首页 > 文献资料
-
不同脱乙酰度和分子量壳聚糖的生物相容性之比较
目的:壳聚糖是天然多糖几丁质部分脱乙酰基后的产物,是一种良好的生物材料.本文研究了四种来源相同,不同脱乙酰度和分子量壳聚糖的生物相容性.方法:应用四唑盐比色法(MTT)研究了宫颈癌细胞(Hela细胞)在四种壳聚糖膜上的细胞活性和生长状况,并通过酶联免疫技术(ELISA)和圆二色法(CD)测定了人血清白蛋白(HAS)在这四种壳聚糖膜上的吸附量以及吸附后HAS二级结构的变化.结果:MTT结果表明:生长在脱乙酰度为74.7%壳聚糖膜上的Hela细胞的活性高.ELISA结果表明:脱乙酰度为74.7%壳聚糖膜对HAS的吸附量较小,其它三种壳聚糖对HAS的吸附量较高.圆二色法结果表明:吸附在脱乙酰度为74.7%壳聚糖膜上的HAS的二级结构与其他三种壳聚糖吸附HAS的结果差异较大.讨论:从这四种壳聚糖的脱乙酰度,壳聚糖膜表面的氨基含量以及亲水性等方面讨论了HAS在四种壳聚糖上的吸附量,吸附后二级结构的差异以及Hela细胞在这四种壳聚糖上生长的差异.
-
不同浓度人血清白蛋白对人牙龈上皮细胞粘附作用的影响
目的探讨不同浓度的人血清白蛋白(hunlan serum alburnm,HSA)对人牙龈上皮细胞(humangmgwalepithdian cells,HGE)粘附作用的影响.方法使用角化细胞无血清培养基、分离酶原代培养HGE,并用广谱细胞角蛋白单抗作细胞鉴定;l、10、50、100mg/ml的HAS预孵育于细胞培养板表面,细胞接种4h时MTT法观测HGE在聚苯乙烯表面的粘附.结果HGE可成功的原代及传代培养,HGE免疫组化染色阳性,各处理组A490值显著少于对照组(P＜0.001).结论1～100mg/mLHSA预孵育于聚苯乙烯表面,对HGE的粘附在早期产生抑制作用.
-
光谱法研究Tl(Ⅲ)离子与人血清白蛋白的相互作用
在模拟生理条件下,利用分子荧光光谱、紫外-可见吸收光谱以及瑞利散射光谱研究了Tl(Ⅲ)离子与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.实验结果指出,Tl(Ⅲ)离子对蛋白质的猝灭是由于生成了新的基态复合物,属于静态猝灭过程.此外,还计算了二者结合反应的结合常数、结合位点数和热力学参数.后,利用同步荧光光谱探究了Tl(Ⅲ)离子对蛋白质构象的影响.
-
构建HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物及对乳腺癌细胞增殖的影响
背景：凋亡素(Apoptin)能诱导50种以上不同类型的肿瘤细胞凋亡，有望成为一种极具应用前景的抗肿瘤制剂。如何安全、有效地将其应用于临床，是一个亟待解决的具现实意义的问题。
目的：拟制备人血清白蛋白(HSA)与Apoptin基因的复合物，通过体内外实验验证其抗瘤效果，为Apoptin尽早应用于基因治疗寻找一个简单有效的转移方式。
方法：①构建含Apoptin基因的真核表达载体pcDNA-Apoptin。以水溶性碳二亚胺(EDC)为交联剂，将聚醚酰亚胺(PEI)与人血清白蛋白(HSA)连接，合成HSA-PEI复合物，然后经电荷中和效应将HSA-PEI复合物与pcDNA-Apoptin重组体及pcDNA空载体分别连接，形成相应HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物；②将HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物转染乳腺癌MCF-7细胞，Western blot检测Apoptin基因在细胞中的表达，MTT法和流式细胞术检测转染后细胞增殖情况；③建立裸鼠乳腺癌模型，使用尾静脉注射法，分别将0.5 mL HSA-PEI-pcDNA-Apoptin、HSA-PEI-pcDNA及生理盐水注射入裸鼠体内，4周后测量肿瘤体积。
结果与结论：①成功构建并鉴定了HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物，体外成功转染乳腺癌MCF-7细胞；②HSA-PEI-pcDNA-Apoptin转染MCF-7细胞24 h有Apoptin蛋白的表达，而转染HSA-PEI-pcDNA细胞及空白对照组细胞未见Apoptin蛋白的表达；③体外细胞增殖实验提示HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组吸光度值明显低于 HSA-PEI-pcDNA 组及空白对照组(P <0.05)；④裸鼠乳腺癌模型HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组肿瘤体积小于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P<0.05)；⑤结果表明， HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物有明显的抑制肿瘤作用。 -
HSA-TP5融合基因表达载体的构建及其真核表达
目的:构建人血清白蛋白(HSA)-胸腺五肽(TP5)融合蛋白表达载体,并在毕赤酵母中表达,阐明其生物学活性.方法:利用基因重组技术构建HSA-TP5融合基因,并转染至毕赤酵母中从而构建其真核表达体系,通过琼脂糖凝胶电泳分离及试剂盒纯化获得PPICZαC-HSA-TP5真核重组表达质粒;采用两步发酵法对HSA-TP5基因工程菌进行高密度发酵,对发酵液上清蛋白沉淀浓缩,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、阳离子交换层析及疏水层析等方法分离纯化蛋白;采用MTT法检测该融合蛋白促淋巴细胞增殖活性.结果:PCR法获得HSA目的基因片段长度为1 845 bp.酶切鉴定融合质粒HSA-TP5-pPICZαC得到片段长度为707 bp.测序分析,目的基因HSA和TP5序列与GenBank公布的基因序列完全一致,并正向连接融合.PCR法鉴定PPICZαC-HSA-TP5真核重组质粒与酵母基因组DNA整合,与对照组比较,转化组出现基因片段长度为1 860 bp.SDS-PAGE分析,在甲醇诱导后72 h内,随着诱导时间延长,HSA-TP5融合蛋白表达量逐步升高.利用阳离子交换层析及AKTA多功能蛋白纯化系统纯化得到HSA-TP5融合蛋白.MTT法检测,HSA-TP5融合蛋白与TP5蛋白具有一致的促淋巴细胞增殖活性.结论:通过构建HSA-TP5毕赤酵母真核表达体系可获得HSA-TP5融合蛋白并具有生物学活性.
-
重组人ADAM15去整合素区域蛋白与人血清白蛋白融合蛋白的表达及其活性
目的 在毕赤酵母中表达重组人ADAM15去整合素区域蛋白(recombinant human disintegrin of ADAM15,rhddADAM 15)与人血清白蛋白融合蛋白(HSA-rhddADAM 15-His),并测定其活性.方法 以rhddADAM15基因为模板,PCR扩增rhddADAM 15-His基因,克隆入pBluescript-HSA质粒中,经酶切后与pPIC9k载体连接,构建重组表达质粒pPIC9k-HSA-rhddADAM 15-His,将重组表达质粒转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达.表达产物经Blue-Sepharose、Ni2+螯合层析及DEAE阴离子交换层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,利用划痕及SRB法检测其活性.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;融合蛋白HSA-rhddADAM15-His相对分子质量约76 000,以可溶性分子形式存在于发酵液上清中;纯化的融合蛋白纯度约为75％,可与兔抗rhddADAM15多克隆抗体特异性结合;融合蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的迁移具有明显的抑制作用,但对其增殖无明显抑制作用.结论 成功在毕赤酵母GS115中表达并纯化了HSA-rhddADAM 15-His蛋白,为其作用机理的研究奠定了基础.
关键词： ADAM15去整合素区域蛋白 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 表达 -
共表达蛋白二硫键异构酶对IFNβ-HSA融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响
目的 探讨共表达蛋白二硫键异构酶(PDI)对干扰素β与人血清白蛋白(IFNβ-HAS)融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响.方法 根据GenBank公布的毕赤酵母PDI序列设计引物,利用PCR方法从毕赤酵母基因组中扩增目的基因片段,插入表达载体pPICZαA,并整合入融合蛋白(IFNβ-HAS)基因工程菌中,筛选共表达PDI的重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA法检测IFNβ-HAS的表达量.结果 经PCR鉴定,重组表达质粒pPICZαA-PDI已转入毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HAS中.经SDS-PAGE分析,PDI在菌体内大量表达,原始菌株和共表达菌株均明显表达融合蛋白IFNβ-HAS,共表达PDI菌株表达量提高了60%,ELISA法测定达(22.49±3.52)mg/L.结论 共表达PDI能促进外源蛋白的分泌表达,为进一步研究在毕赤酵母中过量表达分子伴侣对其分泌外源蛋白的影响奠定了基础.
-
全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性
目的 在毕赤酵母中表达全长甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)(1-34)与人血清白蛋白(Human serum albumn,HSA)的融合蛋白PTH(1-34)-HSA,并检测其活性.方法 在质粒pPIC9K-PTH(1-34)2-HSA的基础上设计引物,引入6His标签及肠激酶酶切位点,从该质粒中扩增6His-EK-PTH(1-34)-HSA基因,插入pPIC9K载体中,构建重组表达质粒pPIC9K-6His-EK-PTH(1-34)-HSA,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达；表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白通过两步亲和层析纯化和肠激酶酶切,获得全长的PTH(1-34)-HSA融合蛋白；检测融合蛋白对UAMS-32P成骨细胞增殖活力、碱性磷酸酶活性以及RANKL和OPG基因转录水平的影响.结果 重组表达质粒经测序证实构建正确；表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白相对分子质量约70 000,可与PTH抗体和HSA抗体特异性结合,发酵 获得的融合蛋白的浓度为200 mg/L;纯化的融合蛋白可与抗PTH、HSA和6His标签抗体特异性结合,经肠激酶酶切后,该蛋白失去了与6His抗体反应的能力,保持了与PTH和HSA抗体结合的能力；酶切后的全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白保持了PTH的生物活性,能促进UAMS-32P成骨细胞的增殖活力,提高细胞的碱性磷酸酶的活性,上调细胞RANKL基因的转录水平以及抑制OPG基因的转录水平.结论 成功在毕赤酵母中表达了全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白,有望提高PTH的成药性.
-
不同结构黄酮类化合物对人血清白蛋白亲和力的影响
目的:研究三种不同结构的黄酮类化合物与人血清白蛋白(HSA)的亲和力关系.方法:采用荧光法,双波长方程计算黄酮类化合物与人血清白蛋白的结合常数,研究结构对亲和力的影响.结果:化合物B环、C环上羟基数目不同,对亲和力影响很大,其中B环上羟基越多,亲和力越高；C环上羟基的存在会降低亲和力；糖基化会降低亲和力；C2=C3被氢化后,与人血清白蛋白的亲和力降低.结论:黄酮类化合物不同的结构,对其亲和力有明显的影响.
-
非酶糖基化对人血清白蛋白磁共振成像造影剂的影响
目的:本研究旨在评估HSA的非酶糖基化可能对一些钆螯合物相对该蛋白的亲和力造成的影响.方法:利用标准的反转恢复序列,在Minispect mq-20磁共振分析仪中(0.47 T和310 K实验条件)测量了纵向的质子弛豫速率.结果:人血清白蛋白(HSA)的非酶糖基化(NEG)会让钆塞酸二钠(1)和MS-325(2)的亲和力稍微降低,但是它对MP2269(3)的的亲和力不造成任何影响.结论:人血清白蛋白(HSA)被糖基化时,钆塞酸二钠(1)和MS-325(2)相对该蛋白的亲和力略微减弱,足以忽略.因此,存在被糖基化人血清白蛋白(HSA)的情况下,所研究的三种造影剂的效能实际上不受影响.糖尿病患者的效能与药物动力学特性不会存在特别明显的差异.
-
人血清白蛋白对人两类异常精液的精子优选
目的本文采用人血清白蛋白柱下游法对19例患者精液液化不良精子及19例精子凝集现象精液精子进行体外优选处理.方法洗涤后精子在含7.5%人血清白蛋白的Eark's液中下游.结果两种情况精子优选后精子活动率及a、b级前向运动精子百分率显著提高,精子畸形率显著下降,并有良好的活动精子回收率.结论人血清白蛋白柱下游法,方法简便稳定,效果良好.
-
基于血清蛋白的沙蟾毒精与盐酸维拉帕米相互作用研究
目的：研究沙蟾毒精和盐酸维拉帕米与血清蛋白的结合及两者间的相互影响。方法：采用平衡透析法和高效液相色谱法测定两种药物与小牛血清蛋白的结合率。荧光光谱法研究沙蟾毒精与牛血清白蛋白和人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)的相互作用，并采用分子对接模拟药物相互作用模式。结果：0.1μg/mL沙蟾毒精与小牛血清蛋白结合率为(61.1±0.2)％，加入不同浓度盐酸维拉帕米后，沙蟾毒精的血清蛋白结合率显著下降，从(61.1±0.2)％下降到(36.9±3.4)％。测得盐酸维拉帕米(2μg/mL)的血清蛋白结合率为(87.5±0.5)％；当加入不同浓度沙蟾毒精后，盐酸维拉帕米血清蛋白结合率无显著变化。荧光光谱检测表明盐酸维拉帕米能够抑制沙蟾毒精与血清白蛋白的结合。分子对接结果表明，沙蟾毒精、盐酸维拉帕米竞争性结合HSA的位点Ⅰ，盐酸维拉帕米与位点Ⅰ的分子结合能力大于沙蟾毒精，置换沙蟾毒精与HSA在位点Ⅰ的结合。结论：盐酸维拉帕米能够抑制沙蟾毒精与血清蛋白及白蛋白的结合。
-
缺血变性白蛋白:急性心肌缺血的一种新生化标志物
急性心肌缺血的早期诊断和处理因缺少一种早期、快速、简便、可靠的诊断试验而受到限制.采用白蛋白-钴结合试验检测的缺血变性白蛋白(IMA),作为一种敏感的、新生化标志物,为急性心肌缺血的早期诊断带来了曙光.本文就其近年来的研究进展作一概述.
-
血清白蛋白和Dane颗粒的作用
HBeAg强阳性患者之血清,经密度区带离心和8ephadex G-200分离后,可以得到具有极高DNA一多聚酶活力的Dane颗粒.对提纯的Dane颗粒的研究表明,这种颗粒结合了一定量的白蛋白,结合的白蛋白在PAGE上和人血清白蛋白单体无明显差别,并非以多聚形式出现.对Dane颗粒和白蛋白结合状态的研究表明,这种结合是非共价的,PAGE可以使其分离.体外条件下,随着时间的推移,这种结合逐渐离解,具有可逆性,提示Dane颗粒和白蛋白的结合可能是以受体和配体的形式出现.目前普遍认为病毒可能通过白蛋白的桥联作用而入侵肝细胞,本文对血清白蛋白可能起的作用进行了讨论.
-
血凝法测定病毒性肝炎患者血清内HBsAg白蛋白受体的研究
近年来一些学者发现乙型肝炎病毒(HBV)感染者的血清能与多聚人血清白蛋白(简称PHSA)起反应,这种现象虽然在某些患者中是由于存在着抗白蛋白抗体,然而在HBsAg阳性、特别是HBeAg阳性血清中尤为明显.继而发现在HBsAg表面有PHSA的受体,并认为与HBV的感染性有关[1,2].本文报告用血凝法测定PHSA结合力的临床意义及其与HBeAg的关系.
-
慢性乙型病毒性肝炎血清HBsAg-pHSA受体与HBeAg和抗-HBe的关系
多聚人血清白蛋白(pHSA)与乙型肝炎病毒(HBV)感染关系是近年来研究进展较快的领域,由于发现了HBV表面及肝细胞膜表面有pHSA受体,引起人们重视.
-
人血清白蛋白注射用凝胶的处方工艺研究
目的:制备人血清白蛋白(HSA)可注射用凝胶,使用星点设计-效应面优化法对处方工艺进行优化筛选.方法:以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)和苯甲酸苄酯(BB)为共溶剂制备载HSA可注射用凝胶;以PLGA的用量及共溶剂的组成为考察因素,体外释放为评价指标,用线性方程和二次及三次多项式描述体外释放和两个影响因素之间的数学关系,根据佳数学模型描绘效应面.选择佳处方,并进行预测分析.结果:各指标的三项式拟合方程均优于多元线形回归方程,建立的数学模型的预测值与实际值符合较好.结论:用星点设计-效应面法优化处方工艺预测性良好.
关键词： 人血清白蛋白 注射用凝胶 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA) 星点设计 效应面 -
表柔比星与人血白蛋白的相互作用特点
目的 研究表柔比星与人血清白蛋白的相互作用特点.方法 用荧光猝灭光谱及同步荧光光谱技术测定在不同温度下表柔比星对人血清白蛋白荧光的猝灭规律.结果 表柔比星对人血清白蛋白荧光呈规律性猝灭,17℃时的n为1.113,K为5.87x 104,37℃时的n为1.128,K为6.85×104.表柔比星使白蛋白的同步光谱中大发射峰红移.结论 表柔比星与人血清白蛋白只有1个结合位点,表现为疏水作用,两者结合使白蛋白的极性略有增加.
-
新型氧化应激标志物AOPPs的体外制备标准化和检测
目的 研究次氯酸氧化的人血清白蛋白(human serum albumin-advanced oxidative protem products,HSA-AOPPs)的制备标准化、次氯酸的清除以及微量HSA-AOPPs的检测.方法 于搅拌条件下在HSA(60mg/mL)内滴加次氯酸至终浓度为60 mmol/L即制得HSA-AOPPs.透析法或层析法清除次氯酸.碘量法测定次氯酸残留量.微量HSA-AOPPs的测定采用高效凝胶色谱法(HP-SEC),曲线下面积(AUC)用于定量计算.结果 恒定的次氯酸加入量对HSA-AOPPs的产量非常关键.当次氯酸和HSA两者克分子浓度之比为1:66左右时为理想.过量次氯酸可导致高分子量AOPPs的破坏,大量蛋白碎片产生.层析法清除次氯酸残留优于透析法.色谱法检测AOPPs的灵敏度比分光光度法要高100倍以上.结论 AOPPs的标准化制备关键在于恒定次氯酸对HSA的克分子比值.HP-SEC方法可用于微量AOPPs的测定.
-
99Tcm-CP用于炎症显像的实验研究
笔者研究了99Tcm标记的小分子炎症趋化肽(CP)在动物炎症模型的显像和体内生物分布,并与99Tcm-人血清白蛋白(HSA)及人多克隆抗体(hIgG)进行比较,现报道如下.
