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天麻素在L6肌管中促进葡萄糖消耗的作用和机制研究
目的 研究天麻素(GSTD)在L6肌管中促进葡萄糖消耗的作用和可能机制.方法 体外培养大鼠L6骨骼肌细胞并诱导分化成肌管,血清饥饿后以GSTD单独处理或与浓度为0.05 nmol/L的胰岛素联合处理24 h,以二甲双胍(Met)为阳性对照药.部分实验中L6肌管先以浓度为100 nmol/L的胰岛素处理24h以诱导胰岛素抵抗,再进行药物处理.以试剂盒测定细胞糖消耗、L-乳酸释放和ATP产生,以Western blot和实时荧光定量反转录PCR检测目标蛋白和基因的表达水平.结果 GSTD浓度依赖性地促进L6肌管的基础糖消耗[与对照细胞比较,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜ 0.01)],并且显著增加胰岛素刺激的糖消耗[与单用胰岛素或GSTD处理的细胞比较,差异有统计学意义(P＜ 0.05)].在胰岛素抵抗状态下,浓度为500 μmol/L的GSTD仍能有效促进细胞糖消耗(P＜0.05).Met处理后显著增加细胞的L-乳酸释放并抑制ATP产生[与对照细胞比较,差异有高度统计学意义(P＜ 0.01)],但GSTD没有作用.GSTD显著上调L6肌管GLUT4蛋白和mRNA的表达,并且激活AMPK和Akt通路,表现为处理后p-AMPKcα和p-Akt的水平显著增加[与对照细胞比较,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01)].结论 GSTD作用于L6肌管显著增加其糖消耗并能克服胰岛素抵抗,其机制可能与GLUT4的上调以及AMPK和Akt通路的激活有关.
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AMP依赖的蛋白激酶/叉头转录因子O3a信号通路及氧化应激介导紫铆因诱导人食管癌细胞凋亡作用的研究
目的 探讨紫铆因(Butein)诱导人食管癌EC109细胞凋亡的作用及AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/叉头转录因子O3a(FOXO3a)信号通路、氧化应激在该过程中发挥的作用.方法 常规培养EC109细胞,分别给予Butein处理,首先检测EC109细胞的活力、迁移能力、氧化应激水平及凋亡指标Caspase 3的活性.采用Westem blot法检测细胞内AMPK、FOXO3a的磷酸化水平及凋亡调节蛋白Bim、Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达水平.用Compound C阻断AMPK后检测相关指标.建立裸鼠皮下肿瘤模型,给予Butein和Compound C处理,检测裸鼠体重和肿瘤体积.结果 Butein处理后,细胞活力下降(P＜0.05);细胞间距增加(P＜ 0.05);Caspase 3活性、NADPH氧化酶活性、ROS含量升高(P＜0.05);总GSH下降,提示凋亡增加、氧化应激增强;p-AMPK磷酸化水平、p-FOX-O3a磷酸化水平升高(P＜ 0.05);Bim、Bax表达升高(P＜ 0.05);Compound C处理逆转了这一过程.裸鼠皮下肿瘤检测发现Butein抑制在体肿瘤增殖,阻断AMPK可以逆转该抑制作用.结论 Butein能显著促进食管癌EC109细胞凋亡.该作用可能是通过激活AMPK/FOXO3a信号通路来实现的.
关键词： 紫铆因 食管癌 AMP依赖的蛋白激酶 叉头蛋白转录因子O3a 氧化应激 凋亡 -
AMP依赖的蛋白激酶α2介导二十二碳六烯酸对抗血管平滑肌细胞表型转化研究
目的 探讨AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)α2介导二十二碳六烯酸(DHA)对抗血管平滑肌细胞表型转化的调控作用.方法 原代培养小鼠血管平滑肌细胞(VSMC),应用棕榈酸(PA)做为平滑肌细胞表型转换的体外病理刺激因素,应用不同浓度的DHA进行干预,流式细胞术检测细胞的增殖情况;明胶谱分析、Transwell小室观察细胞的迁移情况;Western blot检测平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)表达及细胞分化情况,同时检测AMPKα表达及活化情况.结果 PA处理后,原代小鼠VSMC增殖能力显著增强,G1向G2细胞周期转化的细胞比例增加;DHA作用后,PA诱导的VSMC增殖能力明显受到抑制.明胶酶谱分析和Transwell小室研究发现,DHA处理后,PA诱导的VSMC的迁移能力受到明显抑制;细胞增殖标志蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)表达下降,细胞分化标志蛋白SMMHC表达增加,DHA可剂量依赖性抑制PA诱导的VSMC表型转换.DHA可诱导pAMPKα表达,且以AMPKα2异构体为主.结论 AMPKα2异构体介导了DHA对抗PA诱导的血管平滑肌细胞表型转化.
关键词： AMP依赖的蛋白激酶 二十二碳六烯酸 血管平滑肌细胞 表型转化 -
AMP依赖的蛋白激酶及PI3K/Akt信号途径在颈动脉狭窄形成过程中的变化
目的 观察AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)及PI3K/Akt信号途径在颈动脉狭窄形成过程中的变化.方法 取SD大鼠经高脂喂养1个月后行颈总动脉球囊损伤术作为模型组(n=24),继续喂养14 d后取损伤侧颈总动脉,行HE染色观测血管内皮损伤及内膜增生情况,应用荧光定量PCR法检测AMPK及PI3 K/Akt mRNA水平,用Western印迹检测p-AMPK、PI3K、p-Akt蛋白水平,另取8只正常SD大鼠作为假手术组.结果 模型组大鼠血管内膜增生明显、管壁变厚;AMPK/PI3 K/Akt mRNA及蛋白水平较假手术组显著下降(P＜0.01).结论 AMPK/PI3K/Akt在颈动脉狭窄的病理生理进程中起到一定的作用.
关键词： 颈动脉狭窄 AMP依赖的蛋白激酶 PI3K AKT -
AMPK通路在硫化氢后处理减轻2型糖尿病大鼠心肌缺血-再灌注损伤中的作用
目的 观察硫化氢后处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的效果,探讨AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)通路在其中发挥的作用.方法 雄性SD大鼠84只,1月龄,体重100~150 g,采用随机数字表法分为六组:假手术组(Sham组)、IR组、AMPK抑制剂compound c组(CC组)、compound c溶剂组(DMSO组)、硫化氢后处理组(NaHS组)和CC+NaHS组,每组14只.成功建立糖尿病模型后,Sham组仅开胸但不结扎阻断血流;IR组在开胸分离左冠状动脉前降支后用止血钳夹紧圈套管缺血30 min,松开圈套管再灌注4 h后取心脏;CC组于术前1 h腹腔注射CC 250μg/kg,其余操作同IR组;DMSO组于术前1 h给予同样剂量的DMSO,其余操作同IR组;NaHS组于开放左冠状动脉1 min内快速静脉注射NaHS 0.05 mg/kg,再灌注4 h;CC+NaHS组:于术前1 h腹腔注射CC,随后于冠状动脉左前降支阻断30 min,同样于开放左冠状动脉1 min内快速静脉注射NaHS 0.05 mg/kg,再灌注4 h.之后对所有动物进行安乐死,采用TTC染色法测定心肌梗死范围,Western blot法测定AMPK、LC3、p62蛋白含量.结果 与Sham组比较,其余五组再灌注4 h时大鼠心肌梗死范围明显增加,AMPK、LC3、p62蛋白含量明显升高(P<0.05);与IR组比较,NaHS组大鼠再灌注4 h时心肌梗死范围明显减小(P<0.05),AMPK蛋白含量明显升高,LC3、p62蛋白含量明显降低(P<0.05);与NaHS组比较,CC+NaHS组再灌注4 h时心肌梗死范围明显增加,AMPK水平明显降低,LC3、p62蛋白表达含量明显升高(P<0.05).CC组与DMSO组上述各指标差异无统计学意义.结论 硫化氢后处理能减轻2型糖尿病大鼠缺血-再灌注损伤后心肌梗死,其机制与调节自噬小体清除及修复AMPK通路调控的自噬流有关.
关键词： AMP依赖的蛋白激酶 硫化氢 心肌再灌注损伤 2型糖尿病 -
二甲双胍对2型糖尿病大鼠骨骼肌Toll样受体/髓样分化因子88信号通路的影响及机制
目的 2型糖尿病的发病机制复杂,分子水平发病机制仍不明确.文章从免疫炎症的角度探究二甲双胍对2型糖尿病大鼠骨骼肌Toll样受体(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路的影响及作用机制,阐述二甲双胍的抗炎机制.方法 SD雄性大鼠按随机数字表法分为4组,每组10只:正常饮食组、模型组、胰岛素组、二甲双胍组,正常饮食组给予饲喂普通饲料,后3组给予高脂高糖饮食并于第8周末联合腹腔注射STZ(30 mg/kg)构建2型糖尿病大鼠模型.造模成功后给予胰岛素组胰岛素(1IU/d)皮下注射4周,二甲双胍组给予二甲双胍灌胃[200 mg/(d·kg)]4周.计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).ELISA法检测血清中IL-23含量;Western blot法测骨骼肌AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、TLR4、MyD88、NFκB;RT-PCR法测骨骼肌组织MyD88mRNA、TLR4 mRNA. 结果 与正常饮食组HOMA-IR(1.56±0.04)相比,模型组、胰岛素组、二甲双胍组(4.55±0.22、4.32±0.32、1.79±0.15)升高(P＜0.05);与模型组相比,二甲双胍组HOMA-IR显著降低(P＜0.05);与胰岛素组相比,二甲双胍组HOMA-IR下降(P＜0.05).与正常饮食组IL-23[(0.788±0.193) μg/L]相比,模型组、胰岛素组、二甲双胍组[(2.279±0.472、1.886±0.233、1.205±0.398)μg/L]升高(P＜0.05);与模型组相比,二甲双胍组IL-23表达降低(P＜0.05);与胰岛素组相比,二甲双胍组IL-23表达下降(P＜0.05).模型组HOMA-IR与血清IL-23呈正相关(r=0.716,P＜0.05);二甲双胍组HOMA-IR与血清IL-23呈正相关(r=0.725,P＜0.05).与正常饮食组TLR4-mRNA、MyD88-mRNA TLR4、MyD88、NFκB比较,模型组、胰岛素组、二甲双胍组的表达增加(P＜0.05);与模型组相比,胰岛素组、二甲双胍组表达均降低(P＜0.05);与胰岛素组相比,二甲双胍组表达下降(P＜0.05).与正常饮食组、模型组、胰岛素组的AMPK相比,二甲双胍组表达增加(P＜0.05).结论 二甲双胍通过激活AMPK抑制骨骼肌TLR4/MyD88/NFκB通路,下调炎症因子IL-23表达水平,起到抗炎及改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用.
关键词： Toll样受体-4 髓样分化因子88 IL-23 二甲双胍 AMP依赖的蛋白激酶 -
二甲双胍对高糖培养 H9 c2细胞 Connexin43表达的影响
目的研究二甲双胍（metformin， Met）对高糖培养下的H9c2细胞缝隙连接蛋白43（connexin43，Cx43）表达的影响及其机制。方法高糖培养的大鼠H9 c2心肌细胞分别加入3和5μmol· L－1的两种不同浓度的二甲双胍继续培养24 h。 MTT实验检测H9c2细胞活力；LDH释放实验检测细胞毒力；细胞免疫荧光实验检测Cx43的表达和分布；荧光法检测细胞内活性氧（ ROS ）水平；Western blot 检测 Cx43、p-AMPK、AMPK和GAPDH的表达。结果 Met能增加H9c2细胞活力，降低细胞内ROS水平，对LDH释放差异无显著性；Met使AMPK磷酸化水平明显升高，增加心肌Cx43表达，改善Cx43的分布。结论 Met可能通过激活AMPK途径，增加心肌细胞Cx43的表达和减少细胞内ROS的产生，进而发挥心血管的保护效应。
关键词： 二甲双胍 高血糖 Connexin43 氧化应激 AMP依赖的蛋白激酶 H9 C2 -
低氧诱导因子1α对成肌分化中PGC－1β的影响及机制研究
目的：研究低氧诱导因子HIF－1α在颏舌肌成肌分化和线粒体生物发生中的作用，探索可能的调控机制。方法：构建HIF－1α敲降质粒，慢病毒载体转染小鼠颏舌肌成肌细胞，设阴性对照组，用含2％马血清的分化培养基在低氧（1％O2）环境下诱导成肌细胞分化，western blot检测成肌细胞分化2、4、6 d，PGC－1β、AMPKα1、pAMPKα1的表达水平，免疫细胞化学染色观察低氧分化4 d时AMPK通道激活剂与阻滞剂对PGC－1β的表达影响，western blot定量分析。结果：①HIF－1α敲降组的PGC－1β表达量高于对照组（P＜0．05），且分化4 d时表达高（P＜0．05）；②AMPKα1总蛋白表达量无明显差异，pAMPKα1的表达在HIF－1α敲降组远高于对照组（P＜0．05）。③AMPK通路促进剂AICAR增加PGC－1β的表达（P＜0．05），抑制剂Compound C明显抑制PGC－1β的表达（P＜0．05）。结论：HIF－1α下调了低氧环境中PGC－1β的表达，PGC－1β的表达受AMPK通路的正向调节作用。
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AMPK和AKT磷酸化与诱导胰腺癌细胞发生自噬反应的关系
目的 探讨AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和蛋白激酶B(AKT)磷酸化与诱导胰腺癌细胞发生自噬反应的关系.方法 收集我院诊治和手术切除肿物的胰腺癌组织52例,另取癌旁组织52例,采用免疫组化二步法和荧光抗体染色技术检测组织P-AMPK和P-AKT蛋白水平,同时检测自噬相关蛋白Beclin1和LC3的水平,采用相关分析它们之间的相关性.结果 免疫组化检测显示,Beclin1在胰腺癌的阳性率为26.92％,明显低于癌旁组织的84.62％(P＜0.05),LC3在胰腺癌的阳性率为34.62％,与癌旁组织(73.08％)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);同时,胰腺癌组织中P-AKT表达增加,AMPK磷酸化水平降低.荧光抗体染色技术显示Beclin1和LC3的阳性率分别为15.38％和19.23％,而P-AMPK和P-AKT阳性率为21.15％和46.15％,与癌旁组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).相关分析显示Beclin1和LC3的水平与P-AKT呈负相关,而与p-AMPK呈正相关(P＜0.05).结论 自噬相关蛋白Beclin1和LC3在胰腺癌组织中异常低表达,AKT磷酸化水平的升高和AMPK磷酸化水平降低可能参与了自噬的活化和诱导自噬的发生,并促进了胰腺癌的恶性进程.
关键词： 胰腺癌 AMP依赖的蛋白激酶 蛋白激酶B 自噬反应 -
二甲双胍对骨矿盐代谢作用机制初探
二甲双胍作为一种治疗2型糖尿病经典的口服降糖药物,近年部分研究表明其对骨矿盐代谢有着积极作用,但作用机制十分复杂,包括通过多种途径诱导成骨细胞分化、减少破骨细胞数目、逆转高血糖直接或间接引起的骨细胞及成骨细胞凋亡等.本文拟对该领域近期进展作一简要综述.
关键词： 二甲双胍 骨矿盐代谢 2型糖尿病 AMP依赖的蛋白激酶 晚期糖基化终产物 -
激活AMPK对妊娠高血压大鼠HO-1水平、血压和尿蛋白的影响
目的 探讨激活AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)对妊娠高血压大鼠的保护作用.方法 建立妊娠高血压大鼠模型,用AMPK特异性激动剂阿卡地新(AICAR)干预后,分为正常妊娠组、亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组、L-NAME+ AICAR组,测量大鼠血压,ELISA测定24 h尿蛋白,胎盘组织苏木精-伊红(HE)染色,免疫组织化学检测AMPK、血红素氧合酶-1(HO-1)表达的细胞定位,Western blot检测胎盘组织AMPK、HO-1表达水平.结果 与正常妊娠组孕鼠比较,L-NAME组孕鼠血压升高,24 h尿蛋白水平显著增加,AMPK、HO-1表达水平降低(P＜0.05).与L-NAME组比较,L-NAME+ AICAR组血压降低,24 h尿蛋白减少,AMPK、HO-1表达水平升高(P＜0.05).结论 激活AMPK可提高妊娠高血压大鼠HO-1水平、降低血压及减少24 h尿蛋白.
关键词： 高血压 妊娠性 AMP依赖的蛋白激酶 血红素氧合酶-1 24小时尿蛋白 -
小檗碱治疗代谢性疾病抗炎作用的研究进展
慢性非可控性炎症在代谢性疾病如糖尿病、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和动脉粥样硬化的发生和发展过程中发挥关键作用.天然产物小檗碱对代谢性疾病有良好的改善作用并对其伴随的慢性炎症有明显的抑制作用.研究显示小檗碱主要通过调控AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、核转录因子-κB (NF-κB)和肠道菌群来发挥抗炎活性.对小檗碱抗炎作用的深入研究将为其应用于临床治疗代谢性疾病提供进一步科学依据.
