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芒柄花素对兔离体肠平滑肌舒张作用的影响
目的：观察芒柄花素对兔离体肠平滑肌肌张力的影响并探讨其作用机制。方法采用经典的离体小肠灌流技术，观察芒柄花素对肠平滑肌收缩活动以及乙酰胆碱（ Ach）、氯化钡（ BaCl2）及组胺（ HA）所致痉挛性收缩肠平滑肌的影响。应用 L型钙通道开放剂Bay K8644、肌浆网ryanodine受体阻断剂钌红（ RR）和一氧化氮（ NO）合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（ L-NAME），研究芒柄花素舒张肠平滑肌的作用机制。结果芒柄花素（10、20、40、60、80、100μmol/L）能剂量依赖性的抑制家兔离体小肠平滑肌自发性收缩，对 Ach，HA 和 BaCl2所致的兔离体肠痉挛性收缩也具有剂量依赖性抑制作用，且与无刺激肠平滑肌比较有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。芒柄花素可明显抑制Bay K8644（0.5μmol/L），阻断RR引起肠平滑肌舒张作用，但L-NAME不能够抑制芒柄花素舒张肠平滑肌作用。结论芒柄花素显著抑制家兔小肠平滑肌的收缩活动，其抑制可能与抑制细胞外钙内流和内钙释放，从而使细胞内钙浓度降低有关，但与小肠平滑肌一氧化氮（ NO）浓度无关。
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解偶联蛋白嵌合体及突变体的构建方法
目的:构建解偶联蛋白(UCPs)嵌合体和突变体,为阐明解偶联蛋白家族功能结构域的研究提供条件.方法:采用普通PCR和重叠延伸PCR获得UCPs嵌合体基因片段,分别插入pCR2.1测序载体后进行测序,再以限制性内切酶连接方式将嵌合基因定向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,获得pcDNAUCP1UCP2、pcDNAUCP2UCP1和pcDNAUCP3UCP1,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pcDNA.利用定向点突变产生pcDNA-UCP3R167G/pcDNA-UCP3RE171/172GG,并进行测序证实.结果:PCR和酶切,获得的目的基因与嵌合基因片段中包含的碱基数量吻合；测序结果,UCPs嵌合体基因序列、突变体基因序列与预期设计完全相同.结论:成功地构建了含有UCPs嵌合体和突变体基因重组真核表达质粒.
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益心定悸方对快速性心律失常家兔模型心肌L型钙离子通道的影响
目的：观察益心定悸方对快速性心律失常家兔模型心肌L型钙离子通道的影响，探讨其可能的作用机理。方法：采用高脂血症快速性心律失常家兔模型，给予高脂饮食喂养后，注射肾上腺素，造模成功后测定空白对照组、模型对照组、益心定悸方防治组、益心定悸方治疗组和胺碘酮对照组心肌L型钙离子通道的表达。结果：益心定悸方防治组、胺碘酮对照组与模型组比较，心肌细胞钙离子通道(Ica-L)表达减低，差异有统计学意义(P＜0.01)，组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：益心定悸方能够阻断Ca2+通道，抑制Ca2+离子过度内流，这可能是益心定悸方改善心律失常的作用机制之一。
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黄芪甲苷对心肌钙离子通道中活性氧引起的直接氧化作用的影响
目的 探讨黄芪甲苷(AS-IV)影响活性氧引起的钙通道直接氧化作用.方法 利用膜片钳膜内面向外式记录方式,研究AS-IV(10μmol/L)对过氧化氢(H2O2)直接氧化钙离子通道活性的影响.结果 1mmol/LH2O2能引起钙离子通道钙电流的增加(P<0.05),10μmol/LAS-IV并未明显影响H2O2引起离子通道钙电流的增加.结论 AS-IV并未对ROS引起的钙通道直接氧化作用产生影响,AS-IV参与钙通道钙离子内释放,从而起到维持正常心脏功能的作用.
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环维黄杨星D对离体豚鼠胆道括约肌收缩力的影响
目的:研究环维黄杨星D(CyclovirobuxineD,CVB-D)对离体豚鼠胆道括约肌的收缩作用.方法:1)利用离体豚鼠胆道括约肌,加入不同浓度(1×10-7M～3×10-6M)CVB-D,观察由KCl或Ach引起的括约肌快速收缩相和持续相的变化.2)加入维拉帕米(Ver)作用后,再加入CVB-D,观察二者合用对KCl或Ach引起的括约肌收缩变化.结果:对KCl引起的标本收缩,CVB-D使快速相峰值显著下降,且有量效关系,而持续相呈轻度升高,坪/峰比值也呈剂量-效应的增加.但对Ach引起的收缩,CVB-D使快速相、持续相、坪/峰值均显著下降,且有一定量效关系.Verapamil合用CVB-D对KCl引起的快速收缩相峰值下降,但坪值则与单用Ver相当.对Ach引起的快速相收缩,二者也有相似的协同作用,但此时坪值几乎消失.结论:CVB-D对括约肌的收缩作用与引起收缩的刺激剂有关,也与收缩时相有关,反映了CVB-D对不同钙离子通道的影响.
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SD大鼠前列腺上皮新型钙通道TRPV5的实验研究
目的 探讨新型钙通道TRPV5在前列腺疾病发病机制中的作用.方法 年轻和老年的雄性大鼠各30只,先取出前列腺,使用光学显微镜观察其HE切片的组织病理学特点,应用SP法对其进行免疫组化染色,分别柃测TRPV5钙通道在SD大鼠前列腺上皮细胞中的表达.结果 30例老年DS大鼠前列腺标本中TRPV5钙通道强表达的有6例,中表达的11例,低表达的13例:30例年轻SD大鼠前列腺标本中TRPV5钙通道强表达的有19例,中表达的8例,低表达的3例.两组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TRPV5钙通道在SD大鼠前列腺上皮细胞中表达差异有统计学意义,新犁钙通道TRPV5的改变可能在前列腺疾病的发病中起一定作用.
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Catsper通道蛋白与精子功能
正常生理情况下,精子需要经过超活化获能后才具备使卵子受精的能力,而钙离子内流是精子超活化、获能及顶体反应的关键过程.目前已经发现了许多精子的钙离子通道包括环腺苷通道、电压门控通道、短暂受体潜在通道以及精子特异性表达的钙离子通道-Catsper通道,Catsper通道蛋白家族主要包括:catsper1,catsper2,catsper3和catsper4,他们在精子动力和男性生殖中发挥重要作用,其中任何一个基因受到破坏都会影响精子的运动性能,引起精子超活化失败而导致男性不育.
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钙离子通道与前列腺疾病
钙离子通道(calcium ion channels)是一类镶嵌在细胞膜脂质中的大分子蛋白复合体,广泛分布于各种组织细胞中,参与人体内多种生物活动代谢过程,在维持人体正常结构与功能中起了重要作用.通过膜片钳技术、分子生物学技术、荧光探针钙图像分析技术对各种类型钙离子通道的研究已取得了重大进展,阐明了钙离子通道的分子结构或功能的改变与某些疾病的发生发展密切相关.
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HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨
目的探讨HAb18G/CD147诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶(MMP)分泌和活化的机制.方法应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD147分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC-7721肝癌细胞分泌MMP(MMP-2和MMP-9)及其活化的影响,以及细胞内Ca2+信号调控在此过程的作用.结果HAb18G/CD147分子的高表达明显诱导MMP-2和MMP-9的分泌和活化,分泌总量升高(30.45±3.41)%(P＜0.01),而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化.细胞内Ca2+库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染7721细胞可有效诱导MMP-2和MMP-9的分泌与活化,较对照组升高(58.63±31.04)%(P＜0.05),其诱导作用可受到细胞内Ca2+调节抑制剂S-亚硝基-乙酰青霉胺(S-nitroso-N-acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制,而HAb18G/CD147的高表达则抑制了以上细胞内Ca2+信号通路对MMP分泌和活化的调节作用,使转染的T7721细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态.结论全长的HAb18G/CD147分子可通过抑制细胞内Ca2+信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP.
关键词： 癌 肝细胞 肿瘤细胞 培养的 SMMC-7721细胞 基质金属蛋白酶类 HAb18G/CD147 钙离子通道 -
突触前神经末梢的钙离子通道
突触前神经末梢的主要作用是以量子方式释放神经递质,并以此激活突触后的靶细胞.突触前神经末梢有大量的离子通道,在递质释放的每个步骤都有大量离子通道参与.这些离子通道主要包括:钙离子(Ca2+)通道、钾离子通道、Ca2+-门控的钾离子通道、钠离子通道、氯离子通道、突触前配体-门控的离子通道及其他一些离子通道,其中Ca2+通道在递质释放的过程中尤为重要.Ca2+通道存在多种类型,不同类型的分子构成不同,性质也不同,它们分布在不同的生物组织中.不同Ca2+通道之间还存在着协同关系以促进递质释放.此外,大量存在的Ca2+通道是在生理和药理方面对递质释放进行更有效调节的基础.
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小鼠粗线期精母细胞钙离子通道膜片箝方法的建立
应用机械分离获得小鼠单个精母细胞,采用全细胞膜片箝技术记录Ca2+离子通道电流.结果表明:①阻断K+电流后,当钳制电位-90 mV、指令电压-60～+10 mV、步阶电压10 mV时,可记录到内向电流;②内向电流在-30～-40 mV达到大值;③在细胞外液中加入4 μmol/L TTX,对记录电流无影响,表明此电流不含有Na+电流成分,为Ca2+电流.
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钙离子通道在原发性醛固酮增多症发病中的核心作用
原发性醛固酮增多症(primary hyperaldosteronism,PA)是继发性高血压常见的原因.目前研究发现KCNJ5、ATPIA1、ATP2B3、CACNAlD等基因的突变使得它们编码的肾上腺球状带细胞膜上的离子通道蛋白发生改变,终都激活了电压门控的Ca2+通道并增加Ca2+内流,使细胞内Ca2+浓度升高,从而导致醛固酮产生增多.这些发现提示Ca2+通道在PA发病过程中起着核心作用,不仅有助于进一步了解PA的发病机制,而且有助于为PA的治疗提供潜在的药物靶点.
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环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用
目的研究环维黄杨星-D(CVB-D)对心肌钙离子通道的作用,探讨其抗心律失常的电生理机制.方法取豚鼠室间隔标本,37℃恒温,通混合氧,稳定45 min,再以KCl 3 mol/L灌充的微电极记录电刺激产生的动作电位(AP),标本分为3组:(1) CVB-D组:每5 min依次累积加入浓度为3×10-8,1×10-7,3×10-7,1×10-6,3×10-6,1×10-5 mol/L的CVB-D,分别记录AP;(2) CVB-D+维拉帕米(Ver)组:加入维拉帕米0.1 μmol/L,10 min时记录AP,然后每5 min依次累积加入浓度为3×10-8,1×10-7,3×10-7,1×10-6,3×10-6,1×10-5 mol/L的CVB-D,分别记录AP;(3) Ver组:加入维拉帕米0.1 μmol/L,分别纪录(2)中相应时间点的AP.统计给药前后AP幅度(APA)和时程(APD)的变化.结果 CVB-D对APA影响不大,但能显著延长APD,延长幅度随着剂量的加大而增大;但在有维拉帕米存在的情况下,CVB-D却能使APA和APD缩减,尤其是较高浓度1×10-6,3×10-6,1×10-5 mol/L时,缩减幅度较为明显;而单纯加入维拉帕米后,APA和APD的改变轻微.结论 CVB-D能影响细胞膜上的钙离子通道,促进细胞外钙离子内流,从而延长APD.当膜钙离子通道被阻断后,CVB-D却缩短APD.因此可以认为CVB-D除影响膜钙离子通道外,还可能影响其他的离子通道,如钾通道等.根据本实验结果,临床上CVB-D和维拉帕米联合用药时,有引起心律失常的可能,应予以考虑.
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依托咪酯对大脑皮质突触体钙离子通道亚型的作用
目的研究依托咪酯对大鼠大脑皮质突触体上不同钙通道的作用,探讨其抑制突触体内钙离子浓度升高可能涉及的钙离子通道亚型.方法利用SD大鼠新鲜分离的大脑皮质突触体为研究对象,以KCl作为化学刺激剂去极化,采用荧光分光光度法测定依托咪酯100 mmol/L单用或与钙通道阻断剂合用的情况下对KCl诱发的突触体内钙离子浓度升高的影响.结果 P/Q型钙通道约占突触体钙内流的50%,N型钙通道约占20%,而L型钙通道不影响KCl诱发的突触体内钙离子浓度的升高.P/Q型钙通道阻断剂ω-agatoxin IVA在单用或及与加入依托咪酯100 μmol/L合用后对钙内流抑制作用没有差异,而L或N型钙通道阻断剂在加入依托咪酯后抑制钙内流作用增加.结论 P、N型钙通道在神经末梢去极化后钙离子内流中起主要作用.依托咪酯抑制高浓度KCl刺激引起的突触体内钙离子浓度升高可能与阻断P型(可能还包括Q型)钙离子通道有关.
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模拟失重大鼠肠系膜小动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流的改变
本工作旨在探讨短、中期模拟失重下大鼠肠系膜小动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)电压依赖性钙离子通道(voltage-dependent calcium channels,VDC)功能的改变.以尾部悬吊大鼠模型模拟失重对不同部位血管的影响.采用全细胞膜片钳实验技术,以Ba2+作为载流子,测定1周及4周模拟失重大鼠肠系膜小动脉VSMCs的VDC电流密度、稳态激活与失活曲线及有关参数,并与对照组结果进行比较.研究表明,本实验所记录到的内向电流主要为钡离子通过长时程VDC(L-VDC)所形成的电流.与对照组相比,1周模拟失重大鼠肠系膜小动脉VSMCs的L-VDC电流密度仅呈降低趋势;但4周模拟失重大鼠肠系膜小动脉VSMCs的L-VDC电流密度则已显著降低.此外,与对照组相比,1、4周模拟失重大鼠肠系膜小动脉VSMCs的膜电容、翻转电位与L-VDC的一些动力学特征值,如通道的开放与关闭速率,通道电流稳态激活与失活曲线及其特征拟合参数V0.5与k的值,均未见有显著改变.结果提示:模拟失重下后身小动脉VSMCs的VDC功能降低可能是模拟失重引起大鼠后身动脉收缩反应性降低及适应性萎缩变化的电生理机制之一.
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基于时间序列模型评估淀粉样蛋白引起的 脑血管内皮功能损伤
建立时间序列模型评估 β-淀粉样蛋白(Aβ)引起的脑血管内皮功能损伤,探讨相关标记物对脑血管内皮功能损伤的影响和贡献程度.将永生化人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)与2.5μmol/L Aβ 共同孵育,在2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24 h分别测定胞浆Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性和细胞活力,借助时间序列模型探讨相关标记物对细胞损伤的影响和贡献程度.脉冲响应分析表明,给胞浆Ca2+一个正冲击后,细胞活力被抑制并持续走低;给eNOS和MMP一个正冲击后,细胞活力上升,并在早期上升速度较快,晚期上升速率有所下降.方差解析表明胞浆Ca2+水平在脑血管内皮细胞损伤中占主要作用,且这种影响随着疾病进程的发展而下降.结合模型研究推断在损伤早期干预Ca2+通道有可能改善Aβ 引起的脑血管内皮功能损伤.
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铁过载与钙离子通道关系的研究进展
铁过载是体内总铁量超过正常水平的病理状态.铁过载往往会造成一些组织器官功能异常,甚至产生疾病(如神经退变性疾病、铁过载性心肌病、铁介导骨质疏松症、铁沉积肝硬化等).新近研究提示,铁过载时钙离子通道可能是铁进入细胞和线粒体的又一重要途径,钙离子通道拮抗剂能改善机体铁过载状态.本文对“铁过载与钙离子通道”相关文献进行综述,旨在为细胞、线粒体铁转运的离子通道研究提供一些参考.
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大鼠尾加压素Ⅱ收缩大鼠肺主动脉与钙离子通道相关
目的:研究大鼠尾加压素Ⅱ(U-Ⅱ)收缩大鼠离体肺主动脉环与钙离子通道的关系.方法:从雄性Sprague-Dauley大鼠中分离出肺主动脉,切成3～4 mm的血管环.用大鼠U-Ⅱ(30 nmol/L)预收缩血管达平台期后,加入钙离子通道阻断剂尼群地平,制备尼群地平(0.1～30 mol/L)浓度-效应舒张曲线,分别计算EC50和Emax.结果:尼群地平可浓度依赖性舒张大鼠U-Ⅱ预收缩的肺主动脉环[-log(EC50)=5.86±0.30,Emax=(73.73±15.40)%,以30 nmol/L U-Ⅱ的收缩幅度为100%].结论:钙离子通道的激活参与大鼠U-Ⅱ收缩大鼠肺主动脉效应.
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血灵对大鼠血管平滑肌收缩的影响
目的:证明血灵对血管平滑肌钙通道阻滞作用.方法:用累积浓度法依次加入去甲肾上腺素(NE),得NE引起的血管平滑肌收缩的量效曲线,收缩张力恢复正常后加入血灵,测定给药后量效曲线,观察血灵对NE引起的血管平滑肌收缩的影响;同法观察血灵对KCl、CaCl2引起的血管平滑肌收缩的影响,及对NE引起的依赖于细胞内钙与细胞外钙收缩反应的影响.结果:血灵能够使NE和CaCl2收缩血管平滑肌的量效曲线下移,作用性质与维拉帕米(Ver)相似,呈非竞争性拮抗反应;血灵对NE引起的依赖于细胞内钙收缩有明显的抑制作用,而对外钙收缩则无明显的抑制.结论:血灵的作用类似于钙通道阻滞剂维拉帕米,提示血灵降血压与钙通道阻滞作用有关.
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Trp-p8测定在前列腺癌诊断中的应用
瞬时受体电位p8(Trp-p8)是钙离子通道家族中的一员,其多肽链与瞬时受体电位家族的钙通道具有同源性而得名.Trp-p8 属于TRP蛋白的TRPM亚族,故又被称为TRPM8.近年来,研究发现Trp-p8 可能是前列腺癌的一个肿瘤标记物,但关于Trp-p8 与前列腺癌相关性的深入研究报道尚不多,尤其是Trp-p8 在PSA 灰区(4耀10ng/ml)患者血液中表达情况的研究更为少见.本文通过检测PSA 灰区前列腺疾病患者血液中Trp-p8mRNA的表达情况,旨在探讨Trp-p8 测定在诊断前列腺癌中的应用价值,报道如下.
