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毒素-抗毒素系统及其在结核分枝杆菌中的研究进展
毒素-抗毒素系统(TAs)广泛存在于非严格胞内寄生的细菌等原核生物中,基因的多态性分析表明,它们具有共同的祖先.目前已经对TAs多个家族进行了蛋白晶体结构解析,并且分析了它们作用的方式.TAs由于具有RNA酶的活性并且能够在特定的mRNA碱基排列位置切割mRNA,因此TAs在细菌的潜伏感染与适应环境刺激等方面发挥了重要作用.进一步对目前严重危害人类的结核分枝杆菌的全基因组分析表明:结核分枝杆菌存在36对TAs基因,目前已经有少量TAs的功能在结核分枝杆菌中得到证明.
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比较两种方法制备脱细胞小血管支架
目的:比较0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH和酶法制备脱细胞小血管支架的效果.方法:分别用含0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH处理3 d或1.0H Triton X-100+0.125%胰蛋白酶+Dnase+Rnase孵育48 h,脱去犬股静脉中的细胞成分,50Co辐照消毒,血清浸泡24 h,将平滑肌细胞和内皮细胞接种到脱细胞支架中;进行H-E染色、胶原纤维和弹力纤维染色,扫描电镜观察及力学检测.结果:0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH法完全地脱去了血管细胞;细胞外基质较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变;见种植细胞在支架内生长良好,连成片,支架具有良好的生物相容性;力学结果显示其弹性回复率和大断裂强度好于酶组.结论:两种方法比较,0.5%Triton X-100+0.05%NH4OH法简便易行,成本低,脱细胞效果好,组织相容性佳,对力学性状影响小,是比较理想的制备脱细胞小血管支架的方法.
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RNA酶保护试验检测基因表达的研究
目的：探讨应用RNA酶保护试验（RNAse Protection Assay, RPA）进行基 因表达的检测法。方法：应用RPA检测了SD大鼠脑组织，肝脏组织，外周神 经组织中一氧化氮合酶（NOS）三种同分异构体-神经型NOS（nNO S），内皮型NOS（eNOS），诱导型NOS（iNOS）以及看家基因2，3-二羟基丙醛-3-磷酸脱氢 酶（GAPDH）的表达。结果：放射自显影显示出清晰的各具不同密度的与预 期产物相同大小的杂交 信号。结论：RPA具有操作简便，特异性强，灵敏度高，准确度高的特点， 是进行基因表达研究的较佳方法。
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前列腺癌患者血清RNA酶活性及意义
目的测定正常对照、前列腺增生症( Benign prostatic hyperplasia, BPH)患者、前列腺癌患者血清核糖核酸酶( Ribonuclease, RNA酶)活性,探讨其临床意义.方法以纯酵母 RNA为底物的生化反应测定血清 RNA酶活性.结果正常对照组、 BPH组血清 RNA酶活性分别为( 0.0625± 0.0120)、( 0.0638± 0.0182), 2组无显著性差异( P>0.05).前列腺癌患者组血清 RNA酶活性为( 0.1171± 0.0252),显著高于前 2组( P<0.05).结论血清 RNA酶活性分析有助于前列腺癌的临床研究.
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循环miRNA在疾病诊断中的应用
微小RNA(miRNA)是指长度为18～24个核苷酸的内源性小分子非编码RNA,普遍存在于各种生物中,由RNA聚合酶Ⅱ转录后,形成RNA前体分子(pri-miRNA),在细胞核内经 RNA酶Ⅲ( Drosha)和双链RNA结合蛋白(Pasha)加工成长约70个核苷酸,具有茎环结构的miRNA前体(pre-miRNAs),pre-miRNAs经exportin5等蛋白转运到细胞质中,在另一个RNA酶Ⅲ(Dicer)剪切下形成约22个核苷酸的miRNA双链,其中一条为成熟的miRNA分子.成熟的miRNA分子在细胞内与Argonaute蛋白等形成RNA诱导的基因沉默复合体RISC(RNA induced silencing complex),并倾向于保留在miRISC复合体中,对靶基因进行负调控[1,2].
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逆转录PCR(RT-PCR)实验操作要点
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.以RNA为模板,首先在依赖于RNA的DNA聚合酶的催化作用下体外合成cDNA的第一条链,以此条cDNA链为模板.又可继续进行PCR.RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列.作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物.无论使用何种RNA,要得到理想的结果,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染.而确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染,关键是要做好实验前的准备,注意实验操作的一些细节.
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实验性胰腺炎大鼠胰腺总RNA的提取
目的:探讨提取实验性胰腺炎大鼠胰腺总RNA并尽量减少胰腺RNA降解的方法,为胰腺组织mRNA的检测提供前提条件.方法:健康SD大鼠54只,随机分为假手术组(A)、损伤组(B)、动脉给药组(C)和静脉给药组(D),RNA提取采用Chomczynski酸性一步法.结果:RNA琼脂糖凝胶电泳显示RNA没有明显降解.结论:胰腺组织RNA含量丰富,极易降解RNA,操作速度、RNA提取试剂盒的质量和防止RNA污染的综合措施是成功制备高质量RNA的关键.
