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大颗粒淋巴细胞白血病二例并文献复习
目的 提高对大颗粒淋巴细胞白血病的认识.方法 报道2例大颗粒淋巴细胞白血病诊断及治疗经过,并进行文献复习.结果 例1表达CD3/TCR复合体和TCR基因重排,表现为CD+3 CD+8CD+16 CD+57CD-56,起病缓慢,病情较稳定；例2患者不表达CD3/TCR复合体或TCR基因重排,表现为CD3CD+16CD+56,病情进展迅速,病程数月即死亡.结论 细胞形态学、免疫表型、TCR基因重排等检查有助于大颗粒淋巴细胞白血病的诊断.
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髓源树突细胞源性外泌体对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠NK及NKT细胞的影响
目的 探讨他汀类药物诱导髓源树突细胞(BMDCs)源性外泌体(exosomes)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠自然杀伤细胞(NK)及NK T细胞的影响.方法 阿托伐他汀和DMSO分别与BMDCs共培养,采用流式细胞术分析其表型.应用梯度离心法提取不同组BMDCs分泌的外泌体(分别记为他汀Dex和对照Dex),将不同组外泌体注射于EAMG大鼠体内,采用双盲法观察EAMG临床症状;通过流式细胞术检测各组大鼠淋巴结NK、NK T和干扰素γ(IFN-γ)阳性细胞、白细胞介素-10(IL-10)阳性细胞的表达水平;采用ELISA方法检测各组血清抗R97-116 IgG抗体及其亚型水平.结果 他汀类药物能够明显抑制BMDCs表面CD80和CD86的表达水平(CD80:1.10％比22.80％,P<0.01;CD86:30.78％比43.93％,P<0.01),这些BMDCs可进一步分泌他汀Dex.与对照Dex治疗组比较,他汀Dex治疗组EAMG大鼠淋巴结NK细胞比例增加(2.30％比1.63％,P<0.05),淋巴结单个核细胞(MNC)中IFN-γ+细胞比例(1.05％比2.24％,P<0.05)、血清抗R97-116 IgG抗体及其亚型IgG2a和IgG2b水平均明显降低(IgG:0.44比0.64,IgG2a:0.26比0.35,IgG2b:1.47比1.94;均P<0.05).结论 他汀Dex可缓解EAMG大鼠的临床症状,这种作用与上调淋巴结MNC中的NK细胞有关.
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益气温阳方对变应性鼻炎小鼠鼻黏膜NK细胞浸润影响的实验研究
目的 观察益气温阳方对变应性鼻炎(AR)模型小鼠鼻黏膜NK细胞浸润、活化作用的影响,探讨益气温阳方有效干预AR的潜在机制.方法 将48只小鼠随机分为空白组、模型组、益气温阳方低、中、高剂量组及西替利嗪组6组,每组8只.建立小鼠AR模型后,模型组灌胃0.9％氯化钠溶液,益气温阳方各剂量组灌胃不同浓度的益气温阳方水提液,西替利嗪组灌胃西替利嗪水溶液,空白组灌胃PBS溶液,观察各组小鼠行为表现、鼻黏膜病理形态变化及鼻黏膜NK细胞浸润情况,测定鼻腔灌洗液白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(INF-γ)水平.另以益气温阳方灌服小鼠进行急性毒性实验,初步观察其药物安全性.组间比较采用单因素方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 益气温阳方中、高剂量组小鼠的喷嚏数及搔鼻数显著低于模型组,差异有统计学意义(喷嚏数q值分别为7.189、8.748,搔鼻数q值分别为12.074、14.560,P值均＜0.05).益气温阳方中、高剂量组小鼠鼻黏膜的NK细胞浸润程度及鼻腔灌洗液IL-4水平均显著低于模型组,差异有统计学意义(IOD的q值分别为10.073、12.322,IOD/Area的q值分别为10.954、14.073,IL-4的q值分别为4.705、6.801,P值均＜0.05).各组鼻腔灌洗液INF-γ的水平差异无统计学意义(F=1.166,P＞0.05).急性毒性实验过程中,小鼠未见明显中毒症状及死亡发生.结论 益气温阳方能抑制AR鼻部症状,减少鼻黏膜局部NK细胞浸润,抑制NK细胞等释放的2型细胞因子表达,其有效干预AR的潜在机制可能与此有关.
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原发鼻腔NK/T细胞淋巴瘤影响预后的因素分析
目的 分析鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者的临床特征及血液学指标,探讨影响预后的因素.方法 回顾性分析天津医科大学附属肿瘤医院80例鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者的临床特征及血液学指标,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox模型进行多因素分析.结果 80例患者经过治疗后,33例患者达到完全缓解,5年总生存率和无进展生存率分别为52.5％和32.5％.单因素分析显示,美国东部肿瘤协作组评分(Eastern Cooperative Oncology Group performance status,ECOGPS)、Ann Arbor分期、腔外受累、国际预后指数(international prognostic index,IPI)评分、首次治疗是否达完全缓解、治疗模式(单纯化疗与放化疗联合)、血清乳酸脱氢酶(LDH)和β2-微球蛋白和球蛋白水平、外周血白细胞计数与鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者的预后相关(P值均＜0.05).多因素分析显示,首次治疗是否达完全缓解、LDH、腔外受累是影响鼻腔NK/T细胞淋巴瘤预后的独立危险因素(x2值分别为17.109、15.695和13.503,P值均＜0.01).结论 首次治疗是否达完全缓解、LDH、腔外受累可作为鼻腔NK/T细胞淋巴瘤临床预后的参考指标.
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白细胞介素-2基因与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因联合治疗小鼠头颈鳞状细胞癌的研究
目的观察白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因与单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因联合治疗小鼠头颈鳞状细胞癌的疗效.方法建立小鼠头颈鳞状细胞癌动物模型后在荷瘤部位分别注射表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(recombinantadenovirus, Ad)和表达HSV-TK基因的重组腺病毒Ad HSV-TK及联合注射组,对照组分别注射不带目的基因的腺病毒或磷酸盐缓冲液(phosphatic buffered solution,PBS).对注射有Ad HSV-TK基因组和联合治疗组每日腹腔注射抗病毒药物更西罗韦(ganciclovir,GCV) 25 mg/kg体重,每日2次连续7 d.观察肿瘤大小变化并检测脾脏自然杀伤细胞和颈淋巴结细胞毒性T淋巴细胞的活性,探讨其抗肿瘤机制.结果 Ad IL-2和Ad HSV-TK联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于单独治疗组和对照组(P<0.05),在注射有Ad IL-2基因的治疗组中,IL-2蛋白水平明显升高,自然杀伤细胞活性和细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性增强,肿瘤组织中可见大片坏死,并含有大量的CD+4、CD+8淋巴细胞浸润.结论 Ad IL-2基因治疗可提高肿瘤局部和全身的抗肿瘤免疫应答,能加强自杀基因AdHSV-TK的抗肿瘤效果,两者联合应用能显著抑制小鼠头颈鳞状细胞癌的生长.
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自然杀伤T细胞与角膜移植免疫耐受
自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一种新型的淋巴细胞,与T细胞和NK细胞不同,其同时表达T细胞表面受体和NK细胞表面标志,其发育受CD1分子限制.近年来研究发现NKT细胞是调节免疫反应的重要细胞,在器官移植免疫耐受的产生和维持中发挥重要作用.本文主要就NKT细胞的生物学特点以及其在角膜移植免疫耐受中的作用机制作一综述.
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氧化海藻酸钠预处理提高树脂牙本质粘接的耐久性
目的 研究氧化海藻酸钠(ADA)改性脱矿牙本质胶原的交联度和显微形貌,及其对牙本质基质金属蛋白酶(MMP)的抑制作用和树脂牙本质粘接强度的影响.方法 制备ADA,进行傅里叶红外线光谱分析(FTIR).采用0.5％、1％、2％、3％和4％的ADA处理脱矿牙本质粉末(DDP)1、2、30 min,5％戊二醛溶液作为阳性对照,茚三酮比色法检测胶原交联度.制备(1.0±0.1)mm厚牙本质片,35％磷酸溶液酸蚀后ADA处理1 min,保持表面干燥或湿润,场发射扫描电镜(FESEM)观察其显微形貌.Sensolyte Generic MMP assay kit试剂盒检测不同浓度ADA对MMP-9的抑制作用.制备树脂牙本质粘接样本,检测ADA预处理试件冷热循环前后的微拉伸强度.使用SPSS 22.0对交联度实验进行多因素方差分析和Tukey检验,MMP-9抑制实验进行秩和检验和Bonferroni检验,微拉伸实验进行单因素方差分析和LSD检验.结果 FTIR显示海藻酸钠氧化后生成醛基形成ADA.DDP经ADA处理后,胶原交联度随处理浓度及处理时间呈依赖性增加,不同浓度组间(F=1329.423,P<0.001)及不同时间组间(F=1142.93,P<0.001)差异均有统计学意义.35％磷酸溶液脱矿牙本质表面经处理后,除阴性对照和0.5％ADA干燥处理组胶原纤维塌陷外,其余组均保持蓬松状态.0.5％～4％ADA对MMP-9的抑制程度为93.5％～100％,不同浓度组间差异有统计学意义(F=13.786,P<0.001).ADA预处理后,2％ADA组粘接样本冷热循环前后的粘接强度高,分别为(28.2±4.2)、(18.3±3.7)MPa,差异有统计学意义(F前=5.544,P前<0.001;F后=5.181,P后<0.001)MPa.结论 2％ADA处理脱矿牙本质可提高Ⅰ型胶原纤维的交联度,使胶原纤维网保持蓬松状态,同时能抑制MMP-9活性,提高树脂牙本质粘接即刻及老化后的微拉伸强度,有利于改善树脂牙本质的粘接耐久性.
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S-KIR基因组合型与肝移植术后急性排斥发生率的关系
目的 了解激活型NK细胞受体(S-KIR)基因组合型与肝脏移植后急性排斥反应(AR)发生率的相关性.方法 采用PCR-SSP技术对56例接受异体肝脏移植的供受者进行KIR基因分型,采集受者移植前后的临床信息,采用SPSS16.0软件进行统计学分析.结果 抑制型KIR(L-KIR,基因型AA)在肝移植患者中占50％(28/56),其表达频率为0.499;激活型KIR(S-KIR,基因型AB/BB)在肝移植患者中占50％(28/56),其表达频率为0.500.56例受者中有16例发生了AR,发生率28.6％,发生时间为术后7～30d,中位时间为术后14d.16例术后发生AR的患者中,受者为L-KIR者的AR发生率为18.8％(3/16),受者为S-KIR者的AR发生率为43.8％(7/16),差异无统计学意义(P＞0.05);供者为L-KIR者的AR发生率为25.0％(4/16),供者为S-KIR者的AR发生率为12.5％(2/16),差异亦无统计学意义(P＞0.05).在移植后发生AR的受者中表达1个KIR激活基因(S1)的占16.67％,表达≥2个KIR激活基因(S2)的占83.33％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝移植受者S-KIR组合型及其数目与术后AR的发生率存在关联.在肝移植受者中进行KIR检测,可为肝移植后小剂量、低浓度、联合抗排斥药物的临床应用提供参考.
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新鲜血细胞对癌细胞的天然免疫反应性研究
为证实新鲜血细胞是否存在对癌细胞的快速天然免疫反应性,将癌细胞(S180)加入枸橼酸抗凝血中37℃水浴30min.结果显示,35例标本中,红细胞能免疫粘附癌细胞,白细胞也能免疫粘附癌细胞,但红细胞粘附癌细胞形成花环率[(26.49±18.9)%]明显高于白细胞粘附癌细胞形成的花环率[(0.86±2.74)%](P<0.01).这种免疫反应可被抗CR1完全阻断.提示在新鲜血中存在对癌细胞的快速天然免疫反应,红细胞在新鲜血快速天然免疫反应中起重要作用.
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索拉非尼对高表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的鼻咽癌细胞杀伤敏感性的影响的研究
目的 探讨索托非尼提高高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞)对同种异体反应性自然杀伤Allo-NK)细胞的杀伤敏感性及其相关机制.方法 利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP和Allo-NK细胞,并设3个实验组:①处理组(经索拉非尼10ng/ml共孵育4h的ABCG2HighCNE2/DDP细胞);②未处理组(常规培养的ABCG2HighCNE2/DDP细胞);③对照组(常规培养的K562细胞).流式细胞技术检测处理组和未处理组细胞的ABCG2表达率和5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达率.乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法检测Allo-NK细胞对各实验组细胞的杀伤率.结果 分离后的CNE2/DDP细胞的ABCG2表达率为91.40%±2.32%,分选出的CD3-CDl6+CD56+ (Allo-NK)细胞纯度大于90%.未处理组的ABCG2 HighCNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率分别为2.92%±0.33%、4.27%±0.33%、5.80%±0.62%、11.10%±3.15% 、7.75%±1.14%,而处理组明显升高(分别为10.38%±1.23%、10.68%±1.26%、11.62%±1.22%、43.24%±4.42%、11.91%±0.88%;P<0.05).在效靶比为10:1、20:1时,Allo-NK细胞对未处理组靶细胞的杀伤率为15.32%±1.34%、27.26%±6.81%,而对处理组靶细胞杀伤率为27.75%±4.12%、43.17%±5.92%,两组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 索托非尼通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体,使其对AIIo-NK细胞的杀伤敏感性增强.
关键词： 三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2 基因 MDR 鼻咽肿瘤 杀伤细胞 天然 自然杀伤细胞激活受体 -
Fractalkine、IP-10及不同信号通路抑制剂对肿瘤微环境中NK细胞的影响
目的 探讨Fractalkine(FKN)、干扰素诱导蛋白10(IP-10)以及不同信号通路抑制剂对肿瘤微环境自然杀伤(NK)细胞数目和功能的影响.方法 免疫组化染色观察人乳腺癌组织中CD56和DAP10的分布情况.通过共培养小鼠巨噬细胞RAW264.7与小鼠乳腺癌细胞4T1模拟体外肿瘤微环境(数目比例1∶4),以小鼠NK细胞KY-1为研究对象.RT-PCR检测肿瘤微环境中KY-1细胞表面活性受体CD16、NKG2D及NK1.1的表达;ELISA检测培养细胞上清CD107a的含量.在肿瘤微环境中加入10ng/mlFKN及10ng/ml IP-10,流式细胞术测定NK1.1+CD16+ KY-1细胞的数量;趋化及黏附实验评价其迁移和黏附功能的变化.后,以10nmol/L雷帕霉素、30μmol/L LY294002、500ng/μl穿心莲内酯、2μmol/L渥曼青霉素分别处理4T1细胞,收集上清分别孵育RAW 264.7细胞48h后,RT-PCR检测4T1、RAW 264.7 mRNA及两种混合mRNA中Rae1 α、H60a的表达.结果 肿瘤微环境中,KY-1细胞NK1.1+细胞比例、趋化率及黏附功能明显下降,加入FKN和IP-10后以上各项指标明显增高,不同信号通路阻滞剂使4T1细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性均有不同程度提高,以雷帕霉素作用为明显(P＜0.05).结论 FKN、IP-10可上调肿瘤微环境中NK细胞的数目和功能,雷帕霉素等通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(Rae1、H60a),间接促进NK细胞的杀伤活性.
关键词： 趋化因子CX3CL1 趋化因子CXCL10 信号传导 杀伤细胞 天然 肿瘤微环境 -
聚肌胞苷酸、脂多糖及肽聚糖对人气道黏膜天然免疫功能影响的实验研究
目的 研究聚肌胞苷酸[Poly(I∶C)]、脂多糖(LPS)及肽聚糖(PGN)对人气道黏膜屏障及炎性介质表达的影响,进而了解气道黏膜对不同Toll样受体配体的天然免疫应答反应.方法 采用Transwell系统培养人16HBEs气道上皮细胞建立人气道黏膜体外模型,分别给予Poly(I∶C)、LPS及PGN顶侧刺激,对照组仅给予MEM+GlutaMax-Ⅰ培养基培养.通过测定跨膜电阻抗(TER)判断16HBEs细胞间的小分子通透性,测定基底侧培养液中FITC-右旋糖酐浓度判断大分子细胞通透性,用ELISA法检测干预24h后培养细胞顶侧及基底侧上清液中IL-8、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及TNF-d的蛋白含量.结果 10μg/ml Poly(I∶C)导致人气道上皮细胞间TER显著降低,FITC-右旋糖酐通透性增加(p＜0.01),10μg/ml LPS及100μg/ml PGN刺激对气道上皮细胞TER及FITC-右旋糖酐通透性无明显影响.IL-8和TNF-α表达在Poly(I∶C)、LPS及PGN组细胞顶侧和基底侧均较对照组显著增加(P＜0.05).GM-CSF表达在3组细胞顶侧均较对照组增加(p＜0.05),仅Poly(I∶C)组基底侧表达较对照组增加(P＜0.05),LPS和PGN组基底侧与对照组比较无明显变化.Poly(I:C)组、LPS组和PGN组细胞顶侧IL-8和GM-CSF浓度增高程度高于基底侧,形成浓度梯度.结论 Poly(I:C)可破坏气道黏膜屏障完整性,导致小分子和大分子通透性增加,同时刺激细胞定向向顶侧分泌炎性介质,LPS及PGN对气道黏膜屏障无影响,但能诱导细胞向顶侧定向分泌炎性介质,提示病毒及细菌感染所致气道炎症与Toll样受体通路介导的气道黏膜天然免疫应答有关.
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NK细胞在异基因造血干细胞移植中的作用和应用研究进展
NK细胞是异源反应性免疫细胞,它不仅具有直接的细胞杀伤作用,而且可以分泌多种细胞因子参与免疫细胞的调节.众多临床移植资料和动物实验证据提示,NK细胞对于异基因造血干细胞移植预后具有诸多有利影响:通过参与继发细胞免疫应答促进残存宿主细胞的清除,识别和攻击宿主白血病细胞发挥移植物抗白血病(graft versus leukiemia,GVL)效应,调节抗原提呈细胞(antigen present cells,APC)从而降低移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)的发生率和移植后白血病的复发率.由于上述现象的发现,目前NK细胞输注已开始用于异基因造血干细胞移植后的治疗,初步结果显示NK细胞治疗是安全的.为此我们对NK细胞在异基因造血干细胞移植中的作用和临床应用的研究进展作一综述.
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抗登革病毒的天然免疫应答
登革热/登革出血热(DF/DHF)是热带地区重要的蚊传播病毒性疾病,造成了非常严重的世界公共卫生问题.理解机体天然免疫应答对登革病毒感染的影响有重要意义.病毒入侵宿主细胞是感染过程的第一阶段,也是关键性的阶段,其过程所涉及的细胞蛋白鉴定与机制大部分仍然未知.间质性树突细胞(DCs)是登革病毒感染的靶细胞,也是机体天然免疫防御抗登革病毒入侵的第一道防线.在病毒感染早期.NK细胞分泌的Ⅰ型干扰素(IFN)非常重要.机体内有两个应答登革病毒感染的天然免疫通道,其中一个信号通道利用Toll样受体(TLR)家族成员,探测经细胞内吞作用进入的内涵体病毒,通过信号蛋白诱导IFN产生,并终活化NF-κB,IRF7、IRF5等转录因子,另一个抗病毒通道则以维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)作为细胞内识别病毒dsRNA的受体.但RNAi天然免疫通道在人类是否存在还有待进一步研究.
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卵巢癌患者血清及腹水对淋巴细胞增殖及NK细胞活性的影响
肿瘤免疫学研究表明,机体自身的免疫功能与肿瘤的发生、发展密切相关.许多文献报道卵巢癌患者的免疫功能较正常人低[1、2],但迄今为止,导致其免疫功能低下的原因尚未阐明.本研究通过检测卵巢癌患者血清及腹水对淋巴细胞增殖(PHA试验)及NK细胞活性的作用,旨在了解卵巢癌患者血清及腹水对免疫细胞的作用.
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IL-21通过 SENP1调控 NK细胞生物学特性
目的 探讨IL-21对小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)表达的影响及其对NK细胞生物学特性的调控作用.方法 以NK92细胞系为模型,采用慢病毒介导的Senp1基因干涉策略,抑制NK92细胞SENP1的表达.实时荧光定量PCR和Western印迹检测SENP1表达水平;利用CCK-8细胞增殖检测试剂盒测定细胞增殖活性;Annexin Ⅴ-APC/PI标记检测细胞凋亡.将K562细胞与NK92细胞共培养,荧光素酶报告基因方法检测NK92细胞的杀伤活性.结果 IL-21处理上调NK92细胞SENP1的表达;慢病毒介导Senp1-shRNA转染显著降低NK92细胞内Senp1 mRNA和蛋白表达水平.Senp1干涉组NK92细胞增殖能力较对照组明显降低.同时,干涉Senp1能促进NK92细胞凋亡,但对NK92细胞杀伤K562活性无显著影响.结论 IL-21上调NK92细胞SENP1的表达;干涉Senp1能抑制NK92细胞增殖,促进细胞凋亡,同时影响穿孔素表达和对肿瘤细胞的杀伤活性.
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RNF34调控天然免疫的初步研究
目的：研究环指蛋白34（RING finger protein 34， RNF34）对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建 pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID 和 pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒，并在HEK293 T细胞中瞬时表达；利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒（ SeV）和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒；发现在SeV刺激下，RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用， RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性，RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。
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乙型肝炎病毒与宿主天然免疫间的相互作用
天然免疫是机体对抗病原体的第一道防线.病原体入侵后,通过相应的配体受体反应及信号转导,导致机体合成一系列细胞因子,建立广泛的防御机制.其中干扰素是起关键作用的细胞因子,它抑制病原体复制,防止病原体扩散,并影响机体的生理状态.乙型肝炎病毒(HBV)的感染也引起宿主的天然免疫反应,对HBV的复制发挥了不容忽视的抑制作用;另一方面,HBV时天然免疫也有抗击机制,保护病毒自身的生存和复制.HBV与机体天然免疫间的相互作用是非常复杂的.尽管目前对于HBV天然免疫的研究还存在诸多疑问,但在许多方面已取得一定进展.本文将阐述乙型肝炎病毒感染天然免疫方面的研究进展,重点讨论干扰素的作用及病毒对它的拮抗.
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抗病毒天然免疫反应中RIG-Ⅰ样受体调控机制新进展
宿主免疫细胞和相关的组织细胞能够通过表达病原模式识别受体(pattern recognition receptor, PRR)即 Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)、核苷酸寡聚化域样受体(NOD-like receptor,NLR)、维A酸诱导基因Ⅰ样受体(RIG-Ⅰ-like receptor,RLR)检测病毒及其他病原微生物,并将感染信号级联放大,诱发抗病毒天然免疫反应.由于PRR成员识别病原的特异性和机制各具特色,使有关PRR的鉴定及其诱发天然免疫反应的分子机制研究更加具有挑战性,特别是细胞质病原识别受体--RLR引发的信号通路研究已经成为细胞生物学与免疫学领域的热点之一.新研究发现,泛素化、去泛素化及干扰素刺激基因(interferon stimulating gene,ISG)化等翻译后修饰对RLR介导的抗病毒天然免疫反应具有重要调控作用,成为许多病毒逃逸机体防御系统的主要分子机制.并且近研究发现了一个新的RLR信号通路中抗病毒免疫分子STING(也称为MITA/MPYS/ERIS),为揭示复杂的抗病毒天然免疫反应提供了新思路.
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小鼠NK细胞体内扩增、分离纯化的方法研究
目的 为获得一定数量高纯度的自然杀伤细胞(natural killer cells,NK),拟采用水动力高压转染技术实现Flt-3配体(Flt-3 ligand,FL)基因在小鼠肝的高效表达,以刺激脾NK细胞体内扩增,随后通过优化免疫微磁珠分选(MACS)技术获取大量、高纯度NK细胞,为细胞治疗提供支撑.方法 C57BL/6小鼠经多次水动力高压转染FL表达质粒后,流式细胞术检测脾NK细胞的扩增程度及表型变化,并通过MACS技术分离纯化NK细胞.结果 与一次水动力高压转染FL目的质粒的结果相比,两次水动力转染后小鼠脾明显增大,淋巴细胞绝对数量增加(6.02±1.15)倍,NK细胞亚群比例增加(2.07±0.39)倍,NK细胞亚群绝对数量增加(12.49±2.39)倍.同时,FL刺激对NK细胞活性及表型无明显影响.后,经偶联CD5(Ly-1)磁珠阳选和去除T、B等多种杂细胞磁珠阴选相结合的双重分选方法,可获得纯度为(83.81±0.92)％的NK细胞,较单独阴选纯度提高(1.60±0.02)倍.结论 经两次FL表达质粒水动力高压转染,可在不影响NK细胞活性及表型的前提下,实现其在小鼠脾的大量扩增.阳选和阴选相结合的双重MACS分选技术能有效去除T、B等杂细胞影响,获取高纯度NK细胞,为肿瘤细胞免疫治疗奠定基础.
