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不同产地不同采收期蔷薇红景天中红景天苷的含量测定
目的 对不同产地、不同采收时期的蔷薇红景天中主要活性成分红景天苷含量进行对比研究.方法 以红景天苷为指标,采用HPLC法,测定了蔷薇红景天药材中的红景天苷含量.色谱条件为PLATISTLTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),水∶甲∶乙腈为流动相,检测波长为275nm.结果 蔷薇红景天苷的含量在0.52～5.2μg范围内峰吸光度与浓度线性关系良-好(r =0.999 8).由于产地和采收时间不同,蔷薇红景天中红景天苷含量有差异,以8月采收的新疆塔城额敏县的蔷薇红景天的含量高,其为1.297％,RSD为1.519％.结论 该方法操作简便,结果准确,重复性好,实验结果可用于指导合理采收开发蔷薇红景天资源.
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复方景归片中红景天苷含量的高效液相色谱法测定
目的 测定复方景归片中的红景天苷的含量.方法 采用高效液相色谱法.色谱柱为Purospher star RPC18(4.6mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水-甲酸(8∶ 92∶ 0.05),流速为1.0 ml/min,检测波长:277 nm.结果 红景天苷在1～10 μg的范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.85％,重复性实验RSD=0.69％ 结论 该方法可以用于复方景归片中红景天苷的含量测定.
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红景天苷对大鼠脑缺血再灌注损伤抗氧化活性的实验研究
目的 观察红景天苷(Salidroside,Sal)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法 采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察红景天苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经功能障碍,脑水肿及脑梗塞范围以及对脑缺血2h再灌注24 h缺血脑组织能量物质ATP、菊萄糖无氧酵解产物以及体内自由基清除剂SOD、GSH和脂质过氧化产物MDA等生化物质的影响.结果 脑缺血2h再灌注24 h腹腔注射 Sal 24.5 mg·kg-1和60 mg·kg-1可明显减轻神经功能障碍(P<0.05),减轻脑水肿(P<0.05)及缩小脑梗塞范围(P <0.05).同时Sal 24.5 mg·kg-1组和60 mg·kg-1组与缺血再灌注组相比,缺血脑组织内SOD活性和GSH活力明显增高(P<0.05,P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),大鼠脑组织内ATP含量显著升高(P<0.05,P<0.01),脑组织内LA含量明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 红景天苷对局灶性脑缺血再灌注损伤有良好的保护作用.其机制与其改善缺血脑组织能量代谢、降低自由基损伤有关.
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红景天苷对大鼠急性心肌缺血和乳鼠心肌细胞的保护作用
目的 研究红景天苷对大鼠急性心肌缺血的保护作用,以及对乳鼠心肌细胞于缺氧/复氧损伤和氧化损伤下的影响.方法 以垂体后叶素(pituitrin)制备大鼠急性心肌缺血模型,观察急性心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图的变化.体外培养原代乳鼠心肌细胞,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤和过氧化氢(H2O2)诱导造成氧化损伤模型.MTT法测定细胞存活率并测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)浓度.结果 红景天苷能显著抑制垂体后叶素所造成的心电图T波抬高和J点升高;能明显提高缺氧/复氧模型和氧化损伤模型下的细胞存活率,降低培养液中的LDH和CK浓度.结论 红景天苷对急性心肌缺血损伤、缺氧/复氧损伤和氧化损伤均有较好的保护作用.
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高效液相色谱法测定圣地红景天中红景天苷的的含量
目的 测定各地红景天药材中红景天苷的含量,建立各地红景天药材的含量测定方法.方法 用HPLC法测定红景天苷的含量.结果 测定了3批各地红景天药材中红景天苷的含量,建立了红景天苷的含量测定方法.结论 该方法简便,重现性好,专属性强,可作为各地红景天药材的质量控制标准.
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红景天苷体外抗肝纤维化的实验研究
目的:观察红景天苷对大鼠肝星状细胞增殖及细胞外基质分泌的影响.方法:用不同浓度的红景天苷处理大鼠肝星状细胞;以MTT比色法测定细胞的增殖;放射免疫法测定透明质酸和层粘连蛋白;酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅰ型胶原的水平.结果:红景天苷可剂量依赖性地抑制HSC增殖,不同程度抑制Ⅰ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白分泌.结论:红景天苷在体外有显著的抗肝纤维化作用.
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高效液相色谱法测定安糖胶囊中红景天苷的含量
目的:为控制安糖胶囊质量,对制剂中的名贵药材红景天进行了含量测定方法的研究.方法:采用高效液相色谱法测定了安糖胶囊中红景天苷的含量.结果:平均回收率为97.98%,RSD=1.72%.结论:方法简便,快速,灵敏度高,重现性好.
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红景天苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌损伤的保护作用
目的 研究红景天苷对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠急性损伤的保护作用.方法 皮下注射ISO,诱导大鼠产生急性心肌损伤模型.给大鼠使用红景天苷观察大鼠心电图情况,检测其血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等物质的含量,检测大鼠心梗情况.结果 红景天苷能够有效降低缺氧细胞内LDH、CK以及MDA的含量,对于减少心梗面积具有十分明显的作用.结论 红景天苷对ISO所导致的大鼠急性心肌损伤具有保护作用.
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红景天注射液的提取与精制工艺研究
目的 对红景天注射液的提取与精制工艺进行研究.方法 以红景天苷和酪醇的总转移率为考察指标,采用正交实验对提取与精制工艺进行优化.结果 红景天的佳提取工艺为:将粉碎后的药材,以8倍量的水为提取溶剂,加热回流提取3次,1 h/次;采用醇沉法和明胶沉淀法对红景天水提取物进行精制,醇沉法中调含醇量至70%,明胶沉淀法的佳工艺为:将醇沉后的药液浓缩至0.5 mg·ml-1(相当于原生药),调pH值至5.0,在60℃,转速为60 r·min-1的条件下,加入5%明胶溶液至不再生成沉淀时为止.结论 采用上述提取精制方法制得的红景天浸膏杂质检查符合注射液的要求,该方法可用于红景天注射液的提取与精制.
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红景天提取液精制工艺的考察
目的:优选红景天提取液的精制工艺.方法:采用了醇沉法和絮凝法两种精制方法.结果:壳聚糖絮凝法优于明胶絮凝法.壳聚糖絮凝法与醇沉法比较红景天苷保留率分别为95.32%,88.15%;固体物保留率分别为59.7%,63.0%.结论:壳聚糖絮凝法的红景天苷保留率明显高于醇沉法,且两种工艺的固体量无显著性差异.
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红景天提取工艺的优化
目的:优化红景天的提取工艺.方法:运用正交设计法进行实验设计,用高效液相色谱法测定提取物中红景天苷的含量.结果:确认佳提取方案为8倍量水,提取2 h/次,提取3次.结论:用上述方法可以优化提取工艺.
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红景天苷药理作用及分子机制的研究进展
红景天苷是红景天属植物的酚类次生代谢物,其广泛的药理作用以及作用机理方面的研究备受关注.文章从红景天苷对心肌缺血-再灌注损伤、心肌细胞凋亡、血管、神经元细胞的保护作用和对乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌等肿瘤细胞的作用以及抗哮喘等方面总结了近年来国内外对红景天苷生物活性以及作用机制的研究进展,为其进一步开发和利用提供参考依据.
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高山红景天内生真菌的分离及产红景天苷菌株的筛选
目的 分离和鉴定珍贵药用植物高山红景天根及根茎中的内生真菌,并从中筛选出可产红景天苷的菌株.方法 用PDA培养基,通过组织分离法从高山红景天根及根茎中分离内生真菌,并采用传统的鉴定方法对纯化后的菌株进行分类鉴定.通过薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对分离得到的内生真菌发酵产物进行检测来获得产红景天苷的菌株.结果 分离获得内生真菌20株,初步鉴定为3目、5科、9属.其中镰孢霉属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)和曲霉属(Aspergillus)为优势种群.经TLC和HPLC法筛选得到一株可代谢产生活性物质红景天苷的内生真菌G5.结论 高山红景天内生真菌在数量和种类上存在极其丰富的多样性;而且其内生真菌具有产生与其宿主相同或相似生理活性成分的能力.
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红景天苷对脂多糖诱导的急性肺损伤的保护机制研究
目的:研究红景天苷(SDS)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的抗炎作用及调节机制.方法:运用Western blot及Real-time PCR检测SDS对LPS诱导的大鼠肺组织及人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-β1表达的影响;Western blot、Real-time PCR、免疫组织化学筛选SDS可能参与的细胞信号通路;MTT检测SDS对HPAEpiC存活率的影响;利用RNA干扰阻断NF-κB通路后,采用Westernblot及Real-time PCR检测SDS对促炎因子IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-p1表达的影响.结果:SDS可有效抑制LPS诱导的大鼠肺组织及HPAEpiC促炎因子IL-1、IL-6、TNF-a及TGF-β1的表达;SDS降低细胞通路相关因子NF-κB和p38的表达;SDS可增强HPAEpiC存活率;阻断NF-κB通路后,SDS抑制IL-1、IL-6、TNF-α及TGF-β1的表达效果减弱.结论:SDS可以抑制LPS诱导的炎症反应,减轻ALI的症状.
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红景天苷抑制骨肉瘤143B细胞侵袭、迁移及其机制研究
目的 探讨红景天苷对人骨肉瘤143B细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM,含10％血清及1％双抗)培养骨肉瘤143B细胞,实验分组为对照组、30、60 μmol/L红景天苷处理组.噻唑蓝(MTT)实验检测各组24、36、72 h的细胞增殖活性;处理24 h后,采用Transwell法检测3组细胞的侵袭能力;处理24 h后采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,计算细胞迁移率.3组细胞在处理24 h后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的mRNA相对表达水平变化,Western blot实验检测各组细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平.透射电镜检测处理24 h后的细胞自噬体.结果 处理24 h后,60 μmol/L组(0.038±0.002)和30μmol/L组(0.054 ±0.002)143B细胞吸光度值低于对照组(0.074±0.004,t2.659,P=0.016;t=1.993,P=0.039).处理48、72 h后,与对照组比较,浓度为30、60 μmol/L的红景天苷组143B细胞吸光度值同样分别低于对照组,呈剂量依赖和时间依赖性.60 μmol/L[(48.7±8.2)个]和30 μmol/L[(76.8±12.8)个]红景天苷组143B细胞跨膜数目分别少于对照组[(94.5±11.9)个,t=8.056,P=0.000;t=2.472,P=0.038].60 μmol/L[(52.9±6.8)％]和30 μmol/L[(82.6±3.7)％]红景天苷组143B细胞迁移率分别低于对照组[(98.7±0.3)％,t=12.576,P=0.000;t2 =9.794,P=0.000].60 μmol/L和30 μmol/L红景天苷处理组MMP-2、MMP-9的蛋白和mRNA相对表达量分别低于对照组.60 μmol/L红景天苷实验组自噬体形成数目[(2.6±0.5)个]多于对照组[(1.3±0.4)个,t=3.517,P=0.025].结论 红景天苷抑制了骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与诱导自噬及抑制MMP家族蛋白表达相关.
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红景天苷对骨折愈合Runt相关转录因子2调控机制研究
目的 观察红景天苷在骨折愈合的作用,探讨其在成骨作用中对Runt相关转录因子2(Runx2)通路的调控机制.方法 将40只大鼠分为治疗组和对照组,建立SD大鼠闭合骨折模型,检测血液碱性磷酸酶(ALP)和骨保护素(OPG)浓度,采用微焦点断层扫描(MicroCT)比较两组创伤骨折后的成骨改变;运用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测骨痂组织中Runx2、缺氧诱导因子2A(HIF2A)、Wnt4、Wnt10b、β-连环蛋白(ββ-catenin)、糖原合成酶激酶3(GSK-3ββ)、T细胞因子-1(TCF-1)mRNA表达.结果 骨折后第2、4周,治疗组血清ALP[2周:(335.34±9.23) IU/L,4周:(312.45±10.56) IU/L]和OPG[2周:(40.02±2.90) IU/L,4周:(45.56±3.20)pg/ml]浓度较对照组明显升高(P＜0.05);治疗组骨小梁生长显著增加(P＜0.05);骨痂组织中Runx2(2周:1.83±0.11,4周:2.23 ±0.11)、HIF2A(2周:1.37 ±0.12,4周:1.50 ±0.12)、Wnt4(2周:1.78 ±0.10,4周:1.66±0.11)、Wnt10b(2周:1.89 ±0.12,4周:1.92±0.13)、ββ-catenin(2周:1.65 ±0.08,4周:1.72±0.10) mRNA表达均显著增加,GSK-3ββ mRNA表达(2周:0.61 ±0.08,4周:0.56±0.09)显著降低(P＜0.05).结论 红景天苷能促进成骨,对成骨调控通路Runx2有明显的增强作用.
关键词： 红景天苷 Runt相关转录因子2通路 成骨调控 -
红景天苷对成骨细胞的作用及相关分子机制研究
目的:研究红景天苷(SAL)对人成骨样MG-63细胞增殖、分化和HIF-1α依赖的VEGF表达的影响及相关分子机制.方法:采用MTS法、流式细胞术分析、RT-PCR、ELISA、Western blot等技术观察SAL对MG63细胞增殖、分化和HIF-1α依赖的VEGF表达的影响,进一步探讨其相关分子机制.结果:SAL通过调控MG-63细胞的周期分布及上调Runx2和Osterix表达促进成骨细胞的增殖和分化.另外,SAL可明显上调下游靶基因VEGF的表达.结论:SAL可显著促进成骨样MG-63细胞的增殖、分化以及HIF-1α依赖的VEGF的表达,进而促进骨和血管新生.
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红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制
目的 观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制.方法 采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用.分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制.结果 与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义.细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05).结论 红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现.
关键词： 红景天苷 microRNA-370 2型糖尿病 糖代谢紊乱 -
红景天苷对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力和海马组织Aβ含量及p75NTR表达的影响
目的 探讨红景天苷对Aβ1～40所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力,p75NTR信号通路关键蛋白表达和β-淀粉样蛋白(Aβ)含量的影响.方法选取96只雄性SD大鼠,随机分为假手术组,模型对照组,红景天苷小、中、大剂量组,石杉碱甲组,每组16只.除假手术组外,各组大鼠均于双侧海马CA1区缓慢注射Aβ1～40各1μL(10μg)制备AD大鼠模型,假手术组则注射等量0.9％氯化钠溶液.红景天苷小、中、大剂量组分别于术后24h灌胃红景天苷25,50,100 mg·kg-1,石杉碱甲组给予灌胃石杉碱甲50 mg· kg-,假手术组及模型对照组灌胃等量0.9％氯化钠溶液,共21 d.给药结束后经Morris水迷宫实验观察红景天苷对模型大鼠学习记忆能力的影响,并采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清与海马组织中Aβ的含量,免疫组化法检测海马区神经元中p75NTR和p-JNK蛋白表达.结果 与模型对照组比较,红景天苷小、中、大剂量组大鼠在水迷宫训练中潜伏期明显缩短(P ＜0.05或P＜0.01),而水迷宫测试中跨越平台的次数显著增加(P ＜0.05或P＜0.01);红景天苷小、中、大剂量组血清与海马组织中Aβ含量显著降低;海马神经元p75NTR、p-JNK表达显著减少(P＜0.05或P＜0.01).结论 红景天苷可改善Aβ1-40所致学习记忆障碍模型大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与其抑制p75NTR对Aβ的调控通路,减少Aβ的神经毒性作用,从而使海马神经细胞凋亡减少有关.
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红景天养生片中红景天苷的含量测定
目的 建立红景天养生片中红景天苷的含量测定方法,以控制产品的质量.方法 采用Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.1%磷酸(7:93)为流动相,检测波长为233 nm,流速1.0 mL·min-1.结果 红景天苷在0.106 4～1.596 0 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为97.7%(RSD=1.46%).结论 该方法操作简单,结果可靠,重复性好,可用于红景天养生片的质量控制.
