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星点设计-效应面法优化冬凌草甲素聚乳酸纳米粒的制备工艺
目的:优化改良自乳化溶剂扩散法制备冬凌草甲素聚乳酸纳米粒的制备工艺.方法:采用星点设计-效应面法,以冬凌草甲素在有机相中的浓度、载体在有机相中的浓度和水相与有机相的比例为考察因素,以包封率、载药量及药物利用率为考察指标,根据星点设计原理进行实验安排,并用多元线性回归及二项式拟合建立指标与因素之间的数学模型,经效应面法预测佳工艺条件.结果:优化的佳因素范围为药物浓度X1:0.5～0.8 mg/mL;载体浓度X2:1.6～2.6 mg/mL;水油比X3:1～1.5.以优化条件制备的样品平均粒径为98.5 nm,包封率为(28.86±0.93)%,载药量为(8.23±0.35)%.结论:星点设计-效应面法适用于冬凌草甲素聚乳酸纳米粒的工艺优化,所建立的数学模型预测性良好.
关键词： 冬凌草甲素 纳米粒 改良自乳化溶剂挥发法 星点设计-效应面法 -
冬凌草甲素的结构修饰研究进展
冬凌草甲素为贝壳杉烯型二萜类化合物,具有良好的体外抗肿瘤活性,虽然体外活性强,但由于水溶性差、生物利用度低、口服难以吸收等缺点,极大地限制了其临床应用.为了寻找具有更高活性和更好生物利用度的化合物,以开发新的抗肿瘤药物,综述研究者对冬凌草甲素进行的结构改造和修饰的进展.
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前列腺癌细胞内冬凌草甲素的浓度动态变化
建立了高效液相色谱法测定人前列腺癌PC-3细胞内的冬凌草甲素.采用C<,18>色谱柱,以甲醇-水(53:47)为流动相,检测波长238 nm.细胞内冬凌草甲素在10～300 ng/ml浓度范围内线性关系良好,绝对回收率为77.79%～81.32%,RSD为3.29%～4.09%;日内和日间RSD均小于8%.人前列腺癌PC-3细胞与冬凌草甲素溶液或冬凌草甲素纳米粒孵育后,采用该法测定胞内药物浓度动态变化过程.结果表明,纳米粒可显著提高细胞内冬凌草甲素的聚集并减慢其消除.
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冬凌草甲素诱导结直肠癌细胞SW-1116凋亡与衰老的体内外实验研究
目的 探讨冬凌草甲素(Ori)在体内外抑制结直肠癌细胞的作用及机制.方法 应用不同浓度Ori(0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L)处理结直肠癌细胞SW-1116及其建立的裸鼠移植瘤模型,CCK-8法检测Ori对SW-1116细胞的抗增殖效应;流式细胞仪检测Ori处理SW-1116后细胞周期的改变及细胞的凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测Ori诱导SW-1116细胞衰老;软琼脂细胞克隆形成实验检测Ori对SW-1116细胞克隆形成的影响;观察Ori对SW-1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制.结果 Ori可诱导结直肠癌细胞SW-1116生长抑制、细胞周期阻滞、凋亡、衰老和克隆形成能力.Ori还显著抑制SW-1116裸鼠移植瘤的生长,随着Ori剂量的增加裸鼠移植瘤中的细胞凋亡与衰老增加.结论 体内外实验研究表明,Ori具有抗结直肠癌的活性,可能成为治疗结直肠癌的一个新的候选化合物.
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冬凌草甲素下调N-乙酰氨基半乳糖转移酶14(pp-GalNAc-T14)表达对肾癌细胞的体外抑制作用
目的 探讨冬凌草甲素下调N-乙酰氨基半乳糖转移酶14( polypeptide N-acetylgalactosaminy-transferase 14,pp-GalNAc-T14)表达对人肾癌细胞的体外抑制作用.方法 收集20例根治性肾癌切除标本的肾癌组织和相对应的癌旁正常组织,用RT-PCR法检测肾癌组织和癌旁正常肾组织中pp-GalNAc-T14 mRNA的表达情况；用单四唑(MTT)法观察冬凌草甲素对该细胞系(786-0人肾透明细胞癌细胞系)的抑制杀伤效果,并运用RT-PCR法检测用药前后pp-GalNAc-T14 mRNA的表达情况.结果 (1)肾癌组织和正常肾组织中pp-GalNAc-T-14 mRNA均有表达,扫描定量显示pp-GalNAc-T14 mRNA的表达在肾癌组织中较正常肾组织高34.91％(P＜0.05).(2)冬凌草甲素作用于786-0细胞后,细胞中pp-GalNAc-T14表达较空白对照组24h下降15.98％、48h下降44.30％、72h下降58.61％,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)冬凌草甲素可以抑制肾癌细胞的增殖,随着冬凌草甲素剂量的增加和作用时间的延长,其抑制细胞增殖作用逐渐增强,呈明显的时间剂量依赖性.16 μmol/L的冬凌草甲素引起的生长抑制明显高于8μmol/L的抑制率(P＜0.05),高可达90％以上.结论 pp-GalNAc-T14通路与肾癌的发生可能有关；冬凌草甲素可以下调O-糖链的起始糖基化转移酶pp-GalNAc-T14的表达,产生抑制肾癌细胞的作用；冬凌草甲素可能成为RCC治疗的新策略.
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冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究
目的探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K562/A02耐药性的逆转作用.方法以柔红霉素(DNR)和高三尖杉酯碱(HHT)联合不同浓度的冬凌草甲素处理K562/A02及敏感细胞系K562/S,以四唑盐比色法(MTT)检测两种化疗药物的半数抑制浓度(IC50),以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度.结果冬凌草甲素可明显减小K562/A02细胞对DNR、HHT的IC50,降低耐药倍数,下调P170蛋白的表达,增高细胞内DNR的浓度,而对K562/S细胞无显著影响.结论冬凌草甲素可逆转耐药细胞系K562/A02的耐药性,是一种很有希望的抗白血病中药.
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冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用
目的 探讨冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制.方法 雄性裸小鼠20只,皮下接种DU145细胞,随机分成用药组和对照组.于癌细胞种植第2天起,对照组每天喂饲0.9％氯化钠溶液,用药组每天喂饲冬凌草甲素15 mg· kg-1·d-1.记录用药第2～7周末时移植瘤的平均体积.7周后处死小鼠,取肿瘤组织,采用反转录聚合酶链反应检测细胞周期的p16基因、细胞增殖转化相关因子白细胞介素(IL)-6、免疫逃逸相关因子吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的mRNA表达水平.结果 用药组裸小鼠移植瘤的生长明显受到抑制,第3周末至第7周末的移植瘤体积均显著小于对照组(P值均＜0.001).第7周结束时与对照组比较,用药组的生长抑制率达到58.12％.7周后,对照组p16 mRNA的平均相对表达量为0.46,低于用药组的0.95;对照组IL-6mRNA的平均相对表达量为0.33,高于用药组的0.02；对照组IDOmRNA的平均相对表达量为0.08,而用药组均无明显条带,无法计算相对表达量.结论 冬凌草甲素可以显著抑制DU145肿瘤的生长,提示该药对AIPCa有抗癌活性.冬凌草甲素可能是通过阻滞细胞周期,减少其免疫逃逸,以及下调IL-6等抑制AIPCa的生长.
关键词： 冬凌草甲素 雄激素非依赖性前列腺癌 细胞周期 肿瘤逃逸 白细胞介素-6 -
冬凌草甲素对微卫星不稳定结直肠癌的作用在体研究
目的 探索冬凌草甲素对微卫星不稳定的结直肠癌的作用并对其机理进行研究.方法 使用 Lovo细胞(MSH2缺失结肠癌细胞株)建立裸鼠皮下接种模型,4周后使用该模型生长的肿瘤建立结肠造口的结肠癌原位移植模型,使用不同剂量的冬凌草甲素处理动物模型,观察肿瘤的生长曲线、肿瘤微卫星不稳定和TGFβ1、TGFβ2和IGF片段的大小变化.结果 使用5 mg/kg、7.5 mg/kg和10 mg/kg3个治疗组在注射冬凌草甲素后,在1、2、3、4、5周末,治疗组和对照组肿瘤抑制率差异有统计学意义(p＜0.01),而3个治疗组之间蔗异无统计学意义,使用冬凌草甲素治疗后肿瘤微卫星标志仍呈不稳定状态.结论 冬凌草甲素对错配修复基因缺失的结直肠癌有明显抑制作用,但LOVO细胞微卫星不稳定状态并未改变,发生的作用机理与抑制微卫星不稳定无关.
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冬凌草甲素抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖及诱导细胞凋亡的机制研究
目的 研究冬凌草甲素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用及诱导凋亡机制.方法 采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌SMMC-7721细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率,倒置显微镜观察不同浓度组的细胞形态,RT-PCR法检测细胞Survivin、Bcl-2、Bax mRNA的表达,Western Blot法检测细胞Survivin、Bcl-2、Bax的蛋白表达.结果 MTT比色法显示不同浓度的冬凌草甲素可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性.冬凌草甲素作用48 h后细胞表现出特异性凋亡.RT-PCR法和Western Blot法显示,人肝癌SMMC-7721细胞的Bax mRNA和Bax蛋白随冬凌草甲素浓度增加而表达增加,Bcl-2、Survivin mRNA和Bcl-2、Survivin蛋白随药物浓度增加而表达下降.结论 冬凌草甲素能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,降低Survivin、Bcl-2表达和上调Bax表达可能是诱导细胞发生凋亡的机制.miRNA在乳腺癌中表达失调,其中17条表达上调,miR-155是明显上调的miRNA之一,提示其在乳腺癌的发生、发展过程中可能发挥了重要作用.Kong等[7]研究表明miR-155在NMuMG细胞中参与了上皮细胞的间质化和浸润,并且表明miR-155在乳腺癌的转移中发挥了重要作用.本研究发现,miR-155在乳腺癌患者血清中的表达水平明显上调,而且与肿瘤大小、淋巴结转移状况以及肿瘤分期等密切相关,显示了其作为促癌基因的功能,这与既往关于miR-155的研究结论是一致的,ER、PR阳性的乳腺癌患者预后往往好于阴性患者,我们推测,乳腺癌患者血清中miR-155表达水平上调也可能与乳腺癌的不良预后相关,还需要大样本研究和长期随访才能证实.本研究发现,miR-155在乳腺癌患者血清中表达水平上调,且与乳腺癌的临床病理特征密切相关,主要与肿瘤大小、肿瘤分期及淋巴结转移等因素有关.血清中的miRNA有可能成为新一代的乳腺癌肿瘤标志物,并可用于乳腺癌的临床诊断和预后判断,具有较好的临床应用前景.
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冬凌草甲素抗肿瘤作用机制及其结构改造研究进展
天然产物在新药研发中占重要地位,在抗肿瘤药物研究领域,很多活性优良、作用机制和靶点独特的药物都是从活性天然产物中发现的.冬凌草甲素属于ent-贝壳杉烷型二萜化合物,对多种肿瘤具有很好的生长抑制活性.冬凌草甲素的抗肿瘤活性中心为其α,β-不饱和环戊酮结构,其抗肿瘤作用机制涉及细胞凋亡、细胞自噬、细胞周期阻滞等多个方面;近年来,国内外药学工作者针对冬凌草甲素展开了作用机制的深入探索,以及对其提高抗肿瘤活性的结构改造等广泛研究.本文将重点针对这两方面进行综述,期望给药学工作者提供参考.
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冬凌草甲素的研究进展
冬凌草甲素是从冬凌草等植物叶子中提取出的一种贝壳杉烯二萜类化合物,具有好的抗肿瘤活性.对冬凌草甲素进行结构修饰,改善其水溶性得到了部分抗肿瘤活性更强的冬凌草甲素衍生物.本文试从药理作用、构效关系及其衍生物等方面对冬凌草甲素的研究概况作一综述.
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冬凌草甲素纳米结晶黏附性缓释片的制备及体外评价
目的 制备冬凌草甲素纳米结晶黏附片,考察其体外释放性、黏附性和结晶药物形态.方法 采用高压均质法将冬凌草甲素制成纳米结晶,以羟丙甲纤维素(HPMC)和卡渡姆为生物黏附材料,甘露醇为稀释剂和支架剂制备冬凌草纳米结晶生物黏附性缓释片.采用紫外分光光度法测定冬凌草甲素的含量,采用正交设计结合多元线性回归,以累计释放率为主要考察指标,考察了HPMC、卡波姆、甘露醇的用量对药物溶出的影响,确定了片剂的优化处方,并对片剂的黏附性和体外药物释放做了考察.结果 佳处方含HPMC 31.0%,卡波姆21.7%,甘露醇7.44%.片剂中药物以纳米结晶形式从片剂中溶出,而且具有黏附和缓释作用.结论 以佳制备工艺条件制备纳米结晶片,制备工艺简单,重现性好.同时体外实验表明,冬凌草甲素纳米结晶生物黏附性缓释片显示了纳米结晶与生物黏附的双重优点.
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冬凌草甲素对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及机制
目的 检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB 231侵袭的影响并探讨其作用的分子机制.方法 用Transwell实验检测冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MDA-MB 231侵袭的影响；明胶酶谱实验检测冬凌草甲素对基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)酶活性的影响；荧光素酶报告基因实验检测冬凌草甲素对MMP-2和MMP-9启动子活性的影响.结果 冬凌草甲素明显抑制MDA-MB 231细胞的侵袭,且明显下调MMP-2和MMP-9的启动子活性和酶活性(P＜0.05或＜0.01).结论 冬凌草甲素能显著抑制乳腺癌细胞的侵袭,且这种抑制作用可能通过下调MMP-2和MMP-9的启动子活性和酶活性而实现.
关键词： 冬凌草甲素 乳腺癌 侵袭 明胶酶谱 荧光素酶报告基因分析 -
冬凌草甲素固体分散体的制备及溶出度测定
目的：冬凌草甲素水溶性差影响其生物利用度。文中以泊洛沙姆为载体制备冬凌草甲素固体分散体，提高其体外溶出度。方法以泊洛沙姆188为载体，采用溶剂法制备冬凌草甲素固体分散体，并采用差示扫描量热法和粉末X-射线衍射法鉴别冬凌草甲素在固体分散体中的状态，以高效液相色谱法测定原料药、物理混合物和固体分散体在不同pH溶出介质中的溶出度。结果冬凌草甲素分散在泊洛沙姆中，失去了原有的结晶结构，固体分散体的体外溶出研究表明：其浓度在1～25μg／mL范围内线性关系良好。进样精密度实验表明，低、中、高浓度的精密度分别为1．52％、0．85％、0．47％，RSD均＜2％。溶液稳定性实验测得RSD为1．1％，12h内稳定。回收率实验表明，低、中、高浓度冬凌草甲素的回收率分别为99．1％、100．5％、99．5％。原料药、物理混合物和冬凌草甲素固体分散体均以水、pH6．8磷酸盐缓冲液和pH1．2盐酸溶液为溶出介质的累积溶出度以冬凌草甲素固体分散体以作用60 min时高，3种介质的累积溶出度分别为（92．6±4．2）％、（93．1±3．5）％、（94．4±2．9）％。结论成功制备以泊洛沙姆188为载体的冬凌草甲素固体分散体可提高其体外溶出度。
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冬凌草甲素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移能力及E-钙黏蛋白和波形蛋白表达的影响
目的:研究冬凌草甲素对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖抑制及作用机制.方法:采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌细胞SMMC-7721,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western Blot法检测E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白(Vimentin)的表达.结果:MTT法显示不同浓度的冬凌草甲素可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性.划痕实验显示抑制细胞迁移能力,Western Blot法显示,人肝癌细胞SMMC-7721的E-cad随冬凌草甲素浓度增加而表达增加,Vimentin随药物浓度增加而表达下降.结论:冬凌草甲素能抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长及迁移能力,其机制可能与上调E-cad的表达,降低Vimentin的表达有关.
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冬凌草甲素对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡影响的研究
目的 通过体外无菌培养乳腺癌Bcap-37细胞,观察冬凌草甲素对Bcap-37细胞的活性以及凋亡的影响,探索冬凌草甲素的抗肿瘤机制.方法 无菌培养Bcap-37细胞,冬凌草甲素浓度为0、1、2、4、8、16、32、64μg/ml,作用12、24、36、48h时,采用MMT法检测冬凌草甲素抑制Bcap-37细胞活性;冬凌草甲素浓度为8μg/ml、32μg/ml,作用24h,流式细胞术检测冬凌草甲素对Bcap-37细胞凋亡的影响.结果 冬凌草甲素对乳腺癌Bcap-37细胞有增殖抑制以及诱导凋亡的作用.结论 冬凌草甲素可抑制乳腺癌Bcap-37细胞的增殖以及诱导细胞凋亡,为临床治疗乳腺癌提供了新的依据.
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冬凌草甲素逆转耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞耐药性的研究
目的 分析冬凌草甲素对耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞的影响,探讨其逆转耐药的机制.方法 诱导建立耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞;CCK-8法检测吉西他滨对人胰腺癌PANC-1/Gem及PANC-1细胞增殖的影响;采用Chou-Talalay计算药物联合指数(CI);Western blot检测干预前后耐药相关蛋白的表达水平建立皮下异种移植瘤模型,观测不同药物组别对肿瘤生长情况的影响;免疫组化法检测不同组别移植瘤中相关耐药蛋白的变化差异.结果 PANC-1/Gem细胞较PANC-1细胞对吉西他滨的敏感性降低(P<0.01);冬凌草甲素能明显抑制胰腺癌细胞增殖;冬凌草甲素与吉西他滨具有协同抗肿瘤作用;与空白组和吉西他滨组比较,冬凌草甲素及联合组中MRP1和GST-π表达量降低;冬凌草甲素对移植瘤具有抑制作用且能够降低移植瘤中MRP1蛋白的表达.结论 冬凌草甲素在体内外能够抑制人耐吉西他滨胰腺癌PANC-1/Gem细胞的增殖,通过降低MRP1及GST-π耐药蛋白的表达逆转PANC-1/Gem对吉西他滨的耐药,增强其对吉西他滨的敏感性.
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冬凌草甲素增强吉西他滨对胰腺癌Panc-1细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用
目的：探讨冬凌草甲素在体内增强吉西他滨对胰腺癌Panc-1细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用及其可能的作用机制。方法建立胰腺癌Panc-1细胞株的裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为对照组（Control）、吉西他滨组（Gemcitabine）、冬凌草甲素组（Oridonin）以及冬凌草甲素联合吉西他滨组（Gem+Ori），每组各10只，各组均采用腹腔注射给药，1次/3d，共10次。实验过程中测量肿瘤体积并称量裸鼠体重。免疫组织化学染色法观察肿瘤组织中p38和p53表达的变化，Tunel法检测细胞凋亡。结果与其它各组比较，冬凌草甲素联合吉西他滨组对Panc-1细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用；末次用药1周后联合组肿瘤体积和质量明显小于其他各组（P<0.05）；免疫组织化学染色结果显示冬凌草甲素联合吉西他滨组的p38和p53蛋白表达量显著增高（P<0.05）；Tunel检测结果显示联合组凋亡细胞数明显增多。结论冬凌草甲素可协调增强吉西他滨对胰腺癌Panc-1细胞移植瘤的抑瘤作用，其机制可能是通过上调p38及其下游p53的表达而实现。
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冬凌草甲素体外抑制人胃癌SGC-7901细胞炎性因子的研究
目的 通过观察冬凌草甲素对胃癌Sgc-7901细胞体外培养的增殖、凋亡的影响及作用前后细胞炎性因子的变化程度,探讨其抗肿瘤的分子机制.方法 将胃癌Sgc-7901细胞系进行无菌培养,通过CCK-8法筛选冬凌草甲素作用24h后抑制Sgc-7901细胞增殖的佳浓度;RT-PCR法检测冬凌草甲素对Sgc-7901细胞表达MMP-2和MMP-9水平的影响;Western Blot法检测冬凌草甲素作用对Sgc-7901细胞表达IL-1β和IL-33水平的情况;通过免疫细胞荧光法检测冬凌草甲素作用后Sgc-7901细胞因子IL-33表达的情况.结果 CCK-8法检测结果显示:冬凌草甲素能抑制Sgc-7901细胞增殖,并且这种影响呈剂量-效应关系,其24h半数生长抑制剂量(IC50)为66.88μm;RT-PCR实验结果显示,冬凌草甲素能下调Sgc-7901细胞MMP-2和MMP-9的表达;Western Blot和免疫细胞荧光法检测结果显示,冬凌草甲素能下调Sgc-7901细胞中IL-1β和IL-33的表达.结论 冬凌草甲素通过体外诱导细胞凋亡来抑制胃癌Sgc-7901细胞的增殖;同时,也可通过下调细胞中IL-1β、IL-33等炎性因子的分泌,从而达到抗肿瘤的作用,为临床治疗胃癌提供新的理论依据.
关键词： 冬凌草甲素 胃癌SGC-7901细胞 炎性因子 抗肿瘤 -
冬凌草甲素对胃癌Sgc-7901细胞炎性细胞因子的影响
目的 通过体外无菌培养Sgc-7901细胞,观察加入冬凌草甲素后,Sgc-7901细胞炎性因子表达的影响,评价冬凌草甲素对Sgc-7901细胞炎性因子的变化差异,探讨冬凌草甲素抗肿瘤的机制,为临床治疗胃癌提供新的理论依据.方法 无菌培养Sgc-7901细胞,CCK-8实验筛选冬凌草甲素作用24h后抑制Sgc-7901细胞增殖的佳作用浓度;液相芯片分析系统测定冬凌草甲素对Sgc-7901细胞IL-2、IL-4、IL-6、IL-10以及TNF-α炎性因子的影响.结果 CCK-8实验结果显示,冬凌草甲素能抑制Sgc-7901细胞增殖,并且呈剂量依赖性,且IC50分别是66.88μm;液相芯片分析系统检测冬凌草甲素处理前后Sgc-7901细胞IL-2、IL-4、IL-6、IL-10以及TNF-α炎性因子差异表达结果显示:冬凌草甲素组与空白对照组比较,部分炎性因子表达下调.结论 冬凌草甲素可以抑制Sgc-7901细胞的增殖,下调了Sgc-7901细胞中IL-6等炎性因子的分泌,从而达到抗肿瘤的作用.
