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蔗糖浓度及ICSI前培养时间对人卵母细胞慢速冷冻影响的初步研究
目的:研究2种蔗糖浓度对人类卵母细胞冻融结果的影响.方法:采用慢冻-快融程序化冷冻方法冻融不同时期的人卵母细胞,根据冷冻液中蔗糖浓度不同分为二组(A组:0.2 mol/L蔗糖组;B组:0.3 mol/L蔗糖组),比较其复苏后存活情况.B组复苏后成熟卵母细胞培养不同的时间行单精子卵胞浆内注射(ICSI),分析培养时间对卵母细胞受精和发育结果的影响.结果:相对于A组的冷冻方法,B组明显提高了未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的存活率(72.0% vs 54.4%,68.8% vs 44.4%),二组卵母细胞复苏后形态异常率无明显差异;复苏后存活的成熟卵母细胞ICSI前培养3-4h后受精率、优质胚胎率、囊胚形成率明显高于培养1 h、2 h和5 h.结论:适当提高蔗糖浓度更有利于各时期卵母细胞的冻存,复苏的成熟卵母细胞培养3-4 h有助于卵母细胞结构的恢复,提高正常受精率和后期发育潜能.
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未成熟卵母细胞评分系统对人类未成熟卵体外成熟及发育潜能的评价
目的:建立未成熟卵母细胞评分系统,并评价其对人类未成熟卵体外成熟及发育潜能的预测作用.方法:将未成熟卵母细胞取出体外,根据卵母细胞形态及其周围颗粒细胞形态、分布进行评分,然后分别进行成熟培养和体外受精,再将卵母细胞评分与其成熟率、受精率、优质胚胎率,以及相应卵母细胞的颗粒细胞凋亡情况进行比较.结果:随着卵母细胞评分的降低,卵子的成熟率、受精率、卵裂率及优质胚胎率均下降,而颗粒细胞的凋亡率升高.结论:本研究所设计的未成熟卵母细胞评分系统能够较准确地反映卵母细胞的发育潜能,具有一定的应用价值.
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氧化应激下卵母细胞线粒体DNA损伤及修复研究进展
随着不孕症发病率增加,卵母细胞质量下降作为引起胚胎发育不良甚至不孕的重要原因而日益受到关注,如何预测及提高卵母细胞质量成为研究热点.卵母细胞中线粒体数量和质量可影响卵母细胞发育潜能,尤其线粒体基因组(mtDNA)受到氧化损伤后引起的基因突变、DNA链断裂等,可导致线粒体功能不同程度损伤,进而使卵母细胞质量下降.本文简述了mtDNA对卵母细胞的重要性,主要介绍mtDNA氧化损伤后的碱基切除修复、错配修复等自身修复机制.但mtDNA自身修复相比核DNA具有局限性,出现氧化应激时,损伤修复效率低,故同时分析并讨论了mtDNA外源性修复途径.各种抗氧化剂的应用可在一定程度上弥补自身抗氧化系统的不足,减轻氧化应激损伤,改善卵母细胞质量.线粒体移植和线粒体替代治疗,可对原有线粒体进行更直接的补充和置换,明显改善受精率和胚胎发育,为临床研究提供新方向及理论基础.
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溶血磷脂酸在卵母细胞体外成熟过程中作用的研究进展
卵母细胞体外成熟(IVM)已成为一项热门的辅助生殖技术(ART),有广泛的应用和发展前景.但其体外成熟率和受精后的发育能力还有待提高,培养条件需要进一步优化.溶血磷脂酸(LPA)是磷脂激素家族的重要成员,有生长因子和激素样活性,可产生广泛的生物学效应.研究表明LPA存在于卵泡液中,对卵泡发育、卵母细胞IVM、受精、胚胎发育、种植等产生重要作用.本文就LPA特性及其在卵母细胞体外成熟过程中的作用做一简要的阐述.
关键词： 溶血磷脂酸(LPA) 卵母细胞 体外成熟(IVM) -
线粒体替代疗法的研究进展
线粒体替代疗法的主要应用方向为阻断线粒体基因病的遗传和改善高龄妇女的卵母细胞质量.线粒体基因病是线粒体基因组发生基因突变所导致的一类疾病,目前仍无治愈方法,线粒体替代疗法通过对含有突变型线粒体的卵母细胞进行线粒体置换,可阻断线粒体遗传病向子代传递.此外,线粒体替代或补充能增加老化卵母细胞的能量供应,有望用于改善高育龄妇女辅助生殖的临床结局.本文对线粒体替代疗法的研究进展及存在的问题进行综述.
关键词： 卵母细胞 线粒体 线粒体替代疗法(MRT) 辅助生殖技术(ART) -
卵巢衰老与线粒体相关的研究进展
伴随生育年龄推迟及全面开放“二孩”政策,有生育需求的高龄女性显著增多.而与其他器官相比,卵巢易受年龄的影响.女性年龄相关的卵母细胞数量减少和质量下降共同决定了卵巢衰老.线粒体与卵胞质成熟密切相关,是卵巢衰老的决定要素.进一步了解线粒体与卵巢衰老的关系及探索改善卵母细胞质量的可能措施,将有助于为高龄女性提供更好的治疗策略,提高高龄女性的妊娠率.
关键词： 线粒体 线粒体DNA(mtDNA) 卵母细胞 卵巢衰老 -
颗粒细胞与卵母细胞自噬对卵泡发育和闭锁的调控
卵巢早衰(POF)、多囊卵巢综合征(PCOS)等卵巢生殖疾病发病率日益增高,已经成为严重危害女性身心健康的疾病.目前研究表明卵巢生殖疾病中各时期卵泡的闭锁由颗粒细胞(GCs)和卵母细胞凋亡引起,随着对卵泡发育中分子机制研究的深入,揭示了GCs和卵母细胞的凋亡并不是导致卵泡闭锁的唯一因素,自噬的诱导同时参与了卵泡的生长、闭锁和分化,介导了颗粒细胞和卵母细胞的程序性死亡.本文就当前GCs与卵母细胞自噬的诱导进行系统回顾,总结卵巢卵泡发育和闭锁过程中细胞自噬机制,旨在为后续研究提供参考.
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卵泡液代谢组学新研究进展
代谢组学是继基因组学、转录组学、蛋白质组学之后系统生物学的主要研究平台,并逐渐成为生命科学的研究热点.在辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)领域,卵泡液代谢组学已取得较大进展.目前,国内外大多数回顾性研究表明卵泡液相关代谢物(糖类、脂肪酸、氨基酸、激素等)可预测卵母细胞发育潜能,但有待大样本、多中心随机对照试验进一步证实.卵泡液代谢组学的深入研究有望成为评估卵母细胞质量并改善ART治疗结局的重要方法和手段.
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卵母细胞冷冻保存技术新进展
卵母细胞的冷冻保存已经成为女性生殖力保存的一个重要方式,在人类辅助生殖领域中起着关键的作用.近几年,卵母细胞冷冻保存技术的研究有了很大的突破,在诸多方面都提出了一些新技术与新方法,主要包括冷冻方法、保护剂种类、保护剂添加与去除的方式以及卵母细胞质量的评价等,其中微流体装置不仅用于保护剂的连续添加和去除,还能用于细胞的玻璃化冷冻保存,同时细胞质量评价技术的优劣直接会影响胎儿的发育,甚至成人的健康.因此,微流体技术与科学的质量评价方法可能是未来卵母细胞冷冻保存研究的重要方向.
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人未成熟卵母细胞培养体系研究进展
未成熟卵母细胞体外培养成熟(in vitro maturation,IVM)是指将GV期或MⅠ期的卵母细胞在体外培养发育到第二次减数分裂中期(MⅡ期),能够正常发育、受精和着床.人未成熟卵母细胞体外培养成熟(in vitro maturation,IVM)技术已有几十年历史,作为治疗不孕症的新手段,为赠卵以及女性生育力保存提供了新途径.近年随着细胞分子生物科学的迅猛发展,IVM取得了很大进展,向IVM培养系统添加促性腺激素、甾体激素、抗氧化剂、减数分裂抑制剂、生长因子、抑制素/激活素等有助于卵母细胞体外成熟.但仍面临卵母细胞成熟率不高、成熟后体外受精率低、妊娠率低的问题,完善IVM培养系统及相关辅助治疗是IVM的关键,如何获得稳定、有较高成功率的培养体系是亟需解决的问题.现对近几年一些较新的研究发现进行总结,主要从基础培养液、添加成分、培养条件的选择等方面予以综述.
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泛素羧基末端水解酶在生殖细胞发生及受精过程中的作用
泛素羧基水解酶UCHL1和UCHL3在哺乳类动物神经退变、生殖细胞发生与受精,以及肿瘤发生过程中具有重要作用.本文对UCHL1和UCHL3在精子发生与成熟、卵母细胞发生和受精过程中的作用进行了综述,并通过绘制图谱作了归纳.UCHL1和UCHL3具有不同的底物特异性,参与生精过程中正常的细胞凋亡调控和卵母细胞发育过程中的减数分裂调节,并通过不同的途径影响精卵识别和结合而抑制多精受精.UCHL1可以与Ptov1,CDK1以及Jab1结合,初步用于解释其作用的分子机制.目前报道的UCH家族成员主要包括UCHL1和UCHL3,对其它家族成员的研究尚待开展,特别是各成员之间的进化关系,以及彼此的结构和功能差异等都需要进一步研究阐明.
关键词： 泛素羧基末端水解酶(UCH) 卵母细胞 精子细胞 泛素化 去泛素化 -
人卵丘细胞与卵母细胞发育及成熟的关系
卵丘细胞与卵母细胞共处于同一个卵泡液微环境中,卵丘细胞与卵母细胞之间复杂的“对话机制”调控着卵母细胞的成熟和卵丘细胞的增殖延伸.在窦卵泡阶段,卵丘细胞由颗粒细胞分化而来,通过缝隙连接与卵母细胞共同形成一个结构和功能上的合胞体.卵泡发育不同时期,卵丘细胞对卵母细胞的代谢调控主要表现为:在窦卵泡期,卵丘细胞为卵母细胞发育提供必需的营养,而卵母细胞分泌的信号因子亦调控着卵丘细胞的增殖和延伸;在排卵前卵泡中,卵丘细胞主要通过调控卵母细胞中cAMP水平,促使卵母细胞恢复减数分裂;在排卵后卵泡中,卵丘细胞亦影响着精-卵结合及胚胎发育的过程.另外,伴随卵泡内微环境的变化,卵丘细胞与卵母细胞间发生着复杂的信号传递,从而对卵母细胞的发育实现分子水平的调控,其中部分基因可能作为卵母细胞发育成熟、胚胎发育及妊娠结局的分子标志物.
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核质蛋白在精核染色体重建过程中的作用研究
核质蛋白(nucleoplasmin,NP)是一种酸性的、具有热稳定性的蛋白质,能与组蛋白结合从而介导核小体组装和染色质重建,是一种重要的核分子伴侣.受精后,NP在精核去浓缩过程中发挥重要作用,将特异性精子碱性蛋白去除,并用卵母细胞中的组蛋白H2A、H2B替代,从而调控精核染色体重组.
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有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2)在哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟中的作用
有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient 2,MAD2)为一种纺锤体检验点蛋白,是监控卵子减数分裂纺锤体行为和染色体分离的重要的关卡蛋白之一.人MAD2编码一段比较保守的Mr=24 000蛋白片段,它的单倍体和寡聚体状态、非磷酸和磷酸化状态与它的活性密切相关.MAD2的定位在不同的种属、不同的生殖细胞、不同的细胞分裂状态间都有差异.在卵母细胞中,MAD2细胞定位(胞质定位和动粒定位)随减数分裂细胞周期的进程和/或微管与动粒之间的联系改变而发生相应的变化.在哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟过程中,MAD2的主要作用是控制后期的起始和染色体的分离;另外,它与卵母细胞的凋亡有关,并可能参与卵母细胞减数分裂的恢复.目前已有的2种关于纺锤体检验点的作用机制模式,但都存在缺陷.
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精卵融合机制研究进展
精卵融合是发生在有性生殖过程中重要的事件之一,其分子机制至今还未完全阐明.基因打靶已经被证明是一个能够揭示细胞间相互作用候选分子功能的权威工具,以前通过抗体抑制试验认为介导了精卵融合的关键性分子因为基因功能的深入研究而被一一否定,如整合素、ADAM1、ADAM2、ADAM3.近年来作为参与精卵融合的候选分子,如CD9、Izumo、甘露糖受体等,已经引起广大研究者的关注.
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不同受体胞质对哺乳动物核移植效果的影响
核移植受体胞质提供了重构核去分化、恢复全能性所需的环境,对重构胚的发育潜能有着重要影响,目前用于核移植的爱体胞质有卵母细胞、受精卵、2-细胞期卵裂球以及异种卵母细胞等,其中以去核成熟卵母细胞为常用.本文从哺乳动物核移植受体的类型、细胞周期等方面,对核移植效果的影响进行综述.
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干细胞因子及其受体在卯泡早期发育中的作用
目前认为卵泡早期发育是非促性腺激素依赖性过程.此期干细胞因子是启动原始卵泡发育、过渡为初级卵泡的必需因子,与受体c-Kit结合后激活c-Kit下游3-磷酸肌醇激酶等信号通路,调控卵母细胞生长、颗粒细胞和卵泡膜细胞分化、增殖及激素合成.干细胞因子与骨形态发生蛋白15、生长分化因子9等细胞因子相互影响,受促性腺激素调控,共同参与卵母细胞-颗粒细胞对话.
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卵母细胞分泌的因子与IVM
卵子体外成熟(IVM)是一项可以获得成熟卵子的重要辅助生殖技术.但是过去十几年的进展都很缓慢.一个关键的问题是不了解卵子发育能力的组成及调控机制,包括卵子-卵丘细胞缝隙连接的联系,以及这2种细胞之间的双向旁分泌信号作用.通过在体外恰当地操纵卵子-卵丘细胞之间的相互作用,可提高体外成熟卵子授精后的胚胎发育潜能.
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Src家族激酶在卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用
Src家族激酶是一类非受体酪氨酸激酶.在卵母细胞成熟过程中,Src家族激酶能够促进卵母细胞恢复减数分裂.对海洋无脊椎动物和低等脊椎动物卵子受精过程的研究证明,Src家族激酶与卵子活化过程中的Ca2+释放有关;而在哺乳动物卵子中,对Src家族激酶的作用尚未形成一致结论.本文结合作者自己的工作,对目前Src家族激酶在减数分裂成熟和受精中的作用进行了总结和展望.
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人类未成熟卵母细胞体外成熟研究进展
在卵母细胞成熟过程中第二信使、激活素/抑制素、巨噬细胞炎症因子-3α、溶血磷脂酸有重要作用;未成熟卵体外成熟受是否给予促性腺素/绒毛促性素刺激、患者年龄、取卵时卵泡大小及所处月经周期等多种因素影响;体外培养系统中添加促性腺素、绒毛促性素、患者血清、适宜的糖和氨基酸及适当氧浓度是有益的,是否加共培养细胞尚不明确,培养时间倾向缩短至28h.未成熟卵母细胞体外成熟已成为一项热门的辅助生殖技术,有广阔的应用和发展前景.
