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丙型肝炎病毒1b基因型C区氨基酸70替代对干扰素刺激应答元件的影响
目的 探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV) 1b基因型(genotype 1b,GT-1b)C区氨基酸(amino acid,aa)70替代对干扰素刺激应答元件(interferon-stimulated response element,ISRE)的影响.方法 首先构建HCV GT-1b C区aa70野生型和变异型核心蛋白表达质粒,测序鉴定后瞬时转染肝瘤细胞系Huh7细胞,Western blot法鉴定HCV核心蛋白的成功表达;然后利用ISRE双荧光素酶报告基因实验检测核心蛋白表达对ISRE活化的影响,并以SYBR Green real-time PCR检测3种主要干扰素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)的表达情况.结果 构建了HCV aa70野生型和变异型核心蛋白表达质粒,并在体外培养细胞中成功表达.但野生型和变异型核心蛋白表达对ISRE活化及3种主要ISGs表达的影响无明显差异.结论 单纯R70Q/H变异的核心蛋白似乎并不足以直接导致IFNα耐药.
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抗DNA病毒信号通路cGAS-STING的研究进展
病毒感染后,宿主的固有免疫系统快速地识别病毒并作出应答反应,但免疫系统识别和清除病毒的机制尚未完全阐明.研究表明,细胞识别和检测病毒主要通过受体完成,而环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种新发现的 DNA 识别受体,它将信号传递给下游的干扰素刺激基因(stimulator of interferon genes,STING)蛋白,诱导产生I型干扰素(type I interferon,IFN-I),从而启动细胞抗病毒免疫反应.本文综述了cGAS-STING信号通路的作用机制及抗病毒相关研究,以期为抗病毒药物的研发提供理论依据.
关键词： 抗病毒 干扰素刺激基因 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 固有免疫 -
干扰素刺激基因及临床意义研究进展
干扰素(Interferon,IFN)作用于靶细胞表面受体后,通过一系列信号传导激活干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)的表达.干扰素刺激基因及其表达产物具有抗病毒、免疫调控等多种生物学功能,是干扰素发挥功能的重要效应分子,同时具有潜在的临床意义.众多国内外研究发现ISGs对Ⅰ型干扰素临床抗病毒效果具有预测意义,同时可能成为某些自身免疫疾病临床诊断的新靶标以及作为一些肿瘤治疗药物新靶点等潜在应用价值.本文将从干扰素刺激基因的诱导产生、抗病毒等生物学功能以及潜在临床意义方面展开综述.
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干扰素刺激基因、巨噬细胞移动抑制因子在肿瘤细胞和肿瘤微环境中淋巴细胞的表达水平
目的 探讨干扰素刺激基因(STING)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肿瘤细胞和肿瘤微环境中淋巴细胞的表达水平.方法 回顾性分析80例乳腺癌患者临床资料,酶联免疫吸附测定法检测STING、MIF在肿瘤细胞和肿瘤微环境中淋巴细胞的表达水平.结果 肿瘤微环境淋巴细胞Th1、Th2、Th17及CD8中STING、TBK1和IRF3、MIF及TNF-α的表达均显著高于肿瘤细胞中的表达,而IL-2和IL-6的表达显著低于肿瘤细胞表达(P<0.05).结论 STING、MIF在肿瘤细胞中表达显著高于肿瘤微环境淋巴细胞中的表达.
关键词： 干扰素刺激基因 巨噬细胞移动抑制因子 淋巴细胞 肿瘤微环境 -
α干扰素对结肠癌细胞株lovo和sW1116中X染色体连锁凋亡抑制相关因子1表达调节作用
目的:研究α干扰素(IFN-α)对结肠癌细胞株lovo和sw1116中X染色体连锁凋亡抑制相关因子1(XAF1)表达调节作用.方法:以不同浓度(250、125、62.5和0 U/ml)的IFN-α作用细胞,荧光素酶报道系统检测IFN-α对XAF1启动子活性的影响,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹等方法观察IFN-α对XAF1的mRNA和蛋白表达水平的影响.结果:IFN-α可提高XAF1启动子活性,在lovo和sw1116中分别达到61.7%和87.1%(P＜0.05),同时在mRNA和蛋白水平上调XAF1表达,并呈剂量依赖关系(P＜0.05).结论:IFN-α可上调XAF1表达,提示XAF1可能是干扰素刺激基因(ISG).
关键词： X染色体连锁凋亡抑制相关因子1 抑癌基因 α干扰素 干扰素刺激基因 -
口腔鳞状细胞癌中STING的表达及意义
目的 探讨干扰素刺激基因(stimulator of interferon genes,STING)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织及其对应癌旁组织中的表达及其临床诊断意义.方法 收集25例OSCC组织及对应癌旁组织,提取组织内mRNA,采用SYBR Green荧光实时定量PCR技术检测组织中STING、TBK-1和IRF-3的表达,并分析正常角朊细胞系和OSCC细胞系中IRF-3的表达.结果 OSCC组织内STING的表达与对应癌旁组织相比显著下降(P =0.014 1);OSCC组织内STING下游基因TBK-1的表达与对应癌旁组织相比显著下降(P =0.030 6);OSCC组织内IRF-3的表达与对应癌旁组织相比显著下降(P=0.0313);OSCC细胞系HSC-3与正常细胞系HaCaT细胞系相比,IRF-3 mRNA表达显著降低(P =0.009 3).结论 STING及其下游基因在OSCC癌灶组织内低表达,下调的STING-TBK-1-IRF-3通路可能与癌症进程有关.
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RNA干扰上调天然免疫
目的:研究特异性RNA干扰对于天然免疫的上调作用.方法:分别分离WHV感染的土拨鼠和WHV转基因小鼠原代肝细胞,转染针对WHV、小鼠β-actin和GAPDH的siRNA.Northern blot和Real-time RT-PCR分别检测原代肝细胞中WHV、MxA、MHC Ⅰ、β-actin、GAPDH、IFN-β和IP-10的mRNA水平.结果:针对WHV、小鼠β-actin和GAPDH的siRNA抑制靶基因mRNA伴随MxA、MHC Ⅰ、IP-10等干扰素刺激基因的上调表达.这种干扰素刺激基因的上调表达只有在靶基因被特异siRNA降解时出现,呈剂量和沉寂效应依赖性,而且可以被siRNA特异性抑制剂所阻断.结论:RNAi上调天然免疫可能增强siRNA的抗病毒效应,有可能在抗病毒RNAi研究中发挥重要作用.
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慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中STING基因表达与HBV DNA载量的关系
目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞干扰素刺激基因(STING)和I型干扰素(IFN)α、βmRNA的表达,及其与乙型肝炎病毒载量之间的关系.方法 选择2016年2月—2017年2月在武汉大学人民医院感染科未经治疗的CHB患者88例(CHB组),以及同期进行体检的健康者74例(对照组),通过实时荧光定量PCR检测STING,IFN-α和IFN-βmRNA表达,用2-ΔΔCT的方法 计算相对表达量,并对计算结果 进行统计学分析.结果 CHB组患者外周血中STING,IFN-α和IFN-βmRNA 的表达分别是健康对照组的2.95、3.14、2.01倍,两组间比较差异均有统计学意义(t值分别为-4.72,-3.41,-2.31,均P＜0.05);CHB患者STING相对表达量HBV DNA病毒载量≤104 IU/mL组分别是HBV DNA病毒载量104～105 IU/mL组、105～106 IU/mL组和＞106 IU/mL组的2.98、3.76、3.97倍,差异有统计学意义(P＜0.05);CHB组患者STING与IFN-α、IFN-βmRNA表达呈正相关性(r值分别为0.475、0.503,均P＜0.05).结论 CHB患者体内STING表达升高,且STING高表达影响HBV复制.
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5-AZA-CdR联合EGCG对HL-60和K562的影响
目的 探讨细胞因子INFα和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)能否诱导HL-60和K562 Xaf1表达,以及Xafl表达诱导剂联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有协同抗癌作用.方法 (1)1000U/mlINFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48 h.通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达并比较差异.(2)佳Xaf1表达诱导剂联合EGCG作用于白血病细胞,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位和细胞凋亡的情况.结果 (1)随5-AZA-CdR剂量增加,HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,INFα也能诱导Xaf1表达,以5-AZA-CdR(5 μmol/L)的作用强;ISFα和5-AZA-CdR均不影响XIAP mRNA的表达.(2)5-AZA-CdR和EGCG可改变HL-60和K562细胞Bcl-2(Bcl-x1)和Bax的表达,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,二者联合作用被加强.结论 (1)INFα和5-AZA-CdR能诱导HL-60和K562 Xaf1 mRNA的表达,且5-AZA-CdR的作用具有剂量依赖性.(2)5-AZA-CdR和EGCG在体外能诱导白血病细胞凋亡,并具有协同效应.
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干扰素α、5-AZA-CdR对白血病细胞HL-60和K562的作用
[目的]探讨细胞因子干扰素α(INFα)和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)对白血病细胞HL-60和K562的作用机制.[方法]1 000 U/mL INFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48 h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位(△ψm)和细胞凋亡的情况.[结果]INFα和5-AZA-CdR使HL-60和K562 Xafl mRNA表达增加,且与5-AZA-CdR呈剂量依赖性,其中5-AZA-CdR(5 umol/L)的作用明显;XIAP mRNA表达无变化.INFα使HL-60和K562 Bax表达增加,Bcl-2和Bcl-xl表达无改变;5-AZA-CdR降低HL-60 Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达,增加K562 Bax表达.不影响K562 Bcl-2和Bcl-xl.INFα和5-AZA-CdR都能使线粒体膜电位降低、细胞凋亡增加.除细胞凋亡外INFα和5-AZA-CdR对HL-60和K562的Xafl mRNA、Bcl-2家族成员以及△ψm无协同作用.[结论]INFα和5-AZA-CdR促进HL-60和K562细胞凋亡,其作用机制可能与上调xafl mRNA的表达,下调Bcl-2(Bcl-x1)/Bax和降低线粒体膜电位有关.
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鲤鱼TLR2过表达对下游干扰素相关免疫因子转录水平的影响
目的 探讨鲤鱼Toll样受体2(CcTLR2)过表达对下游干扰素相关免疫因子转录水平的影响及其介导的抗病毒效应.方法 构建过表达载体pEGFP-N 1-CcTLR2,并将pEGFP-N1-CcTLR2和空载体pEGFP-N1同时转染鲤鱼上皮瘤(epithelioma papulosum cyprinid,EPC)细胞;采用real-time PCR检测转染后0、6、12、24、48和72 h细胞内干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)和IRF7以及干扰素刺激基因ISG15、Mx1、PKR和Viperin的mRNA转录水平;并通过鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)感染实验验证TLR2的抗病毒效应.结果 在EPC细胞中转染pEGFP-N1-CcTLR2后IRF3、IRF7、ISG15、Mx1、PKR和Viperin的mRNA转录水平均出现明显上调,在转染后48 h,其转录水平分别相当于转染前的6.3倍、16.5倍、15.0倍、13.0倍、7.6倍和92.4倍,差异显著(P＜0.01);与转染pEGFP-N1空载体相比,转染pEGFP-N 1-CcTLR2的EPC细胞IRF3、IRF7、ISG15、Mx1、PKR和Viperin的mRNA转录水平在转染后48 h和72 h分别上调2倍和2.2倍、1.5倍和2.4倍、3.9倍和4.7倍、3.4倍和6.7倍、5.4倍和3.7倍、6.6倍和15.6倍,差异显著(P＜0.01);转染pEGFP-N1组在感染SVCV后6、12、24、48和72 h的病毒量分别是转染pEGFP-N 1-CcTLR2组的1.1倍、2.4倍、3.8倍、11.7倍、11.4倍,差异显著(P＜0.01).结论 鲤鱼TLR2在EPC细胞中过表达可上调IRF3、IRF7、ISG15、Mx1、PKR和Viperin基因的mRNA转录水平,以及抑制SVCV的增殖;提示鱼类TLR2可通过激活IRF3或/和IRF7信号通路诱导Ⅰ-IFN的产生,进而诱导ISG15、Mx1、PKR和Viperin等干扰素刺激基因表达抗病毒蛋白发挥抗病毒免疫效应.
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干扰素刺激基因在丙型肝炎病毒复制中的作用
丙型肝炎(简称丙肝)由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致,约80％感染者可发展成慢性肝炎,甚至肝硬化和肝癌.目前,丙肝的防治仍无有效的疫苗,临床治疗丙肝主要应用干扰素结合利巴韦林联合疗法,但治疗后HCV有效应答率不高,并伴有明显的副作用.目前对干扰素抗HCV作用的具体机制还不清楚.干扰素通过各种信号通路终激活干扰素刺激基因(ISGs)的表达,其表达产物称为干扰素诱导蛋白,其中与HCV复制相关的主要有PKR、MxA、ISG15、USP18等.近几年ISGs的抗HCV作用和机制的研究已经有了很大的突破,ISGs在抗HCV的作用也越来越受到人们重视.了解清楚ISGs对HCV的作用,对于研制新的抗病毒药物及提出新的抗病毒策略具有重要意义.
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慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中干扰素刺激基因及相关信号通路基因表达的研究
目的 观察慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中干扰素刺激基因(stimulator of interferon genes,STING)、维甲酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid inducible gene 1,RIG-1),以及Ⅰ型干扰素α(Interferon-a,IFN-α)和β(IFN-β) mRNA的表达,为治疗CHC提供新思路.方法 选择2016年1月～2017年1月在武汉大学人民医院感染科未经治疗的CHC患者113例,以及同期进行体检的健康人94例,通过实时荧光定量PCR检测STING,RIG-1样受体,以及IFN-α和IFN-β mRNA表达,用2-△△Ct的方法计算相对表达量,并对计算结果进行统计学分析.结果 CHC患者外周血中STING,RIG-1,IFN-α和IFN-β mRNA的表达分别是健康对照组的0.018,0.361,0.578和0.573倍,两组间的比较差异均有统计学意义(t=8.28,4.26,2.18和2.07,均P＜0.05);健康人STING与IFN-α mRNA,IFN-β mRNA表达呈正相关性(r=0.487,0.207,均P＜0.05);CHC患者STING与IFN-α mRNA,IFN-βmRNA表达无相关性(r=0.174,0.091,均P＜0.05);健康人STING与RIG-1 mRNA表达呈低正相关性(r=0.222,P＜0.05),CHC患者STING与RIG-1 mRNA表达无相关性(r=-0.029,P＞0.05).结论 与健康人相比,CHC患者STING,RIG-1,IFN-α和IFN-β mRNA表达均降低,且在健康人中STING基因与RIG-1及干扰素基因存在正相关性,而CHC中无相关性.
关键词： 慢性丙型肝炎 干扰素刺激基因 Ⅰ型干扰素 实时荧光定量聚合酶链反应 -
干扰素刺激基因在人牙髓组织及牙髓细胞中表达的研究
目的：研究干扰素刺激基因（ STING）在人牙髓组织和细胞中的表达。方法：分别采用逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）检测STING在体外培养的人牙髓细胞中的表达，免疫细胞化学和免疫组化技术检测STING在人牙髓组织的表达和定位。结果：STING mRNA在人牙髓细胞中有显著表达；而在牙髓组织中，STING主要表达于牙髓组织表面的成牙本质细胞的胞浆中。结论：在人牙髓组织中，STING在基因和蛋白水平均呈高表达，且主要定位于成牙本质细胞的胞浆中；提示STING调节通路可能对宿主的天然免疫反应发挥调节作用。
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HCV感染过程中的相关免疫反应
丙型肝炎病毒( Hepatitis C Virus, HCV)是慢性丙型病毒性肝炎的主要病因,也是引发肝硬化和肝癌的主要诱因。在HCV感染过程中,伴随着干扰素信号通路的激活和干扰素刺激基因( IFN-stimulated gene,ISG)的持续表达,且有HCV独特的免疫逃逸和免疫细胞的功能损伤。现就HCV感染过程中机体的固有免疫反应和适应性免疫反应的研究进展作一综述。
