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薯蓣皂苷的次皂苷元B(DRG)体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机制研究
目的 探讨中药单体薯蓣皂苷的次皂苷元B(DRG)体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机制.方法 采用Western blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及逆转录PCR(RT-PCR)对DRG诱导细胞凋亡的机制进行了研究.结果 在HCT15细胞中,DRG促发了线粒体调控的凋亡途径,细胞色素c呈时效性地从线粒体中释放到胞质中,同时Bax与Bcl-2蛋白表达的相对比例上调,caypase-9、caspase-3和PARP等被剪切成具有活性的片段,但是caspase-7却未见剪切,同时还不影响P53和Bcl-xL的表达；而与死亡受体途径相关的FADD表达无明显变化,caspase-8酶原也未见剪切；另外,DRG也不抑制BH3短肽与Bcl-xL 的结合；RT-PCR检测结果表明,DRG诱导HCT-15细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA水平的改变,进而导致Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平则明显增加,说明DRG诱发的细胞凋亡中涉及到Bcl-2和Bax基因水平的变化.结论DRG诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax和Bcl_2靶基因的转录表达,上调Bax/Bcl-2蛋白表达水平比例,并终通过激活经典的线粒体途径而不是死亡受体途径来发挥其HCT-15细胞凋亡诱导作用,且对P53呈非依赖型.
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昆布多糖硫酸酯LAMS-2诱导人结肠癌LOVO细胞凋亡的线粒体途径研究
目的 考察昆布多糖硫酸酯LAMS-2对人结肠癌细胞LOVO凋亡的影响及作用途径研究.方法 采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT) 法检测LOVO细胞的增殖,Hoechst 33258荧光染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞内活性氧水平、线粒体通透性转换孔活性和线粒体膜电位,激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子水平,Western blot法检测凋亡蛋白Cyt-C、caspase-9和caspase-3的表达,比色法检测caspase-9和caspase-3的活性.结果 昆布多糖硫酸酯LAMS-2作用于LOVO细胞后,能显著抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡,细胞出现明显的凋亡特征形态,引起细胞内活性氧增多,钙离子含量增加,细胞线粒体通透性转变孔开放,线粒体膜电位降低,胞质内Cyt-C蛋白表达量增加,caspase-9和caspase-3的蛋白表达和活性都显著升高,较阴性对照组和昆布多糖组都显著增加.结论 昆布多糖硫酸酯LAMS-2可显著抑制人结肠癌LOVO细胞的增殖,并可通过线粒体途径诱导LOVO细胞发生凋亡.
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益气化痰散瘀方含药血清对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响
目的 观察益气化痰散瘀方含药血清对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的影响,并探讨其机制是否通过线粒体途径.方法 制备益气化痰散瘀方含药血清和空白血清.组织贴块法培养大鼠PASMCs并进行a-SMA 细胞免疫荧光鉴定.MTT法筛选佳含药血清及佳低氧时间:常氧对照组,低氧模型组,5%含药血清、10%含药血清、20%含药血清组(含药血清用空白血清稀释),分别作用12、24、48 h.正式实验根据MTT结果分为常氧对照组、低氧模型组、佳含药血清组,含药血清作用佳低氧时间后,TUNEL-FITC/DAPI法检测各组PASMCs凋亡情况,Western Blot法检测各组casepase-9、casepase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 MTT结果显示益气化痰散瘀方含药血清浓度为20%、低氧作用24 h时抑制作用强,效果佳.TUNEL-FITC/DAPI法显示与低氧模型组比较,益气化痰散瘀方含药血清可明显促进低氧条件下大鼠PASMCs的凋亡(P<0.01);Western Blot法显示益气化痰散瘀方含药血清可升高低氧大鼠PASMCs的casepase-9、casepase-3和 Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低Bcl-2蛋白表达(P<0.01).结论 益气化痰散瘀方含药血清可能通过线粒体途径诱导低氧大鼠PASMCs凋亡.
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隐丹参酮对人胃癌细胞 SGC-7901凋亡的影响及其机制
目的：探讨隐丹参酮（CPT）对人胃癌细胞 SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的 CPT 作用于人胃癌细胞 SGC-7901，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖的活力；流式细胞术检测细胞凋亡的变化；Real Time RT-PCR 法检测细胞凋亡相关蛋白 Bax、Bcl-2、p53和 p21 mRNA 表达的变化；Western blot 法检测细胞凋亡相关蛋白 Bax、Bcl-2、p53和 p21表达的变化。结果CPT 作用于人胃癌细胞 SGC-790124 h 后，可明显抑制细胞生长，诱导细胞发生凋亡；在转录水平上调促细胞凋亡蛋白 Bax 和 p53 mRNA 的表达，下调抑制细胞凋亡蛋白 Bcl-2 mRNA 的表达；在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白 Bax 和 p53的表达，下调抑制细胞凋亡蛋白 Bcl-2的表达。结论CPT 对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用，其机制可能与线粒体途径相关。
关键词： 隐丹参酮 人胃癌细胞 SGC-7901 细胞增殖 细胞凋亡 线粒体途径 -
杨梅素对HepG2细胞凋亡的影响
目的：探讨杨梅素对人肝癌细胞系 HepG2凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度的杨梅素孵育HepG2细胞，在不同时间分别采用倒置显微镜观察细胞形态学变化；采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率；采用乳酸脱氢酶（LDH）活力定量测定试剂盒测定细胞上清液LDH活性；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡途径关键蛋白的表达。结果杨梅素对HepG2细胞的凋亡诱导作用呈现剂量和时间依赖性。杨梅素作用于HepG2细胞，随杨梅素浓度增加，细胞凋亡率增加。与正常对照组相比，100μmol/L杨梅素作用于HepG2细胞24 h后，细胞存活率明显降低[（100.02±5.97）%vs.（71.60±3.75）%，P=0.006]；早、晚期细胞凋亡率明显升高[（10.19±2.61）%vs.（2.52±2.05）%，P=0.003；（11.71±3.34）%vs.（3.69±1.13）%，P=0.004]，差异均有统计学意义。随杨梅素浓度增加，线粒体途径的促凋亡因子BAX蛋白表达量增加，而抗凋亡因子BCL-2蛋白表达量降低。结论杨梅素能够诱导HepG2细胞凋亡，可能具有潜在的抗肝癌活性；线粒体途径在此过程中起重要作用。
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线粒体途径在慢性低氧高二氧化碳小鼠骨骼肌凋亡中的作用
目的 探讨线粒体途径在慢性低氧高二氧化碳小鼠骨骼肌凋亡中的作用.方法 成年storage protect feature(SPF)级雄性C57BL/6小鼠16只随机分成两组:正常对照组(n=8)和实验组(n=8),将实验组小鼠置于常压低氧高二氧化碳舱内,通过氮气调节舱内氧浓度,使其维持在9％ ～11％,通入二氧化碳使其浓度维持在5％ ～6％,每天8h,共4周.用酶联免疫吸附测定法( ELISA)检测骨骼肌细胞胞质内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase -3)的含量,荧光实时定量PCR法检测胞浆内细胞色素C(Cyt - C)及细胞凋亡因子Bax、Bcl-2基因的表达情况.结果 与正常对照组相比,实验组骨骼肌细胞内的caspase-3含量增加(P<0.05),Cyt -C mRNA表达增多,Bax mRNA表达增多,而Bcl -2 mRNA表达减少,Bcl - 2/Bax比值下降.结论 线粒体途径可能参与了慢性低氧高二氧化碳小鼠骨骼肌细胞的凋亡,Bcl - 2/Bax比值下降可能是促进骨骼肌线粒体途径凋亡的重要因素.
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凋亡相关蛋白Caspase研究进展
细胞凋亡,又称细胞程序性死亡,是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程.细胞凋亡是一个主动的、信号依赖的过程,可以由许多因素所诱导,如放射线照射、毒素、药物、缺血缺氧、病毒感染等.和细胞增殖一样,细胞凋亡也是受基因调控的精确过程,其途径主要有两条,一条是通过细胞膜上的死亡受体激活cas-pase,另一条是通过胞质内的线粒体途径释放细胞凋亡因子激活caspase.
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姜黄素对高糖诱导的INS-1细胞凋亡的影响
目的 观察姜黄素对高糖诱导的INS-1胰岛β细胞凋亡的作用,探讨其抗糖尿病作用的可能机制.方法 流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电子显微镜观察INS-1细胞的形态学变化;采用激光共聚焦和流式细胞术检测INS-1细胞线粒体膜电位的变化;用Western blotting法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量.结果 姜黄素浓度为10 μ mol/L抗凋亡作用效果为明显(P＜0.05).与正常组相比,模型组INS-1细胞凋亡率明显升高(P＜0.05),形态发生改变,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显降低(P＜0.05),Bax蛋白表达明显升高(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值降低.与模型组比较,姜黄素改善凋亡的INS-1细胞的形态,提高线粒体膜电位,降低Bax蛋白表达(P＜0.05),增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值升高.结论 姜黄素改善高糖诱导的INS-1细胞凋亡状态,其抗凋亡机制与线粒体途径有关.
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隐丹参酮对K562细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨隐丹参酮诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡的作用及其线粒体途径相关机制.方法 MTT法检测隐丹参酮对细胞增殖的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测丹参酮对细胞凋亡的影响,DAPI染色法观察细胞形态的变化;Western blotting检测丹参酮对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP、Bax、Bcl-2和细胞色素C(Cyt C)表达的影响,线粒体膜电位检测试剂盒检测丹参酮对线粒体膜电位的影响;检测线粒体膜通透性转运孔(PTP)抑制剂环孢霉素A和caspase抑制剂z-VAD-fmk对隐丹参酮药效的影响.结果 隐丹参酮对K562细胞的生长有显著抑制作用,可引起细胞形态发生明显改变,诱导细胞发生凋亡,提高蛋白Bax/Bcl-2的比例,降低线粒体膜电位,促进Cyt C从线粒体释放到胞浆,增强促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9和PARP的活性.环孢霉素A和cz-VAD-fmk均能减弱隐丹参酮抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.结论 隐丹参酮可显著诱导K562细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡途径密切相关.
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雷公藤红素对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和迁移的影响
目的 研究雷公藤红素对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制.方法 采用MTT法检测雷公藤红素对U87细胞增殖的影响;流式细胞术检测U87细胞凋亡和线粒体膜电位;Western blotting法检测U87细胞中线粒体途径相关凋亡蛋白表达水平;Transwell和划痕实验检测U87细胞的迁移能力.结果 雷公藤红素可显著抑制U87细胞的增殖、降低U87细胞线粒体膜电位并诱导U87细胞凋亡;雷公藤红素显著性地调控Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)、Caspase-9和Caspase-3的表达水平;同时雷公藤红素显著抑制U87细胞迁移能力.结论 雷公藤红素抑制U87细胞增殖、迁移和诱导其凋亡,其中凋亡机制可能是通过调控线粒体途径相关凋亡蛋白来实现的.
关键词： 雷公藤红素 神经胶质瘤U87细胞 细胞凋亡 线粒体途径 细胞迁移 -
白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究
目的 探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制.方法 采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402增殖的影响,同时观察BEL-7402细胞形态的变化,采用集落形成实验考察白头翁皂苷D对BEL-7402细胞集落形成的影响;Hoechest 33342染色观察BEL-7402细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化;采用Western blotting法检测BEL-7402细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖有抑制作用;集落形成实验结果显示白头翁皂苷D能明显抑制BEL-7402细胞集落的形成,白头翁皂苷D(25.00 μg/mL)能显著诱导BEL-7402细胞凋亡;白头翁皂苷D(18.75、25.00 μg/mL)能显著降低BEL-7402细胞线粒体膜电位;白头翁皂苷D(12.50、18.75、25.00 μg/mL)可显著上调BEL-7402细胞中Caspase-3的表达;白头翁皂苷D(25.00 μg/mL)可显著下调Bcl-2的表达.结论 白头翁皂苷D有良好的体外抗肝癌作用,其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达有关.
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异丙酚对离体大鼠心肌缺血、再灌注损伤后细胞凋亡及其机制研究
目的:观察异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响并从氧化应激和线粒体介导的凋亡方面探讨其作用机制.方法:应用Langendorff离体心脏灌注系统建立心肌缺血/再灌注损伤模型.40只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血/再灌注模型(I/R)组、异丙酚15、30、60 μmolL-1组.除正常对照组外,各组分别平衡灌注20 min后,常温全心停灌25 min,再灌注30min.Powerlab/8s仪记录各组平衡末、缺血前及再灌30 min时的各项心功能指标并测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性;检测心肌线粒体活力、膜肿胀度、锰超氧化物岐化酶(Mn-SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;流式细胞术检测Bc1-2和Bax的表达,免疫组化法测定天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3,9,8蛋白的表达.结果:与I/R组相比,异丙酚30、60μmol·L-1能明显改善缺血/再灌注后的心功能,减弱冠脉流出液中LDH、CK的活性(P＜0.015);心肌线粒体活力有所恢复,膜肿胀度减轻,Mn-SOD活性升高,MDA生成明显减少(P＜0.05),心肌细胞凋亡明显减少,Bc1-2表达上调,Bax达下调,caspade-3,9阳性表达细胞数明显减少(P＜0.05).结论:异丙酚明显减轻缺血/再灌注所致的心肌线粒体的过氧化损伤,抑制线粒体途径的凋亡.可能是其心肌保护作用机制之一.
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三氧化二砷诱导K562/ADM细胞内质网应激反应性凋亡的机制研究
内质网应激反应性凋亡途径是不同于经典的线粒体途径和死亡受体途径的细胞凋亡适路.三氧化二砷(A2O3)对白血病以及其他实体肿瘤均具有良好的抗肿瘤效应,且与常规化疗药物无交叉耐药性[1].
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氯霉素通过线粒体途径诱导白血病多药耐药细胞凋亡
多药耐药(MDR)是影响白血病治疗效果的主要障碍,因耐药机制的复杂性或耐药逆转药物临床应用的不良反应,致使目前尚未解决这一难题.
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Bcl-2家族在线粒体细胞凋亡途径中的作用
细胞凋亡是细胞的程序性死亡,而在此过程中线粒体途径是主要的内在途径.在此途径中Bcl-2家族起着相当重要的作用.在Bcl-2家族中主要分为促凋亡因子和抗凋亡因子,本文就Bcl-2家族的特点及其在线粒体细胞凋亡途径中的作用作以综述.
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美洲大蠊提取物对肺癌细胞H125作用
目的 探讨美洲大蠊提取物对人肺癌细胞H125影响及其作用机制.方法 将H125细胞分为阴性对照组、阳性对照组(顺铂10 μg/mL)、美洲大蠊提取物(10、20、40 μg/mL)组,四甲基偶氮噻唑蓝比色法观察H125细胞生长状况,流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡及线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 美洲大蠊提取物可以抑制H125细胞的生长,IC50为24.8μg/mL;美洲大蠊提取物可明显降低H125细胞的线粒体膜电位,与对照组比较,40 μg/mL美洲大蠊组H125细胞绿色荧光细胞的百分率[(34.12±0.21)％]及凋亡率[(24.76±0.168)％]升高,同时G2/M期细胞比例[(23.12 ±0.159)％]减少,S期细胞比例[(20.92 ±0.096)％]增加,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达受到明显抑制.结论 美洲大蠊提取物可以抑制人肺癌细胞H125的生长,阻滞细胞周期于S期,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡.
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人参皂苷对大鼠重型脑外伤后神经细胞凋亡的保护作用及其机制研究
目的:研究人参皂苷对重型脑外伤后大鼠神经细胞凋亡的保护作用及其机制.方法:健康雄性Wist-ar大鼠60只,分为正常对照组10只,未治疗组10只,人参皂苷治疗组40只.参照Feeney法制作重型颅脑损伤模型,并于术后6h、24h、48h、72h、5天、7天共6个时相点取大鼠脑组织,用TUNEL法观察凋亡细胞,并计算凋亡指数;透射电镜下观察细胞线粒体形态的改变;应用RT-PCR法检测神经细胞COX-2 mRNA的表达.结果:未治疗组脑外伤后6h出现较多TUNEL染色阳性细胞,72h达到高峰,5天后明显减少;人参皂苷治疗组各个时间点TUNEL染色阳性细胞数明显低于未治疗组.电镜下可见细胞固缩,凋亡小体形成,线粒体肿胀变形.COX-2mRNA的表达与细胞凋亡同步升高并同步下降,治疗组各个时间点COX mRNA的表达明显低于未治疗组.结论:COX-2诱导线粒体途径细胞凋亡作用在重型脑外伤后的损伤中起重要作用.人参皂苷对大鼠重型脑外伤后神经细胞凋亡有保护作用,其作用机制可能与人参皂苷抑制COX-2的表达,从而抑制COX-2诱导的线粒体途径细胞凋亡有关.
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脑卒中与线粒体途径凋亡相关因子的研究进展
脑卒中导致的脑神经元凋亡过程中,存在着大量正性和负性的可调控相关因子,这些可调控因子可作为治疗脑卒中的潜在靶点.研究表明,脑卒中神经元细胞凋亡主要是由Caspase的级联反应所调控,细胞凋亡的主要途径之一是线粒体凋亡通路,Bcl-2家族蛋白主要调节Caspase的激活.线粒体释放的与凋亡相关的因子也对Caspase的激活有调节作用,而这些与凋亡相关的因子又受Bcl-2蛋白所调节.对脑卒中神经元凋亡过程中线粒体途径调控相关因子的研究是寻找和开发治疗脑卒中药物的重要理论基础.
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葫芦素B 通过激活线粒体途径诱导人肺癌NCI-H460细胞凋亡
目的：探讨葫芦素B 对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养NCI-H460细胞,MTT 法观察葫芦素B 对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。采用罗丹明123(Rhodamine 123)染色,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm),采用Western blot 方法检测线粒体内和胞浆内的细胞色素C。结果葫芦素B 对NCI-H460细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性；葫芦素B 处理组细胞形态发生显著改变,细胞皱缩、变圆,可见胞核染色质浓缩；流式细胞仪检测结果显示葫芦素B 诱导NCI-H460细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B 处理后线粒体膜电位显著下降,细胞色素C 由线粒体释放到胞浆中。结论葫芦素B 可以抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖并诱导细胞凋亡,线粒体途径参与葫芦素B 诱导的NCI-H460细胞凋亡。
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EGCG通过抑制COX-2表达及PGE2合成诱导胃癌细胞系HGC27凋亡
目的:探讨EGCG对胃癌细胞系HGC27细胞凋亡的影响及其机制.方法:体外培养的HGC27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度EGCG处理24、48、72 h,对照组加入同等体积的培养基,MTT法测定其对HGC2细胞增殖的影响;EGCG(浓度分别为0、10、20、40μg/mL)处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,western blot法检测环氧合酶2(COX-2)基因表达,ELISA法检测PGE2含量.结果:EGCG(浓度10～80μg/mL)能显著抑制HGC27细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;EGCG(浓度分别为10、40、80μg/mL)作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为14.8％、25.8％、37.7％,对照组凋亡率为0.6％; Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加,线粒体膜电位降低,COX-2的表达降低,PGE2合成减少.结论:EGCG可通过抑制HGC27细胞COX-2表达及PGE2合成,激活线粒体凋亡途径,抑制细胞增殖并促进其凋亡.EGCG可能是一种前景广阔的抗肿瘤药物.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 HGC27细胞 线粒体途径 环氧合酶-2 前列腺素
