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氟对原代培养大鼠肝细胞的氧化损伤作用研究
目的探讨氟对原代培养大鼠肝细胞的氧化损伤作用.方法采用半原位酶消化法分离大鼠肝细胞,氟化物染毒24 h后用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,检测培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量.结果氟对大鼠肝细胞具有明显的毒性作用,表现为细胞存活率下降,ALT、AST的活性升高,MDA含量增加.结论脂质过氧化引起的氧化损伤作用是氟致原代培养大鼠肝细胞毒性的主要原因.
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GSH/GSSG在染氟成骨细胞中的变化
目的 通过对谷胱甘肽(GSH)代谢研究来探索氟对成骨细胞氧化应激的影响.方法 取材昆明小鼠乳鼠颅骨来源的成骨细胞进行原代培养并传至第3代,用高效液相色谱仪对不同浓度染氟的成骨细胞内GSH、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量进行检测.结果 在含氟1.0、2.0 mgF-/L培养液中作用24-72 h,成骨细胞的GSH水平多有不同程度的增高,在12.0、20.0 mgF-/L氟水平作用下,GSH水平达到高;染氟24-72 h的成骨细胞在0.5、1.0、2.0 mgF-/L培养液孵育下,细胞的GSSG水平有不同程度的下降(除48 h的0.5、1.0 mgF-/L组细胞外);暴露于氟24 h的成骨细胞在含氟0.5、2.0 mgF-/L培养液孵育下,细胞的GSH/GSSG比值有不同程度的提高;氟暴露48 h组,成骨细胞在2.0、8.0mgF-/L氟水平作用下,GSH/GSSG比值亦明显增加.结论 低剂量氟作用下GSH含量和GSH/GSSG比值增加,而GSSG水平下降,说明成骨细胞处于活跃的抗氧化状态,进一步证明了成骨细胞内氧化应激水平明显增强.
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氟化钠对血管平滑肌细胞增殖活性的影响
目的研究氟对血管平滑肌细胞增殖活力的影响.方法对大鼠胸主动脉平滑肌细胞采用组织块培养法.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性和生化方法检测细胞内蛋白和丙二醛(MDA)含量.结果加氟培养胸主动脉平滑肌细胞48、72 h时间段在1.0～15.0 mg F-/L组随着投氟量的增加,细胞增殖活性有所降低,且在25.0mg F-/L组各时间段细胞增殖活性降低为明显.在同一时间段MDA含量随着投氟浓度的增加而增加,72 h时间段的MDA含量较24 h时间段的相同氟作用浓度下MDA明显下降.结论随着氟作用时间的延长和浓度的增加对血管平滑肌细胞增殖活性降低显著,且氧化应激在高氟情况下对细胞毒性中有重要作用.
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氟化钠对体外培养大鼠破骨细胞的影响
目的:探讨氟对体外培养的破骨细胞的作用.方法:体外分离培养大鼠乳鼠四肢长骨破骨细胞,于分离后2 h加入氟化钠(NaF)4、6、8和10 mg@L-1,对其进行形态学的动态观察.结果:破骨细胞形态多样,含多个核,体外培养存活时间短,24 h大部分细胞凋亡.加入NaF后,破骨细胞数目减少,体积变小,空泡增多,甚至崩解坏死.结论:在一定的剂量和时间范围内,氟对体外培养的破骨细胞有直接的损伤作用.
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内质网应激在氟中毒大鼠肾损害中的作用
目的:初步观察内质网应激在氟中毒大鼠肾组织中的变化,探索内质网应激在氟中毒肾损伤机制中的作用.方法:48只Wistar大鼠按体重平均分成4组:常食对照组、常食加氟组、低钙对照组和低钙加氟组;分别给予常食和低钙饮食.加氟组大鼠饮水中投氟化钠(NaF)(221 mg·L~(-1))3个月.实验结束后,取一侧肾脏制作病理切片,在光镜下观察形态学变化.取各组大鼠50 mg肾组织抽提总RNA,利用RT-PCR技术分析内质网应激相关基因Grp78、Xbp1、CHOP和PDI的表达水平.结果:光镜下可见,常食加氟组大鼠肾组织以近端小管和远端小管上皮细胞水肿和空泡变性为主;低钙加氟组大鼠肾组织近端小管和远端小管上皮细胞呈现水肿和空泡变性,伴有散在的坏死、轻度再生修复和肾间质充血;常食对照组和低钙对照组大鼠肾组织无明显变化.RT-PCR产物经半定量分析显示,低钙加氟组和常食加氟组大鼠肾组织Xbp1的表达较相应对照组明显增强(P<0.05),低钙加氟组大鼠肾组织Grp78 mRNA表达较常食加氟组和低钙对照组明显增强(P<0.05或P<0.01);而低钙加氟组大鼠肾组织PDI的表达较常食加氟组明显下降(P<0.05).各组大鼠肾组织CHOP表达差异无显著性(P>O.05).结论:过量氟可造成肾组织损伤,低钙营养进一步加剧了氟对肾的损伤作用,而内质网应激很可能参与该损伤机制.
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氟化钠与氯化钠溶液含漱预防老年人根面龋的疗效比较
1 资料与方法选择2005年1月-2008年1月来本院门诊就诊的182例牙龈萎缩根面暴露的老年人作为研究对象,其中男性101例,女性81例,年龄60～72岁,随机分为实验组和对照组各91例.实验组和对照组均按常规方法记录牙龈退缩数和根面龋坏数,实验组每日使用1次0.05%氟化钠溶液(本院制剂室制剂)作为漱口水含漱,对照组使用0.09%氯化钠溶液(长春豪邦药业有限公司生产,国药准字20023482)作为漱口水含漱,每次用量均为10 mL,每次含漱1 min,漱口后半小时内不进食、不饮水.
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氟透入、氟含漱效果观察
龋病是学生中的常见病,发病率较高,仅靠治疗是被动的,应该积极开展预防工作.目前利用氟化物含漱及透入达到防龋目的,是当前国内外开展群体预防龋齿较为先进的方法.为便于对防龋效果进行对比观察,我们按群体随机化原则分为3个组:一组采用氟离子透入防龋,一组采用氟化钠含漱防龋,另一组为空白组(不加任何防龋措施)现将结果报告如下.
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Gluma脱敏剂对牙本质过敏症疗效的Meta分析
目的:运用Meta分析的方法,科学评价Gluma脱敏剂对牙本质过敏症的临床疗效,指导临床治疗.方法:检索中国生物医学文献数据库和Ovid medline数据库中关于Gluma脱敏剂和75％氟化钠甘油对牙本质过敏症治疗研究的文献,通过纳入和排除标准筛选文献,评价文献质量,提取数据,并进行Meta分析.结果:7个试验研究共1898颗牙齿纳入分析,合并RR值为1.51,95％可信区间为[1.44～1.59],合并效应检验值Z=15.68,P＜0.00001.结论:表明Gluma脱敏剂治疗牙本质过敏症效果优于75％氧化钠甘油.
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亚慢性染氟对雌性小鼠雌激素受体mRNA表达的影响
目的 观察亚慢性染氟(氟化钠)对雌性小鼠雌激素受体(ER)mRNA表达的影响.方法 雌性小鼠40只,按体质量随机分成4组:对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组10只.分别饮用0、1、5、25 mg/L氟化钠溶液,喂养12周后,RT-PCR法检测小鼠卵巢中ERα、ERβ mRNA表达.结果 对照组、低氟组、中氟组、高氟组小鼠卵巢组织ERα、ERβ mRNA表达分别为0.7028±0.0474、0.7195±0.0552、0.6479±0.0590、0.5684±0.0513,0.8418±0.0131、0.7729±0.0974、0.7610±0.0984、0.8026±0.0234.其中高氟组小鼠卵巢组织ERαmRNA表达与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 亚慢性染氟可导致卵巢组织中雌激素受体表达下降,后者对雌性小鼠的生殖发育可能有一定的影响作用.
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细胞内钙离子和活性氧在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤中的关系
目的 探讨细胞内钙离子水平([Ca2+]1)和活性氧(ROS)在氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤中的关系.方法 用40 mg/L NaF对SH-SY5Y细胞进行染毒,检测在染毒不同时间(0、3、6、12、18、24 h)的[Ca2+]1和ROS水平的变化,选择佳染毒时间;观察佳染毒时间(12 h)40 mg/L NaF与38.23 mg/L BAPTA-AM或380.40 mg/L乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)或16.32 mg/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)共同和单独作用下,[Ca2+]1、细胞内ROS和培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平变化.结果 染毒3、6、12、18、24 h,[Ca2+]1水平(5620.0±226.3、4775.5±85.6、3312.3±87.5、3047.0±75.0、2717.0±66.5),与0 h(2115.0±24.0)比较,均明显升高(P<0.05);ROS水平(4449.53±324.61、7463.07±117.43、20 227.33±178.04、8817.56±200.13、7975.61±92.90),与0 h(4098.01±21.22)比较,除3 h外也明显升高(P<0.05);[Ca2+]1、ROS达到峰值的时间分别为3、12 h.[Ca2+]1、LDH水平,NaF组[3279.5±94.0,(1057.50±64.35)U/L]、NaF+NAC组[3583.0±350.7,(561.02±85.50)U/L]、NaF+EGTA组[3701.5±157.7,(1074.50±86.97)U/L]、NaF+BAPTA-AM组[2766.5±38.9,(521.43±40.80)U/L],与对照组[2022.5±118.1,(186.97±8.73)U/L]比较,均有明显升高(P<0.05);ROS水平,NaF组(19 003.04±332.34)、NaF+EGTA组(19 170.12±95.46)明显高于对照组(4060.98±145.66,P<0.05).在财ROS和LDH的影响中,NaF与NAC之间存在拮抗作用(F值分别为976.11、43.54,P<0.05).在对[Ca2+]1、ROS和LDH水平的影响中,NaF与BAPTA-AM之间存在拮抗作用(F值分别为15.65、1515.53、115.00.P<0.05).结论 NaF诱导SH-SY5Y细胞损伤的机制可能是通过胞内钙库的释放而提高[Ca2+]1水平,升高的[Ca2+]1促使ROS的产生,二者共同对细胞产生毒性,导致细胞培养液中LDH水平升高.
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不同剂量氟化钠对Balb/c小鼠软骨损害及白细胞介素-6表达的影响
目的 探讨不同剂量氟化钠对Balb/c小鼠软骨损害以及对小鼠血清、软骨组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的影响.方法 64只5周龄雄性Balb/c小鼠,按体重(18 ～ 21 g)采用随机数字表法分成4组,每组16只.对照组饮用蒸馏水,低、中、高氟组分别饮用含氟量为25、50、100 mg/L的蒸馏水.每周称量1次小鼠体重,饲养3个月建立饮水型氟中毒模型.处死小鼠,氟离子选择电极法检测脊柱骨氟含量;光镜下观察膝关节软骨、骺板软骨的病理变化;酶联免疫吸附法检测血清IL-6和可溶性IL-6受体(sIL-6R)含量;免疫组化法检测膝关节软骨、骺板软骨IL-6蛋白表达情况.结果 与其他3组比较,高氟组小鼠自染氟第6周,体重开始下降(P均＜ 0.05);与对照组和低氟组比较,中氟组小鼠自染氟第7周,体重开始下降(P均＜0.05);与对照组比较,低氟组小鼠在整个染氟过程中体重变化不明显(P均＞ 0.05).对照组和低、中、高氟组小鼠骨氟含量[(842.46±89.27)、(1 705.05±105.76)、(2 614.17±156.10)、(3444.58±233.69)mg/kg]组间比较差异有统计学意义(F=309.716,P＜ 0.05),且随着染氟剂量的增加而增加(P均＜0.05).光镜下,对照组软骨组织结构正常;染氟组关节软骨、骺板软骨呈现不同程度的软骨内骨化,且随着染氟剂量的增加而加重.对照组和低、中、高氟组小鼠血清IL-6水平[(5.98±1.43)、(7.54±2.16)、(5.25±1.97)、(6.31±1.36)ng/L]组间比较差异有统计学意义(F=3.840,P＜0.05),其中低氟组明显高于对照组(P＜0.05),中氟组明显低于低氟组(P＜0.05).对照组和低、中、高氟组小鼠血清slL-6R水平[(0.83±0.20)、(0.93±0.23)、(0.82±0.27)、(0.92±0.28)μg/L]组间比较差异无统计学意义(F=0.738,P＞0.05).免疫组化结果显示,各组小鼠关节软骨全层细胞均表达IL-6,其中中层软骨细胞表达明显,骺板软骨只有肥大区软骨细胞表达IL-6;与其他各组比较,低氟组软骨组织IL-6阳性细胞数多,染色深.结论 不同剂量氟化钠不仅能造成Balb/c小鼠软骨损伤,还能改变小鼠血清及软骨组织中IL-6的表达,提示IL-6可能参与氟导致的软骨损伤.
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氟中毒大鼠骨组织中内质网应激实验研究
目的 观察内质网应激在氟中毒大鼠骨组织中的变化,探索内质网应激在氟骨症发病机制中的可能作用.方法 48只Wistar大鼠,按体质量分成4组,每组12只.对照组和低钙组分别饲以常食饲料(含钙量为0.790%)和自制低钙饲料(含钙量为0.063%),饮用自来水(含NaF＜1 mg/L);高氟组和低钙高氟组分别饲以常食饲料和自制低钙饲料,饮用加氟(NaF,221 mg/L)自来水.实验期间动物自由进食、进水,每周测体质量1次.实验期3个月.生化方法检测大鼠血清氧化应激酶、尿酸(URIC)和碱性磷酸酶(ALP)活性.抽提大鼠一侧股骨骨干的总RNA,利用RT-PCR技术分析内质网应激相关基因BIP、Xbp1、CHOP和PDI的表达水平.结果 低钙高氟组血清丙二醛(MDA)水平高于对照组[(14.74±3.11)μmol/L比(10.15±1.96)μmol/L,P＜0.05];高氟组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性高于对照组[(3.87±0.41)×103 U/L比(2.85±0.55)×103U/L,P＜0.05];高氟组和低钙高氟组的尿酸(URIC)分别低于对照组和低钙组[(73.95±9.52)μmol/L比(110.43±25.48)μmol/L,(54.32±22.09)μmol/L比(101.71±17.01)μmol/L/L,P＜0.05].低钙高氟组大鼠的ALP活性高于对照组[(24.77±4.57)×103 U/L比(12.91±3.97)×103 U/L,P＜0.01)].低钙组和低钙高氟组BIP/GAPDH的表达高于对照组(1.38±0.24、1.35±0.12比1.14±0.06,P＜0.05).低钙高氟组的Xbp1/GAPDH的表达高于对照组和低钙组(1.48±0.20比1.02±0.25、1.07±0.25,P＜0.01);低钙高氟组的CHOP/GAPDH的表达高于对照组(0.84±0.18比0.52±0.07,P＜0.05).结论 氟中毒大鼠机体内氧化应激态和骨形成有明显的增强,并伴有骨组织细胞的内质网应激.说明内质网应激与氧化应激很可能都参与了氟骨症的发病机制.
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氟对人成骨细胞TM9SF1和Ras mRNA表达的影响
目的 探讨氟对体外培养人成骨细胞中TM9SF1、Ras mRNA表达的影响.方法 采用原代细胞培养的方法培养人成骨细胞.取早期引产胎儿的骨组织,胶原酶消化、分离成骨细胞,加入DMEM培养液进行传代培养.将传代后的人成骨细胞按染氟剂量不同分为0(对照)、2.5、5.0、10.0、20.0 mg/L组.染氟培养10 d后,光镜下观察氟对人成骨细胞形态的影响:实时定量(RT)PCR法检测不同染氟剂量对体外培养人成骨细胞TM9SF1、Ras mRNA的表达影响.结果 光镜下对照组和2.5 mg/L组人成骨细咆呈长梭形、三角形或不规则多边形,有突起伸出,胞质透亮、饱满,相邻细胞彼此贴靠;20.0 mg/L组人成骨细胞呈长梭形或不规则多边形,细胞数目明显减少、体积变大,一些细胞胞质出现了多个小空泡及颗粒样物质.不同染氟剂量对人成骨细胞TM9SF1 mRNA表达的影响,组间比较差异有统计学意义(F=322.82,P<0.01);其中2.5 mg/L组(9326.0±115.97)表达高,随着染氟剂量增加,TM9SF1 mRNA表达降低,5.0、10.0、20.0 mg/L组(6495.0±323.9、4387.5±545.2、5962.5±536.7)与对照组(9221.0±107.5)比较,差异有统计学意义(P均<0.01).不同染氟剂量对人成骨细胞Ras mRNA表达的影响,组间比较差异有统计学意义(F=703.28,P<0.01);其中对照组表达高,随着染毒剂量的增加,Ras mRNA表达减少,2.5、5.0、10.0、20.0 mg/L组(6144.5±270.82、5603.5±88.39、3181.0±159.81、4067.5±37.4)与对照组(6571.0 ±196.58)比较,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 氟影响人成骨细胞TM9SF1、Ras mRNA的表达,表达量的高低与染氟剂量有关.
关键词： 氟化钠 成骨细胞 TM9SF1 mRNA Ras mRNA -
投氟不同时间大鼠血清氧化应激和碱性磷酸酶活性的变化研究
目的 观察过量氟处理的大鼠在不同时间内氧化应激态与碱性磷酸酶(ALP)活性的变化.方法 24只Wistar大鼠,按体质量随机分成对照组、高氟组,每组12只.对照组大鼠饮用自来水(氟化钠<1 mg/L),高氟组大鼠饮用自来水中加入剂量为221 ms/L的氟化钠.实验期间动物自由进食、饮水,每周测体质量1次.实验时间分别为l、4、 8、 12周.通过生化方法检测大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、尿酸和ALP活性.结果 投氟与时间两因素对ALP活性影响有交互作用(F=4.690,P<0.05).投氟1周与12周大鼠血清的ALP活性[(19.29±3.69)、(15.72±0.79)kU/L]较对照组[(14.08±1.99)、(12.91±3.97)kU/L]明显升高(P均<0.05);投氟1周和4周大鼠血清MDA[(13.37±4.38)、(11.82±2.08)μmol/L]较对照组[(8.75±3.24)、(7.42±2.62)μmol/L]明显增高(P均<0.05);高氟组SOD、GPx与对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05);投氟1、4周大鼠血清尿酸[(89.53±13.21)、(88.47±19.78)μmol/L]较对照组[(77.79±11.43)、(65.42±13.42)μmol/L]明显增高(P均<0.05),而投氟8、12周大鼠尿酸[(67.21±9.44)、(73.95±9.52)μmol/L]低于对照组[(77.79±11.43)、(65.42±13.42)μmol/L,P均<0.05].结论 投与过量氟大鼠的ALP活性变化具有一定的时间依赖性;而投氟刺激大鼠氧化应激水平增强,这种刺激与投氟时间没有明显关联.
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氟对鼠成骨细胞BMP表达的影响及锌的拮抗作用
目的研究氟对大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白(BMP-2)表达的影响以及锌制剂能否拮抗氟化物的作用.方法体外培养SD乳鼠成骨细胞,给予不同剂量氟或/和锌制剂,测定细胞增殖及AKP活性,通过免疫组化方法对各组成骨细胞表达BMP-2进行定量分析.结果10-4mol/LZnSO4及10-5mol/LNaF能促进细胞增殖,增强AKP活性;10-3mol/L NaF则抑制细胞增殖及AKP活性;高氟(10-3mol/L)可促进BMP-2表达,但10-4mo1/L ZnSO4加入高氟组后未发现有抑制BMP-2表达的作用.结论高氟可促进成骨细胞BMP-2表达,锌制剂能拮抗高氟的毒性作用,但对BMP-2的表达无拮抗作用.
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氟对大鼠成骨细胞Runx2表达的影响
目的 研究氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Runx2表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,按染氟剂量分为0(对照组)、1、2.4 mg/L 4个水平,分别在48、72 h后,提取RNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PcR)方法检测Runx2 mRNA表达;采用酶联免疫吸附试验(EUSA)方法检测培养液上清中的Runx2蛋白质.结果 Wistar大鼠乳鼠成骨细胞在体外染氟培养48 h后,1、2、4mg/L染氟水平下Runx2的mRNA表达(0.613±0.055、0.773±0.070、0.775±0.070)与对照组(0.482±0.043)比较.差异均有统计学意义(P<0.05);在染氟培养72 h后,1、2,4 mg/L染氟水平和对照组的Runx2 mRNA表达量分别为0.969±0.048、1.229±0.061、1.255±0.063、0.724±0.036,任意两组问比较,差异均有统计学意义(P<0.05).各染氟组Runx2mRNA表达,72 h组均高于铝hm(P<0.05);染氟剂量和染氟时间有交互作用(F=189.20,P<0.05).在染氟培养48 h后,1、2、4 mg/L染氟水平下的Runx2蛋白质表达(0.141±0.007、0.143±0.008、0.143±0.011)与对照组(0.129±0.012)比较,差异有统计学意义(P<0.05);在染氟培养72 h后,1、2、4 mg/L染氟水平下的Runx2蛋白质表达(0.156±0.014、0.168±0.018、0.162±0.010)与对照组(0.137±0.016)比较.差异有统计学意义(P<0.05);各染氟剂量Rung2蛋白质表达.72 h组均高于48 h组(P<0.05),染氟剂量和染氟时间之间无交互作用(F=2.22,P0.05).结论 氟可促进成骨细胞Runx2的mRNA和蛋白质表达,与染氟的剂量以及作用时间有关.
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氟对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达的影响
目的研究不同剂量的氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Ⅰ型胶原表达的影响.方法体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,给予不同剂量的氟,提取RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅰ型胶原mRNA;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测培养液上清中的Ⅰ型胶原蛋白质.结果与对照组相比,1、2及4 mg/L F-均能促进Ⅰ型胶原表达,但在蛋白质表达方面培养48 h后只有2、4 mg/L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P＜0.05),而在培养72 h后各加氟组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01);在mRNA表达方面培养48 h后只有2 mg/L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P＜0.01),而在培养72 h后2 mg/L F-和4 mg/L F-组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01).结论氟可促进成骨细胞Ⅰ型胶原的表达,且与氟化物水平以及作用时间有关.
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氟化钠对原代培养大鼠甲状腺细胞形态学的影响
目的 观察不同染氟(氟化钠)剂量对体外培养原代SD大鼠甲状腺细胞形态学的影响,为探讨氟引起甲状腺组织损伤提供理论依据.方法 采用原代细胞培养方法,体外培养SD大鼠甲状腺细胞,96 h后收集对数生长期的细胞,将细胞密度调整约5.0×108个/L;取5 ml(约 2.5×106个细胞)加入到6孔培养板中,培养12h,按不同染氟剂量分为0(对照)、10、100、1000 μmol/L组,每组设6个重复样.相差显微镜下观察甲状腺细胞的形态变化.48 h后收集细胞,扫描电镜下进行甲状腺形态学观察和分析.结果 相差显微镜下,对照组甲状腺细胞透明度良好.聚集成群,贴壁良好,细胞存活率在90%以上;染氟组甲状腺细胞有大量悬浮,透明度差,细胞存活率约55%.扫描电镜下,可见对照组甲状腺细胞胞膜完整,细胞之间嵌合紧密,界限清晰,分裂良好;10、100μmol/L组甲状腺细胞明显皱缩和变形;1000μmo/L组甲状腺细胞胞膜不完整,集结在一起生长的细胞间界限不明显,有的细胞发生明显皱缩,有的细胞则完全破碎.结论 氟影响甲状腺细胞的生长和发育,使细胞的形态发生改变,损伤程度与剂量有关.
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氟对培养乳兔肋软骨中细胞柱形态和细胞凋亡的影响
目的观察氟对体外培养乳兔肋软骨的直接作用,探讨氟对软骨细胞形态和细胞凋亡的影响.方法采用乳兔的肋软骨体外培养方法,实验分为处理组和对照组.处理组根据加氟浓度的高低(20μmol/L、320μmol/L),加或不加SOD(0.006 U/L)分为4组.培养18 d后观察软骨细胞柱的形态学变化并做计量学分析;观察细胞超微结构变化;用TUNEL法检测细胞凋亡并计算凋亡指数(AI,%);测定细胞生长液中H2O2和NO水平.结果①光镜下,高氟组软骨增生区的软骨细胞数量增多,细胞柱较对照组明显增长,但变细,其余各处理组细胞柱也变细长.与对照组相比,2个单纯加氟组软骨细胞柱长度、面积和周长增加,细胞柱横径减少;2个氟+SOD组软骨细胞柱的改变与2个单纯加氟组相比程度明显减轻.电镜下,4组均有凋亡的特征性改变,以单纯高氟组为多.②与对照组相比,高氟组细胞凋亡指数(AI)明显增高(P＜0.01);与单纯加氟组相比,加SOD组细胞AI值明显下降(P＜0.05,P＜0.01).③H2O2水平在2个高氟组与对照组比较,差异有显著意义(P＜0.05,P＜0.01).除低氟+SOD组外,其余各组之NO浓度均升高,和对照组相比,差异有显著意义(P＜0.01,P＜0.05).结论①氟可引起发育过程中的软骨细胞柱形态改变,损害细胞的超微结构.②氟可引起乳兔肋软骨中细胞凋亡增加,抗氧化剂SOD可以抑制氟的诱导凋亡作用.③氟诱导的软骨细胞凋亡,部分是通过氧自由基在起作用.
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氟对软骨细胞与成骨细胞凋亡及H2O2、SOD、NO的影响
目的研究氟对体外培养的软骨细胞、成骨细胞凋亡及H2O2、SOD、NO的影响.方法采用流式细胞仪对细胞周期进行分析及测定凋亡细胞的百分比;化学方法检测细胞培养液中的H2O2、SOD、NO;透射电镜观察软骨细胞超微结构.结果软骨细胞:(1)不同剂量的氟均诱导细胞凋亡,培养基中的H2O2、NO均水平高于对照组,加SOD可使H2O2、细胞凋亡百分率明显下降,NaF 20、160μmol/L可使G2/M期细胞升高.(2)NaF 320μmol/L可使细胞超微结构损伤,加SOD可拮抗氟的损伤作用.成骨细胞:与对照组相比(1)加入不同剂量NaF,培养基中的SOD活性降低.但仅在加入160、240μmol/L,培养基中H2O2升高,NO亦同时升高.(2)NaF 400μmol/L可诱导成骨细胞凋亡,同时使G0/G1期细胞增多,240、400μmol/L可使G2/M期细胞减少.结论(1)低、中剂量的氟可促进软骨细胞、成骨细胞凋亡,损害细胞超微结构.与此同时培养物中H2O2升高,SOD活性降低,表明细胞凋亡及损伤与氧化应激有关.此外,NO也升高,可能也起一定作用.氟对细胞周期的影响:对软骨细胞主要作用于G2/M期,对成骨细胞可同时作用于G0/G1及G2/M期;(2)一定量的SOD可明显拮抗氟促进的H2O2释放及细胞凋亡,对细胞有保护作用.(3)一定剂量的氟促使软骨细胞、成骨细胞凋亡,同时也促进成骨细胞增殖.可能细胞凋亡产物刺激细胞增殖过程,是氟骨症增殖病变发生机制之一,NO可能也在其中起一定作用.
