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硒蛋白S过表达载体的构建及其在肝癌细胞SMMC7721中的表达鉴定
目的：构建硒蛋白S基因（SELS）真核表达载体pCMV-SELS，转染肝癌SMMC7721细胞，实现 SELS 在 SMMC7721中的成功过表达。方法通过基因克隆技术将 SELS 基因的完整ORF插入真核表达载体pCMV-3tag-3a（+），得到阳性真核表达质粒pCMV-SELS，将其瞬时转染到肝癌SMMC7721细胞中，利用RT-PCR与Western blot方法验证SELS的过表达水平。结果成功构建了真核表达质粒pCMV-SELS，将其瞬时转染SMMC7721细胞后24 h，收集细胞进行RT-PCR和Western blot检测，结果显示：与阴性对照组pCMV-3tag-3a（+）转染组相比，实验组pCMV-SELS细胞中SELS的mRNA和蛋白表达水平均有显著升高，两组比较具有统计学差异（P＜0.05）。结论成功构建真核表达载体pCMV-SELS，并实现了SELS基因在SMMC7721细胞中的过表达。
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几种脂质体对Li-7肝癌细胞株的转染效率研究
目的：比较Lipofectamine2000、lipoplexes和apoE-lipoplexes三种脂质体对Li-7肝癌细胞的转染效率。方法构建普通阳离子脂质体 lipoplexes 和载脂蛋白 apoE 修饰脂质体apoE-lipoplexes；使用Lipofectamine2000，lipoplexes和apoE-lipoplexes三种脂质体运载以EGFP为报告基因的pGenesil-1质粒转染Li-7肝癌细胞，通过荧光显微镜观察EGFP蛋白的表达，流式细胞术检测三种脂质体的转染效率。结果 Lipofectamine2000、lipoplexes和apoE-lipoplexes三种脂质体转染效率分别为（18.63±0.57）%，（24.07±0.91）%，（28.93±0.50）%，3组间两两比较均有显著性差异（P＜0.01）。结论 Li-7肝癌细胞的转染效率与脂质体的结构有关，提示脂质体结构改造可能成为提高转染效率的新策略。
关键词： 脂质体 pGenesil-1质粒 肝癌细胞 转染效率 -
MiR-132靶向YAP抑制肝癌Huh7细胞的生长
目的：研究miR-132靶向YAP后对肝癌Huh7细胞生长的抑制，为临床治疗肝癌的方法提供新的理论依据。方法实验分为三组：未转染miR-132的Huh7细胞组（control组），阴性对照组（miR NC组）以及转染miR-132的Huh7细胞组（miR-132组），通过RT-PCR检测YAP mRNA表达情况；通过流式细胞仪检测细胞凋亡改变；通过Edu检测细胞增殖能力；通过Transwell法检测细胞侵袭能力。结果 RT-PCR检测YAP mRNA发现miR-132可明显抑制YAP基因在肝癌细胞株Huh7中的表达，control组、miR NC组和miR-132组YAP mRNA的相对表达量为1.0000±0.0241、0.9426±0.0248和0.2573±0.0458（P＜0.05）；流式细胞仪检测发现转染miR-132后能明显促进肝癌Huh7细胞的凋亡，control组、miR NC组和miR-132组Huh7细胞总凋亡为4.03±0.35、4.53±0.26和13.62±0.49（P＜0.05）；EdU检测发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞增殖能力明显受抑制，control组、miR NC组和miR-132组分别为（65.12±1.93）%、（64.02±0.87）%和（42.00±1.26）%（P＜0.05）；traswell检测结果发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞侵袭能力明显受抑制，control组、miR NC组和miR-132组分别为3.35±0.13、0.72±0.06和0.48±0.03（P＜0.05）。结论 miR-132具有抑制肝癌细胞生长的作用，并有可能通过靶向YAP而下调其表达起作用。
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构建靶向性高尔基体膜蛋白高尔基体蛋白73修饰脂质体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶诱导肝癌细胞凋亡
目的 构建一种具有靶向性的非病毒基因治疗载体高尔基体蛋白73(GP73)-脂质体lipoplexes,并检测其对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞HL-7702的转染效率和凋亡的影响.方法 以水溶性碳二亚胺为交联剂将GP73与lipoplexes偶联.用GP73-lipoplexes运载标记有绿色荧光蛋白(green lfuorescent protein,GFP)荧光报告基因的PGenesil-l质粒转染肝癌细胞组HepG2和肝正常细胞组HL-7702,通过荧光显微镜观察被转染细胞GFP的表达情况,流式细胞术检测转染效率.并用GP73-lipoplexes运载含治疗基因HSVtk的质粒PBI-SUR-TK转染肝癌细胞和肝细胞,经RT-PCR和Western blot检测细胞中HSVtk表达情况,流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡情况.结果 经GP73修饰的lipoplexes转染的肝癌细胞组[(26.37±0.76)％]比肝细胞组[(9.68±0.57)％]有更高的转染效率和更多的HSVtk基因的表达,肝癌细胞增殖能力明显减弱,凋亡显著.结论 GP73修饰的lipoplexes介导的HSVtk自杀基因系统对肝癌细胞有治疗作用,可以尝试作为一种靶向性杀伤肝癌细胞的非病毒基因转运载体.
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RNA干扰体外抑制肝癌细胞端粒逆转酶基因表达的研究
目的利用小片段干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞内诱导RNA干扰(RNAi),抑制端粒逆转录酶(hTERT)基因表达,在体外进行RNAi对肝癌治疗的试验研究.方法构建针对hTERT基因的siRNA(siRNA-hTERT),转导入肝癌细胞7721,在瘤细胞内诱导RNAi,采用流式细胞分析、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫组化等技术检测siRNA处理前后细胞增殖及hTERT基因表达变化.结果 siRNA-hTERT对肝癌细胞生长抑制率达37.5%;细胞周期中S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加;hTERT基因的mRNA表达由99.4%下调到53.1%,其蛋白表达由86.3%下调到46.6%.结论 RNAi在体外明显抑制了肝癌细胞中hTERT基因的表达和瘤细胞增殖.
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凝集素亲和电泳-免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体
甲胎蛋白(AFP)是一个公认的肝细胞癌(HCC)标记物.然而,部分慢性肝炎、肝硬化等良性肝病亦可合成少量AFP.由于糖基化过程的差异,不同疾病状况下肝细胞分泌的AFP 在糖链结构上并不相同.为了鉴别AFP是产生于恶性肝癌细胞还是良性肝病细胞,人们已建立多种 AFP糖链变异体测定方法.新近的报告表明, AFP糖链变异体测定还有助于HCC复发转移的监测和预后的判断[1,2].我们在已建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法[3]的基础上,又建立了操作更简便、敏感度更高的凝集素亲和电泳-免疫印迹法,并初步用于良恶性肝病的AFP糖链变异体检测.
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重组溶瘤流感病毒靶向杀伤肝癌细胞的实验研究
目的 拯救获得重组溶瘤流感病毒株rFlu△NS/HCC,对其全面鉴定并评价特异性杀伤肝癌细胞的效果.方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将NS基因部分敲除,构建重组质粒pFlu△NS1,与流感病毒PR8的7个质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M共转染MDCK和COS-Ⅰ细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu△NS/HCC.重组溶瘤流感病毒株rFlu△NS/HCC经SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化等步骤获得重组病毒,通过血凝试验、RT-PCR、电镜观察病毒形态等方法对rFlu△NS/HCC进行全面鉴定,并通过MTS细胞活力测定、细胞病变检测评价重组溶瘤流感病毒对不同类型肝癌细胞系的杀伤效果.结果成功拯救重组溶瘤流感病毒rFlu△NS/HCC,血凝效价为29~10,在HpG2细胞上感染病毒滴度log10TCID50/ml为6.5.MTS和结晶紫染色检测结果显示,重组溶瘤流感病毒rFlu△NS/HCC感染复数(multiplicity of infection,MOI)≥1时,能够显著降低HepG2细胞活力(P均<0.05);MOI≥3时,对SMMC-7721细胞活力影响达显著水平(P均<0.05);而不同MOI值的rFlu△NS/HCC对正常细胞L02无明显影响.结论重组溶瘤流感病毒rFlu△NS/HCC能靶向杀伤肝癌细胞,有望为临床肝癌靶向治疗提供新的治疗策略.
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Ang Ⅱ通过刺激肝癌细胞发生上皮间质转换促进肝癌转移
目的 探讨肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)在肝癌组织中的表达及血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)刺激肝癌细胞发生上皮间质转换现象.方法 搜集56例肝癌手术标本,组织标本石蜡切片,免疫组织化学法测定血管紧张素转化酶l(angiotensin converting enzyme l,ACE l)、ACE2、vimentin、ecadherin蛋白表达定量;将细胞分组,用AngⅡ刺激肝癌细胞系,比较不同分组细胞系vimentin、ecadherin蛋白表达差异.结果 与正常组织相比,肝癌组织ACE1、AT1表达上升,上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)标志物vimentin蛋白表达均上升,ecadherin均下降.Ang Ⅱ刺激下,SSMC7721细胞系的vimentin基因和蛋白表达均上升,ecadherin下降;加入Ang Ⅱ的抑制剂Angl-7后,这种变化受到抑制;加入Angl-7的抑制剂A779后,再次出现vimentin上升,ecadherin表达下降.单独加入A779与对照组差别不大.结论 Ang Ⅱ可能通过刺激肝癌细胞发生EMT对肝癌的转移起到促进作用.
关键词： 肾素血管紧张素醛固酮系统 肝癌细胞 上皮间质转换 -
细胞外HSP70/HSP70-PCs通过HIF-1α影响肝癌细胞HepG2 Glut1与VEGF的表达
目的:探讨细胞外的热休克蛋白70及HSP70肽复合物(heat shock protein 70/peptide complexes,HSP70/HSP70-PCs)对肝癌细胞HepG2缺氧诱导因子1α(hypoxiainducible factor-1 α,HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及可能机制.方法:将肝癌细胞分为3组:正常对照组、细胞外HSP70/HSP70-PCs诱导实验组(终浓度2μg/mL)、细胞外HSP70/HSP70-PCs+siRNA转染组.应用Real-time RT-PCR与Western blot法检测HIF-1α、Glut1和VEGF的表达变化.结果:细胞外HSP70/HSP70-PCs诱导实验组HIF-1α、VEGF与Glut1蛋白表达显著升高,与对照组相比有显著差异(P＜0.05),表明细胞外HSP70/HSP70-PCs促进肝癌细胞的HIF-10α、Glut1和VEGF表达;应用siRNA阻断HIF-1α后,细胞外HSP70/HSP70-PCs对Glut1和VEGF的上调表达作用消失,与对照组相比有明显差异(P＜0.05).结论:细胞外HSP70/HSP70-PCs可以上调肝癌细胞HepG2中Glut1和VEGF表达,并且这一作用是通过HIF-1α来实现的.
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溪黄草黄酮对肝癌细胞增殖, 迁移和侵袭的影响及相关机制
目的 探讨溪黄草黄酮[Flavonoids from Rabdosia serra(Maxim.) Hara]对人肝癌细胞株HepG2的增殖、迁移与侵袭能力的影响, 并研究初步机制.方法 CCK-8法检测不同浓度溪黄草黄酮(0、1、5、10、 20和40 μmol/L)对HepG2细胞活性的影响;划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测Notch-1, Cyclin D1, MMP-2和 MMP-9蛋白表达水平变化.结果 CCK-8法检测结果显示溪黄草黄酮呈浓度依赖性抑制HepG2细胞的生长, 当浓度到达20 μmol/L时, 抑制作用达到大;经溪黄草黄酮干预后, HepG2细胞迁移和侵袭能力显著下降, Notch-1, Cyclin D1, MMP-2和MMP-9蛋白表达水平显著下降.结论 溪黄草黄酮具有抑制肝癌细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭的作用, 其作用机制可能与溪黄草黄酮抑制Notch-1-MMP-2/-9和Notch-1-Cyclin D1信号通路相关.
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低表达Smad4对肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化的影响
目的:探讨低表达Smad4调控上皮间质转化影响肝癌细胞(hepatocellular carcinoma cells,HCC)侵袭转移的相关机制.方法:采用Western blot法观察低表达Smad4对β-catenin和Vimentin总蛋白表达水平的影响；逆转录PCR法测定低表达Smad4后,β-catenin和Vimentin mRNA表达的变化；细胞免疫荧光法检测Smad4、β-catenin和Vimentin在肝癌细胞SMMC-7721及其转染组中的定位及荧光表达强度.结果:低表达Smad4后,相较于CON组和RNAi-NC组,在转染组RNAi-Smad4-2和RNAi-Smad4-12细胞中,β-catenin mRNA和相应总蛋白的表达水平明显增加(P＜0.05),并促使其发生了核转位的改变；另一方面,在RNAi-Smad4-2和RNAi-Smad4-12两转染组细胞中,Vimentin的蛋白表达水平和相应胞浆荧光的表达强度比对照组明显下调(P＜0.05),相应mRNA的表达水平在肝癌SMMC-7721细胞及其转染组无显著差异.结论:低表达Smad4可调控上皮间质转化相关标志物β-catenin和Vimentin的表达,发挥抑制肝癌SMMC-7721细胞上皮间质转化的作用.
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共轭三烯酸抑制肝癌细胞体外增殖和凋亡诱导的作用
目的: 探讨共轭三烯酸抑制肝癌细胞体外增殖的作用机制.方法:采用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、Brdu掺入实验(20 g/L, 12 h)研究共轭三烯酸对人正常肝细胞L-02, 人肝癌细胞系SMMC-7721和鼠肝癌细胞系Hepa1-6的体外增殖抑制作用;Hoechst33342荧光染色, 流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布.结果: 共轭三烯酸处理后, 肿瘤细胞增殖活性降低(SMMC-7721: 1.5±2.6 vs 1.9±12.3, P<0.05;Hepa1-6: 1.0±1.5 vs 1.2±9.7, P<0.05), 克隆形成下降(SMMC-7721: 149.3±3.1 vs 191.7±5.8, P<0.05;Hepa1-6: 32.7±3.1 vs 61.3±4.2, P<0.05), Brdu标记指数降低(SMMC-7721: 42.3%±1.5% vs 63.6%±0.7%, P<0.05;Hepa1-6: 59.5%±0.7% vs 79.6%±1.6%, P<0.05), 凋亡细胞增多(SMMC-7721: 48.9%±0.7% vs 9.9%±0.4%, P<0.05;Hepa1-6: 65.1%±1.1% vs 15.9%±0.7%, P<0.05);凋亡指数升高(SMMC-7721: 16.3%±0.7% vs 3.3%±0.4%, P<0.05;Hepa1-6: 21.7%±1.1% vs 5.3%±0.4%, P<0.05), G0/G1期细胞数增加(SMMC-7721: 48.4%±1.8% vs 38.0%±2.1%, P<0.01;Hepa1-6: 53.4%±2.1% vs 41.1%±0.7%, P<0.01), S期细胞数减少(SMMC-7721: 32.2%±2.9% vs 37.2%±1.9%, P<0.05;Hepa1-6: 28.3%±0.9% vs 39.9%±0.9%, P<0.01).结论:共轭三烯酸对肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用, 其作用机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成, 诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞.
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miR-128-3p靶向Lin28B增加肝癌细胞对奥沙利铂的敏感性
目的 研究miR-128-3p与肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞对奥沙利铂敏感性的影响,并探讨其作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测人正常肝细胞HL-7702、HCC细胞BEL-7402和Hep-3B中miR-128-3p、Lin28B的表达;将对数生长期的HCC细胞BEL-7402、Hep-3B随机分成miR-128-3p mimics组(转染miR-128-3P mimics)、miR-NC组(未转染细胞)、Lin28B-3'UTR WT组(载体psiCHECK2-Lin28B-3'UTR WT和miR-128-3p共转染)、Lin28B-3'UTR MUT组(载体psiCHECK2-Lin28B-3'UTR MUT和miR-NC共转染)和miR-128-3p+Lin28B组(miR-128-3p和Lin28B共转染)、si-Lin28B组(转染si-Lin28B)和si-NC组(转染沉默对照),均以脂质体转染.采用MTT法检测各组细胞的存活率和活力;Western Blot检测各组细胞的蛋白表达.结果 与人正常肝细胞相比,HCC细胞BEL-7402和Hep-3B中miR-128-3p的表达较显著降低(P＜0.01),Lin28B的表达较显著升高(P＜0.01),且过表达miR-128-3p、沉默Lin28B均可抑制HCC细胞增殖,促进凋亡,增加HCC细胞对奥沙利铂的敏感性.Lin28B为miR-128-3p的靶标,且回补Lin28B可逆转miR-128-3p增加HCC细胞对奥沙利铂敏感性的作用.结论 miR-128-3p可增加HCC细胞对奥沙利铂的敏感性,其作用机制可能与靶向Lin28B有关,提示miR-128-3p可作为抗奥沙利铂耐药性的潜在靶点.
关键词： miR-128-3p Lin28b 奥沙利铂 肝癌细胞 -
肝癌细胞BEL7402中神经元特异性烯醇化酶的表达
目的:分别从转录水平、蛋白水平及细胞水平检测人神经元特异性烯醇化酶(NSE)在肝癌细胞BEL7402中的表达情况.方法:利用NSE特异引物,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人肝癌细胞BEL7402中扩增人NSE基因的转录产物,采用免疫印迹(Western blot)、免疫细胞化学(ICC)染色技术检测NSE在肝癌细胞中的表达.结果:通过RT-PCR方法可以从BEL7402中扩增1 305 bp的NSE产物;Western blot方法证实BEL7402细胞可以表达Mr50 000的NSE蛋白;免疫细胞化学染色显示BEL7402与抗NSE单抗呈阳性反应,这说明从转录水平、蛋白水平及细胞水平均检测到了NSE在肝癌细胞BEL7402中的表达.结论:NSE可在肝癌细胞BEL7402转录和表达.
关键词： 神经元特异性烯醇化酶 肝癌细胞 BEL7402细胞 -
丹参酮ⅡA对肝癌SMMC-7721细胞COX-2表达的影响
目的:观察丹参酮ⅡA对肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的影响及其作用机制.方法:体外培养肝癌SMMC-7721细胞株,经丹参酮ⅡA(终浓度0.5 mg/L)作用后,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,透射电镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学SABC法检测COX-2蛋白表达,放射免疫法检测前列腺素E2(PGE2)含量.结果:丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.以0.5 mg/L作用终浓度抑制作用明显,其48 h的抑制率为69.3%,与对照组相比差异有显著性(P＜0.01).电镜下观察,丹参酮ⅡA作用后肝癌细胞表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态改变.5 mg/L丹参酮ⅡA作用后,随时间的延长,凋亡率逐渐升高,48 h达到高峰,随后逐渐下降(24,48,72 h凋亡率分别为7.45%±0.33%、6.59%±0.45%、4.78%±1.05%),与对照组比较,各处理组都有显著性差异(均P＜0.01),丹参酮作用组肝癌细胞COX-2表达明显减少,其培养液中PGE2的产生量下降,与对照组相比差异均有显著性(P＜0.01).结论:丹参酮ⅡA可能是通过下调COX-2mRNA的表达水平发挥其对肝癌细胞生长抑制及促进凋亡作用.
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pHBx-EGFP载体构建及其在肝癌Bel 7402细胞中的表达
目的:构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)-X蛋白(hepatitis B virus x protein,HBx)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)真核融合蛋白表达载体(pHBx-EGFP),转染肝癌Bel 7402细胞,观察其表达和定位,为进一步研究HBx功能提供工具.方法:以pcDNA3.1-HBx为模板,应用PCR和DNA重组技术构建增强型绿色荧光蛋白HBx-EGFP融合蛋白表达载体pHBx-EGFP,经脂质体转染Bel 7402细胞,应用倒置荧光显微镜观察融合蛋白表达和定位；同时提取转染pHBx-EGFP 24 h后的Bel 7402细胞总蛋白,应用Western blot技术,鉴定HBx在细胞的表达情况.结果:成功扩增HBx片段插入pEGFP载体,经酶切验证后测序正确；pHBx-EGFP转染Bel 7402细胞24 h后,荧光显微镜下观察显示HBx-EGFP存在于细胞核周区域,而EGFP则弥散分布于整个细胞；Western blot得到HBx-EGFP、EGFP和HBx目的条带,结论:成功构建pHBx-EGFP真核重组蛋白表达载体,通过检测绿色荧光蛋白标记显示其在Bel 7402细胞中表达及定位,并证实pHBx-EGFP载体能在Bel 7402细胞正确表达.
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芹菜素对肝癌细胞生长及基因表达的影响
目的:探讨芹菜素(apigenin)对Huh-7肝癌细胞生长及基因表达的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测芹菜素对Huh-7细胞增殖、克隆形成、周期及凋亡的影响:通过动物模型观察芹菜素对裸鼠人肝癌Huh-7移植瘤肿瘤质量及体积的影响;采用基因芯片技术检测芹菜素作用前后Huh-7细胞全基因组序列,分析其基因表达差异;采用qRT-PCR、Westem blot技术验证基因芯片结果.结果:与对照组相比,不同浓度的芹菜素(5、10、20 mg/L)处理Huh-7细胞后,芹菜素对Huh-7细胞的生长有显著的抑制作用(IC50=10.5 mg/L±0.3 mg/L).细胞周期阻滞于G2/M期、降低G0-G1期细胞的比例、并促进细胞凋亡和抑制移植瘤的生长.全基因芯片发现芹菜素可改变Huh-7细胞中1 764个功能性基因的表达.在这些差异表达的基因中,大多数与核酸结合、转运、接触和酶调节活性、转录调节、细胞骨架结构和黏附、信号转导、代谢、凋亡以及免疫反应等有关.其中重要的发现是芹菜素显著下调IL-4R和USP18基因表达,qRT-PCR、Westem blot检测结果与芯片结果相符.结论:芹菜素可能通过阻滞细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡从而抑制体内体外Huh-7细胞的生长,并影响多种基因的表达.
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ENT1在人肝癌细胞中的表达特征及临床意义
目的:探讨ENT1在人肝癌细胞株中的表达特征及其临床意义.方法:人肝癌细胞HuH-7、HepG2、Hep3B并选择人乳腺癌细胞MCF-7为对照,采用免疫荧光法检测细胞中ENTl的定位表达;RT-PCR法检测细胞中ENT1 mRNA的表达；CDKs特异性抑制剂干预人肝癌细胞HuH-7的细胞周期,RT-PCR法检测细胞不同周期ENT1 mRNA的表达特征.结果:3株人肝癌细胞膜上均可见ENT1的表达；肝癌细胞中ENT1 mRNA的表达水平均高于乳腺癌细胞；不同肝癌细胞株中ENT1mRNA的表达水平存在差异(HuH-7:0.756±0.019,HepG2:0.469±0.041,Hep3B:0.580±0.030,MCF-7:0.356±0.029);肝癌细胞被阻滞在G0/G1期后,ENT1 mRNA的表达水平明显上调(0.737±0.017 vs 0.345±0.027,P＜0.05).结论:人肝癌细胞膜上普遍存在较高的ENT1表达,不同的肝癌细胞及不同的细胞周期其表达均存在差异.ENT1在人肝癌细胞中的表达特征对临床化疗策略具有潜在的临床价值,并为认识肝癌的耐药机制提供新的思路.
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细胞周期依赖性蛋白激酶对体外培养人肝癌细胞侵袭力的影响
目的:探讨CDKs对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721侵袭力的影响及其分子机制.方法:将细胞分为A、B两组(A组用终浓度为0μmol/L Roscovitine.B组用终浓度为32μmol/L Roscovitine,均培养24 h),采用流式细胞术检测PACDKs特异性抑制剂Roscovitine干预后的人肝癌细胞SMMC-7721的细胞周期,并用Transwell小室、划痕实验、PCR技术分别检测处于不同细胞周期下的人肝癌细胞侵袭能力、水平运动能力及uPA、MMP-9mRNA表达.结果:经终浓度为32μmol/L的Roscovitine干预24 h后的人肝癌细胞SMMC-7721处于G0/G1期细胞比例迅速升高(72.19%±0.47%vs 59.22%±0.54%,P<0.05),细胞侵袭能力下降,穿膜细胞数明显减(71.40±5.59 vs 149.60±16.36,P<0.05);细胞水平运动能力明显下降(P<0.05);uPA mRNA的表达下降、但MMP-9mRNA的表达却无明显变化.结论:Roscovitine干预使人肝癌细胞SMMC-7721侵袭能力和水平运动能力下降,其机制可能与肝癌细胞周期时相分布发生改变和uPAmRNA的表达下降有关.
关键词： 细胞周期依赖性蛋白激酶 细胞周期 侵袭力 uPA 肝癌细胞 -
中药诱导肝癌细胞凋亡的研究进展
如何诱导肿瘤细胞凋亡,以阻止肿瘤的无限生长一直是近年来肿瘤研究领域里的热点.研究表明,中药及其提取物对诱导肝癌细胞凋亡具有确切的作用,已引起学术界的普遍关注.本文将通过对近年来有关文献的回顾与复习,就中药及其提取物诱导肝癌细胞凋亡的相关研究进展作一综述.
