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NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡和COX-2表达的影响
目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡及COX-2表达的影响,并进一步探讨其作用的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测NS-398对SGC -7901细胞的杀伤抑制作用；免疫细胞化学法检测SGC-7901细胞内COX-2的蛋白表达情况；ELISA法检测NS-398作用于SGC-7901细胞后PGE2释放水平；流式细胞仪检测SGC-7901细胞的凋亡情况.结果 NS-398对胃癌SGC-7901细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增强,呈剂量-时间双效应关系(P＜0.05)；不同浓度NS-398作用下的SGC-7901细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降(P＜ 0.05)；NS-398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应关系,与对照组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05)；NS-398作用于SGC-7901细胞48 h后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应(P＜0.05).结论 NS-398通过COX-2依赖途径抑制SGC-7901细胞增殖并促进其凋亡.
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丹参饮加味方对胃癌细胞SGC-7901体外生长抑制及细胞周期的实验研究
目的:探讨丹参饮加味方对胃癌细胞SGC-7901体外生长情况及细胞周期的影响.方法:采用MTT法和流式细胞仪检测丹参饮加味方不同浓度和不同作用时间对胃癌细胞抑制率和DNA含量的变化.结果:与空白对照组相比较,丹参饮加味方各浓度组细胞抑制率明显升高(P＜0.05),G0/G1期细胞DNA含量明显升高(P＜0.05).结论:丹参饮加味方能抑制体外胃癌细胞SGC-7901的生长,且能将胃癌细胞周期阻滞在G0/G1期.
关键词： 丹参饮加味方 胃癌细胞SGC-7901 体外抑制 细胞周期 -
2-甲氧基雌二醇对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响
目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对体外培养的SGC-7901胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将不同浓度的2-ME不同时间作用于SGC-7901,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测2-ME对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞超微结构变化.结果 2-ME对SGC-7901细胞有很强的抗增殖的作用,引起大量细胞凋亡,且在一定范围内呈剂量和时间依赖性,作用组与对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05).细胞周期检测发现作用组大量细胞阻滞于G2/m期G0/G1及S期细胞减少,与对照组存在显著差异(P<0.05).结论 2-ME可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其凋亡.
关键词： 2-甲氧基雌二醇 凋亡 胃癌细胞SGC-7901 -
亚硒酸钠联合阿霉素前体药通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路介导胃癌细胞SGC-7901的增殖凋亡
目的 探讨亚硒酸钠联合阿霉素前体药(PADM)对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以2.93 μg,/ml亚硒酸钠和2μg/ml PADM处理胃癌SGC-7901细胞48 h后采用噻唑蓝(MTT)法检测各组SGC-7901细胞的增殖能力.采用流式细胞仪检测各组SGC-7901细胞的凋亡水平.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各组SGC-7901细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关因子[细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)]的表达和蛋白活化.结果 与对照组(不加药的SGC-7901细胞)(0.873±0.055)比较,亚硒酸钠组(0.551±0.032)和PADM组(0.610 ±0.023)均能明显地降低胃癌细胞SGC-7901的增殖能力(P =0.001、0.001);与单药组比较,药物联用后(0.234±0.022)抑制效果更明显(P=0.000、0.000).与对照组(11.413±1.676)比较,亚硒酸钠组(23.530±0.943)和PADM组(23.207±2.294)均能明显促进胃癌细胞SGC-7901的凋亡(P=0.000、0.001);与单药组比较,两种药物联用后(54.827±4.048)作用促凋亡效果更显著(P =0.000、0.000).亚硒酸钠和PADM能明显地下调ERK1/2的mRNA表达和蛋白活性,上调p38和JNK的mRNA表达和蛋白活性,且两种药物联用后作用效果更显著.结论 亚硒酸钠联合PADM可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,促进SGC-7901细胞凋亡且效果强于单用药物,其作用机制可能与抑制ERK1/2活化,增强p38MAPK和JNK活化有关.
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西妥昔单抗对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察西妥昔单抗对体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度西妥昔单抗(12.5、25.0、50.0、100.0 mg/L)作用于对数期生长的胃癌细胞SGC -7901,噻唑蓝(MTT)法观察生长抑制作用；流式细胞术(FCM)检测对细胞周期和细胞凋亡的影响；逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3) mRNA的表达水平；免疫组织化学(SP)法测定细胞内B淋巴细胞/白血病-2( bcl-2)、p-27蛋白表达变化.结果 MTT法显示随西妥昔单抗浓度增加,抑制率由(9.76±1.41)％上升至(78.12±3.88)％,并呈现时间依赖性(P＜0.05),FCM结果示G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,呈浓度依赖性(P＜0.05),凋亡率与西妥昔单抗浓度呈正相关.RT-PCR法和SP法结果显示,细胞中Caspase-3、p-27mRNA和蛋白随西妥昔单抗浓度增加而表达增加,bcl-2 mRNA和蛋白则表达下降(P＜0.05).结论 西妥昔单抗可抑制体外培养的人胃癌细胞SGC -7901增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3、p-27基因转录和蛋白表达,下调bcl-2基因转录和蛋白表达有关.
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缺氧时缺氧诱导因子-1α在胃癌细胞的表达及其同细胞增殖凋亡的关系
目的 研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在缺氧的胃癌细胞SGC-7901的表达及其同缺氧时Fas、PCNA关系,探讨HIF-1α同缺氧时胃癌细胞增殖凋亡的关系.方法 产气袋法(GasPaK)制造缺氧细胞培养条件,细胞免疫化学观察SGC-7901细胞HIF-1α、PCNA及Fas的变化.结果 缺氧时SGC-7901细胞HIF-1α表达明显上调,HIF-1α表达随缺氧时间延长而增加.缺氧时HIF-1α表达与Fas呈负相关(P＜0.05),同PCNA表达无关.结论 缺氧能使SGC-7901细胞HIF-1α表达明显上调,HIF-1α抑制缺氧诱导的细胞凋亡,同缺氧时胃癌细胞增殖无关.
关键词： 缺氧诱导因子-1α 胃癌细胞SGC-7901 细胞凋亡 增殖 -
新疆多伞阿魏对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用研究
目的:研究新疆多伞阿魏提取物对胃癌细胞株SGC-7901增殖抑制作用及作用机制.方法:采用二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT法)检测新疆多伞阿魏不同提取物对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,筛选出抑制作用强的提取物W3.光镜下观察W3不同浓度对SGC-7901细胞形态的影响,TUNLE凋亡染色实验检测W3诱导SGC-7901细胞凋亡作用,流式细胞仪进一步检测其对细胞凋亡率的影响.结果:多伞阿魏提取物W3能显著抑制SGC-7901细胞增殖,同时具有诱导细胞凋亡作用,且呈剂量依赖关系.结论:多伞阿魏提取物W3抑制胃癌细胞增殖作用可能与诱导细胞凋亡有关.
关键词： 新疆多伞阿魏 胃癌细胞SGC-7901 抑制增殖作用 凋亡作用 -
全反式维甲酸增加胃癌细胞对放射的敏感性
目的：研究全反式维甲酸（ all－trans retinoic acid，ATRA）对胃癌细胞SGC－7901存活率与放射敏感性的影响，并讨论其可能的机制。方法：MTT法检测细胞存活率；平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞的放射敏感性和细胞周期；实时荧光定量PCR（ RT－qPCR）检测细胞中Bax、Bcl－2、survivin与NF－κB的mRNA表达。结果：ATRA可降低SGC－7901细胞存活率，当浓度到达8μmol／L时，抑制作用达到大；ATRA联合X射线处理后，与单纯放射处理相比，平均致死剂量（D0）和准阈剂量（Dq）显著变小（P＜0．05），且拟合的生存曲线明显下移；ATRA能显著降低放射诱导的细胞G2／M期阻滞，下调SGC－7901细胞Bcl－2与survivin的mRNA表达（ P＜0．05），上调Bax与NF－κB的mRNA表达（P＜0．05）。结论：ATRA能够增加胃癌细胞SGC－7901的凋亡及放射敏感性，可能与抑制细胞周期G2／M期的阻滞作用、下调Bcl－2与survivin mRNA表达和上调NF－κB与Bax mRNA表达有关。
关键词： 全反式维甲酸 放射治疗 胃癌细胞SGC-7901 敏感性 -
RNA干扰下调LAT1表达对胃腺癌SGC-7901细胞增殖、侵袭、转移及细胞周期的影响
目的 观察下调胃癌细胞SGC-7901的LAT1表达对其体外增殖、迁移、侵袭的影响.方法 设计并合成2条针对编码LAT1的SLC7A5 mRNA寡核苷酸干扰序列和阴性对照序列,连接pGPU6/GFP/Neo质粒载体上,分别转染至细胞株SGC-7901,RT-PCR与Western blot检测干扰后LAT1、LAT1异二聚体CD98hc mRNA与蛋白表达量,筛选出抑制率较高的质粒,用G418筛选出稳定表达干扰序列的胃癌细胞株.MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭能力.结果 酶切电泳分析和DNA测序证实成功构建LAT1-shRNA质粒,转染48 h后,与空白对照组和阴性对照质粒转染组相比,LAT1-shRNA1与LAT1-shRNA2重组载体转染胃癌SGC-7901细胞后对LAT1 mRNA表达及LAT1蛋白表达均有抑制作用,LAT1-shRNA2重组载体抑制效率高,但CD98hc未见明显变化.与空白对照组和阴性对照转染组比较,LAT1的表达下调后,胃癌细胞SGC-7901的增殖、迁移与侵袭能力均受到一定程度的抑制(P＜0.05).流式细胞术检测结果表明,细胞阻滞于G0/G1期.结论 下调LAT1的表达对胃癌细胞SGC-7901的体外增殖、迁移与侵袭有抑制作用,并且细胞周期被阻滞,LAT1在人胃癌细胞增殖、迁移与侵袭中发挥重要作用.
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健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关基因表达的影响
目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡相关基因表达的影响.方法:采用RT-PCR法测定不同浓度健脾化瘀方作用后人胃癌细胞株SGC-7901凋亡相关Bax、Bcl-2、Survivin等基因表达的变化.用West-ern Blotting测定健脾化瘀方对SGC-7901细胞凋亡相关Bax、Bcl-2蛋白表达的变化.结果:健脾化瘀方大、小剂量组中Bax表达上调,Bcl-2、Survivin表达下调(P＜0.05).结论:健脾化瘀方能通过上调Bax表达,下调Bcl-2、Sur-vivin表达,达到抑制胃癌细胞生长,诱导细胞凋亡的作用.
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化痰通瘀解毒方水提取物对胃癌SGC-7901细胞划痕愈合及E-cadherin和MMP-2表达的影响
目的 观察化痰通瘀解毒方(Huatan Tongyu Jiedu Decoction,HTJD)水提取物对胃癌细胞SGC-7901E-钙黏蛋白(Epithelial cadherin,E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(matrix metallopro-teinase 2,MMP-2)表达及其侵袭转移能力的影响.方法 分别用含化痰通瘀解毒方水提取物5、10、20、30、40μg/mL的培养基干预人胃癌SGC-7901细胞24h后,采用划痕实验检测人胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力,采用酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测SGC-7901细胞中和E-Cad、MMP-2的表达水平.结果 HTJD 10、20、30、40μg/mL浓度组与空白对照组相比,划痕愈合距离(△d)明显减小(P＜0.05或P＜0.01);HTJD 10、20、30、40μg/mL浓度组SGC-7901细胞上清液中E-Cad比空白对照组含量升高;细胞上清液中MMP-2的含量与空白对照组相比明显减少(P＜0.05或P＜0.01).结论 化痰解毒方可抑制人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2表达水平,上调E-Cad的表达水平有关.
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散癖平胃方对人胃癌细胞SGC-7901侵袭转移的影响
目的 观察散癖平胃(SPPW)方对人胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响.方法 SPPW方含药血清干预人胃癌细胞SGC-7901 48h后,应用黏附实验、侵袭实验及迁移实验,检测SPPW方对人胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响.应用实时定量聚合酶链反应( real-time PCR)检测SPPW对与侵袭转移有关的MMP-2和MMP-9mRNA表达的影响.结果 SPPW方各组含药血清干预人胃癌细胞48 h后,SGC-7901细胞黏附抑制率、侵袭抑制率及迁移抑制率均增加且呈剂量依赖关系,与阴性对照组比较有统计学差异(P＜0.01或P＜0.05).SPPW方三个剂量组对MMP-2 mRNA的表达无统计学差异,对MMP-9 mRNA的表达具有统计学差异(P＜0.01).结论 SPPW方可抑制人胃癌细胞SGC-7901黏附、侵袭和迁移能力,其抑制有明显的剂量依赖性,其抑制的机制可能与下调MMP-9的表达有关.
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环氧合酶-2对人胃癌细胞SGC-7901迁移能力及上皮钙粘素表达的影响
目的 探究不同环氧合酶-2(COX-2)表达水平对胃癌细胞SGC-7901迁移能力及其上皮钙粘素(E-cadherin)表达的影响.方法 采用不同浓度的COX-2特异性抑制剂塞来昔布(10、20、30、40、50 μmol/L)干预胃癌细胞SGC-7901作为实验组,另设对照组(不加塞来昔布干预),构建不同COX-2表达水平的胃癌细胞SGC-7901,采用Transwell小室法检测胃癌细胞SGC-7901迁移情况.以终浓度为30 μmol/L的塞来昔布干预胃癌细胞SGC-7901,通过作用不同时间(24、36、48小时)构建不同COX-2表达水平的胃癌细胞SGC-7901,采用免疫荧光标记法检测胃癌细胞 SGC-7901 E-cadherin表达情况;采用实时荧光定量反转录PCR检测胃癌细胞SGC-7901 COX-2及E-cadherin mRNA表达情况.结果 对照组及实验组(10、20、30、40、50 μmol/L)COX-2 mRNA表达量分别为(1.00±0.00)及(0.82±0.15)、(0.70±0.29)、(0.62±0.25)、(0.49± 0.21)、(0.33±0.15);E-cadherin mRNA分别为(1.00±0.00)及(0.73±0.16)、(1.38±0.22)、(2.43±0.21)、(2.66±0.34)、(2.87±0.28).与对照组比较,实验组胃癌细胞SGC-7901 COX-2 mRNA表达量均显著降低, E-cadherin mRNA表达量显著升高,且均呈剂量依赖性(P<0.01).Transwell小室实验结果显示,与对照组比较,实验组胃癌细胞SGC-7901迁移数量均显著降低(P<0.01),实验组随COX-2表达水平的降低呈逐渐降低趋势(P<0.01),迁移抑制率呈逐渐升高趋势(P<0.01).以终浓度为30μmol/L塞来昔布处理胃癌细胞SGC-790124、36、48小时后COX-2 mRNA表达量分别为(0.69 ±0.23)、(0.55 ±0.17)、(0.42 ±0.11);E-cad-herin mRNA表达量分别为(2.46±0.23)、(4.03±0.31)、(5.11±0.28);SGC-7901 E-cadherin平均荧光强度分别为(21.25±4.32)、(27.67±5.01)、(46.38±4.92);随着塞来昔布作用时间的延长,胃癌细胞 SGC-7901 COX-2 mRNA表达量逐渐降低,而E-cadherin mRNA表达量及平均荧光强度均逐渐升高(P<0.05).结论通过COX-2特异性抑制剂塞来西布抑制胃癌细胞SGC-7901 COX-2表达,可显著上调其E-cadherin mRNA,进而抑制胃癌细胞SGC-7901迁移能力.
关键词： 胃癌 塞来昔布 环氧合酶-2 胃癌细胞SGC-7901 上皮钙粘素 -
维生素E琥珀酸酯通过Akt/mTOR信号通路诱导人胃癌细胞SGC-7901发生保护性自噬
目的:观察维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)处理SGC-7901细胞后是否发生自噬,并探讨自噬在VES抑制细胞增殖中的作用.方法:用不同浓度(0、5、10、15、20μg/mL)VES处理SGC-7901细胞24 h后,电子显微镜观察自噬体形态;VES处理转染GFP-LC3质粒后的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察自噬情况;Western blot检测自噬标志蛋白LC3,以及Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR活性变化;采用自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)和3-甲基腺苷(3-methyladenine,3-MA)处理细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力.结果:电子显微镜观察显示经不同浓度VES处理后,细胞中出现了典型的自噬囊泡以及自噬溶酶体等自噬各阶段的形态变化;荧光显微镜观察显示GFP-LC3质粒转染后随VES处理剂量的增加,绿色点状荧光逐渐聚集增强;Western blot结果显示,VES可使LC3-Ⅱ蛋白表达增强;并下调Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR的活性;MTT结果显示VES+CQ组和VES+3-MA组的细胞增殖抑制率均明显高于VES单独处理组(P均＜0.05),即自噬抑制剂CQ与3-MA预处理使细胞增殖率进一步下降,提示VES诱导的肿瘤细胞自噬对肿瘤细胞增殖具有保护作用.结论:VES可以通过抑制Akt/mTOR通路活性诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞发生自噬,且此种自噬为保护性自噬.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 胃癌细胞SGC-7901 自噬 -
死亡受体Fas在TRAIL联合三氧化二砷诱导人胃癌细胞凋亡中的作用
目的:探讨Fas在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)与三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合诱导人胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法:采用体外培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以Fas正义、反义寡核苷酸转染SGC-7901细胞获得Sense、Antisense细胞.以0.5μg/ml As2O3+0.2μg/ml TRAIL分别处理未转染细胞、Sense组细胞以及Antisense组细胞,采用MTT法检测24、48、72 h后细胞增殖情况；倒置显微镜观察联合作用48 h后细胞集落形态；DAPI染色法、流式细胞仪技术检测48 h时细胞凋亡率；Western blot法检测48 h细胞中Fas、FADD以及Parp表达情况.结果:与未转染组和Sense组细胞比较,转染Fas反义寡核苷酸后,降低了TRAIL与As2O3联合抑制细胞增殖、促进凋亡的作用(P＜0.05),48 h时效果为明显；荧光显微镜下可见死亡细胞明显减少；Western blot结果显示细胞中Fas、FADD表达降低,Parp活化程度降低(均P＜0.05).结论:Fas在TRAIL与As2O3联合抑制人胃癌细胞增殖、促进细胞凋亡过程中起重要作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 三氧化二砷 凋亡 胃癌细胞SGC-7901 Fas
