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冬凌草甲素对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制的研究
目的 探讨冬凌草甲素(Oridonin)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度冬凌草甲素对A549细胞增殖的抑制作用;瑞氏-吉姆萨染色法检测细胞形态学的改变;Western blot法观察Bcl-2和Bax表达水平的变化.结果 冬凌草甲素明显抑制A549细胞的增殖,作用24、48和72 h的IC50分别是87.9、67.6和45.2 μmol/L,姬姆萨染色可观察到核染色质浓缩、胞浆空泡、核裂解等典型的凋亡细胞形态学改变,Western blot分析显示有Bcl-2表达的降低和Bax表达的上调.结论 冬凌草甲素对人A549细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调可能是冬凌草甲素诱导肺腺癌A549细胞发生凋亡的重要作用机制之一.
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冬凌草片溶出度测定方法的建立
目的 研完并建立冬凌草片溶出度测定方法.方法 按中国药典2010年版附录中溶出度测定第三法,分别以5％乙醇溶液、0.1mol·L-1盐酸溶液、水、磷酸盐缓冲液(pH 6.8)500mL为溶出介质,转速为75r·min-1,采用HPLC法测定冬凌草片中冬凌草甲素在溶出介质中的浓度.结果 冬凌草甲素在0.4～1.2μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.2％,RSD=0.72％.结论 本法测定冬凌草片的溶出度科学、准确、简便,可用于冬凌单片的质量控制.
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冬凌草甲素现代药理研究进展
冬凌草甲素为唇形科香茶菜属植物冬凌草的主要有效成分,为贝壳杉烯骨架的四环二萜类化合物.本文就这几年来对冬凌草甲素在肿瘤防治、免疫功能、β-受体阻断等方面的现代药理作用研究进展进行阐述.
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冬凌草化学成分积累动态的研究
目的:分析冬凌草化学成分的积累动态.方法:采用中国药典(2005年版)的方法进行水溶性浸出物、醚溶性浸出物的测定;用高效液相色谱法测定冬凌草中冬凌草甲素、迷迭香酸的含量.结果:冬凌草中水溶性浸出物、醚溶性浸出物、冬凌草甲素、迷迭香酸的含量在不同生长时期有明显的变化规律.结论:冬凌草中化学成分动态积累的变化规律,将为研究冬凌草生物特性的形成及冬凌草的规范化种植提供科学依据.
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冬凌草甲素抑制血管生成活性及作用机制
目的:研究冬凌草甲素抑制血管生成的活性及其作用机制.方法:采用体外和体内两种模式,研究冬凌草甲素在血管生成方面的抑制效应.通过体外培养心脏微血管内皮细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的活力,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血管内皮生长因子(VEGF)的含量;体内选择斑马鱼(Fli1-GFP)生物模式,观察冬凌草甲素对胚胎期血管生成和成鱼期血管损伤后再生的影响,并采用相对荧光定量PCR法检测VEGF通路上主要相关基因VEGFA,血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)2,VEGFR3的表达量.结果:冬凌草甲素具有抑制血管生成活性的作用,可抑制体外内皮细胞活力,其半抑制浓度(IC50)8.04 mg·L-1,可使细胞血清中VEGF的表达量明显下降;可抑制斑马鱼胚胎期体节间血管生成,且抑制成鱼期血管损伤后再生,可能通过降低体内VEGFA,VEGFR2,VEGFR3基因的表达量从而抑制血管生成.结论:冬凌草甲素可有效抑制血管生成,为其抗肿瘤血管生成治疗提供了重要的科学依据.
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稀土元素对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响
目的:探讨稀土元素镧、铈对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响.方法:冬凌草均匀愈伤组织在添加不同浓度La3或Ce3的培养基中培养,通过质量法测定愈伤组织鲜质量、绘制生长曲线,HPLC测定甲素、乙素含量.结果:CeCl3·7H2O浓度为1μmol·L-1时,愈伤生物量高,是空白条件下的2.4倍.空白及对照条件下甲素含量均为0；空白条件下乙素含量低为0.11％,随着Ce3+浓度升高而升高,当浓度为10 μmol· L-1时高达0.58％；乙素随着La3+浓度升高而降低,当浓度为0.1 μmol· L-1时含量高达0.44％.结论:0～ 10 μmol·L-1的La3+及Ce3+均有利于冬凌草愈伤生物量的积累及乙素的合成,对甲素的合成无影响,将CeCl3 ·7H2O浓度10 μmol· L-1作为佳条件选择.
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HPLC测定冬凌草饮片中冬凌草甲素含量
目的:建立冬凌草饮片的含量测定方法,并对市售饮片进行含量分析,以考察其质量.方法:色谱柱:Agilent ZORBAX Eclispse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相:甲醇:水(50:50),检测波长:240 nm.结果:冬凌草甲素在0.41～1.02μg范围内呈良好线性关系,r=0.999 8,加样回收率平均为99.2%(n=9,RSD=1.5%).结论:该法灵敏度高、操作简便、结果准确.可用于冬凌草饮片的含量测定.
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河南产冬凌草的质量评价
目的:对产于河南济源地区不同品种冬凌草资源进行质量评价.方法:以冬凌草甲素为对照,按照《中国药典》(2010年版),采用高效液相色谱法,Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水(55∶45),检测波长239nm,柱温25℃,流速1 mL· min-1,对收集到的34个不同品种冬凌草中冬凌草甲素的含量进行测定.回归方程为Y=1006X+9.046(r =0.9999),线性范围在0.488 ～4.88 μg与峰面积线性关系良好,平均回收率为98.80％,RSD 2.17％.结果:不同品种的冬凌草中冬凌草甲素的含量有显著的差异,其中低含量是0.63％,高含量是1.98％,均符合药典标准.结论:冬凌草甲素是冬凌草的主要有效成分,可以作为冬凌草质量评价的一个重要指标.本方法简单易行,重复性好且分离度高,为评价冬凌草的质量提供科学依据.
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冬凌草甲素纳米制剂的研究和应用
冬凌草甲素(oridonin),别名冬凌草素、延命草宁,是唇形科香茶菜属植物碎米亚桠Rabdosia rubescens的全草,由醉提、萃取、层析、结晶等工序完成.冬凌草甲素对白血病、乳腺癌、黑色素瘤等多种肿瘤,具有显著的抑制或杀伤作用,主要用于抗肿瘤,抗菌,清热解毒,消炎止痛和健胃活血等方面的治疗.但因其微溶于水,且味道极苦,很大程度上限制了其在临床上的应用.纳米制剂作为一种新型的药物传递系统,近年来已有学者开展了冬凌草甲素纳米制剂的研究探索,其中包括冬凌草甲素的β-环糊精包合物、纳米粒、脂质体、微乳聚合物胶束和纳米混悬剂等.研究发现,纳米制剂能够有效地改善冬凌草素水溶性,提高其生物利用度,具有开发价值和广阔的应用前景.该文对当前冬凌草甲素纳米制剂的研究和应用状况进行了综述,为冬凌草甲素新制剂的研究开发提供依据.
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离体条件下培养物中冬凌草甲素积累与其组织结构关系
目的:研究冬凌草甲素动态积累变化关键期培养物显微、超微结构的变化,探讨培养物组织结构与冬凌草甲素积累的相关性.方法:采用高效液相色谱法研究了离体培养过程中培养物内冬凌草甲素积累的动态变化规律.在此基础之上,采用石蜡切片、透射电镜方法研究了培养物组织结构与冬凌草甲素积累的关系.结果:离体培养过程中培养物中冬凌草甲素积累表现出有-无-有的规律性,随着叶片外植体的脱分化,培养物内叶绿体数目逐渐减少,冬凌草甲素的含量也随之逐渐降低,当冬凌草甲素再次积累时,培养物内叶绿体数目再次增多且出现了维管组织的分化.结论:冬凌草甲素积累合成与培养物叶绿体数目的多少及内部维管系统的分化有着紧密的联系.
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冬凌草植株再生过程中冬凌草甲素的积累机制
目的:探讨冬凌草植株再生过程中培养物的生理特性与冬凌草甲素积累之间的机制.方法:采用紫外分光光度法、高效液相法测定不同时期培养物内叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白、丙酮酸、冬凌草甲素的含量.结果:培养物内叶绿素、丙酮酸、可溶性蛋白含量与冬凌草甲素含量呈正相关,相关系数分别为0.781,0.897,0.866;而可溶性糖含量与冬凌草甲素含量呈负相关,相关系数为-0.515.结论:冬凌草培养物内叶绿素、丙酮酸的含量、可溶性蛋白与冬凌草甲素积累有相互促进的关系,而可溶性糖变化主要与培养物细胞的生长、发育关系密切.
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HPLC法测定冬麦利咽口服液中冬凌草甲素和冬凌草乙素的含量
目的 建立HPLC法测定冬麦利咽口服液中冬凌草甲素和乙素含量的方法.方法 采用Symmetry@C185.0μm 4.6×250(mm)色谱柱,流动相为甲醇-水(52:48);流速1.00ml/min检测波长239nm.结果 冬凌草甲素在1.004～20.08ug·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为99.68%,RSD=0.44%(n=6)冬凌草乙素在1.013～20.26ug·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9990),平均回收率为98.86%,RSD=1.14%(n=6).结论 本方法 操作简便,专属性强,结果 准确,可用于冬麦利咽口服液的质量控制.
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冬凌草甲素诱导肝癌细胞凋亡中Bcl-2及端粒酶变化的研究
目的:探讨冬凌草甲素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2表达及端粒酶活性的变化.方法:以8,16,24,32 μmol·L-1不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法.Western blot观察Bcl-2,Bax表达变化.应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERT mRNA表达水平的变化.结果:冬凌草甲素可诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡,具有明显的量-效与时-效关系.冬凌草甲素作用60h后,在HoeChst 33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征.凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调,同时端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低.结论:冬凌草甲素在诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡过程中,能降低端粒酶hTERT mRNA的表达水平和端粒酶活性,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调.
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冬凌草甲素水溶液稳定性研究
目的:考察冬凌草甲素(ORI)水溶液的稳定性,为ORI新型给药系统的研究奠定基础.方法:在室温下将ORI水溶液分别用1 mol·L~(-1)的NaOH或HCl调节pH至设定值,放置60 h,考察pH对ORI水溶液稳定性的影响;采用经典恒温法预测ORI水溶液在室温下和4℃条件下的稳定性.结果:ORI降解的pH-速率曲线呈V型,稳定的pH(pH_m)为5.ORI的水溶液在室温下有效期(t_(90))为53.2 h,4℃下为91.5 h.结论:ORI水溶液不稳定,其降解反应速度受溶液pH的影响,属于酸碱专属催化反应.
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冬凌草甲素亚微乳的制备及其特性表征
目的:制备冬凌草甲素亚微乳,并对其理化性质进行表征.方法:采用高压均质法制备冬凌草甲素亚微乳,并对其粒径、Zeta电位、黏度等性质进行表征.结果:冬凌草甲素亚微乳为白色不透明乳状液体,载药量1 g·L~(-1),平均粒径(138.87±O.60)nm,Zeta电位(47.27±2.31)mV,pH(6.02±0.03),黏度(1.78±0.015)MPa·s.结论:本实验所制得的冬凌草甲素亚微乳理化性质较稳定,工艺简单,可为冬凌草甲素亚微乳制剂的制备提供研究依据.
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冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡
目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用.方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法.结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性.27μmol·L-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化.ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化.细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-XL表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用.结论:冬凌草甲素(27μmol·L-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-XL的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡.
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藏药小叶毛球莸中对映-贝壳杉烯型二萜类成分研究
目的:研究藏药小叶毛球莸的化学成分.方法:采用溶剂法和色谱法提取分离化学成分,并用波谱方法鉴定化学成分结构.结果:从藏药小叶毛球莸中分离得到2个对映-贝壳杉烯型二萜类化合物:冬凌草甲素(1)和nodosin(2),并首次报道了该两个化合物在甲醇(CD3OD)中的~1H和~(13)C-NMR数据.结论:对映-贝壳杉烯型二萜类化合物为首次从莸属植物中分离得到.
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冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释放动力学研究
目的:研究冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释放特性,探讨释药机制.方法:利用HPLC测定冬凌草甲素的含量,以反向透析法进行冬凌草甲素自微乳的体外释放实验,考察释放介质、搅拌速度和处方因素对药物释放的影响.采用相似因子法比较释药曲线的相似性,利用药物释放模型方程拟合释放曲线.结果:释放介质对药物释放无显著影响;在50～100 r·min-1药物释放曲线具有相似性;冬凌草甲素自微乳与乙醇溶液的释放曲线相似;冬凌草甲素自微乳在pH 7.8 PBS中,30 min释放达65%,释放曲线符合Hixson-Crowen方程.结论:冬凌草甲素自微乳释药较快,在水性环境中自发形成的微小乳滴在释药过程中粒径和表面积均发生改变,药物分子透膜为被动扩散过程.
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冬凌草甲素诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及对细胞内活性氧水平的影响
冬凌草甲素是从中药冬凌草Rabdosia rubescens中分离得到的一种贝壳杉烯二萜类的天然有机化合物,具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性.该实验观察冬凌草甲素对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.采用MTT法检测冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用,PI单染、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞凋亡的影响,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平的变化,Western blot分析PARP,Bcl-2,caspase-3蛋白的表达情况.结果表明,冬凌草甲素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有明显的凋亡诱导作用,显著升高细胞内的ROS水平,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并促进caspase-3及其底物PARP的切割.提示,冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的作用可能与升高细胞内ROS水平、下调Bcl-2的表达以及激活caspase-3相关.
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冬凌草甲素在小鼠体内的药代动力学研究
目的:建立小鼠血浆中冬凌草甲素的高效液相测定方法,探讨冬凌草甲素在小鼠体内的药代动力学过程.方法:小鼠按10 mg kg-1尾静脉注射冬凌草甲素后,不同时间点摘除眼球取血,乙酸乙酯萃取血浆,HPLC测定血浆中冬凌草甲素的浓度,并用3P97软件拟合,计算药动学参数.结果:冬凌草甲素在0.202～20.0 mg·L-1线性关系良好,r=0.998 7,测得低、中、高浓度方法同收率均大于93％,低、中、高浓度日内、日间精密度RSD均小于9％.冬凌草甲素小鼠尾静脉注射给药后,在体内呈二室模型分布,其药代动力学方程为C=16.192 5e-0.5546t+5.475 7e-0.0163t,主要药动学参数为t1/2α1.249 9 min,t1/2β42.638 4 min,K21 0.152 3 min-1,K12 0.359 3 min-1,K10 0.059 2 min-1,AUC 366.0350 μg· min-1·mL-1,CL 0.027 3 L·min-1·kg-11,Vc 0.461 5 L·kg-1.结论:建立的RP-HPLC测定方法适用于体内冬凌草甲素的含量测定及药代动力学研究,冬凌草甲素在小鼠体内吸收快、分布也快,药物起效迅速,在体内以消除为主.
