微小RNA-320检测在体外循环所致急性呼吸窘迫综合征中的临床价值及其机制研究

目的 研究微小RNA(microRNA)在体外循环(CPB)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者中表达,并初步探讨其机制.方法 设定体外循环转流开始前(T1)、转流结束后4 h (T2)、术后8 h(T3)、术后16 h(T4)等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术加以验证.酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数.Pearson相关性分析研究microRNA-320(miR-320)与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分的相关性.体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8(CCK-8)法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响.结果 在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义(t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均<0.001),其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度(0.28 ± 0.09)为显著,而miR-320的增高程度(1.62 ± 0.12)为显著(P均<0.05).qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平(1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08)逐渐升高,差异有统计学意义(F=20.648,P<0.05).CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[(110 ± 10)ng/L vs.(254 ± 16)ng/L]、IL-6[(86 ± 8)ng/L vs.(165 ± 11)ng/L]、呼吸指数[(0.182 ± 0.021)vs.(0.381 ± 0.032)]均增高,氧合指数[(350 ± 22)vs.(245 ± 18)]下降,差异均有统计学意义(P均<0.05).Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关(r = 0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P 均 < 0.05),而与氧合指数呈负相关(r =-0.745, P<0.05).pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率 [(82% ± 8%)vs. 100%]、凋亡率[(20.0% ± 1.1%)vs.(9.4% ± 0.8%)]相比,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能.

急性髓样白血病干细胞CD200的表达及与疗效的相关分析

目的 探究急性髓样白血病(AML)患者白血病干细胞(LSCs)中CD200的表达以及其与临床疗效的相关性.方法 收集2014年4月至2017年4月衢州市人民医院收治的137例AML患者,进行AML分型,分为M1~M5型.并对患者临床疗效进行统计,分为三组:完全缓解(CR)组(59例)、部分缓解(PR)组(47例)和未缓解(NR)组(31例).通过流式细胞仪分离患者治疗前后的骨髓LSCs,检测LSCs表达、CD200在LSCs中的表达水平.结果 24.82%(34/137) AML患者的LSCs中表达CD200,且CD200在AML各亚型中表达的阳性占比的比较,差异有统计学意义(5/11、13/26、4/35、3/22、9/43,χ2=16.533,P=0.002).AML-LSCs在AML各亚型中都存在高表达,且差异无统计学意义(F=0.980,P=0.421);除CD200在M3组的LSCs中呈现更低表达外[(10.1 ± 2.7)%],其在AML其他各亚型中表达差异均无统计学意义[(16.5 ± 2.8)%、(19.7 ± 4.0)%、(16.4 ± 2.4)%、(17.0 ± 3.1)%,P均>0.05].而在治疗疗效观察中,治疗前CD200在LSCs中的表达水平在CR、PR、NR三组间比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);治疗后随着症状的缓解程度提高,各组CD200在LSCs中表达水平也随之降低[(16.4 ± 3.6)%、(10.8 ± 2.6)%、(5.0 ± 1.8)%,P均<0.05].治疗后,CR与NR两组CD200阳性表达占比的比较,差异有统计学意义(5/59 vs. 14/31,P<0.017);同时AML亚型分组中M3组内的CR、PR、NR三组CD200+/CD200-分布情况的比较,差异有统计学意义(0/22、1/11、1/0,χ2=17.786,P<0.001).结论 AML患者LSCs中高表达CD200与不良预后有一定关系,可影响临床疗效.

性激素水平对急性胰腺炎患者炎症反应及预后的影响

目的 探讨性激素表达水平对急性胰腺炎患者炎症水平及预后的影响.方法 选择2014年9月至2016年12月扬州大学附属医院急诊科、消化内科、普外科以及重症医学科收治的105例急性胰腺炎患者,分为轻症组(57例)和重症组(48例).比较两组患者的一般资料及性激素包括雌二醇、孕酮和睾酮的表达水平,并分析其与超敏C反应蛋白(hs-CRP)和降钙素原的相关性.结果 两组急性胰腺炎患者间急性病生理学和长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分、全身性感染相关性器官功能衰竭评分(SOFA)、hs-CRP及降钙素原表达水平比较,差异均有统计学意义(t=4.408、9.607、5.478、3.214,P均<0.05);而雌二醇、孕酮及睾酮表达水平比较,差异均无统计学意义(U=56.000、105.500、70.000,P=0.452、0.228、0.104).根据生存与否,将重症组患者分为存活组(36例)和死亡组(12例).结果显示,存活组患者的雌二醇表达水平高于死亡组(U=5.000,P=0.022),而两组患者孕酮及睾酮表达水平比较,差异均无统计学意义(U=10.000、7.000, P=0.909、0.425).Spearman相关分析显示,轻症组患者雌二醇、孕酮及睾酮的表达水平与hs-CRP (r=-0.208、0.065、0.029,P=0.352、0.775、0.897)和降钙素原(r=-0.197、-0.016、0.113,P=0.621、0.942、0.618)均无相关性;重症组患者雌二醇表达水平与hs-CRP呈正相关(r=0.709,P=0.022),与降钙素原无相关性(r=0.389,P=0.216),而孕酮及睾酮的表达水平与hs-CRP(r=-0.224、0.199,P=0.228、0.582)和降钙素原(r=0.369、-0.165,P=0.777、0.649)均无相关性.结论 雌二醇表达水平与急性重症胰腺炎患者炎症水平具有相关性,可作为急性重症胰腺炎预后的指标.

不同剂量右美托咪定对脓毒症大鼠微循环的影响

目的 探讨不同剂量右美托咪定对脓毒症大鼠微循环系统的影响.方法 48只Wistar大鼠按随机数字法分为盲肠结扎穿孔术(CLP)组、小剂量治疗组、中剂量治疗组和大剂量治疗组,每组12只.脓毒症模型采用CLP法进行制作,小、中、大剂量治疗组大鼠模型制作完成后,分别将右美托咪定以2.5 μg·kg-1·h-1、5 μg·kg-1·h-1和10 μg·kg-1·h-1的速度经尾静脉持续泵入.记录各组大鼠CLP术后1、3、5 h的平均动脉压和心率,以及CLP后3 h动脉血气包括pH值、二氧化碳分压、氧分压、细胞外液剩余碱、碳酸氢盐水平、总二氧化碳含量、氧饱和度及血乳酸水平,并计算24 h各组大鼠死亡情况.结果 四组大鼠平均动脉压及心率水平比较,差异均有统计学意义(F=2.935、3.862,P=0.005、0.001).与CLP组相比,小、中、大剂量治疗组大鼠的平均动脉压水平在术后1 h均显著降低(P均<0.05),但术后3、5 h比较差异均无统计学意义(P均>0.05);而心率则在术后3、5 h开始降低(P均<0.05).CLP组大鼠术后3、5 h的平均动脉压较1 h均显著降低(P均<0.05),而小、中、大剂量治疗组大鼠术后3、5 h的心率均较同组1 h显著降低(P均<0.05),小、中剂量治疗组大鼠术后5 h的心率均较同组3 h显著降低(P均<0.05).四组大鼠pH值[(7.27 ± 0.07)、(7.17 ± 0.08)、(7.12 ± 0.07)、(7.13 ± 0.07)]、二氧化碳分压[(38 ± 8)、(72 ± 21)、(77±24)、(83±16)mmHg]、细胞外液剩余碱[(-9.7±3.9)、(-3.2±2.8)、(-4.7±3.4)、(-2.0± 1.7)mmol/L]、碳酸氢盐水平[(17.4 ± 3.3)、(25.0 ± 2.7)、(24.7 ± 4.2)、(27.1 ± 1.7)mmol/L]、总二氧化碳含量[(18.6±3.7)、(27.1±2.8)、(26.9±4.9)、(29.6±2.1)mmol/L]、氧饱和度[(97.8±1.0)%、(97.2±1.5)%、(93.9±4.2)%、(94.4±4.0)%]及血乳酸水平[(94.45±4.01)、(0.63±0.66)、(0.63± 0.43)、(0.45 ± 0.38)mmol/L] 比较,差异均有统计学意义(F=21.902、34.460、30.096、33.709、33.988、18.076、39.916,P均<0.05),而氧分压水平 [(115 ± 17)、(118 ± 23)、(105 ± 19)、(109 ± 22)mmHg]比较,差异无统计学意义(F=1.545,P>0.05).小、中、大剂量治疗组大鼠pH值、二氧化碳分压、细胞外液剩余碱、碳酸氢盐、总二氧化碳含量及血乳酸水平与CLP组大鼠比较,差异均有统计学意义(P均<0.05),而氧饱和度方面比较,中、大剂量治疗组大鼠均较CLP组有所降低(P均<0.05).此外,小剂量治疗组大鼠总二氧化碳含量、氧饱和度及中剂量治疗组大鼠细胞外液剩余碱与大剂量治疗组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).四组大鼠死亡构成比(11/1、9/3、3/9、2/10)比较,差异有统计学意义(χ2=17.658,P=0.001),且中、大剂量治疗组较CLP组和小剂量治疗组均显著降低(P均<0.008).结论 右美托咪定在CLP脓毒症大鼠中持续输注3 h内即明显改善微循环系统,使心率显著下降并维持平均动脉压稳定.随着右美托咪定输注剂量的增加,CLP脓毒症大鼠的生存情况明显得到改善.

醒脑静注射液对颅脑损伤大鼠神经功能的影响及机制研究

目的 探讨醒脑静注射液对颅脑损伤大鼠神经功能的影响及相关机制.方法 108只大鼠采用随机数字表法分成假手术组、创伤组和治疗组,每组36只.采用改进的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠颅脑损伤模型,假手术组和创伤组大鼠腹腔注射1 mL等渗NaCl溶液,治疗组大鼠按5 mL/kg的剂量腹腔注射醒脑静注射液,1次/d,连续7 d.每组6只大鼠用于神经功能检测,另外每组分别在12、24、48、72和168 h时点断头处死6只大鼠,分离海马组织.采用Western-blotting检测Survivin蛋白表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况.采用前肢放置试验评分和平衡实验评分对术后7、14、21和28 d大鼠进行行为测试,改良神经功能缺损程度评分测定各组大鼠神经功能损伤情况.结果 三组间大鼠海马组织Survivin蛋白表达和神经细胞凋亡比例比较,差异有统计学意义(F=262.495、203.219,P均<0.05).12、24、48、72和168 h创伤组及治疗组大鼠海马组织Survivin蛋白表达和神经细胞凋亡比例均较同时间点假手术组显著升高(P均<0.05);与同时间点创伤组比较,48、72和168 h治疗组大鼠海马组织Survivin蛋白表达均显著升高(P均<0.05),而48、72和168 h神经细胞凋亡比例均较同时间点创伤组显著下降.三组前肢放置试验评分和平衡实验评分比较,差异均有统计学意义(F=60.876、23.143,P均<0.05).术后7、14、21和28 d治疗组大鼠前肢放置试验评分和平衡实验评分均较同时间点创伤组显著下降(P均<0.05).三组大鼠改良神经功能缺损程度评分比较,差异有统计学意义(F=24.046,P<0.001).术后7、14、21和28 d治疗组大鼠改良神经功能缺损程度评分均较同时间点创伤组显著下降(P均<0.05).结论 醒脑静注射液可能通过上调Survivin蛋白表达抑制神经细胞凋亡,从而发挥保护颅脑损伤大鼠神经功能的作用.

转化生长因子β1/Smads通路在百草枯中毒所致上皮-间充质转变和肺纤维化中的作用研究

目的 本研究通过观察百草枯诱导大鼠肺纤维化中转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路的上皮-间充质转变(EMT)现象及相关蛋白的表达.方法 将60只雄性大鼠分为对照组及百草枯组,每组各30只.百草枯组腹腔注射80 mg/kg百草枯建立中毒模型,对照组注射3 mL等渗NaCl溶液.分别在建模后1、3、7、14、21、28 d分批处死大鼠,比较两组大鼠肺组织湿干比重及羟脯氨酸水平,取左肺下叶予苏木素-伊红(HE)染色及Masson染色.评估肺组织病理学和肺纤维化程度,采用Western-blotting检测百草枯中毒后1、3、7、14、21、28 d肺组织中EMT相关指标和TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达.结果 两组各时间点肺湿干比重及羟脯氨酸水平的比较,差异有统计学意义(F=9.772、22.541,P均<0.001),且百草枯组湿干比重的比值在3、7、14、21、28 d均显著高于对照组(P均<0.05),而羟脯氨酸表达水平仅在14、21、28 d明显高于对照组(P均<0.05).病理结果显示百草枯组大鼠中毒后1~7 d,炎症细胞浸润,肺泡间质增厚水肿,中毒后21 d和28 d可见肺泡壁明显增厚及胶原纤维明显增生,而对照组大鼠肺组织无明显改变.对照组与百草枯组各时间点 TGF-β1、Smad2 / 3、p-Smad2 / 3、Smad4、p-Smad4、Smad7、p-Smad7、E-cad、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Vimentin和成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)表达水平的比较,差异均有统计学意义(F=10.685、7.381、7.878、10.743、14.575、17.791、33.200、14.453、10.849、25.415、26.263,P均<0.001),且百草枯组TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、p-Smad4、α-SMA、Vimentin及FSP-1表达水平逐渐升高,中毒后21 d达高峰(P均<0.05).而Smad7、p-Smad7及E-cad表达水平逐渐降低,Smad7、p-Smad7水平在中毒后7 d达到谷底;E-cad表达水平在中毒后21 d达到谷底(P均<0.05).结论 TGF-β1/Smads信号通路可能通过调节EMT过程影响百草枯诱导的肺纤维化发生.

胃镜下置入瘘腔引流管治疗食管癌术后巨大吻合口瘘五例

胸内吻合口瘘是食管癌术后严重的并发症,其发生率为9.3%,约40%的术后死亡都与吻合口瘘相关[1-2].胸内吻合口瘘一旦发生,尤其是巨大吻合口瘘,容易引起严重的纵隔感染,终可导致脓毒症,甚至死亡[3-4].因此,控制术后吻合口瘘的发生和提高瘘的治疗效果是临床医生一直关注的重点.目前,在胃镜引导下置入瘘腔引流管治疗食管癌术后巨大胸内吻合口瘘的方法已在重庆医科大学附属第一医院得到应用和发展.本研究采用回顾性研究方法,分析近年来我院巨大瘘口治疗的数据,评价经胃镜引导下置入瘘腔引流管治疗术后胸内巨大吻合口瘘的临床价值.

急性敌草快中毒12例诊治分析

敌草快与百草枯均属于联吡啶类接触性除草剂,规范使用敌草快对人畜少有危害,但意外经皮肤、黏膜或口服吸收,则对人体有较强毒性,可造成中毒,甚至死亡.近年来,由于百草枯水剂在国内禁止生产,敌草快的使用随之增加,其急性中毒的发生率也逐渐增加.迄今为止,对敌草快中毒而言尚无特效解毒剂,也无明确治疗方案[1].因此,正确认识敌草快中毒表现,正确诊断和救治敌草快中毒患者,意义重大.本文回顾性分析研究遵义医学院附属医院救治的12例急性敌草快中毒患者临床表现、诊断、治疗及预后情况,为急性敌草快中毒患者提供诊断和治疗上的参考.

镇静镇痛状态下危重症患儿谵妄评估研究进展

谵妄是一组由于躯体疾病或其治疗不当引起的精神认知障碍[1].《精神障碍诊断与统计手册》第五版修订版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-Ⅴ,DSM-Ⅴ)提出谵妄的诊断标准包括:①注意(即指向、聚焦、维持和转移注意的能力减弱)和意识(对环境的定向减弱)障碍;②该障碍在较短时间内发生(通常为数小时到数天),表现为与基线注意和意识相比的变化,以及在一天病程中严重程度的波动;③额外的认知障碍(例如,记忆力缺陷、定向障碍、语言障碍、视觉空间能力或知觉障碍);④在①②诊断标准中的障碍不能用其他已患的、已经确立的或正在进行的神经认知障碍来更好地解释,也不是出现在觉醒水平严重降低的背景下,例如昏迷;⑤病史、体格检查或实验室发现的证据表明,该障碍是其他躯体疾病、物质中毒或戒断(即由于滥用毒品或药物)、接触毒素或多种病因的直接生理性结果[2].

预测儿童创伤性脑损伤脑功能结局的生物标志物

创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是儿科较常见的急危重症,也是儿童残疾和死亡的重要原因,且有逐年增加的趋势.美国每年约有42 000名儿童因为TBI住院治疗,其中约2 000名死亡[1].轻度TBI患儿很少有临床症状,却存在潜在恶化的风险.对于严重TBI患者,原发性损伤和继发性损伤的不同处理常常混淆初期临床检查和预后的关系.由于儿童TBI早期缺乏特异性临床表现,如何早期准确判断儿童脑损伤,及正确评估脑损伤的严重程度,对改善预后有重要意义,找到儿童TBI早期损害特异、灵敏的检测手段仍是目前不断探索的课题.脑损伤的诊断、疗效评价及预后评估主要依靠患儿的临床表现及影像学检查,但缺乏有效的量化指标,尤其缺乏灵敏度高、特异性强的客观评估工具和方法,同时影像学检查有射线辐射损害和风险,且费用贵,所以寻找一些能够反映脑组织损害的特异性生物标志物至关重要.近年来发现一系列蛋白质或脂质蛋白分子可作为脑损伤的生物标志物,与预后直接相关.神经系统的生物标志物有以下特点:①高度特异性,存在于中枢神经系统并能反映损伤程度;②脑组织遭受损伤时快速释放入血液和脑脊液;③高度灵敏,含量丰富,容易被检测;④能够评价疗效;⑤与年龄、性别相关性小.有意义的生物标志物应该是对脑损伤有特异性,能动态反映炎症或其他生化、生理进展的标记.下文就此类生物标志物的生物学特性、临床应用进展等进行阐述.

综合护理干预对肥厚型心肌病合并心律失常患者负面情绪、依从性及生存质量的影响

肥厚型心肌病有复杂的病因,临床上多表现为胸痛、劳力性呼吸困难、晕厥等一系列症状,通常可随疾病的发展引发恶性心律失常、猝死等其他症状,导致病情进一步加重,其中以恶性心律失常为常见[1].因此,对肥厚型心肌病引起的恶性心律失常给予早期判断,并采取积极有效的治疗方法至关重要,这期间对护理服务方法也提出了较高的要求[2].部分肥厚型心肌病合并心律失常患者因疾病本身的作用,加之心理负担过重,产生了焦虑、抑郁甚至是恐惧及排斥等不良情绪,妨碍了疾病的正常治疗,同时也在一定程度上增加了心血管不良事件的发生率[3].因此,本研究在常规护理的基础上对80例肥厚型心肌病合并心律失常患者实施综合护理干预,以期达到更好的治疗及护理的目的,现将结果报告如下.

准分子激光冠状动脉斑块消融术治疗冠状动脉支架内重度狭窄伴消化道出血一例

经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)是目前治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的主要手段之一,但PCI术后可能发生的支架内再狭窄(in-stent restenosis,ISR)仍然困扰着临床医生.虽然药物洗脱支架的问世极大地降低了ISR 的发生率,但据统计再狭窄率仍高达5% ~20%[1-3].目前ISR常用的处理方法包括支架内支架再植入术、单纯球囊扩张术、切割球囊、旋磨术等[4].近年来准分子激光冠状动脉斑块消融术(excimer laser coronary atherectomy,ELCA)也逐渐开始应用于复杂冠状动脉介入的辅助治疗,并取得良好效果[5].2017年7月浙江大学医学院附属第一医院心内科收治了冠状动脉支架内重度狭窄伴消化道反复出血患者一例,后成功行准分子激光消融治疗,效果良好,现报告如下.

谷氨酰胺强化肠外营养支持对重症患者临床结局影响的Meta分析

目的 系统评价谷氨酰胺强化肠外营养支持治疗对重症患者免疫营养功能及临床结局的影响.方法 检索Embase、Medline、Cochrane Central Register of Controlled Trials、The Cochrane Database of Systematic Reviews、中国期刊全文数据库、维普中文科技期刊全文数据库、万方数据库及中国生物医学文献数据库自建库至2016年12月期间研究常规肠外营养(常规组)与谷氨酰胺强化肠外营养(干预组)支持治疗对ICU重症患者病死率、感染发生率及住院时间等临床结局影响的随机对照试验.由2名研究者按照纳入及排除标准独立进行文献筛选、提取和质量评估后,使用Review Manager 5.2.0分析软件进行Meta分析.结果 共纳入18项随机对照试验,包括1708例患者.Meta分析结果显示,应用谷氨酰胺强化的肠外营养,可以显著降低重症患者住院病死率[RR=0.63,95%CI(0.47,0.84),Z=3.16,P=0.002],但两组间ICU病死率[RR=1.00,95%CI(0.83,1.22),Z=0.04,P=0.97]、6个月病死率[RR=0.95,95%CI(0.67,1.34),Z=0.29, P=0.77]比较,差异均无统计学意义;且肺部感染发生率[RR=0.91,95%CI(0.62,1.32),Z=0.52, P=0.61]、尿路感染发生率 [RR=0.79,95%CI(0.37,1.67),Z=0.62,P=0.54]、菌血症 [RR=0.52,95%CI(0.21,1.33),Z=1.36,P=0.18]、导管相关感染 [RR=0.69,95%CI(0.32,1.49),Z=0.95,P=0.34]及其他感染[RR=0.94,95%CI(0.80,1.10),Z=0.81,P=0.42]比较,差异亦均无统计学意义;同时,两组患者间住院时间[WMD =-0.26,95%CI(-3.81,3.28),Z = 0.15,P = 0.88]及住ICU时间[WMD =-1.04,95%CI(3.95,1.87),Z=0.70,P=0.48]比较,差异均无统计学意义.结论 使用谷氨酰胺强化的肠外营养支持疗法不能改善重症患者临床结局.

《中华危重症医学杂志(电子版)》稿约