当归与激素合用对哮喘小鼠的治疗作用及其机制
摘要： 目的:探讨当归与激素合用对哮喘小鼠的治疗作用及其机制.方法:取BALB/c小鼠随机分为对照组、血瘀模型组、哮喘模型组、氢化可的松组、当归组、氢化可的松与当归合用组(n=12).采用卵白蛋白致敏、激发,复制哮喘模型;使用氢化可的松复制血瘀模型.观测当归、氢化可的松及其合用对小鼠血液流变学(全血黏度与血清TXB2含量)和哮喘(哮喘行为学、肺功能、肺指数与肺组织含水量)的影响,采用ELISA法、免疫组化法测定相关细胞因子和HMGB1/TLR4/NF-KB蛋白质的表达水平.结果:8 g/kg当归、0.05 g/kg氢化可的松及其合用可明显缓解哮喘行为学指标,提高肺功能,降低肺指数及肺组织含水量,降低BALF中TNF-α、IL-Iβ及IL-6水平,抑制肺组织HMGB1、TLR4及NF-KB蛋白质的高表达;当归与氢化可的松合用对提高哮喘小鼠肺功能、降低相关细胞因子(TNF-α、IL-1β及IL-6)水平明显优于单独使用当归组,抑制肺组织中TLR4和NF-κB蛋白质表达的作用优于单独使用当归或氢化可的松.二者合用后可缓解氢化可的松所致的小鼠血清TXB2含量升高、血液粘稠度增加.结论:当归与激素及其合用具有明显的平喘作用,抑制HMGB1/TLR4/NF-κB蛋白质合成是其平喘的机制之一.当归与激素合用改善肺功能的作用更强,可能与加强抑制TLR4/NF-KB合成有关.合用当归可缓解激素在治疗哮喘时引起的血液流变学异常变化.
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八肽胆囊收缩素对内毒素休克时海马损伤的影响及其机制初探
目的:观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对内毒素休克(ES)时海马损伤的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:将日本大耳白兔经静脉注入内毒素的主要活性成分脂多糖(LPS,8mg/kg)复制ES模型.动物(32只)随机分为对照组、LPS组、CCK-8+LPS组和非特异性CCK受体拮抗剂丙谷胺(Pro)+LPS组(n=8).监测平均动脉压(MAP)的变化,光、电镜观察海马的组织形态学改变,比色法检测海马NOS和SOD活性、NO和MDA含量的改变,用SD大鼠(12只,同上复制模型及分组)以免疫组织化学染色法观察海马iNOS和nNOS表达的变化.结果:与对照组相比,注入LPS后出现MAP显著而持续下降(P＜0.01);海马部位神经元损伤明显;iNOS和nNOS表达增强,NOS活性、NO和MDA含量显著升高(P＜0.05、P＜0.01和P＜0.01),SOD活性则降低(P＜0.01).预先注入CCK-8可明显减轻上述变化,预先注入Pro则加剧以上变化.结论:CCK-8可减轻ES时脑内海马部位的损伤,其机制可能与其抗氧化作用和抑制NO的过量生成有关.
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低氧时一氧化碳对PASMC增殖的影响及机制探讨
目的和方法:应用MTT比色、原位杂交、免疫细胞化学技术检测内源性或外源性CO对低氧状态下PASMC增殖的作用以及对PDGF-B和原癌基因bcl-2、突变型p53表达的影响,探讨CO抑制低氧状态下PASMC增殖的机制.结果:各组PASMC中PDGF-B mRNA 原位杂交和PDGF-B蛋白的免疫细胞化学染色均为阴性,单纯低氧组较正常对照组Bcl-2和突变型P53蛋白表达增强(P<0.01),Hemin和CO干预组Bcl-2和突变型P53蛋白表达低于单纯低氧组,而Hb干预组则高于单纯低氧组(P<0.01).结论:低氧时CO可能通过抑制Bcl-2和突变型P53的表达而抑制PASMC的增殖.
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低氧对胚胎干细胞增殖的影响
目的:观察间歇性低氧和持续性低氧对体外培养的胚胎干细胞(ES细胞)增殖的影响.方法:利用细胞记数法和BrdU (5-溴脱氧尿苷)掺入的流式细胞分析检测细胞增殖,并用RT -PCR的方法检测低氧诱导因子(HIF-1a)的表达变化.结果:①将ES细胞分别放在低氧(3%～10% O2)和常氧(20% O2)的环境中培养24 h后,在低氧环境中培养的ES细胞数较常氧组明显减少;②将ES细胞分别给予间歇性低氧刺激(3%～10% O2),每天10 min,连续4 d后,发现3%低氧组较常氧对照组的细胞增殖明显升高.③用RT-PCR方法观察HIF-1a的表达与细胞增殖的关系,发现在常氧环境中培养的ES即有HIF-1a的表达,ES细胞在持续低氧24 h或间歇性低氧(3%～10% O2)刺激4 d后对HIF-1a的表达均无明显影响.结论:间歇性低氧(3% O2)可明显促进体外培养的ES细胞增殖,而持续性低氧抑制ES细胞增殖,间歇性低氧(3% O2)刺激促进ES细胞增殖的机制尚有待于进一步的研究.
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尾加压素对常氧及低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞周期的影响
目的:观察新近发现的缩血管活性肽人类尾加压素Ⅱ(human urotensin Ⅱ, hUII)对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)周期的影响.方法:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,加入不同浓度(mol/L)的hUII(10-7、10-8、10-9),在常氧及低氧条件下孵育12 h,用流式细胞术碘化丙啶染色法,分析PASMCs DNA直方图细胞周期时项、细胞增殖指数及凋亡亚二倍体峰的改变,以初步观察hUII对PASMCs增殖与凋亡的影响.结果:hUII呈浓度依赖方式促进PASMCs的增殖,主要表现为细胞周期S期的百分比增加,细胞增殖指数(PI)增高,常氧作用比低氧作用更明显.hUII浓度(mol/L)为10-7、10-8、10-9时,与PASMCs常氧作用12h,PI分别比对照组增加了的175%、135%、118%;低氧作用12h,PASMCs PI分别是对照组的135%、118%、103%,hUII浓度为10-7mol/L时作用明显.同时DNA直方图分析各浓度范围的hUII均未见PASMCs凋亡亚二倍体峰出现.结论:hUII以剂量依赖方式刺激常氧及低氧PASMCs S期DNA合成速率,使PI增高,提示hUII具有明显的促PASMCs增殖作用.
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血管内膜增生过程中核酸代谢相关酶活性变化的研究
目的和方法:应用血管内皮剥脱后再狭窄模型,动态观察胸腹主动脉壁核膜核苷三磷酸酶及核酸代谢和糖代谢相关酶5'-核苷酸酶、腺苷脱氨酶和琥珀酸脱氢酶活性的变化.探讨其与血管平滑肌细胞增生和新生内膜形成的关系.结果:血管内皮剥脱后,胸腹主动脉壁核膜核苷三磷酸酶活性持续升高,与血管内膜增厚程度相平行;血管平滑肌细胞收缩型标志蛋白α-肌动蛋白表达降低及合成型标志蛋白骨桥蛋白表达上调,说明血管平滑肌细胞发生了表型转化,由分化型转变成为去分化型;5'核苷酸酶、腺苷脱氨酶和琥珀酸脱氢酶活性表现为先升后降,三种酶活性均于血管平滑肌细胞增殖旺盛期(术后3～7 d)达峰值.结论:细胞内参与mRNA转运及糖、核酸代谢的一系列酶活性的变化是新生内膜形成的生化基础.
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内源性CO在缺氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构中的作用
目的和方法:应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、双波长分光光度法、右心导管及维多利亚蓝染色方法,动态观察慢性缺氧不同时间点大鼠肺组织中诱导型血红素氧合酶(HO-1)基因表达、内源性CO生成、肺动脉压力及构型的变化,探讨内源性CO在大鼠缺氧性肺动脉高压肺血管重构中的作用.结果: ①正常大鼠肺组织可表达少量HO-1 mRNA,缺氧5、10、15 d大鼠肺组织HO-1 mRNA含量分别增加2.3、3.6、4.0倍(P<0.01),动脉血中COHb分别较正常大鼠增加1.9、2.6和2.9倍(P<0.01或P<0.05),同时RVSP升高.光镜下可见IAPA血管壁增厚,管腔变窄. ②Hemin可使缺氧大鼠肺组织HO-1 mRNA和动脉血中COHb保持在高水平(分别高达正常对照组的5.2和3.7倍, P<0.01或P<0.05),能部分地抑制缺氧时大鼠RVSP的升高,减轻IAPA的病理改变.结论:在慢性缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中HO-1基因的表达增加,内源性CO生成增多.Hemin促进HO-1基因表达和内源性CO生成,可抑制肺动脉压升高,阻抑肺血管重构,对缺氧性肺动脉高压的形成有一定的防治作用.
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木黄酮对小鼠胰岛β细胞电压依赖性钙通道表达和电流的影响
目的:研究长期抑制酪氨酸激酶活性对胰岛β细胞中电压依赖性钙通道的影响,探讨酪氨酸激酶在胰岛β细胞中的作用.方法:原代培养小鼠胰岛和胰岛β细胞,经0.1 mmol/L酪氨酸激酶抑制剂木黄酮处理12 h后,运用全细胞电流记录的方法观察电压依赖性钙电流以及动作电位的改变,RT-PCR方法观察电压依赖性钙通道α1亚单位的表达改变.结果:木黄酮处理12 h后,小鼠胰岛β细胞的电压依赖性钙电流明显减小(13.83±1.515pA/pFvs 7.012±1.502 pA/pF,P＜0.01,n=6),动作电位幅度明显减弱(38.50±7.46 mV vs 15.95±4.39 mV,P＜0.01,n=6).木黄酮处理12 h后,小鼠胰岛中电压依赖性钙通道的α1亚单位的表达明显减少,降低为对照组的0.792±0.078(P＜0.01,n=5).结论:木黄酮处理可以抑制小鼠胰岛β细胞中电压依赖性钙通道的表达和电流,提示长期抑制酪氨酸激酶活性在胰岛β细胞功能损害中具有重要作用.
关键词： 胰岛β细胞 木黄酮 L-型电压依赖性钙通道 -
横断大鼠穹窿-海马伞对其海马CA3区突触形态的影响
目的:观察横断大鼠穹窿-海马伞对其海马突触形态的影响.方法:横断大鼠双侧穹窿-海马伞(FF)建立动物模型,于手术前、后对大鼠进行迷宫检查,重点对海马CA3区多形层突触界面的结构参数进行定量分析.结果:突触界面曲率减小,突触间隙宽度加大,突触后膜致密物质厚度明显变薄,穿孔性突触的比例也有不同程度降低.结论:横断穹窿-海马伞引起海马CA3区突触形态明显改变,推测海马内Ach的正常水平对维持海马CA3区突触界面超微结构有重要作用.
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五鹤续断抗小鼠衰老的作用及其机制研究
目的:研究五鹤续断(WHDA)注射液对D-半乳糖所致小鼠衰老模型的抗衰老作用及其机制.方法:昆明种小鼠(雌雄各半)48只,随机分为对照组、模型组、阳性WHDA组、7.2 g/kgWHDA组、3.6 g/kgWHDA组及1.8g/kgWHDA组,每组8只.腹腔注射D-半乳糖造模,Morris水迷宫测量小鼠学习和记忆能力.检测各组小鼠皮肤羟脯氨酸、脑组织MDA、LP、SOD及GSH-Px含量,采用双抗体夹心ELISA法检测小鼠血清中IL-2及IL-6含量.结果:Morris水迷宫实验结果表明WHDA各组潜伏期与模型组相比较明显减少(P＜0.05),模型组小鼠穿越平台的次数比其它各组小鼠少(P＜0.05).脑组织氧化性指标(SOD、MAD、LP及GSH-Px)检测,对照组及WHDA各组MAD与LP含量低于模型组(P＜0.05).对照组及WHDA各组SOD与GSH-Px的活性明显高于模型组(P＜0.05).注射过D-半乳糖小鼠皮肤羟脯氨酸含量都明显低于对照组(P＜0.05),WHDA组小鼠皮肤中羟脯氨酸的含量明显高于模型组(P＜0.05).WHDA组小鼠血清中IL-2、IL-6含量显著高于对照组和模型组(P＜0.05),模型组小鼠血清中的IL-2、IL-6比对照组要低(P＜0.05).结论:WHDA能改善D-半乳糖所致的衰老小鼠的学习记忆能力,消除其体内自由基,增强机体免疫能力,具有较好的抗衰老作用.
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Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型中的动态表达
目的:通过观察大鼠心肌组织缺血/再灌注(I/R)急性期Tol样受体2(TLR2)和4(TLR4) mRNA及蛋白质的表达,探讨TLR2和TLR4在心肌缺血/再灌注损伤中的作用.方法:雄性Wistar大鼠随机分为缺血/再灌注组(I/R组)和假手术组(sham组),建立大鼠心肌缺血/再灌注模型,按不同的再灌注时间(1、2、4、6、12、24h和7 d)处死动物(n=42).光镜下观察心肌组织形态改变.实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)定量心肌TLR2及TLR4 mRNA水平.逆转录聚合酶链式反应(rt-PCR)测定心肌白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的mRNA水平.结果:①随着再灌注时间的延长,心肌梗死面积逐渐增大,在再灌注4h时达大值,再灌注4h、6h、12 h、24h,再灌注7d已发生心室重塑.②在再灌注早期,sham组心肌组织形态未见明显改变,I/R组心肌结构有不同程度损伤,在复灌7d时可见心室重塑,左室壁厚度明显变薄,大量成纤维细胞替代原有的心肌细胞.③sham组和I/R组TLR2、TLR4、MCP-1和IL6 mRNA水平均出现不同程度上调,其中TLR2和TLR4均在再灌注4h时达高峰,随后逐渐下降,至再灌注7d时TLR4水平再次升高.IL-6在6h达到高峰后开始下降,到24h时基本降至sham组水平,再灌注7d时再次有升高趋势.MCP-1在缺血/再灌注后一直保持与sham组相当水平,在再灌注7d时才有明显升高.结论:在心肌缺血/再灌注早期,心肌组织中TLR2和TLR4基因水平迅速上调,并促进下游炎症因子的产生造成心肌早期的损伤.在再灌注后期,TLR2和TLR4的再次升高使得炎症因子的表达再一次增加,从而影响心肌重塑,损伤心肌结构及功能.
关键词： 心肌缺血/再灌注损伤 Toll样受体2 Toll样受体4
