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β2糖蛋白I基因转染HEp-2细胞株中融合蛋白的表达及临床应用
目的观察β2糖蛋白I(β2GP I)基因转染的HEp-2细胞(HEp-β2GP I)中β2GP I融合蛋白的过度表达.探讨以HEp-β2GP I为底物间接免疫荧光(IIF)法检测抗β2GP I抗体的可行性.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人源β2GP I cDNA,克隆入pEGFP-C1,并转染HEp-2细胞.通过RT-PCR、共焦荧光显微镜、免疫印迹法(IBT) 及IIF鉴定β2GP I-绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的表达和抗原性.以转染细胞为底物IIF检测19份疑诊继发性抗磷脂综合征(APS)病人、1份原发性APS病人及10份正常人血清的IgG-β2GP I,与同时进行的ELISA法检测IgG-ACL、IgG-β2GP I的结果作比较.结果 (1)获得的HEp-β2GP I细胞传十几代后仍具有较强的β2GP I-GFP表达,融合蛋白保持β2GP I的抗原性,其IIF表型具有特征性.(2)IIF法测血清IgG-β2GP I 的结果显示:7份病人血清出现特征性免疫荧光表型,而正常人血清均无荧光染色.3种方法的比较性研究显示IIF法测IgG-β2GP I与ELISA法测IgG-β2GP I的一致性程度佳(Kappa值0.886).(3)HEp-β2GP I保持了原型HEp-2细胞检测抗核抗体(ANA)的荧光特性,且检出2例原型HEp-2细胞IIF ANA是阴性的血清.结论 HEp-β2GP I转染细胞株可用于IIF检测抗β2GP I,而且仍可作为常规IIF ANA检测的底物.
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系统性红斑狼疮中抗β2糖蛋白I抗体的表达及诊断意义
系统性红斑狼疮(SLE)是一种累及多器官多系统的自身免疫性疾病,产生多种自身抗体是其特点,抗心磷脂抗体(ACA)是其中一种,已被列入1997年SLE诊断标准中[1].
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β2糖蛋白I与肝脏疾病
近40余年以来,有关β2糖蛋白I的生物学特性及作用等研究发展迅速,它参与脂代谢、凝血纤溶系统调节,并与抗磷脂抗体综合征、清除外来异物等有关.此文主要综述β2糖蛋白I与病毒性、酒精性、自身免疫性肝脏疾病的关系.
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抗磷脂抗体与动脉粥样硬化的关系
抗磷脂抗体(aPL)是一组异质性自身抗体,β2糖蛋白I(β2-GP I)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)复合物是导致动脉粥样硬化的自身抗原.抗磷脂抗体能抑制芳香烷基磷酸酯酶(PON)活性,降低总抗氧化能力(TAC),并Fcγ受体介导单核巨噬细胞摄入oxLDL而促进动脉硬化的进程.本文就aPL在动脉粥样硬化发生过程中的作用和分子基础进行综述.
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温州汉族SLE患者载脂蛋白H基因Leu247Val多态性与抗磷脂抗体的相关性研究
目的 探讨apoH第7号外显子G817T(Leu247Val)的多态性与温州地区汉族SLE患者抗磷脂抗体产生的关系.方法 收集温州地区汉族SLE患者165例及健康体检者160例,PCR技术及DNA测序技术检测apoH第7号外显子G817T(Leu247Val)的多态性；蝰蛇毒试验法测定狼疮抗凝物(LAC)比值,ELISA法测定其抗β2糖蛋白I(32GPI)抗体及抗心磷脂抗体(ACA).用Logistic回归分析Leu247Val多态性与抗磷脂抗体(APL)的关系.结果 SLE患者组与健康对照组G817T位点的基因型构成及等位基因频率差异有统计学意义(P值均＜ 0.01),患者组TT、GT基因型及T等位基因频率较高,而GG基因型及G等位基因频率偏低.G817T位点的基因型分布与LAC,抗32GPI抗体及ACA的阳性均有关(P值＜0.05,＜0.01,＜0.05).GT基因型是LAC(P＜0.05,OR=2.33,95％ CI 1.18～4.59)、抗β2GPI抗体(P＜0.01,OR=5.92,95％ CI 2.61 ～ 13.46)及ACA(P＜ 0.05,OR=2.52,95％CI1.22～5.24)产生的危险因素.TT基因型是抗β2GPI抗体的危险因素(P＜0.01,OR=5.84,95％ CI 1.69～20.20).结论 温州地区汉族SLE患者apoH第7号外显子G817T(Leu247Val)位点的多态性与APL产生有关,GT、TT基因型是APL产生的危险因素.
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β2糖蛋白I纯化及其稳定性分析
目的:从正常人混合血浆中纯化获得β2糖蛋白Ⅰ(β2GPI),并对提纯蛋白的纯度及稳定性进行分析.方法:采用HClO4沉淀、Heparin Sepharose CL-6B亲和层析柱等纯化β2GPI;利用SDS-PAGE、蛋白质印迹分析提纯蛋白的纯度;观察不同温度、NaCl浓度及防腐剂等条件下的β2GPI稳定性.结果:本法获得了高纯度目的蛋白β2GPI(＞95%). β2GPI在浓度低于0.8 mol/L 的NaCl溶液中,置室温及4℃保存易降解变性,但在1.6 mol/L NaCl溶液中于室温及4℃保存60天均未见蛋白明显降解.结论:利用本法能够得到高纯度的β2GPI,在使用和保存β2GPI时要考虑到其降解的可能性,注意保存条件,必要时冻干保存.
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β2糖蛋白I与乙型肝炎病毒嗜肝性的关系
目的 研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与β2糖蛋白I(β2GP I)的结合特性,探讨β2GP I在乙型肝炎病毒(HBV)嗜肝性中的作用.方法 采用Western blot技术,研究还原型与非还原型β2GP I与HBsAg的结合特性.结果 还原型与非还原型β2GP I与HBsAg有相同的亲和力,推测β2GP I与HBsAg的结合部位是在一级结构上相邻的氨基酸残基肽段,与空间构象关系不大.结论 HBV与β2GP I有特异的亲和能力,这一亲和能力可能在HBV感染肝细胞过程中发挥了重要作用,是HBV嗜肝性的原因之一.
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丹参对β2-GPI诱导的自身免疫小鼠aCL产生的影响
目的观察丹参注射液对β2糖蛋白I( β2-GPI)诱导的抗心磷脂抗体(aCL)产生的影响,探讨丹参注射液对抗磷脂综合征(APS) 的治疗作用及可能的作用机制.方法 4周龄的雌性昆明种小鼠40只随机分为小、中、大剂量组及模型组.小、中、大剂量组经腹腔注射予以不同剂量的丹参注射液;连续14?d后,四组均多部位皮下注射β2-GPI;用ELISA法测定不同实验组各周血清中的aCL OD值.结果用药组血清aCL OD值均较模型组有不同程度降低( P＜0.05或P＜0.01);药物剂量与aCL OD值的变化呈负相关(P＜0.01).结论丹参注射液对β2-GPI诱导的aCL产生显示出明显的抑制作用.
