, r＝0.999 8;日内和日间精密度均良好(RSD＜2%);高、中、低(88、110、132 μg/ml)3个浓度的回收率分别为100.8%、98.4%、100.9%;低检测限4.4 ng;低定量限为17.6 ng;脂质体包封率达98.68%.结论:本制备方法适于制备草苔虫内酯脂质体,所建立的分析方法准确可靠,重现性好、操作简便、专属性强,符合质量测定要求.

总合草苔虫中抗癌活性成分的提取和含量测定

目的:建立总合草苔虫原料样品的预处理方法,用RP-HPLC法测定其中抗癌活性成分草苔虫内酯含量.方法:采用3种不同方法提取原料中草苔虫内酯,初提液经过硅胶柱和反相ODS柱纯化,然后用RP-HPLC法测定.结果:二氯甲烷-甲醇(1∶1)超声提取液中草苔虫内酯含量较高;HPLC可以同时测定原料中的草苔虫内酯4、5、10和18,峰形和分离度良好.结论:该方法可以方便地测定原料中的活性成分含量,为原料的质量控制奠定了基础.

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究(Ⅳ)Bryostatin 8,16的分离与结构鉴定

以体外抗癌活性为指标,采用多种层析分离技术,从采自广东大鹏湾海域的总合草苔虫中追踪分离得到8个活性单体.利用电喷雾离子质谱(ESI-MS)和高分辨(600MHz)核磁共振二维谱技术测定活性化合物的结构,分别鉴定为:bryostatin 4,bryostatin 5,bryostatin 6,bryostatin 8,bryostatin 10,bryostatin 11,bryostatin 16,bryostatin 18.其中,bryostatin 8(Ⅰ)和bryostatin 16(Ⅱ)是首次从南海总合草苔虫中获得,并在体外表现出显著的抗癌活性.

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究 Ⅲ Bryostatin 10, 11, 18的分离鉴定及其体外抗肿瘤活性

对采自广西北海的总合草苔虫进行抗癌活性成分的追踪分离,经溶媒提取和多种层析方法(Sephadex LH-20, ODS, HPLC等)分离,得到6个活性单体.利用电喷雾离子质谱(ESI-MS)和高分辨核磁共振(600 MHz)二维谱技术(DQF-COSY, HMQC, TOCSY, ROESY等),分别将其鉴定为:bryostatin 4, bryostatin 5, bryostatin 6,bryostatin 10,bryostatin 11,bryostatin 18.其中,bryostatin 10,bryostatin 11,bryostatin 18是首次从中国产总合草苔虫中获得,并在体外表现出显著的抗癌活性.

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究Ⅱ总草苔虫内酯的超强抗癌活性

我国海洋药物主要成分研究概况(Ⅳ)

10.3 吡喃类10.3.1 草苔虫素(bryostatins):从苔鲜动物总合草苔虫(Bugula neritina)中提取出的一种大环内酯类物质,在研究其构效关系时发现其苔藓吡喃环(bryopyran)及其取代基才是保持活性所必需的组分.迄今草苔虫素的衍生物已得到了19个活性单体,其中Bryostatin19是由我国从采自南海的新鲜样品中分离所得,体外试验表明,对U937单核细胞白血病胞株有极强的杀灭作用;对HL-60早幼粒细胞白血病和K562白细胞白血病等细胞株均有显著的抑制作用.近又从南中国海采集了大量的草苔虫,从中分离得9个大环内酯类成分,并制备分离至纯度高达95%以上的总草苔虫内酯,此总活性成分对人红白血病细胞株K562具有超强的杀灭作用,IC50小于1×10-18μg·mL-1,是天然产物中抑制该瘤作用强的化学成分[1,2].草苔虫素既有抗肿瘤活性又有促进造血的活性,此种双重作用具有相当重要的临床价值.Bryostatin已经FDA批准,进入Ⅱ期临床实验.

草苔虫内酯的遗传毒性评价

目的:检测草苔虫内酯的遗传毒性.方法:采用Ames试验、体外培养中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary,CHO)细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验检测草苔虫内酯的遗传毒性.结果:Ames试验显示在每皿100、10、1、0.1g受试剂量下,在加或不加S9代谢活化系统时对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535所诱发的回复突变菌落数均与溶剂对照的突变菌落数相近.体外培养CHO细胞染色体畸变试验结果显示,在3.75、1.88和0.94 g/ml 3个剂量组,在加S9条件下培养24 h和不加S9培养24、48 h的CHO细胞染色体畸变率与溶剂对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).小鼠骨髓微核试验,在12.5、25、50 g/kg 3个剂量下对ICR小鼠的微核诱发率呈剂量反应关系,与溶剂对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论:在本实验条件下,草苔虫内酯对鼠伤寒沙门氏菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞染色体的致畸变作用为可疑阳性,对ICR小鼠有诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应,提示草苔虫内酯对人体具有潜在的遗传毒性.