HCG刺激对未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的:探讨获取未成熟卵母细胞之前使用人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,HCG)能否改善未成熟卵母细胞在体外培养条件下成熟的时间、体外受精率、2细胞、4细胞发生率.方法:将HCG刺激后或未刺激所获得的小鼠生殖泡(Germinal reside,GV)期卵丘-卵母细胞复合物在培养液中进行体外培养,观察未成熟卵母细胞减数分裂的恢复、核成熟、受精率以及胚胎的发育.结果:体外培养后16 h G-PR组生殖泡破裂(Germinal vesicle break down,GVBD)发生率显著高于G-UPR组(P＜0.01).体外培养后20 h G-PR组GVBD发生率明显高于G-UPR组(P＜0.05).体外培养后24 h G-PR组PBI发生率显著高于G-UPR组(P＜0.01).G-PR组受精率明显高于G-UPR组(P＜0.05).结论:HCG加快了卵母细胞的体外成熟进程,同时也增加了卵母细胞的体外受精率.

抑制素A及促性腺激素对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨抑制素A(Inhibin A,INH A)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(In vitro maturation,IVM)的影响.方法:从孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)组(使用PMSG组,16例)及无PMSG组(未使用PMSG组,20例)获得的生殖泡期(Germinal vesele,Gv)卵母细胞在不同浓度INH A的培养液中进行体外培养,观察第一极体(The first polar body,PBI)排出和皮质颗粒(Cortical granules,CG)染色情况.结果:PMSG组获卵数为(17.2±2.6)个/只,无PMSG组获卵数为(15.9±1.8)个/只(P>0.05);PMSG组与无PMSG组的PBI率分别为57.7%、50.7%(P＞0.05).PMSG组中INH A 200、350 ng/ml组的PBI率较对照组高(P<0.05);无PMSG组中各INHA组PB1率与对照组比较无显著差异(P＞0.05);结论:INHA和PMSG对体外培养GV期卵母细胞核成熟有促进作用.

表皮生长因子促进小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的实验研究

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响.方法 将生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞分别在EGF浓度为0(对照)、0.5、1、2.5、5、10 ng/ml的培养液中进行体外培养,观察生殖泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的情况.将达到MⅡ期的卵母细胞进行体外受精,观察原核和胚胎发育情况.结果 EGF浓度为1、2.5、5、10 ng/ml组GVBD发生率高于对照组;EGF浓度2.5、5、10 ng/ml组PB1排出率高于对照组,其中EGF浓度5 ng/ml组的GVBD、PB1发生率高(P＜0.01).卵母细胞在1、2.5、5、10 ng/ml EGF培养浓度下的退化率低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).卵母细胞的体外受精率、2-细胞和4-细胞胚胎的发生率在EGF浓度为5 ng/ml时明显高于对照组(P＜0.01).结论 EGF可促进GV期卵母细胞的成熟,对其受精能力和胚胎发展也有促进作用,也可能有抑制卵母细胞凋亡的作用,而EGF以上作用与剂量有关.

猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育潜力

目的优化猪胚胎体外生产培养系统.方法将猪卵母细胞在不同培养液中行体外成熟、体外受精,比较成熟率和卵裂率.结果促性腺激素明显提高猪卵母细胞成熟率,其中以15 IU/ml FSH+30 IU/ml LH成熟率、卵裂率高,分别为62%和15%.M199和NCSU-23基础培养液中的成熟率相近,但二者的卵裂率差异显著(15.7% vs 36%);两种基础培养液中添加150 μmol/L半胱氨酸后,仅M199培养液中出现促卵裂效应(P<0.05);添加1 mmol/L dbcAMP后,卵母细胞的GVBD被阻止,去除dbcAMP后继续培养 22 h,实验组的成熟率和卵裂率分别为76.1%～83.3%和43.9%～52.9%率,显著高于基础液组和半胱氨酸单独添加组.结论促性腺激素是猪卵细胞体外成熟的重要调节因子;dbcAMP通过调节卵体外成熟动力学,促卵母细胞分裂同步化,提高成熟和发育能力.

外源性一氧化氮对小鼠卵母细胞及胚胎发育的影响

在某些病理情况下,腹腔液和子宫内膜组织中的免疫细胞在炎性因子和细胞因子的作用下可产生大量一氧化氮(NO)[1].有研究认为这种局部微环境NO浓度增高与女性不孕症有关[2].本研究以昆明小鼠为实验模型,以硝普钠为NO供体,模拟内源性NO生成,探讨生殖系统局部微环境NO过量产生对小鼠卵母细胞体内成熟、体外受精和早期胚胎发育的影响.

TGF-β超家族在人卵母细胞发生中的调控作用

人卵母细胞作为研究生命科学和生殖医学的核心,其发育过程中的基因调控也成为生殖医学工作者研究的热点和难点.本文从卵母细胞的发生着手,简要叙述了卵母细胞发生过程中TGF-β超家族成员对其的影响,为更好地开发卵母细胞资源奠定理论基础.

未成熟卵体外培养技术的临床应用

体外受精-胚胎移植(in-vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)需要通过控制性超排卵(COH)来获取更多的卵母细胞,但促排卵药物昂贵,且治疗过程较复杂,有可能发生卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)的风险,严重者可能危及患者生命.

试管婴儿取卵术前阴道准备方法与现状分析

目的 探讨取卵术前阴道准备(阴道冲洗)的时机与溶液的选择,以寻找一种佳的方法提高患者满意度和工作效率.方法 回顾性分析到该院生殖中心接受试管婴儿的患者2000例,分为A、B组.A组在注射绒毛膜促性腺激素日(HCG日)上午用0.9％氯化钠溶液1 000mL进行阴道冲洗1次,取卵日术前30 min再次用0.9％氯化钠溶液1 000mL进行阴道冲洗,取卵术前5 min第3次用0.9％氯化钠溶液500 mL进行阴道冲洗后行取卵术；B组取卵日术前30 min用Ⅲ型安尔碘抗茵洗液1 000mL进行阴道冲洗,取卵术前5min再用0.9％氯化钠溶液500 mL进行阴道冲洗后行取卵术.结果 两组患者均无一例发生取卵术后感染现象,A、B组临床妊娠率分别为43％、47％,B组临床妊娠率较A组提高4％.结论 两种方法均能达到阴道冲洗的目的,B组临床妊娠率较A组提高4％,同时B组方法更省时,节省护士人力,提高工作效率和患者满意度,值得临床推广应用.

哺乳动物卵母细胞退化机制

卵子的发育、成熟是一个非常复杂的动态过程,它主要由两方面的因素调控:①通过下丘脑—垂体—卵巢所释放的激素,即中枢神经内分泌进行调节.激素是促进卵母细胞成熟的重要物质,如促性腺激素、性激素及类固醇激素等；②通过卵巢内微环境中的细胞因子,即卵巢内微环境局部的卵泡膜细胞、颗粒细胞以及卵母细胞等产生的自分泌和旁分泌调节因子,直接调控卵子的发育和成熟.减数分裂紊乱以及细胞分裂基因的表达异常是人类以及其他高龄哺乳动物卵母细胞退化的主要机制之一.

卵母细胞孤雌激活及纺锤体形态改变?

目的：：探讨不同激活方法小鼠卵母细胞孤雌激活的效率及纺锤体的变化。方法：小鼠卵母细胞采用乙醇、氯化锶化学激活，研究孤雌激活效果；采用免疫荧光染色法观察孤雌激活下卵母细胞纺锤体的动态变化。结果：(1)8%乙醇处理10、15 min的桑囊率高于处理5 min；(2)10 mmol·L-1氯化锶激活率高于2.5、5 mmol·L-1；(3)激活过程中纺锤体形态发生了改变。结论：8%乙醇处理时间相对延长有利于提高桑囊率；高浓度氯化锶激活效果较好；孤雌激活后纺锤体形态会发生改变。

羟基磷灰石纳米颗粒对猪MⅡ期卵母细胞玻璃化保存的影响及其机理初探

纳米低温保存技术很可能是新一代低温保存技术的发展方向,但未见将纳米颗粒应用于卵母细胞玻璃化保存的报道.本文将不同粒径的羟基磷灰石纳米颗粒添加到冷冻保护剂中,使用Cryotop法对第二次减数分裂中期(MⅡ期)的猪卵母细胞进行玻璃化保存,结果表明纳米颗粒的添加提高了猪MⅡ期的卵母细胞的低温保存存活率,但纳米颗粒的粒径影响不显著.采用超快速测温装置测量低湿保护剂的降温速率,并采用差示扫描量热仪(DSC)测量冷冻保护剂的熔融焓,发现纳米颗粒的添加并不能加速溶液的降温速率,而是降低了冷冻过程及复温过程中反玻璃化产生的冰晶量,由于冰晶量减少,从而可能降低了细胞内外冰晶对细胞的机械损伤.

尾吊模型模拟微重力抑制小鼠卵母细胞的成熟

本文研究模拟微重力对小鼠卵母细胞成熟的影响,探讨尾吊模型模拟微重力研究雌性小鼠生殖功能的可行性.采用转壁式生物反应器模拟微重力体外培养小鼠卵母细胞,以及对小鼠进行旋转和尾吊处理,观察小鼠卵母细胞的成熟情况.结果表明:体外旋转培养和尾吊模型产生的模拟微重力条件下,小鼠卵母细胞的成熟受到抑制,异常率增加.表现为体外旋转培养小鼠卵母细胞的成熟率为8.93％,显著低于1 g重力条件下的72.33％；尾吊模型小鼠卵母细胞的成熟率为14.54％,显著低于对照组的73.29％.与对照组比较,小鼠旋转模型对小鼠卵母细胞的成熟无明显影响,提示该旋转模型不适用于模拟微重力的研究.尾吊模型可适用于地面研究模拟微重力对母鼠繁殖机能的影响.

微流控法去除低温保护剂对卵母细胞发育的影响

为了减小低温保护剂去除过程对卵母细胞造成的渗透损伤和毒性损伤,本文利用微流控芯片对猪二次减数分裂中期(M Ⅱ-stage)卵母细胞低温保护剂的去除方案进行了优化研究.首先分析了微流控去除方法中去除时间、去除液成分及浓度对卵母细胞存活率及体外发育情况的影响,然后将微流控去除方法与传统的一步法、两步法进行了比较.研究结果表明,微流控法中去除总时间为8 min时,卵母细胞存活率(95.99％±4.64％)及桑椹胚率(74.17％±1.18％)与新鲜细胞(98.53％±2.94％;78.22％±1.34％)相比,差异无统计学意义;1 mol/L蔗糖去除液有利于卵母细胞低温保护剂去除后的存活及体外发育;微流控法去除低温保护剂后,卵母细胞的存活率、体外发育情况等,均好于传统去除方法.本文研究结果提示,以微流控法去除低温保护剂可减小对卵母细胞的损伤,从而可能进一步提高卵母细胞的低温保存效果.

全染色体涂抹探针在女性罗伯逊易位携带者植入前遗传学诊断中的临床应用

目的 应用全染色体涂抹探针(whole chromosome painting probe,WCP)对女性罗伯逊易位携带者进行卵母细胞第一极体的植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis, PGD).方法 应用全染色体涂抹探针进行第一极体荧光原位杂交,对4例女方罗伯逊易位携带者进行了4个周期的PGD.患者染色体核型均为45,XX, der(13;14),(q10;q10).所有周期取卵后6 h内通过活检取出第一极体,采用WCP探针进行荧光原位杂交,受精后第3天选择染色体组成正常或平衡的胚胎进行宫腔内移植.结果 4个周期共获卵61个,其中54个成熟可进行活检,活检成功率92.6%(50/54),固定成功率90.0%(45/50).40个获得明确诊断,总体诊断率为74.1%(40/54).卵胞浆内单精子注射后受精率64.8%(35/54),优质胚胎率为65.7%(23/35).获得2例临床妊娠.其中1例于孕9周胚胎停止发育,绒毛染色体分析核型为45, X;另1例产前诊断证实核型为46,XX.2006年6月足月分娩一正常活女婴.结论 全染色体涂抹探针可准确区分正常、平衡以及异常卵子,从而可有效应用于女性染色体易位携带者的PGD.

女性年龄对卵母细胞纺锤体和染色体构型的影响

目的 探讨女性年龄对卵母细胞纺锤体和染色体构型的影响.方法 取试管婴儿术后卵龄1天的未受精卵母细胞,采用免疫细胞化学和激光共聚焦术检测卵母细胞纺锤体和染色体构型.结果 25～29岁女性卵母细胞Ⅰ级纺锤体和染色体比率分别为33%和31%,显著高于30～34岁(P＜0.05)和35～40岁女性(P＜0.01);而25～29岁女性卵母细胞的Ⅲ级纺锤体和染色体率均为54%,明显低于30～34岁(P＜0.01)和35～40岁女性(P＜0.05).结论 卵母细胞纺锤体和染色体构型异常率与女性年龄存在明显的相关性.

排卵后老化对卵母细胞姐妹染色单体平衡性早分离的影响

目的探讨排卵后老化对卵母细胞姐妹染色单体平衡性早分离(balanced predivision,BP)的影响.方法分别采用荧光原位杂交和免疫细胞化学方法检测排卵后不同培养时间下小鼠成熟卵母细胞16号染色体的核型及纺锤体和染色体构象的变化.结果新鲜小鼠卵母细胞中BP的发生率为7%, 培养24 h、48 h和72 h后,卵母细胞BP发生率分别为32%、53%和61%,明显高于新鲜卵母细胞(P<0.01);新鲜小鼠卵母细胞的纺锤体和染色体异常比率为9%,明显低于培养24 h、48 h和72 h后卵母细胞的纺锤体和染色体异常率(P<0.01).结论 BP可发生于卵母细胞排卵后老化过程中,其发生可能与纺锤体和染色体构象改变有关.

卵巢早衰的中西医治疗进展

卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)是指妇女40岁以前因某种原因引起以闭经、不孕、雌激素缺乏及促性腺激素升高为特征的一种疾病[1].患者的卵泡内无卵母细胞或虽有原始细胞,但对促性腺激素无反应,表现为雌激素水平低下、促性腺激素水平升高.临床上患者表现为闭经、不孕,兼有面色潮红、烘热汗出、情绪波动、白带减少、性欲低下、阴部干燥、生殖器及第二性征逐渐退化的类更年期症状,影响患者的生活质量.中医认为该病属于血枯、血隔、闭经之范畴,认为肾虚乃主要病理基础,治疗上多以肾为本.近年来中西医对该病的治疗进行了大量的研究,取得了一定成绩,现作一综述.

非洲蟾蜍卵母细胞Rh和Rh相关蛋白的功能表达

常规IVF完全失败后行补救ICSI 10例

在常规体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)中,受精完全失败是临床上面临的大困扰之一,也给患者带来很大的精神压力.虽然常规ⅣF完全失败在目前技术条件下难以避免,但对受精失败后的卵母细胞进行补救性卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗完全可能获得临床妊娠和分娩,从而给患者增加了受孕机会,与此同时妊娠结局存在的风险性也应引起重视.我中心自2003年3月起对10例ⅣF完全失败的患者进行补救性ICSI治疗,以探讨补救性ICSI治疗的临床价值.

多种因素对卵母细胞浆内单精子显微注射结果影响的探讨

目的:研究进行卵母细胞浆内单精子显微注射(ICSI)过程中诸多因素的影响.方法:对263个周期行ICSI的患者的各种因素,包括不孕原因、促排方案、精液来源及质量等进行受精率、卵裂率、优质胚胎率及妊娠率的比较.结果:男方因素合并女方PCOS、附睾穿刺获得精子、HMG方案、取卵数目介于20～30及月经第3天血E2浓度对优质胚胎的获得有影响,但是对妊娠率没有明显的影响.结论:所观察、研究的各种因素对妊娠率影响不明显.