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P53CyclinD1P-gp在上皮性卵巢癌发生中的作用及其预后关系
目的:探讨P53、CyclinD1、P-gp在上皮性卵巢癌发生中的作用及其预后关系.方法:阅读国内外有关文献并进行综述.结果:P53、CyclinD1、在上皮性卵巢癌的发生、发展过程中起关键作用,P53、Cyc-linD1、P-gp可作为卵巢癌预后和复发的重要指标.结论:P53、CyclinD1可能参与上皮性卵巢癌的发生、发展,P53、CyclinD1、P-gp可能是卵巢癌治疗靶点.
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三棱散对人胃癌SGC-7901细胞增殖作用的影响
目的:探讨三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡影响及其可能机制.方法:制备三棱散水提物,培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法观察不同时间(24 h,72 h)不同浓度三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响.用流式细胞仪检测三棱散水提物对细胞周期阻滞及其凋亡的影响.RT-PCR法检测不同浓度三棱散水提物作用人胃癌SGC-7901细胞72 h后细胞NF-κBp65 mRNA、cyclinD1 mRNA及p16 mRNA表达情况.结果:随着三棱散水提物浓度增高和作用时间的延长,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐增高(P＜0.05),同一浓度不同时问的细胞增殖抑制率相比,有显著性差异(P＜0.05).人胃癌SGC-7901细胞在G0/G1期表现出明显的增加,S期细胞明显的减少,各浓度组均明显诱导细胞凋亡(P＜0.05),其凋亡率随三棱散浓度增加而提高.RT-PCR法检测显示,随着三棱散水提物浓度的增加,NF-κBp65 mRNA、cyclinD1 mRNA表达逐渐减少,p16 mRNA表达逐渐增加.三棱散水提物浓度5.0 mg/mL,10.0 mg/mL时,NF-κBp65 mRNA、cyclinD1 mRNA及p16 mRNA表达存在显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞有抑制增殖和促凋亡作用,呈时间和浓度依赖性,且G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少.RT-PCR法检测显示,NF-κBp65 mRNA、cyclinD1 mRNA呈现低表达,p16 mRNA呈现高表达,由此推测,NF-κBp65表达下调会直接影响CyclinD1表达,发挥细胞周期的正反馈调节,p16表达上调可启动细胞周期的负反馈调节,共同作用产生细胞增殖抑制及促进凋亡的作用.
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中药组方对小鼠Lewis肺癌细胞抑制作用的机理研究
目的:探讨中药组方抑制小鼠Lewis肺癌细胞的作用机理.方法:复制小鼠Lewis肺癌模型,用免疫组织化学方法,检测中药组方、替加氟生理盐水对各组肿瘤细胞周期蛋白D1(cyclinD1),增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,并测定各组小鼠的皮下瘤重,计算抑瘤率.结果:中药组方治疗组的皮下瘤重,cyclinD1标记指数和PCNA标记指数均低于生理盐水组(P＜0.01),且抑瘤率为43.09%,与替加氟组差异无显著性(P＞0.05).结论:中药组方能有效降低小鼠Lewis肺癌细胞cyclinD1的表达,抑制细胞增殖,从而抑制肺癌细胞生长.
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温下方抑制肺癌A549细胞增殖及对PCNA Rb CyclinD1表达的影响
目的:研究温下方对肺癌A549细胞增殖的抑制作用及对PCNA、Rb、CyclinD1表达的影响.方法:正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549细胞,MTT法检测含药血清对A549细胞的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察PCNA、Rb、CyclinD1的表达.结果:温下方大、小剂量含药血清组作用24h抑制率为29.85%、25.90%,作用36h抑制率为42.02%、35.10%;PCNA表达降低至3.08±0.97、3.15±0.88,CyclinD1表达降低至2.65±0.83、2.70±0.79.结论:温下方可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,明显降低PCNA、CyclinD1表达.
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幽门螺杆菌感染CAG脾胃湿热证与CyclinD1 CyclinE及DNA含量的相关性研究
目的:探讨幽门螺杆茵(H. pylori, Hp)感染慢性萎缩性胃炎(CAG)脾胃湿热证与细胞周期蛋白(CyclinD1、 CyelinE)及细胞核DNA含量表达的相关性.方法:将80例Hp感染CAG患者按中医辨证分型,其中脾胃湿热证44例.脾虚证36例,正常对照组18例,分别采用组织化学免疫法和流式细胞术检测CyelinD1、CyclinE和DNA含量,并分析比较它们间的相关性.结果:(1)Hp感染CAG脾胃湿热组的肠化程度明显高于脾虚组.(2)正常对照组胃黏膜内CyclinD1、 CyclinE主要呈阴性或弱阳性表达, Hp感染CAG脾胃湿热组及脾虚组患者胃黏膜CyclinD1、 CyclinE表达增强,较正常对照组有非常显著差异,但两组间无显著性差异.(3)Hp感染CAG脾胃湿热组与脾虚组胃黏膜细胞核DNA含量(DI值)比较无显著性差异(P>0.05).萎缩组、萎缩伴肠化组、萎缩伴不典型增生组各组间DI值比较元显著性差异(P>0.05).结论:(1)在一定的病情发展过程,脾胃湿热组病情进展较快,病情较重,原因可能是脾胃温热证与炎症关系密切所致.(2) CyclinD1、 CyclinE的表达增强可能与Hp感染及所继发炎症有关.脾胃湿热证和脾虚证之间细胞增殖可能呈递增的趋势,而这种递增可能提示了庆病发展的方向, CydlnE蛋白阳性表迭可能是胃炎发生发展过程中的重要分子事件.(3) Hp感染CAG尚未发展为胃癌的过程中黏膜细胞可能尚处于病变早期或DNA合成速度相同.
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细胞周期蛋白D1基因多态与人结直肠癌遗传易感性
目的 探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因第87啦点单核苷酸多态(G870A)与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)遗传易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测345例CRC与670名对照的G870A基因型分布及差异.结果 CRC和对照两组人群的Cyclin D1 G870A基因型分布差异无统计学意义(P>0.05).与GG基因型相比,GA、AA基因型及A等位基因携带者(GA及AA基因型)的CRC风险分别为1.08倍(95%CI=0.75～1.54)、1.01倍(95%CI=0.68～1.51)及1.06倍(95%CI=0.75～1.49).经性别、年龄、肿瘤位置、组织学分化程度和Dukes分期等因素分层分析,结果均显示G870A与CRC发病风险无显著性相关.结论 Cyclin D1 G870A多态与宁波地区人群的CRC发病风险无相关性.
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体外共培养大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的影响:Cyclin D1与P27表达调控
背景:在肝纤维化发生发展过程中,肝星状细胞起着关键作用.研究证实骨髓间充质干细胞移植可作为治疗肝纤维化的方法,但其逆转肝纤维化的机制不明.目的:探讨体外共培养条件下,大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的调控机制.方法:实验组在半透膜上接种大鼠骨髓间充质干细胞,在6孔塑料培养板上接种肝星状细胞,建立上下双层细胞共培养体系;对照组将大鼠骨髓间充质干细胞更换为成纤维细胞;空白组仅行肝星状细胞单独培养.WST-8法检测肝星状细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测肝星状细胞CyclinD1和P27 mRNA的表达,Western blot检测肝星状细胞CyclinD1和P27蛋白的表达.结果与结论:与空白组、对照组比较,实验组共培养24,48,72 h肝星状细胞牛长抑制率均显著升高(P＜0.01):共培养72 h G_0/G_1期细胞显著增加(P＜0.01),S期细胞显著减少(P＜0.01),可阻滞肝星状细胞由G_0/G_1期向S期转换.共培养24 h,实验组CyclinD1 mRNA及蛋白表达开始下调,至72 h时表达量显著低于对照组、空白组(P＜0.01);共培养全过程中各组p27mRNA的表达无明显差异(P＞0.05),共培养24 h时实验组p27蛋白表达较对照组、空白组均显著上调(P＜0.01).结果证实大鼠骨髓间充质干细胞能够抑制肝星状细胞的增殖,其机制可能是通过下调CyclinD1表达,上调P27蛋白表达,使细胞周期停滞于G_0/G_1期实现的.
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Survivin、CyclinD1在大肠癌中的表达及其临床意义
目的 观察Survivin和CyclinD1在大肠癌组织中的表达与临床病理指标及预后的关系.方法 应用免疫组织化学(S-P)法,检测44例大肠癌组织、30例癌旁组织、10例正常黏膜组织中Survivin、CyclinD1的表达情况.结果 大肠癌组织中Survivin、CyclinD1的表达明显高于癌旁组织的表达,差异具有显著性(P＜O.05),正常黏膜组织无Survivin、CyclinD1表达;Survivin表达与性别、年龄、肿瘤组织类型及组织分级、大体类型差异均无显著性(P＞0.05),而与淋巴结转移、Dukes分期显著相关(P＜0.05),CyclinD1表达与大肠癌各临床病理指标差异均无显著性(P＞0.05);Survivin阳性生存率显著低于Survivin阴性患者,CyclinD1阳性生存率显著低于CyclinD1阴性患者(P＜0.05);Survivin、CyclinD1在大肠癌中表达正相关(P＜0.05).结论 Survivin表达与淋巴结转移、Dukes分期密切相关,提示预后不良,可作为大肠癌侵袭性和预后评估的生物学指标;CyclinD1表达提示预后不良,是判断预后的指标之一;Survivin、CyclinD1在大肠癌的发生过程中既有独立的功能,又有协同作用.
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5-FU对增生性瘢痕中cyclinD1、cdk4及p53基因表达的影响
目的 探讨5-FU对增生性瘢痕组织的成纤维细胞中细胞周期蛋白因子(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk4)及抑癌基因(p53)的mRNA表达的影响,以阐明5-FU对病理性瘢痕的作用机制.方法 组织块法培养增生性瘢痕组织及正常皮肤组织的成纤维细胞.用不同浓度的5-FU作用于体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞,检测MTT值;利用半定量RT-PCR分析用药前后cyclinD1、cdk4、p53的mRNA表达的变化.结果 5-FU在体外能明显抑制人增生性瘢痕组织中成纤维细胞的增殖及cyclinD1、cdk4的mRNA表达;对p53的mRNA表达无影响.结论 5-FU抑制病理性瘢痕成纤维细胞的机制与其抑制cyclinD1、cdk4的表达有关,而与p53表达无关.
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5-FU抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖与cyclinD1、CDK4和TGF-β1表达的关系
目的 研究5-FU抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖与细胞因子cyclinD1、CDK4、TGF-β1表达的关系及其作用机制.方法 组织块法培养增生性瘢痕组织及正常皮肤组织的成纤维细胞.用不同浓度的5-FU,作用于体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,检测MTT值;利用半定量RT-PCR分析用药前后cyclindl、CDK4、TGF-β1 mRNA表达的变化.结果 5-FU在体外能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,其抑制率随5-FU浓度的增加而增高;并且5-FU能明显抑制cyclinD1、CDK4、TGF-β1 mRNA的表达.结论 5-FU能抑制增生性瘢痕中成纤维细胞的增殖,其机制与5-FU能明显降低cyclinD1,CDK4和TGF-β1的表达有关.
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病理性瘢痕中p53和cyclinD1的mRNA表达的实验研究
目的探讨病理性瘢痕中p53、cyclinD1的表达及在瘢痕疙瘩与增生性瘢痕中表达的区别,以进一步了解瘢痕疙瘩与增生性瘢痕的形成及发展的机理.方法手术切取病理性瘢痕标本作为实验组,以普通瘢痕作为对照组,运用RT-PCR方法测定病理性瘢痕中p53和cyclinD1的mRNA表达情况.结果病理性瘢痕中p53和cyclinD1的mRNA表达与对照组比较差异有显著意义(P＜0.05);而瘢痕疙瘩中p53的mRNA表达明显高于增生性瘢痕,两者比较差异有显著意义(P＜0.05).结论病理性瘢痕中p53和cyclinD1的异常表达,在病理性瘢痕的形成及发展中起重要作用.
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翼状胬肉上皮细胞中β-catenin和CyclinD1表达的研究
目的 探讨翼状胬肉上皮细胞的病理改变和β-catenin/Wnt信号通路及其下游靶基因CyclinD1的表达.并比较其与复发性翼状胬肉的表达差异.方法 收集翼状胬肉组织26例,其中复发翼状胬肉8例.正常结膜组织6例.冰冻包埋后行HE和免疫组织化学和免疫荧光染色,检测上皮细胞中β-catenin和CyclinD1的表达.并作相关分析.结果 翼状胬肉上皮细胞增生,上皮细胞中β-catenin和CyclinD1表达水平明显高于正常结膜.β-catenin表达平均阳性细胞数124.85±9.25,积分光密度826.56±10.25.CyclinD1表达平均阳性细胞数90.40±9.63,积分光密度531.85±12.36.β-catenin和CyclinD1表达水平具有正相关.在复发性翼状胬肉上皮细胞中β-catenin和CyclinD1表达水平较初发翼状胬肉有增加.其中β-catenin表达平均阳性细胞数295.12±11.26,积分光密度1145.25±16.58.CyclinD1表达平均阳性细胞数162.54±9.24,积分光密度856.26±13.85,差异有统计学意义.结论 Wnt/β-catenin通路可能通过CyclinD1参与翼状胬肉上皮细胞的发病过程.
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β-catenin核表达与非小细胞肺癌增殖失控和凋亡抑制的关系
目的 探讨β-catenin活化、核表达与非小细胞肺癌(NSCLC)增殖失控和凋亡抑制的关系.方法 采用免疫组织化学和原位末端标记法(TUNEL),检测139例人NSCLC样本β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2、Survivin的表达水平、肿瘤细胞增殖指数(Ki67)和凋亡指数.结果 (1)在分化程度较低、有淋巴结转移的NSCLC组织中,β-Catenin核表达水平明显升高.(2)在β-Catenin细胞核高表达的NSCLC中,肿瘤细胞Cyclin D1表达水平和肿瘤细胞增殖指数明显升高;在Cyclin D1高表达的NSCLC中,肿瘤细胞增殖指数明显升高.(3)在β-Catenin细胞核高表达的NSCLC中,肿瘤细胞Survivin的表达水平明显升高,肿瘤细胞凋亡指数显著降低;Bcl-2、Survivin表达水平较高的NSCLC中,肿瘤细胞凋亡指数显著降低;NSCLC中β-Catenin的核表达水平与Bcl-2表达不相关.结论 (1)β-Catenin核表达水平升高导致NSCLC去分化和转移机会增加.(2) β-Catenin入核活化、激活下游基因Cyclin D1的表达是导致NSCLC细胞增殖失控的重要原因.(3)β-Catenin入核活化、激活下游基因Survivin的表达是导致NSCLC细胞凋亡抑制的重要原因.
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P16、CDK4、cyclinD1在乳腺癌中的表达及临床意义
[目的] 探讨P16、CDK4、cyclinD1蛋白在乳腺癌组织中的表达情况及临床意义.[方法]用免疫组织化学方法,检测32例乳腺癌组织石蜡切片P16、CDK4及cyclinD1蛋白的表达情况,并分析其与临床病理学指标之间的关系.[结果] P16、CDK4在I级与II级、III级中的表达差异有显著性意义(P<0. 05).P16、CDK4蛋白的阳性表达与患者的年龄、肿瘤的大小、淋巴结转移及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达均无显著相关性.cyclinD1在I级与II级、III级中的表达差异没有显著性意义( P>0. 05) ,随着乳腺癌分化程度的降低,阳性表达呈现升高趋势.cyclinD1蛋白的阳性表达与患者的年龄、肿瘤的大小、淋巴结转移及ER、PR表达均无明显相关性.[结论] P16蛋白的失表达和CDK4、cyclinD1蛋白的过表达可能参与了乳腺癌的发生和发展.
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结肠癌组织中P16、CyclinD1和PKC-α的表达及意义
目的:研究P16、CyclinD1和PKC-α在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床指标的关系.方法:采用免疫组织化学S-P染色方法检测P16、CyclinD1和PKC-α在70例结肠癌组织及癌旁组织中的表达.结果:结肠癌组织中P16蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,CyclinD1和PKC-α阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义.结论:结肠癌的发生与CyclinD1、PKC-α高表达和P16低表达均有关,P16蛋白可作为结肠癌早期诊断、临床生物学行为和预后评估的重要指标.
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Pygo2过表达促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖
目的 通过构建过表达Pygo2的重组体上调Pygo2表达,探讨其在大鼠胶质瘤C6细胞增殖中的作用及机制.方法 重组体经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染大鼠胶质瘤C6细胞,采用Western blot检测外源pygo2蛋白表达,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测过表达Pygo2对C6细胞中cyclinD1、β-catenin水平的影响,并采用细胞免疫荧光法检测其对C6细胞中cyclinD1、β-catenin亚细胞定位的影响.结果 双酶切和测序鉴定结果证实插入序列正确,重组体能有效上调Pygo2表达.将重组体转染C6细胞上调Pygo2表达后,细胞的生长增殖被显著促进,克隆形成显著增多,细胞周期进程从G1期至S期转变显著增强；且cyclinD1水平随之增高,亚定位无改变,β-catenin水平和亚细胞定位无明显改变.结论 成功构建了过表达Pygo2的重组体,过表达Pygo2通过增高cyclinD1水平,促进细胞从G1期进入S期,从而促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖.
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染色质重塑因子1在肺癌中过表达并促进肺癌增殖能力
目的 检测染色质重塑因子1(Rsf-1)对肺癌增殖能力的影响,初步探讨Rsf-1促进肺癌增殖的分子机制.方法 应用Western blot方法筛选Rsf-1高表达人肺癌H1299、H460细胞系,通过小干扰RNA (siRNA)方法干扰内源性Rsf-1表达,并检测干扰效率.应用集落形成、流式细胞术检测Rsf-1干扰前后肺癌细胞增殖能力的变化.应用Western blot检测干扰内源性Rsf-1表达前后肺癌细胞中增殖相关因子的变化.结果 Western blot结果显示:肺癌细胞中Rsf-1蛋白表达水平明显高于正常支气管上皮HBE细胞系,其中H1299、H460细胞中存在非常明显的Rsf-1高表达.转染Rsf-1特异的siRNA于高表达Rsf-1的H1299和H460细胞后,其克隆形成明显少于对照组(H1299细胞中对照组和干扰组分别为123±15和83±9; H460细胞中对照组和干扰组分别为218±18和112±17)(P＜0.05).流式细胞术结果显示:干扰内源性Rsf-1表达后,H1299和H460细胞中Gt期细胞比例增多(H1299细胞中对照组和干扰组分别为56％±5％和71％±7％;H460细胞中对照组和干扰组分别为53％±4％和70％±6％),S期细胞比例减少(H1299细胞中对照组和干扰组分别为17％±2％和11％±5％;H460细胞中对照组和干扰组分别为19％±2％和10％±5％).细胞周期相关蛋白检测结果:干扰内源性Rsf-1表达后,H1299和H460细胞中cyclinD1和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)水平明显下调.干扰Rsf-1在下调H1299和H460细胞pERK蛋白表达的作用结果与应用细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂U0126相似.结论 Rsf-1可通过cyclinD1/ERK相关通路促进肺癌细胞的增殖.
关键词： 染色质重塑因子1 肺癌 小干扰RNA 磷酸化细胞外调节蛋白激酶 CyclinD1 -
CyclinD1、VEGF、Flt-1在肝细胞癌中的表达及临床意义
探讨肝细胞癌( Hepatocellular carcinoma,HCC)、胆管癌、肝硬化及正常肝组织中周期素D1 (CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体(Flt-1)蛋白表达的意义及其与肝癌生物学行为关系.对52例符合要求的HCC组织、10例胆管癌组织、10例肝硬化组织及10例正常肝组织采用免疫组化S-P法检测CyclinD1、VEGF及Flt-1蛋白.CyclinD1、VEGF及Flt-1在HCC的强阳性表达率分别为55.8％、55.8％及67.3％,均显著高于胆管癌、肝硬化及正常肝组织(P＜0.001).CyclinD1及VEGF表达与肿瘤包膜完整、血管侵犯及肿瘤分化程度明显有关(P＜0.05)；Flt -1与肿瘤分化程度明显有关(P＜0.05).CyclinD1与VEGF间、CyclinD1与Flt-1间及VEGF与Flt-1间的蛋白表达均呈正相关(R=0.445,P＜0.01、R=0.368,P＜0.01、R=0.332,P＜0.01).CyclinD1、VEGF及Flt-1蛋白的过表达可促使肝癌细胞增殖,使肝癌细胞具有更强的侵袭力,与肝癌的发生、发展密切相关.
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子宫内膜上皮内瘤变中PI3K和CyclinD1蛋白的表达及意义
目的:探讨PI3K和CyclinD1蛋白表达在良性子宫内膜增生、子宫内膜上皮内瘤变(EIN)、子宫内膜样腺癌发生、发展中的作用.方法:选取增殖期子宫内膜10例、良性增生性子宫内膜30例(包括单纯性增生和复杂性增生),子宫内膜上皮内瘤变30例,子宫内膜样腺癌20例,应用免疫组织化学法检测各组中PI3K和CyclinD1蛋白的表达,分析其表达水平的变化.结果:PI3K和CyclinD1在增殖期子宫内膜、良性增生性子宫内膜、EIN和子宫内膜样腺癌中表达依次增高,组间差异具有统计学意义(H=46.64,P＜0.01;H=44.96,P＜0.01);PI3K与CyclinD1表达呈正相关(r=0.682,P＜0.01),且二者与组别及年龄均呈正相关(P＜0.01).结论:PI3K高表达可能是通过诱导和调控CyclinD1的过表达实现的,PI3K和CyclinD1可能参与了子宫内膜恶性转化的过程.
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STAT3及下游基因CyclinDl在子宫肌瘤的表达和意义
目的:探讨STAT3及其下游基因CyclinDl在子宫肌瘤的表达和意义.方法:采用RT-PCR方法检测子宫肌瘤和同源正常子宫平滑肌组织中STAT3及其下游基因CyclinDl的表达,采用免疫组化方法检测子宫肌瘤和同源正常子宫平滑肌组织中磷酸化STAT3的表达.结果:STAT3 mRNA在子宫肌瘤表达明显高于正常的子宫平滑肌组织,P0.01;CyclinD1 mRNA在子宫肌瘤的表达也相应升高.磷酸化STAT3在子宫肌瘤和同源正常子宫平滑肌的阳性表达率分别是77.8%和5.56%,差异有统计学意义(P0.01).结论:子宫肌瘤STAT3及CyclinD1表达增高,STAT3和CyclinD1在子宫肌瘤的发病中起了一定作用.
