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妊娠肝内胆汁淤积症患者的胎儿淋巴细胞研究
目的 探讨胎儿淋巴细胞在妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)发病中的作用.方法 采用单向混合淋巴细胞反应法,检测20例ICP患者(ICP组)及20例正常孕妇(对照组)的脐血胎儿淋巴细胞与母体外周血已灭活的淋巴细胞、皮肤组织可溶性抗原、蜕膜组织可溶性抗原的增殖反应情况.结果 (1)ICP组脐血胎儿淋巴细胞与母体已灭活的淋巴细胞混合反应中,胎儿淋巴细胞的增殖反应程度为2.75±0.36,显著高于对照组的1.45±0.19,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)ICP组脐血胎儿淋巴细胞与母体蜕膜组织可溶性抗原混合反应中,胎儿淋巴细胞的增殖反应程度为1.45±0.19,显著高于对照组的0.67±0.24,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)ICP组脐血胎儿淋巴细胞与母体皮肤组织可溶性抗原反应中,胎儿淋巴细胞的增殖反应程度为1.22±0.44,显著高于对照组的0.66±0.27,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胎儿淋巴细胞可能是ICP发病过程中的主要效应细胞之一;母-胎间免疫失衡是ICP发病的重要机制之一.
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妊娠肝内胆汁淤积症患者脐带血管病变及血管活性物质的表达与胎儿窘迫发生的关系
目的 探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者脐带血管病理改变、脐带血管活性物质表达的变化与胎儿窘迫发生的关系.方法 应用HE染色法制片,光镜下观察25例ICP伴有胎儿窘迫(ICP窘迫组)、25例ICP不伴胎儿窘迫(ICP对照组)以及27例正常妊娠妇女(正常妊娠组)新生儿脐带血管病理改变;应用免疫组化辣根过氧化物酶-生物素标记(SABC)法测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮素1(ET-1)蛋白在各组脐静脉内皮细胞中的表达量,以平均吸光度(A)值表示;应用循环酶法测定脐静脉血总胆酸水平并进行相关性分析.结果 (1)脐静脉血总胆酸水平:ICP窘迫组为(19.0±2.3)μmol/L,ICP对照组为(9.0±1.7)μmol/L,正常妊娠组为(4.4±1.5)μmol/L,各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)脐静脉病理改变:ICP患者脐静脉内皮细胞单层扁平结构丧失,细胞向管腔耸立,梭形排列,细胞排列不均甚至脱落.ICP窘迫组患者脐静脉内皮细胞出现此病理改变的发生率(92%,23/25)明显高于ICP对照组(68%,17/25),差异有统计学意义(P＜0.05).(3)脐静脉内皮细胞中eNOS蛋白表达量:ICP窘迫组为0.09±0.06,ICP对照组为0.21±0.08,正常妊娠组为0.47±0.07,各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).脐静脉内皮细胞中iNOS蛋白表达量:ICP窘迫组为0.20±0.04,ICP对照组为0.21±0.05,正常妊娠组为0.26±0.04,两ICP组分别与正常妊娠组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);而ICP窘迫组与ICP对照组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(4)脐静脉内皮细胞中ET-1蛋白表达量:ICP窘迫组为0.49±0.08,ICP对照组为0.32±0.07,正常妊娠组为0.14±0.06,两ICP组分别与正常妊娠组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).(5)脐静脉血总胆酸水平与其病理改变的关系:脐静脉血总胆酸水平升高是脐静脉病理改变的危险因素;且与脐血管内皮细胞eNOS、iNOS的蛋白表达量呈负相关关系(r1=-0.88、r2=-0.45,P＜0.01);与脐血管内皮细胞ET-1蛋白的表达量呈正相关关系(r3=0.79,P＜0.01).结论 ICP患者脐静脉血高胆酸状态可能损伤脐静脉内皮细胞,且与其eNOS、iNOS蛋白表达下调、ET-1蛋白表达上调有关,脐静脉的这些改变可能与ICP患者胎儿窘迫的发生有关.
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细胞因子信号传导负调控因子3在妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇胎盘组织中的表达及其意义
目的 探讨细胞因子信号传导负调控因子3(SOCS3)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)孕妇胎盘组织中的表达及其意义.方法 选择2008年4月至2009年1月在中南大学湘雅二医院产科剖宫产分娩的ICP孕妇44例为ICP组(其中重型21例、轻型23例),选择同期健康孕妇25例为对照组.采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法测定SOCS3在孕妇胎盘组织中的定位与表达水平(以阳性细胞率及平均灰度值表示),酶联免疫吸附试验测定胎盘组织中自细胞介素10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 (1)SOCS3在两组孕妇胎盘滋养细胞中均有表达,SOCS3主要表达于胎盘滋养细胞胞质中,呈现淡黄色、棕黄色或棕褐色染色颗粒,其中在ICP组重型孕妇胎盘滋养细胞中呈弱阳性表达,在轻型孕妇胎盘滋养细胞中呈阳性表达,在对照组孕妇胎盘滋养细胞中呈强阳性表达;而在滋养细胞的细胞核和细胞膜上基本无表达.(2)ICP组重型孕妇胎盘滋养细胞中SOCS3阳性细胞率为(0.15±0.08)%,明显低于对照组的(0.69±0.12)%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);也明显低于ICP组轻型孕妇的(0.42±0.09)%,两者比较,差异也有统计学意义(P<0.01).ICP组重型孕妇胎盘滋养细胞中SOCS3平均灰度值为204±7,明显高于对照组的81±7,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);也明显高于轻型孕妇的147±7,两者比较,差异也有统计学意义(P<0.01).(3)ICP组重型孕妇胎盘滋养细胞中IL-10水平为(1.16±0.68)g/L,明显低于对照组的(1.39±0.08)μg/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);也明显低于轻型孕妇的(1.22±0.75)μg/L,两者比较,差异也有统计学意义(P<0.01).(4)ICP组重型孕妇胎盘组织滋养细胞中IFN-γ水平为(16.8±0.7)μg/L、IFN-γ/IL-10比值为16.02±2.79,分别高于对照组的(10.5±0.3)μg/L及8.56±0.14,分别比较,差异有统计学意义(P<0.01);也分别高于ICP组轻型孕妇的(13.4±0.5)μg/L及8.56±0.14,两者比较,差异也有统计学意义(P<0.01).(5)ICP组轻型及重型孕妇胎盘滋养细胞中SOCS3表达阳性细胞率与胎盘滋养细胞中IFN-γ/IL-10比值呈负相关(r=-0.685及-0.702,P<0.01),而SOCS3平均灰度值与IFN-γ/IL-10比值呈正相关(r=0.621及0.891,P<0.01).结论 (1)SOCS3在ICP孕妇胎盘组织中呈低表达,而且病情越重降低越明显,提示SOCS3可能参与了ICP的发病,并且与病情进展有关.(2)ICP胎盘组织中SOCS3表达与胎盘组织中IFN-γ/IL-10比值呈负相关,提示SOCS3可能在ICP患者细胞因子免疫调节中起了一定作用.
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CD4+CDhigh25调节性T淋巴细胞在妊娠肝内胆汁淤积症发病中的作用
目的 探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者外周血与蜕膜组织CD4+CD25+凋节性T淋巴细胞(Treg细胞)及CD4+CD25hJigh细胞在ICP发病中的作用.方法 采用流式细胞仪检测30例ICP患者(ICP组,其中轻度15例,重度15例)及28例正常晚期妊娠妇女(对照组)外周血和蜕膜组织CD4+CD25+Treg细胞及CD4+CD25hJigh细胞占CD+T淋巴细胞的百分率,分析其与ICP发病的关系.结果 ICP组外周血CD4+CD25+Treg细胞百分率为(7.96±1.32)%,CD4+CD25high细胞了百分率为(0.78±0.22)%,均低于对照组[(17.05±2.86)%、(1.71±0.69)%],分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);ICP组蜕膜组织CD4+CD25+Treg细胞百分率为(17.18±2.27)%,CD+4CD25highTreg细胞百分率为(2.25±0.89)%,也均低于对照组[(32.01±3.88)%、(8.30±1.13)%],分别比较,差异也均有统计学意义(P<0.01).ICP组及对照组蜕膜组织中CD4+CD25+Treg细胞及CD4+CD25highTreg细胞百分率均高于外周血,差异均有统计学意义(P<0.01).ICP组轻度及重度患者外周血CD4+CD25+Treg细胞百分率分别为(8.74±0.96)%、(7.17±1.17)%,CD4+CD25hiithTreg细胞百分率分别为(0.89 ±0.20)%、(0.68±0.19)%,而蜕膜组织CD4+CD25+Treg细胞百分率分别为(18.43 ±1.90)%、(15.94±1.95)%,CD4+CD25highTreg细胞百分率分别为(2.62±0.72)%、(1.87±0.90)%,ICP组外周血及蜕膜组织CD4+CD25high胞及CD4+CD25+Treg细胞百分率随着病情的加重呈下降趋势,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 CD4+CD25+Treg细胞及CD4+CD25+highTreg细胞可能参与ICP的发病过程,并与病情的严重程度密切相关.
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妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘细胞凋亡及调控基因的研究
目的通过观察妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡调控基因p53、bax和 bcl-2在胎盘中的表达,探讨细胞凋亡基因在胎盘细胞凋亡中的作用.方法采用原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法对31例ICP患者(ICP组)的胎盘组织中p53、bax和 bcl-2基因表达及调亡指数进行检测,并以31例正常妊娠妇女的胎盘组织作对照(对照组).结果 (1)ICP组胎盘组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞中细胞凋亡指数分别为(49.1±9.1)%、(46.6±9.8)%、(35.1±9.5)%、(38.7±9.7)%,明显高于对照组的(22.5±6.2)%、(21.6±5.2)%、(17.9±6.2)%、(17.0±4.7)%.两组比较,差异有极显著性(P< 0.01).(2)而调控基因p53的表达,ICP组明显高于对照组,两组比较,差异有极显著性(P< 0.01);bax的表达在两组滋养细胞中比较,差异无显著性(P>0.05).但在合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞中,ICP组明显高于对照组,两组比较,差异有极显著性(P< 0.01);bcl-2的表达在ICP组胎盘组织细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞中,均明显低于对照组(P< 0.01).(3)p53、bax和bcl-2在ICP组合体滋养细胞中的表达分别是(75.9±8.2)%、(65.8±13.8)%、(45.3±11.3)%;在对照组中分别是(58.8±16.1)%、(43.8±13.9)%、(69.8±14.4)%.两组比较,差异有极显著性(P<0.01).结论 (1)ICP患者胎盘组织中细胞凋亡明显增加,说明ICP 患者的胎盘功能减退与细胞凋亡有密切关系.(2)p53, bax基因表达增强及bcl-2表达减弱,是胎盘细胞凋亡的主要调控基因,可能与ICP患者胎盘功能减退有密切关系.
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妊娠肝内胆汁淤积症患者血清甘胆酸水平变化与胎盘细胞凋亡调节基因表达的关系
目的探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者血清甘胆酸水平变化与胎盘细胞凋亡的关系,进一步分析ICP患者胎盘功能减退的可能机制.方法应用放射免疫方法,测定30例ICP患者(ICP组) 及27例正常孕妇(对照组)分娩前血清甘胆酸水平,应用免疫组化方法测定两组孕妇胎盘细胞凋亡调节基因bax和bcl-2的表达.结果 (1)ICP组甘胆酸水平为(51.8±5.9) μmol/L,对照组为(9.4±5.6) μmol/L,两组比较,差异有显著性(P<0.05).(2) ICP组胎盘合体滋养细胞bax阴性2例,弱阳性9例,中等阳性11例,强阳性8例;bcl-2弱阳性12例,中等阳性12例,强阳性6例.对照组bax阴性9例,弱阳性13例,中等阳性4例,强阳性1例;bcl-2弱阳性3例,中等阳性4例,强阳性20例.两组比较,ICP组bax表达阳性率显著高于对照组(P<0.0005), 而bcl-2的表达阳性率又显著低于对照组(P<0.0005).(3)孕妇血甘胆酸水平与胎盘bax表达阳性率呈线性正相关(P<0.005),与胎盘bcl-2表达呈线性负相关(P<0.005).结论 ICP患者血中高水平的甘胆酸使胎盘合体滋养细胞bax基因过度表达,这可能是ICP患者胎盘功能减退的机制之一.
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妊娠肝内胆汁淤积症患者高水平胆汁酸对血管内皮细胞生长因子的作用
目的探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者高水平胆汁酸对血管内皮细胞生长因子(VEGF)的作用及其与胎儿窘迫的关系.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定33例ICP产妇 (ICP组)和30例正常晚期妊娠妇女(对照组)血清中VEGF水平;采用免疫组织化学方法测定两组产妇的胎盘血管密度;采用放射免疫法测定两组产妇的血清胆汁酸水平.结果 (1)ICP组产妇的VEGF水平为(2 072±17) ng/L,胆汁酸水平为(47.9±14.2) ng/L,血管密度为(68±5)个/高倍镜下;对照组产妇VEGF水平为(2 256±30) ng/L,胆汁酸水平为(1.6±0.7) ng/L,血管密度为(74±7)个/高倍镜下.(2)ICP组产妇血清中VEGF水平与胆汁酸水平呈负相关,与胎盘血管密度呈正相关.对照组产妇血清中VEGF水平与胆汁酸水平无相关性,与胎盘血管密度呈正相关.结论 ICP产妇血清中高水平的胆汁酸对血管内皮细胞具有细胞毒性作用,导致内皮细胞分泌VEGF减少,造成ICP患者胎盘毛细血管减少,母儿间物质交换困难.这可能是ICP患者易发生胎儿窘迫及胎死宫内的原因之一.
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妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘合体滋养细胞超微结构的观察与脐静脉血总胆酸水平的测定
目的探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者是否存在胎盘合体滋养细胞超微结构损伤及胎儿胆酸水平的变化.方法选取ICP患者10例(ICP组)和正常孕妇10例(正常组),采用细胞形态学计量方法观察两组孕妇胎盘合体滋养细胞体视学参数变化;采用循环酶法检测两组孕妇分娩胎儿的脐静脉血总胆酸水平.结果 (1)ICP组胎盘合体滋养细胞微绒毛的数目及数密度分别为(21±12)个/视野及(1.9±1.3)μm-3,明显少于正常组的(35±11)个/视野及﹙4.1±3.2﹚μm-3, 两组比较,差异有统计学意义﹙P<0.05﹚;ICP组胎盘合体滋养细胞微绒毛平均体积及表面积密度分别为(0.1200±0.0050)μm3、(2.500±0.600)μm2/μm3,明显大于正常组的(0.0500±0.0010)μm3及(1.300±0.400)μm2/μm3,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)ICP组胎盘合体滋养细胞线粒体的平均体积、表面积密度及体积密度分别为(0.0200±0.0020)μm3、(0.600±0.010)μm2/μm3及(0.0800±0.0090)μm3/μm3,明显大于正常组的(0.0100±0.0050)μm3、(0.500±0.030)μm2/μm3及(0.0500±0.0020)μm3/μm3,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)ICP组胎盘合体滋养细胞内质网的平均体积、表面积密度及体积密度分别为(0.0200±0.0010)μm3、(0.900±0.010)μm2/μm3及(0.0900±0.0050)μm3/μm3,明显大于正常组的(0.0100±0.0030)μm3、(0.500±0.030)μm2/μm3及(0.0500±0.0010)μm3/μm3,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(4)ICP组胎儿脐静脉血总胆酸水平为﹙8.6±3.2)μmol/L,正常组为(4.6±1.5)μmol/L,两组比较,差异有统计学意义﹙P<0.05﹚.结论 ICP患者高水平的胆酸可能损伤胎盘合体滋养细胞的细胞器,影响胎盘对胆酸的运输功能.
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妊娠肝内胆汁淤积症分度诊断和处理的临床意义
目的探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)分度诊断和处理的临床意义.方法将1999年1月至2003年5月,在我院产前检查并诊为ICP的278例患者,应用我院1999年自订的ICP分度标准,根据ICP患者的血清胆红素、肝转氨酶和甘胆酸水平分为轻度与重度ICP.并进行分度诊断和分度处理,观察其妊娠结局与分度诊断前后的围产儿死亡率.结果 (1)轻度ICP患者为192例(轻度组),重度ICP患者为86例(重度组).(2)重度组和轻度组ICP患者终止妊娠的平均孕周分别为(35.8±1.6)周和(37.7±1.9)周,两组比较,差异有极显著性(P<0.01).(3)重度组和轻度组ICP分度诊断后,期待治疗的时间为(10±5)d和(19±6)d,两组比较,差异有极显著性(P<0.001).(4)重度组ICP患者羊水粪染、新生儿窒息和新生儿转入重症监护室的发生率分别为38.4%(33/86)、12.8%(11/86)、30.2%(26/86),明显高于轻度组的9.4%(18/192)、4.2%(8/192)、9.4%(18/192).(5)采用分度诊断前围产儿死亡率为3.9%～6.0%,分度诊断后围产儿死亡率为0.7%～1.2%,两者比较,差异有极显著性(P<0.01).结论对ICP患者进行分度诊断和处理,有助于改善围产儿预后.
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妊娠肝内胆汁淤积症1241例发病特点分析
目的探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)的发病特点.方法采用回顾性分析的方法,对我院1991年1月至2000年12月收治的1241例ICP患者的临床资料进行回顾性系统分析.结果 1241例ICP患者中,多胎妊娠44例(3.5%), 合并妊娠高血压综合征(妊高征)101例(8.1%);126例经产妇中,38例(30.2%)为ICP复发;有发病时间记录的1230例患者的平均发病孕周为32.6周,孕晚期发病有1100例(88.6%);1201例(96.8%)以皮肤瘙痒为首发症状,也有以黄疸(8例,占0.6%)、肝功能异常(28例,占2.3%)等为起始表现者;生化指标中主要以血清总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)升高为主,但大多为轻、中度升高;也有患者TBA、ALT或AST正常(分别占17.7%、15.6%、17.1%),少数患者(35例,3.2%)白蛋白/球蛋白比值倒置.结论 (1)ICP具有复发性,多胎妊娠孕妇更易发病,瘙痒常是ICP显著而且首发的症状,TBA和肝脏转氨酶升高有助于该病的诊断.(2)少数患者发病时临床表现及实验室检查结果均不典型,对此要引起警惕.
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转化生长因子β2对妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘组织分泌肿瘤坏死因子α及γ干扰素的影响
目的探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘组织分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素的影响.方法选取10例ICP患者(ICP组)和10例正常孕妇(对照组)的胎盘组织,通过体外培养后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同浓度TGF-β2[0浓度、低浓度(1 μg/L)、高浓度(10 μg/L)]对两组体外培养1、24、48 h的胎盘组织上清液中TNF-α和γ干扰素的水平.结果 (1)胎盘组织培养1、24、48 h时,ICP组胎盘组织上清液中的TNF-α水平分别为(771±187)pg/g、(2490±575)pg/g、(3339±1106)pg/g,γ干扰素水平分别为(931±148)pg/g、(1888±545)pg/g、(3027±667)pg/g;对照组胎盘组织上清液中的TNF-α水平分别为(106±40)pg/g、(658±177)pg/g、(1099±264)pg/g,γ干扰素水平分别为(404±155)pg/g 、(936±142)pg/g 、(1386±378)pg/g .ICP组TNF-α和γ干扰素水平均明显高于对照组,两组比较,差异有极显著性(P<0.001).(2)不同浓度(0浓度、低浓度、高浓度)TGF-β2抑制ICP组胎盘组织分泌TNF-α[24 h时分别为(2490±575)pg/g、(1806±502)pg/g、(1231±238)pg/g;48 h时分别为(3339±1106)pg/g、(2168±794)pg/g、(1047±183)pg/g]和γ干扰素[24 h时分别为(1888±545)pg/g、(1347±405)pg/g、(913±303) pg/g;48h时分别为(3027±667)pg/g,(2062±795)pg/g,(1001±301)pg/g]的作用随时间的延长、剂量的增加而加强.结论 (1)ICP患者胎盘细胞因子TNF-α、γ干扰素过度分泌,使免疫排斥反应增强,可能是ICP发病的机制之一;(2) TGF-β2可能通过抑制胎盘TNF-α和γ干扰素的分泌,对妊娠起免疫保护作用.
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熊去氧胆酸对肝内胆汁淤积孕鼠肝组织中谷胱甘肽、脂质流动性及雌、孕激素受体的影响
目的探讨熊去氧胆酸对肝内胆汁淤积孕鼠肝组织中谷胱甘肽含量、肝细胞膜脂质流动性以及肝细胞雌、孕激素受体的影响.方法选择清洁级妊娠SD大鼠60只,随机分成3组,每组20只:(1)自妊娠第13天起,正常组孕鼠开始每天皮下注射精制植物油2.5 ml/kg; 对照组和治疗组孕鼠每天皮下注射孕酮75 mg/kg体重和17-α-乙炔雌二醇1.25 mg/kg体重,直至孕第17天.(2)自孕第17天起,正常组及对照组孕鼠每天行生理盐水5 ml/kg体重灌胃; 治疗组孕鼠每天行熊去氧胆酸50 mg/kg体重灌胃.(3) 3 组孕鼠均于孕第21天处死,提取肝组织,应用5,5′-二硫代双直接法测定肝组织中谷胱甘肽含量;应用1,6-二苯已三烯荧光标记法测定肝细胞膜脂质流动性[以偏振度(P)的比值表示];应用流式细胞技术测定肝细胞雌、孕激素受体(以平均荧光强度表示).结果 (1)肝组织中谷胱甘肽含量及肝细胞膜脂质流动性比值:正常组孕鼠分别为(2.11±0.07) mmol/g蛋白及0.132±0.004;对照组孕鼠分别为(1.13±0.03) mmol/g蛋白及0.149±0.008;治疗组孕鼠分别为(1.82±0.04) mmol/g蛋白及0.141±0.006.肝组织中谷胱甘肽含量,对照组明显低于正常组(P<0.05),治疗组高于对照组;肝细胞膜脂质流动性比值,对照组明显高于正常组(P<0.05),治疗组低于对照组(P<0.05);而两组两个指标分别与正常组比较,差异无显著性(P>0.05).(2)肝细胞雌、孕激素受体测定:对照组孕鼠分别为89.4±8.4及112.3±11.6;治疗组孕鼠分别为56.4±7.5及70.1±9.3.治疗组明显低于对照组(P<0.05),但与正常组孕鼠的39.5±7.3及59.6 ±7.4相比,差异则无显著性(P>0.05).结论熊去氧胆酸是治疗肝内胆汁淤积孕鼠的有效药物.
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过氧化物酶增殖体激活受体α、氧固醇7α羟化酶及雌激素受体间调控关系及其与孕鼠肝内胆汁淤积发生的相关性
目的 探讨过氧化物酶增殖体激活受体α(PPARα)、氧固醇7α羟化酶(CYP7B1)、雌激素受体(ER)α及ERβ之间的调控关系与孕鼠肝内胆汁淤积发生的相关性.方法 选择清洁级SD孕鼠80只,随机分为4组,每组20只,自孕第13天起:对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0ml·kg-1·d-1;低剂量组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇(1.0 mg·kg-1·d-1);中剂量组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇(1.25 mg·lg-1·d-1);高剂量组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇(1.5 mg·kg-1·d-1).4组孕鼠于妊娠第21天处死后提取肝脏组织.应用酶联免疫吸附试验检测各组孕鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆酸(TBA)及胆红素(BIL)水平;应用实时定量PCR技术检测各组孕鼠肝脏组织中PPARα mRNA、CYP7B1 mRNA、ERα mRNA及ERβ mRNA的表达水平.结果 (1)生化指标:对照组孕鼠ALT、AST、TBA及BIL水平分别为(41.1±2.8)U/L、(44.4±3.6)U/L、(26.4±5.6)μmol/L、(2.8±0.2)U/L,低剂量组孕鼠分别为(48.2±3.4)U/L、(47.9±3.7)U/L、(36.4±4.2)μmol/L、(4.2±0.2)U/L,中剂量组孕鼠分别为(70.4±5.3)U/L、(68.4±5.6)U/L、(64.3±3.8)μmol/L、(6.2±1.2)U/L,高剂量组孕鼠分别为(72.4±7.6)U/L、(70.2±3.8)U/L、(72.4±7.8)μmol/L、(8.2±2.2)U/L.低剂量组、中剂量组、高剂量组孕鼠ALT、AST、TBA、BIL水平明显高于对照组(P<0.05);中剂量组、高剂量组孕鼠各生化指标水平明显高于低剂量组(P<0.05).(2)ERαmRNA及ERβmRNA表达水平:ERαmRNA的表达水平在低剂量组(0.76±0.02)、中剂量组(0.99±0.04)和高剂量组(1.21±0.01)孕鼠肝脏组织中呈逐渐升高趋势(P<0.05),并明显高于对照组(0.65±0.01),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ERβ表达水平在4组孕鼠间分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(3)CYP7B1 mRNA及PPARα mRNA表达水平:CYP7B1 mRNA的表达水平在低剂量组(0.93±0.01)、中剂量组(0.99±0.06)和高剂量组(1.22±0.04)孕鼠肝脏组织中呈逐渐升高趋势(P<0.05),并明显高于对照组(0.75±0.02),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);PPARα mRNA表达水平在低剂量组(0.83±0.05)、中剂量组(0.71±0.02)和高剂量组(0.64±0.03)孕鼠肝脏组织中呈逐渐降低趋势(P<0.05),并明显低于对照组(1.35±0.05),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 随着雌激素剂量的增加,PPARα表达水平降低,对CYP7B1表达的抑制作用解除,而导致CYP7B1表达水平升高;而CYP7B1有促进ERα高表达的作用,终由ERα介导了雌激素诱导的肝内胆汁淤积的发生.提示PPARα、CYP7B1及ER的异常表达,是调控雌激素诱导孕鼠肝内胆汁淤积的发生机制之一.
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妊娠期肝内胆汁淤积症对胎鼠肺脏形态的影响
目的 探讨孕鼠发生肝内胆汁淤积症(ICP)时对胎鼠肺脏形态学的影响.方法 将妊娠15 d的20只SD孕鼠随机分为实验组和对照组,每组10只.实验组孕鼠皮下注射17α-乙炔雌二醇和孕酮,连续5 d,成功建立ICP大鼠模型;对照组孕鼠皮下注射精制植物油,连续5 d.分别测定两组孕鼠模型建立前、后血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)的水平.于妊娠第21天处死孕鼠,取出孕鼠肝脏组织;处死孕鼠后立即行剖宫取胎术,对取出的胎鼠肺组织和孕鼠肝脏组织进行光镜和电镜的病理学检查.结果 (1)生化指标:模型建立前,实验组孕鼠血中ALT、AST及TBA水平分别为(55±15)U/L、(146±16)U/L及(13±4)μmol/L;对照组分别为(49±12)U/L、(145±20)U/L及(14±4)μmol/L,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05).模型建立后(于妊娠第21天断颈处死孕鼠),实验组孕鼠血中ALT、AST及TBA水平分别为(94±12)U/L、(245±26)U/L及(44±16)μmol/L;对照组分别为(59±17)U/L、(163±27)U/L及(17±3)μmol/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)孕鼠肝脏病理学检查:大体所见,实验组孕鼠肝脏边缘钝厚,色泽灰暗;对照组孕鼠肝脏边缘锐利,色泽红润.光镜下所见,实验组孕鼠中有部分肝细胞肿胀变性,胞质疏松化,肝血窦受压变窄,部分胆管扩张,偶见肝细胞坏死;对照组孕鼠则肝细胞形态及肝小叶结构均正常.(3)胎鼠肺脏组织学检查:实验组胎鼠肺脏色泽灰暗,对照组胎鼠肺脏外观红润.光镜下所见,实验组胎鼠肺组织已发育成熟,但肺间质毛细血管明显扩张、充血,大部分肺泡间隔增宽,肺泡内少量炎性渗出物,灶状肺泡内出血.电镜下所见,肺泡Ⅱ型细胞微绒毛减少,线粒体空泡变性,部分细胞质崩解,板层小体排空增多;对照组为正常肺组织病理表现,肺组织结构清晰,肺泡壁薄,肺泡腔内偶见巨噬细胞,未见炎性细胞浸润.结论 联合应用雌、孕激素能够有效地建立ICP孕鼠模型,且ICP孕鼠的高胆汁酸血症对胎鼠肺组织有明显的毒性损伤作用,导致肺组织发生严重的病理改变.
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妊娠肝内胆汁淤积症孕鼠肝细胞中水通道蛋白8的表达
目的 探讨孕鼠妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)时其肝细胞中水通道蛋白8(AQP8)蛋白及mRNA的表达情况.方法 将20只孕鼠(孕15 d)分成ICP组和对照组,每组10只.ICP组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇2.5 mg·kg-1·d-1,连续5 d,建立ICP模型,对照组孕鼠皮下注射1,2-丙二醇2.5 ml·kg-1·d-1,连续5 d.采用免疫组化法检测两组孕鼠肝细胞AQP8的蛋白相对表达量和定位;RT-PCR技术检测肝细胞AQP8的mRNA相对表达量.结果 孕鼠ICP模型成功建立.两组孕鼠肝细胞均有AQP8蛋白和mRNA的表达.ICP组孕鼠肝细胞AQP8的蛋白相对表达量为10.8±2.4,对照组为17.1±2.2,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);ICP组孕鼠肝细胞AQP8的mRNA相对表达量为1.07±0.11,对照组为0.80±0.11,两组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).结论 ICP孕鼠肝细胞中AQP8的蛋白表达下调,mRNA表达上调,可能与ICP发病有关.
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妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清中白细胞介素18、12及肿瘤坏死因子α的水平变化及其临床意义
目的 探讨白细胞介素(IL)18、IL-12及肿瘤坏死因子α(TNF-α)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者肝功能异常中的作用.方法 选择2010年4-9月在重庆医科大学附属第一医院就诊的62例ICP患者为ICP组,其中重度患者32例,轻度患者30例;同期就诊的30例健康孕妇为对照组,另选同期在重庆医科大学附属第一医院感染科住院的30例乙型肝炎妇女为肝炎组.采用ELISA 法测定IL-18、IL-12及TNF-α水平.检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平.同时观察ICP组及对照组的围产儿结局.结果 (1)肝炎组血清中IL-18、IL-12、TNF-α水平分别为(256±51)、(122±96)、(207±3)ng/L,ALT、AST水平分别为(363±174)、(359±237)U/L;ICP组IL-18、IL-12、TNF-α水平分别为(72±32)、(42±28)、(48±14)ng/L,ALT、AST水平分别为(201±128)、(132±87)U/L;对照组IL-18、IL-12、TNF-α水平分别为(43±13)、(10±3)、(33±9)ng/L,ALT、AST水平分别为(13±4)、(15±3)U/L.肝炎组血清中IL-18、IL-12、TNF-α及ALT、AST 水平显著高于ICP组和对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);ICP组也显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)ICP组重度患者血清中IL-18、IL-12、TNF-α水平分别为(81±32)、(50±25)、(50±14)ng/L,ALT、AST水平分别为(269±111)、(181±73)U/L;轻度患者IL-18、IL-12、TNF-α水平分别为(48±18)、(17±4)、(40±10)ng/L,ALT、AST水平分别为(87±46)、(50±21)U/L,ICP组重度患者血清中IL-18、IL-12、TNF-α及AST、ALT水平显著高于轻度患者和对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);轻度患者血清中AST和ALT水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)ICP组重度患者的早产儿发生率(50%,16/32)及羊水胎粪污染率(31%,10/32)显著高于轻度患者[分别为7%(2/30)及3%(1/30)]和对照组[分别为3%(1/30)及3%(1/30)],差异均有统计学意义(P＜0.05);重度患者新生儿1分钟Apgar评分≤7分的例数(2例)与轻度患者(1例)和对照组(1例)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-18、IL-12和TNF-α可能参与ICP患者肝细胞损害的过程,其水平升高有助于临床诊断ICP患者的肝细胞损害.
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妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇胎盘合体滋养细胞中组成型雄烷受体的表达及其临床意义
目的 探讨组成型雄烷受体(CAR)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)孕妇胎盘合体滋养细胞中的表达及其临床意义.方法 收集2009年4月-2010年3月在重庆医科大学附属第一医院分娩的ICP孕妇的胎盘绒毛组织,其中ICP轻度孕妇10例(ICP轻度组),ICP重度孕妇10例(ICP重度组).同期健康晚期妊娠妇女10例为对照组.采用免疫组化链霉亲和素一生物素一过氧化物酶复合物(SABC)法检测胎盘组织中CAR蛋白的表达定位;采用逆转录(RT)-PCR技术检测CAR mRNA表达水平;蛋白印迹法检测CAR蛋白的表达水平.结果 (1)CAR表达定位在对照组和ICP轻度组胎盘合体滋养细胞中,着色较淡,呈淡棕黄色染色,着色部位主要在细胞质;在ICP重度组,CAR也主要定位在胎盘合体滋养细胞中,但着色部位主要在细胞核,呈棕黄色浓染.(2)对照组、ICP轻度组及重度组孕妇胎盘组织中CAR mRNA的表达水平分别为0.06±0.03、0.07 ±0.03及0.56 ±0.03,ICP重度组明显高于对照组和ICP轻度组,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);而ICP轻度组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(3)对照组、ICP轻度组及重度组孕妇胎盘组织中CAR蛋白的表达水平分别为0.74 ±0.03、0.79 ±0.03及1.02 ±0.04,ICP重度组与轻度组及对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);ICP轻度组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ICP 孕妇尤其是ICP重度孕妇胎盘合体滋养细胞中CAR表达水平显著升高,其可能参与了维护胎盘的屏障功能,从而在ICP的发病中起到保护作用.
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妊娠期肝内胆汁淤积症发生死胎的临床因素分析
目的 探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)孕妇发生胎儿死亡的临床特点、实验室指标及胎儿监护手段.方法 对1999年1月至2010年12月浙江大学医学院附属妇产科医院收治的发生死胎的21例ICP孕妇的临床资料进行回顾性分析.结果 (1)21例ICP孕妇的平均年龄(30.2±4.6)岁,其中＞35岁者4例;经产妇6例,1例2年前因ICP发生死胎而引产1次;20例单胎妊娠,1例双胎妊娠.(2)21例ICP孕妇的死胎均发生在孕晚期,胎儿死亡的孕周为29～41周,平均(33.8±4.2)周.12例发生在孕29～37周,9例发生在孕37周后.9例为门诊B超检查时确诊胎死宫内;9例因诊断ICP入院治疗期间发生胎心消失;2例临产后胎心消失;1例胎心监护提示V型减速,拟行急诊刮宫产术于麻醉期间胎心消失.在所有ICP孕妇中围产儿死亡率为0.148%(21/14 184).(3)21例ICP孕妇均有皮肤瘙痒,其中11例有全身皮肤瘙痒.10例在发生死胎前自觉胎动减少或消失.21例ICP孕妇血清甘胆酸水平均升高,其中21.49～64.48 μmol/L 11例,t≥64.48 μmol/L 10例.血清总胆汁酸水平升高16例(另5例未检查),高达270μmoL/L.血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平升高14例,总胆红素＞21μmol/L 7例,直接胆红素升高12例.21例ICP孕妇中,重度15例,轻度6例.(4)9例孕妇门诊即确诊宫内死胎未做胎心监护,其余12例住院检查结果 为:胎心监护结果 可疑2例,无应激试验(NST)提示胎心轻度V型减速1例,B超提示脐动脉舒张期血流缺如3例,胎儿生物物理指标评分低值1例.(5)21例ICP孕妇均经阴道分娩.6例为自然宫缩娩出死胎,其余15例予米非司酮配合依沙吖啶羊膜腔注射或缩宫素引产,14例在48 h内成功娩出死胎,仅1例追加地诺前列酮栓后引产成功.所有死胎外观无异常,脐带长度均在正常范围,有4例脐带绕颈或绕体.胎盘胎膜外观无异常,18例羊水Ⅲ度胎粪污染,2例合并羊水过少.10例行死胎及胎盘病理检查,其中1例合并多发畸形,其余死胎病理检查未见明显异常,10例胎盘病理检查均有绒毛膜周围或底蜕膜、大血管周围的纤维蛋白沉积,同时伴有钙化、退行性变、红色梗死及局灶性合体细胞结节增多.结论 ICP孕妇发生死胎的孕周常在孕晚期,时间常在正常宫缩后,ICP重度可能是发生死胎的关键因素;尚无有效的胎儿监护指标可预测死胎的发生.因此,应综合评估病情,加强胎儿监护,适时终止妊娠.
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妊娠期肝内胆汁淤积症胎儿胆汁酸水平与肺表面活性物质的相关性研究
目的 探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎儿总胆汁酸水平与胎儿肺表面活性物质(PS)的关系.方法 选择2008年4月至2010年2月在中南大学湘雅二医院住院行剖宫产分娩的ICP孕妇55例(ICP组),记录ICP组孕妇的新生儿出生至产后7 d的一般情况,凡符合胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿呼吸窘迫综合征其中1项者为病理围产儿,无上述情况为正常围产儿.另选同期健康孕妇23例为对照组.采用循环酶法测定两组孕妇血、脐血及羊水中总胆汁酸水平;ELISA法测定两组胎儿脐血肺表面活性蛋白A(SP-A)水平;高效液相色谱法测定两组羊水中磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、溶血卵磷脂(LPC)、神经鞘磷脂(SM)的含量.结果 (1)ICP组孕妇血、脐血及羊水中总胆汁酸水平分别为(30.1±7.9)、(9.3±3.3)及(4.4 ±1.5)mmol/L,明显高于对照组的(4.8±2.2)、(4.9±0.9)及(1.4±1.1)mmol/L,两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)ICP 组胎儿脐血SP-A水平为(29.5±6.4)μg/L,明显高于对照组的(22.6±7.4)μg/L,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)ICP组中病理围产儿20例,健康围产儿35例,病理围产儿脐血总胆汁酸及SP-A水平分别为(10.9±2.2)mmol/L及(37.0±5.9)μg/L,健康围产儿分别为(8.0±2.8)mmol/L及(26.7±4.8)μg/L,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)脐血总胆汁酸水平分别与孕妇血、羊水总胆汁酸水平呈正相关(r1=0.706,r2=0.763,P＜0.05);脐血SP-A水平与脐血总胆汁酸水平呈正相关(r3=0.494,P＜0.05).(5)ICP组羊水中PC及PI的含量分别为(65.4±7.2)及(3.8±0.6)mg/L,均明显低于对照组的(69.7±3.7)及(4.3±0.7)mg/L,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);ICP组羊水LPC的含量为(4.8±0.9)mg/L,明显高于对照组的(4.2±0.6)mg/L,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);ICP组羊水SM的含量为(3.5±0.8)mg/L,与对照组的(4.0±0.5)mg/L比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(6)ICP组羊水PC/LPC比值(14.2±3.2)明显低于对照组(16.9±2.5),差异有统计学意义(P＜0.05).(7)脐血总胆汁酸水平与羊水PC、PI的含量均呈负相关(r1=-0.561,r2=-0.407,P＜0.05);与LPC含量无相关性(r3=0.260,P＞0.05).结论 ICP孕妇的胎儿脐血及羊水中总胆汁酸水平均明显高于健康孕妇,其胎儿PS的改变与胎儿体内高总胆汁酸水平有关.
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糖酵解相关基因在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘组织内的变化
目的 探讨糖酵解相关基因糖转运体(GL UT)1、磷酸甘油酸激酶(PGK)1、乳酸脱氢酶(LDHA)基因在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘组织内的表达及其意义.方法 按照数字表法,随机选择2015年6月至10月于四川大学华西第二医院产科行择期剖宫产分娩的40例产妇的胎盘组织为研究对象.按照是否合并ICP,将其分别纳入ICP组(n=20)和对照组(n=20).2组产妇行剖宫产分娩待胎盘娩出后,立即收取胎盘母体面的中央绒毛区组织.采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)及Western印迹法分别检测胎盘组织中GLUT1、PGK1、LDHA mRNA及蛋白相对表达水平.采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法进行免疫组化染色,并检测GLUT1、PGK1及LDHA在胎盘组织的定位.2组产妇的年龄、孕龄、孕次、产次、新生儿出生体重、娩出胎盘重量等一般临床资料比较,差异无统计学意义(P＞0.05).本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.结果 ①2组胎盘组织中GLUT1、PGK1及LDHA mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).②ICP组胎盘组织中GLUT1、PGK1及LDHA蛋白水平均高于对照组,并且差异有统计学意义(t=3.270,P=0.003;t=4.222,P＜0.001;t=3.585,P=0.002).③2组胎盘组织的合体滋养细胞及细胞滋养细胞的细胞质内均可见GLUT1、PGK1及LDHA蛋白的表达.结论 ICP患者胎盘组织的糖酵解相关基因蛋白表达水平增高,糖酵解水平较正常晚孕期产妇代偿性增高,一定程度上可以缓解宫内低氧或缺氧,进一步加重的缺氧则可能导致组织能量代谢失代偿,从而导致胎死宫内等不良妊娠结局.
