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酸蚀面螺纹状牙种植体的表面分析
目的:评价酸蚀面与机械面螺纹状牙种植体的表面差异.方法:应用扫描电镜(SEM)对10枚酸蚀面、10枚机械面螺纹状牙种植体进行表面分析,采用小鼠成纤维细胞(L929)进行细胞毒性试验.结果:酸蚀面螺纹状牙种植体表面呈无数微米级微孔,表面粗糙度Ra为2.1 μm.细胞毒性试验显示酸蚀面和机械面螺纹状牙种植体均无细胞毒性反应,生物相容性良好.结论:酸蚀面螺纹状牙种植体具有良好的细胞相容性,表面呈比较均匀的微米级微孔,是一种较理想的表面状况.
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雪卡毒素两种检测方法的比较研究
目的 建立雪卡毒素的细胞毒性试验检测和小鼠生物法检测方法,对比评价两种方法的优缺点.方法 利用不同浓度的雪卡毒素标准品(P-CTX-1)结合乌苯苷和黎芦定处理小鼠神经母细胞瘤细胞(N-2a),研究和建立毒素剂量与细胞活性的毒性曲线关系式.同时,通过测定昆明系小白鼠的雪卡毒素半数致死剂量LD50和毒素剂量与小鼠死亡时间的关系方程式,建立小鼠生物法检测标准,再分别以两种方法对32份不同月份采集的鱼样品的毒素提取物进行检测,对两种方法检测结果做分析比较. 结果细胞毒性试验法检测结果与小鼠生物法检测结果具有一定的相关性,但细胞毒性试验法检测雪卡毒素的检测灵敏度远高于小鼠生物法.结论 细胞毒性试验检测法适用于大量样品的初步筛选方法,而小鼠生物法可作为雪卡毒素检测的重要参考方法.
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医疗器械体外细胞毒性试验相关标准的比较及有关内容的商榷
八十年代末，国际标准化组织成立了 TC194医疗器械生物学评价技术委员会，研究制定“生物材料和医疗器械生物学评价标准”，相继推出了 ISO 10993系列标准。
中国是从70年代后期开始研究生物材料和医疗器械的生物学评价，1983年由以中国药品生物制品检定所为主的研究单位对生物材料生物学评价试验项目选择（短期）和试验方法进行了研究。1987年卫生部根据研究结论，正式发布 WS5‐1‐87标准，为国内开展生物材料和医疗器械的生物学评价提供了依据。1997年卫生部以卫药发（1997）第81号文，发布《生物材料和医疗器材生物学评价技术要求》。为使中国医疗器械生物学评价与国际接轨，1997年国家技术监督局将 ISO 10993部分转化为国家标准，发布了 GB／T 16886‐1997医疗器械生物学评价标准，GB／T 16886现已成为国内评价医疗器械生物安全性的重要标准之一。然而，由于中国的医疗器械一直是分专业归口管理，因此除 GB／T 16886外，还有按专业制定的生物学评价标准，如：医用输液输血注射器具类、医用有机硅材料类以及口腔医疗器械类等标准。 -
人类白细胞抗原-B27与强直性脊柱炎的相关性分析
目的 了解人类白细胞抗原(HLA)-B27与强直性脊柱炎(AS)的相关性.方法 采用淋巴细胞毒方法对348例非AS患者或体检人员(非AS对照组)、52例AS疑似患者(AS疑似组)和119例AS患者(AS组)进行HLA-B27检测.结果 非AS对照组、AS疑似组和AS组的HLA-B27阳性率分别为4.02%、32.69%和90.76%,AS组、AS疑似组的HLA-B27阳性率明显高于非AS对照组,AS组的HLA-B27阳性率明显高于AS疑似组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 HLA-B27与AS高度相关,检测HLA-B27对疑似AS患者的早期诊断有重要意义.
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CD4+NKT细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的意义
我们采用流式细胞术（flow cyto-metry）对慢性HBV感染者外周血CD4+NK-T、CD8+NK-T细胞的分布情况进行分析，并对细胞样品进行51Cr细胞毒性试验，以鉴定其细胞毒性。一、资料与方法1. 对象：病例为第一军医大学南方医院感染内科1999年5月至9月门诊及住院病人。选择慢性HBV携带者（AsC）18例、经肝组织活检证实的慢性乙型病毒性肝炎（中度）（CHB）18例，正常对照组12例取自门诊健康体检者。48例受检者中女14例，男34例，年龄17～42岁（平均32.4岁）；36例慢性HBV感染者均为HBsAg阳性（ELISA），27例HBeAg阳性，9例抗-HBe阳性；正常对照组除5例抗-HBs阳性外，其余对照者HBV血清标志物全部阴性。2. 方法：流式细胞检测（FACS）分析CD4+ NK-T、CD8+NK-T细胞的分布情况新鲜抗凝全血4ml，常规分离PBMC，在RPMI 1640培养液中、37℃培养2h，移去贴壁的单核细胞。2×106/ml非贴壁细胞继续以20U/ml rhuIL-12及100U/ml rhuIL-2刺激培养14d，加入FITC标记鼠抗人CD4单克隆抗体（mAb）或CD8 mAb、PE标记CD56-mAb 45min，作FACS，获得CD4+ NK-T和CD8+ NK-T细胞的百分率。所有病例均同步设一鼠抗人IgG（PE、FITC）细胞样品作为对照。
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MTT法和XTT-PMS法测定细胞毒性的探讨
目的:探讨细胞毒性的评价方法.方法:分别采用MTT,XTT-PMS比色法和传统的血球计数法比较医用高分子材料的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929)相对增殖率的影响.结果:采用3种测定方法测定此类医用高分子材料,均呈现出高的细胞相对增殖率,其细胞毒性为1级,即无细胞毒性.结论:在常规细胞毒性测试法的基础上采用MTT和XTT-PMS比色分析法,能更快捷准确地测定细胞的增殖反应,XTT-PMS与MTT相比较,其灵敏度更高,操作更简便.
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新型可注射性人工髓核的体外细胞毒性测试
目的 检测前期制备的新型人工髓核材料的细胞毒性.方法 材料分为4组,编号为1～4.样品1组为合成的聚碳酸酯型聚氨酯;样品2组为在室温下由硅氢加成反应制成的缩合硅橡胶材料;样品3组是在2号样品中添加二氧化硅后制成;样品4组为室温下固化的聚醚型聚氨酯.采用细胞培养基作为阴性对照组.采用小鼠成纤维细胞(1929细胞)在材料浸提液中培养的方法 检测其细胞毒性,使用3-(4,5-二甲基-2,噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTF)比色法比较材料组与对照组问吸光度值和细胞相对增值率.结果 材料组的吸光度值和L929细胞相对增殖率相埘于对照组没有明显差异(P>0.05),在细胞毒性分级中处于0～1级,属于合格材料.结论 该材料没有细胞毒性,具有作为髓核替代材料的应用潜力.
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脱细胞膀胱基质补片的生物相容性研究
目的：评价脱细胞膀胱基质作为盆底修复替代材料的生物相容性。方法通过细胞毒性试验、溶血试验、阴道埋植试验等体内外生物学实验相结合的方法评价该材料的生物相容性。结果在细胞毒性试验中，材料毒性级别0～1级。材料浸提液的溶血率为1．5％。大体和组织学观察示材料未引起宿主免疫排斥反应，植入后引起轻度的异物反应，移植12周后基本降解。结论该材料具有良好的生物相容性，但需调整其降解率，以适应盆底修复手术要求。
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溪黄草抗乙型肝炎病毒体外抑制作用研究
目的：为证实溪黄草单味药具有体外抗乙型肝炎病毒活性提供重要的科学依据。方法将溪黄草50%乙醇提取物配置成一定药物浓度，拟采用HepG2.2.15细胞模型进行细胞毒试验和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）酶联免疫检测。结果半数细胞抑制时其浓度为4.275 mg/mL，溪黄草粗提物对HBsAg的半抑制浓度（IC50）为2.250 mg/mL，对HBeAg的IC50为2.150 mg/mL，治疗指数小于2。结论溪黄草粗提物具有抑制体外乙型肝炎病毒的作用。
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Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步探讨
目的 探讨人B细胞淋巴瘤Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤的机制.方法 以K562细胞作为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤Raji细胞的活性.并分别用PCR方法和流式细胞仪检测K562和Raji细胞MICA/B、ULBP1-3、HLA基因型和分子的表达情况.效靶比20∶1时用单抗分别阻断K562和Raji细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3和HLA-Ⅰ类分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果 不同效靶比时NK细胞杀伤Raji细胞的活性明显低于杀伤K562细胞的活性,二者之间差异有统计学意义(P<0.05).K562细胞表达MICMB和ULBP1～3基因和分子,不表达HLA-Ⅰ类分子,Raji细胞表达ULBP1～3基因和HLA-Ⅰ类分子,不表达MICA/B和ULBP1～3分子.Raji细胞HLA基因型为A*3、3.B*71、71,Cw3、4.用单抗封闭MICMB和ULBP1～3分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对Raji细胞的杀伤活性无明显改变.结论 Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制和Raji细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达NKG2D的配体MI-CA/B和ULBPI～3有关.
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纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究
目的 评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性.方法 对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估.结果 纤维蛋白止血敷料的细胞毒性分级0-1级;无急性全身毒性作用,无皮肤刺激反应、皮内刺激反应,无溶血性.结论 纤维蛋白止血敷料具有良好的生物相容性.
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Alamar blue法测定细胞毒性
目的 评价测定细胞毒性的方法.方法 分别采用血球计数法、四氮甲唑蓝(MTT)、Alamar blue法测定医用高分子材料的浸提液对小鼠成纤维细胞L-929相对增殖率的影响.结果 后两种测定方法均呈现出高的细胞相对增殖率,其细胞毒性为1级,即无细胞毒性.结论 MTT和Alamar blue法均能快捷准确地测定细胞的增殖反应,Alamar blue比MTT操作更简便.
关键词： 细胞毒性试验 四氮甲唑蓝 Alamar Blue -
新型苯并噻唑衍生物YLT322诱导结直肠癌细胞的凋亡作用及机制研究
目的:YLT-322是本实验室合成的一种新型的苯并噻唑衍生物,已有文献证实其可以通过线粒体途径诱导肝癌细胞HepG2凋亡,对多种癌细胞都有效果.本实验拟通过一系列生物实验来考察YLT-322对结直肠癌细胞的作用.方法:作者对多种癌细胞进行初筛,筛选出两种效果较好的结直肠癌细胞进行细胞毒性试验,平板克隆形成,Hoechst等实验,以证实YLT-322对结直肠癌有良好的抑制作用.结果:YLT-322实验组比对照组的细胞凋亡明显增多,且与剂量和作用时间成正比.说明YLT-322的确对结直肠癌有抑制作用.结论:YLT-322对结直肠癌细胞有诱导凋亡的作用,作为一个新型的小分子抑癌药物,具有很大的开发价值.
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异种去细胞角膜基质浸提液对 CHL 细胞毒性的实验研究
目的：通过鸵鸟去细胞角膜基质浸提液对中国仓鼠肺纤维细胞（CHL）毒性的实验观察，筛选出浸提液的大无毒浓度，为进一步完成该去细胞角膜基质材料的染色体畸变实验奠定基础。方法采用细胞培养的方法，将鸵鸟去细胞角膜基质材料制备成浸提液，用浸提原液、1∶2，1∶4稀释的浸提液与传代培养的 CHL 细胞共同培养，同时设立阴性、阳性对照，参考 MTT 比色法评价24 h 后对细胞生长的影响。结果1∶4稀释的浸提液既无毒性，又具有促进细胞生长的作用。结论采用 CHL 细胞进行细胞毒性试验，依据分级结果并结合细胞形态学特征可筛选出鸵鸟去细胞角膜基质浸提液进行 CHL 细胞染色体畸变实验的基准无毒浓度。
关键词： 鸵鸟去细胞角膜基质浸提液 细胞毒性试验 基准无毒浓度 -
染料介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣的细胞毒性研究
目的 评价染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣膜的细胞毒性.方法 将L929细胞经亚甲基蓝介导光氧化处理去细胞猪主动脉瓣浸提液培养后,用MTT比色法测定其相对增殖率.将L929细胞与染料介导光氧化处理去细胞猪主动脉瓣直接接触培养,于不同时间观察细胞的生长状态.将L929细胞种植于染料介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣表面,用扫描电镜观察其生长情况.结果 染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣的性质稳定,细胞毒性程度为0～Ⅰ级.L929细胞与瓣膜材料直接接触培养生长良好,形态学无明显改变.结论 染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣的细胞相容性良好.
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蜂胶提取液生物安全性的初步评价
目的:对自行研制的300 g/L蜂胶提取液的生物安全性进行初步的评价.方法: 根据中华人民共和国医药行业标准,应用体外细胞培养琼脂覆盖法对这种蜂胶提取液进行细胞毒性评价.利用大耳白兔检测这种蜂胶提取液对口腔黏膜的刺激反应.结果:该蜂胶提取液的细胞毒性分级为0级;口腔黏膜刺激试验中实验动物未见局部及全身的不良刺激反应.结论:该蜂胶提取液不具有细胞毒性及对口腔黏膜的不良刺激反应.
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材料受试形式对材料细胞毒性测试结果的影响
目的:研究琼脂扩散法细胞毒性试验中材料受试形式对材料细胞毒性测试结果的影响.方法:制备光固化复合树脂、氧化锌丁香油水门汀、磷酸锌水门汀、玻璃离子水门汀、聚羧酸锌水门汀的固体试样及浸提液,采用琼脂扩散法测定此5种材料凝固即刻和24 h的固体试样及其浸提液的细胞毒性.结果:细胞毒性由重到轻依次为:①以材料浸提液为试样时,氧化锌丁香油水门汀(重度) >磷酸锌水门汀=玻璃离子水门汀=聚羧酸锌水门汀(中度) >光固化复合树脂(轻度);②以凝固24 h为受试样品时,氧化锌丁香油水门汀(重度) >磷酸锌水门汀=聚羧酸锌水门汀=玻璃离子水门汀=光固化复合树脂(轻度);③以即刻凝固为受试样品时,氧化锌丁香油水门汀(重度) >磷酸锌水门汀(中度) >聚羧酸锌水门汀=玻璃离子水门汀=光固化复合树脂(轻度).结论:3种受试形式对轻、重度细胞毒性材料的测定结果无影响,而对中度细胞毒性材料的测定结果有影响,其中浸提液测出相对较高的细胞毒性,而试样凝固24 h的细胞毒性则小于即刻凝固.
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新型防钙化无支架生物心脏瓣膜的毒性试验研究
目的对采用环氧氯丙烷和Triton X-100联合处理的新型防钙化无支架生物心脏瓣膜进行临床应用前毒性试验研究. 方法参考美国
试验方法,对该生物瓣膜进行细胞毒性、小鼠全身毒性、溶血、皮内注射刺激等试验. 结果①直接接触法细胞毒性试验表明,该种生物瓣膜对L-929小鼠成纤维细胞株的生长无明显毒性作用;②用该材料的浸提液进行小鼠全身毒性试验、溶血试验、皮内注射刺激试验,表明毒性符合 要求;③戊二醛处理的猪主动脉瓣,经环氧氯丙烷和Triton X-100联合化学改性后,毒性较单纯戊二醛处理的猪主动脉瓣减轻. 结论对新鲜猪主动脉瓣依次用戊二醛、环氧氯丙烷、Triton X-100联合防钙化处理,再以独特的缝合技术制作的新型防钙化无支架生物心脏瓣膜,从本组毒性试验研究的结果看符合美国 ,有开发和利用价值,可以进一步进行试验研究. -
可吸收防粘连液的生物安全性评价
目的 对可吸收防粘连液进行生物学安全性评价,为产品成功应用于临床提供依据.方法 参照GB/T 16886《医疗器械生物学评价标准》的要求,对可吸收防粘连液进行热原试验、体外细胞毒性试验、迟发型超敏反应试验、急性全身毒性试验、溶血试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验及小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验(mLA试验)等生物相容性试验研究.结果 可吸收防粘连液经热原检测高升温0.1℃,无致热性,细胞毒性1级,急性全身毒性反应阴性,迟发型超敏反应阴性,遗传毒性检测均为阴性.以市售医用几丁糖为对照品,经动物血液学一般检验、生化检验,试验组与对照组相比无统计学差异(P＞0.05),动物体重/脏器系数与对照组相比无统计学差异(P＞0.05),结果显示无亚慢性全身毒性.结论 可吸收防粘连液具有良好的生物相容性和生物学安全性,可为产品应用于临床提供依据.
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低免疫原性猪真皮支架制备及其细胞相容性评价
目的 观察基质金属蛋白酶7(MMP-7)、京尼平及真空冷冻干燥处理对猪脱细胞网状层真皮基质组织结构及细胞相容性的影响. 方法 取清洁级健康大约克夏猪边腹部皮肤,采用机械法制作54块网状层真皮,面积10.0 mm ×5.0 mm,厚0.5～0.6mm,按随机数字表法分为正常对照组(A1组,不行处理)、脱细胞组(R组,行脱细胞处理)、脱细胞+ MMP-7组(C组,行脱细胞和MMP-7处理)、脱细胞+ MMP-7+京尼平组(D组,脱细胞处理后用MMP-7和京尼平处理)和脱细胞+MMP-7+京尼平+真空冷冻干燥组(E组,除行D组处理外,加真空冷冻干燥处理),A1组6块,其余毎组均为12块.另取6块相同面积人ADM设为人ADM组(A2组,不行处理),即细胞相容性实验中的对照组.采用HE染色、扫描电镜检测A1、B～E组真皮支架中细胞数量及组织结构变化,采用免疫组织化学染色法检测A1、B、C组样本中波形蛋白、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原蛋白残留情况,采用细胞毒性试验检测B～E组浸提液的细胞毒性.接种人Fb于B～E组和A2组真皮支架表面培养,观察培养3、7、14 d时 Fb生长情况,采用ELISA法检测培养3、7 d 上清液中IL-6、IL-8含量.对数据进行双因素方差分析及LSD-t检验. 结果 A1组可见含毛囊的浅黄包颗粒状结构,B组标本毛囊内仍有少量毛发、上皮根鞘、细胞核、细胞碎片样结构及波形蛋白、LN、Ⅳ型胶原蛋白残留,C～E组经MMP-7处理后上述物质被完全去除.大体观察显示,D、E组真皮支架韧性较B、C组增加.C ～E 组胶原纤维结构完整,排列与A1组相似且胶原纤维之间间隙增大,其中C、D组间隙相近但均大于B组,E组大 .B～E组真皮支架浸提液细胞毒性为0或1级.Fb于A2和B～E组真皮支架上均能增殖,并且随培养时间延长逐渐由单层变成复层生长进而向标本内部生长.D、E组真皮表面细胞密度较高,A2、C组细胞则主要存在于组织内部.培养7 d,A2、B～E组培养上清液中IL-6含量分别为(132±14)、(104 ±9)、(122±14)、(120±12)、(128±17) pg/mL,IL-8含量分别为(135±18)、(102±17)、(127±18)、(134 ±23)、(141±24) pg/mL,分别较培养3d的(55±13)、(34±8)、(48±8)、(50±13)、(49±12)pg/mL和(93±19)、(63±11)、(82±15)、(82±16)、(89±16) pg/mL明显增高(F值分别为98.869、184.038、125.531、93.237、87.265和 15.694、23.451、22.801、19.607、1 8.808,P值均小于0.05)；同一时相点A2、B～E组组间IL-6、IL-8含量比较,差异均有统计学意义(F值分别为2.809、3.301 和3.757、3.266,P值均小于0.05)；LSD-t检验结果表明,A2、C～E组组间IL-6、IL-8含量比较差异无统汁学意义(t值分别为0.058 ～1.905、0.034 ～1.295,P值均大于0.05),但均较B组高(t值分别为3.707～ 5.612、2.785～4.079,P值均小于0.05).结论 脱细胞联合MMP-7、京尼平及真空冷冻干燥方法制备的低免疫原性猪真皮支架具有较好的细胞相容性,细胞长人组织内部较少可能与京尼平增加组织韧性有关.
