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内毒素致伤大鼠白介素-10表达及肺组织激活蛋白-1活性的变化
目的:观察内毒素(LPS)致伤大鼠血浆IL-10及肺组织IL-10 mRNA含量和激活蛋白-1(AP-1)活性的变化,探讨AP-1对IL-10基因表达的作用.方法:采用LPS(2、4、6和8 mg/kg)致伤Wistar大鼠 ,在各时间点(1、2、4和6小时)制备动脉血浆并取肺组织.采用酶联免疫吸附法(ELISA) 检测血浆IL-10含量,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-P CR)检测 IL-10 mRNA含量;采用凝胶迁移率分析法(EMSA)检测AP-1活性.结果:①LPS可使血浆IL-10含量及肺组织的IL-10 mRNA含量和AP-1活性同步升高;②LPS≥6 mg/kg时,血浆IL-10含量及肺组织的IL10 mRNA含量和AP-1活性的高峰增长幅度显著加大.结论:急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征时IL-10基因表达增强与AP-1活性同步升高有关.
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玫瑰树碱对脂多糖诱导RAW264.7细胞的炎症抑制作用
目的 探讨天然生物碱玫瑰树碱(ELL)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7的炎症抑制作用及机制.方法 取对数生长期RAW264.7细胞,给予0.05、0.5、5μmol/L的ELL或10 mg/L的LPS单独或联合作用于细胞,同时设空白对照组;作用12 h后用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中炎性因子含量,确定ELL佳浓度用于后续实验.用10 mg/L的LPS刺激RAW264.7细胞致炎后,用5μmol/L的ELL进行干预,作用2、4、6、12 h时用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中炎性因子的mRNA表达;作用15 min、30 min、1 h、2 h时用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测核转录因子-κB p65(NF-κB p65)入核情况以及总蛋白的细胞外信号调节激酶(ERK)、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、激活蛋白-1(AP-1)亚基c-fos和c-jun的磷酸化水平.结果 ① 用0.05、0.5、5μmol/L的ELL或10 mg/L的LPS作用于RAW264.7细胞后的增殖情况与空白对照组比较差异无统计学意义,说明该浓度范围内ELL对细胞无明显毒性,也不会因两种药物的相互作用而影响细胞的增殖能力.与空白对照组比较,LPS刺激后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平均明显升高;而不同浓度ELL可呈剂量依赖性地降低炎性因子水平,以5μmol/L的ELL抗炎效应更强.② 与空白对照组比较,LPS刺激后TNF-α、IL-6的mRNA表达水平显著升高,NF-κB p65入核增多,ERK、p38MAPK、JNK、c-fos、c-jun的磷酸化水平明显升高.而ELL可逆转TNF-α、IL-6的mRNA表达及JNK、c-fos、c-jun的磷酸化水平〔TNF-αmRNA(2-ΔCt):2 h为2.45±0.19比3.41±0.32,4 h为1.20±0.11比2.11±0.21,6 h为1.68±0.09比2.51±0.31;IL-6 mRNA(2-ΔCt):6 h为3.41±0.52比4.10±0.38,12 h为1.61±0.08比3.91±0.25;p-JNK/GAPDH:1 h为0.557±0.034比1.049±0.056,2 h为0.439±0.040比0.855±0.038;p-c-fos/GAPDH:1 h为0.158±0.030比0.741±0.035,2 h为0.156±0.015比0.932±0.030;p-c-jun/GAPDH:1 h为0.425±0.036比0.802±0.059,2 h为0.345±0.075比0.952±0.068;均P<0.05],但对NF-κB p65入核及ERK、p38MAPK的磷酸化水平无明显影响.结论 ELL可抑制LPS活化的RAW264.7细胞中IL-6、TNF-α生成,可能是通过抑制JNK-AP-1信号轴来实现的.
关键词： 玫瑰树碱 炎症 核转录因子-κB c-Jun氨基末端激酶 激活蛋白-1 -
RhoA/ROCK与糖尿病肾病
Rho具有与GTP及GDP结合的能力,同时具有GTP酶活性,通过与GTP、GDP结合形式的转换调控许多细胞内信号转导.糖尿病时在高糖环境下肾小球系膜细胞RhoA/Rho激酶活性增加,诱导激活蛋白(AP)-1、转化生长因子(TGF)-β、血管内皮生长因子(VEGF)等上调,抑制内皮型一氧化氮合酶(eNOS),增强Ca2+依赖的血管平滑肌收缩,在肾脏缺血、纤维化中起重要作用.他汀类药物亦通过抑制RhoA活性,对肾脏结构和功能起保护作用.
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AP-1与大肠癌浸润转移的相关性研究
目的:探讨大肠癌组织激活蛋白-1(AP-1)与DNA探针结合活性的变化及AP-1信号转导通路活化与大肠癌浸润转移的关系.方法:采用电泳迁移率分析方法,对30例大肠癌手术标本的癌组织和切端结肠组织AP-1与DNA探针的结合活性进行检测;并结合病理指标进行分析.结果:大肠癌组织AP-1与DNA探针的结合活性明显高于切端结肠组织(P＜0.01);大肠癌组织AP-1结合活性在不同的肿瘤浸润程度、有无淋巴结转移及Dukes分期之间具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),而与肿瘤组织学分型以及肿瘤分化程度无显著相关性(P＞0.05).结论:随着大肠癌组织分期的进展,AP-1结合活性显著升高,提示AP-1信号转导通路参与了大肠癌浸润和转移过程,其活化促进了大肠癌的进展.
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丹参酮ⅡA抗乳腺癌细胞增殖的环氧合酶-2通路研究
目的 探讨中药小分子单体化合物丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞增殖及环氧合酶-2表达的影响.方法 以3种乳腺癌细胞系T47D、MCF-7、MDA-MB-231作为研究材料,采用MTT法检测不同浓度与不同作用时长下丹参酮ⅡA对3种细胞增殖的影响;采用Westernblot法检测经丹参酮ⅡA处理48 h后3种细胞中环氧合酶-2的蛋白水平;分别用带有荧光素酶标记的环氧合酶-2的启动子质粒及其转录因子核因子-κB、激活蛋白-1的位点质粒转染3种细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测经丹参酮ⅡA处理48 h后3种细胞中环氧合酶-2的转录水平以及转录因子核因子-κB、激活蛋白-1的活性.结果 MTT实验结果 显示丹参酮ⅡA可抑制乳腺癌细胞系T47D、MCF-7、MDA-MB-231的增殖,且抑制率与其浓度和作用时长呈正相关.Westernblot检测结果 显示经丹参酮ⅡA处理48 h后,3种细胞中环氧合酶-2的蛋白水平均显著降低.荧光素酶检测结果 显示经丹参酮ⅡA处理48 h后,T47D和MCF-7细胞中环氧合酶-2的转录水平显著降低(P均＜0.05),同时3种细胞中激活蛋白-1的活性均显著降低(P均＜0.05),核因子-κB的活性仅在T47D和MCF-7细胞中明显降低(P均＜0.05).结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子核因子-κB、激活蛋白-1的活性,进而抑制环氧合酶-2的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖.
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大剂量氨溴索对机械通气大鼠肺组织激活蛋白-1、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的影响
目的 通过观察不同剂量氨溴索对机械通气大鼠肺组织激活蛋白-1(AP-1)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,探讨大剂量氨溴索对呼吸机所致肺损伤(VILI)的干预作用.方法 32只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、机械通气(MV)组、常规剂量氨溴索(CDAMB)组和大剂量氨溴索(HDAMB)组,分别采用原位分子杂交技术和免疫组织化学染色法检测肺组织AP-1和γ-GCS Mrna及其蛋白表达水平.结果 MV组和CDAMB组大鼠肺组织AP-1 Mrna及其蛋白表达水平明显高于对照组,而γ-GCS Mrna及其蛋白表达水平则明显低于对照组(P<0.01).HDAMB组AP-1 Mrna及其蛋白表达水平明显低于MV组和CDAMB组,而γ-GCS Mrna及其蛋白表达水平高于MV组和CDAMB组(P<0.01).MV组和CDAMB组各项指标比较差异无统计学意义.结论 氧化/抗氧化失衡参与了VILI的发病过程.大剂量氨溴索可通过抑制机械通气大鼠肺组织AP-1的表达和上调γ-GCS的表达而发挥抗氧化作用,对VILI有一定保护作用.
关键词： 机械通气 激活蛋白-1 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 氨溴索 -
红霉素对吸烟大鼠肺组织激活蛋白-1铜锌超氧化物歧化酶表达的影响
目的 通过研究红霉素对吸烟大鼠肺组织激活蛋白-1(AP-1)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)表达的影响,探讨其在慢性阻塞性肺疾病(COPD)抗氧化治疗中的作用及其机制.方法 Wistar大鼠30只,随机分为对照组、吸烟组和红霉素组.分别采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交半定量技术检测支气管上皮细胞及肺泡巨噬细胞中AP-1(c-Jun和c-Fos亚单位)和CuZn-SOD蛋白及其mRNA的表达水平.结果 吸烟组大鼠支气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞c-Jun、c-Fos、CuZn-SOD蛋白及其mRNA表达均高于对照组(P均＜0.05);红霉素组c-Jun、c-Fos表达水平明显低于吸烟组(P均＜0.01),而CuZn-SOD表达水平明显高于吸烟组(P均＜0.01).结论 红霉素可能通过影响AP-1、CuZn-SOD的表达而在COPD治疗中发挥一定抗氧化作用.
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氨溴索对吸烟大鼠肺组织激活蛋白-1、铜锌超氧化物歧化酶表达的影响
目的 通过研究氨溴索对吸烟大鼠肺组织中激活蛋白-1(AP-1)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)表达的影响,探讨氨溴索在慢性阻塞性肺疾病(ODPD)抗氧化治疗中的作用及其机制.方法 健康雄性Wistar大鼠30只随机分为对照组、吸烟组、氨溴索组,分别采用原位杂交半定量技术、免疫组织化学法和免疫细胞化学法检测支气管上皮细胞及肺泡巨噬细胞中AP-1(c-jun和c-fos亚单位)和CuZn-SOD mRNA及其蛋白的表达水平.结果 吸烟组大鼠支气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞c-jun、c-los、CuZn-SOD mRNA及其蛋白表达水平明显高于对照组(均P<0.05);氨溴索组c-jun、c-fos mRNA及其蛋白、CuZn-SOD mRNA表达水平明显低于吸烟组(均P<0.01),而CuZn-SOD蛋白表达水平与其他两组相比无统计学差异(P>0.05).结论 氨溴索可以降低吸烟大鼠肺组织AP-1 mRNA及其蛋白和CuZn-SOD mRNA的表达,其可能通过降低AP-1的表达在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用.
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PPAR-γ受体激活对百草枯中毒致大鼠急性肺损伤的保护作用
目的 研究PPAR-γ受体激活对百草枯中毒致大鼠急性肺损伤的保护作用.方法 48只SD雄性大鼠随机平均分成3组,A组(百草枯中毒组):按照20 mg/kg剂量腹腔注射;B组(低剂量PPAR-γ受体激动剂罗格列酮预处理组):在给予百草枯腹腔注射前1h腹腔注射3 mg/kg罗格列酮;C组(高剂量PPAR-γ受体激动剂罗格列酮预处理组):在给予百草枯腹腔注射前1h腹腔注射10 mg/kg罗格列酮;D组(对照组):1 mL生理盐水腹腔注射.在注射百草枯后24 h和72 h时,每组取出6只,收集血清和肺组织标本.采用Elisa方法检测血清中IL-1β和TNF-α含量测定,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Westem blot方法检测肺组织中caspase-3和AP-1蛋白表达水平,采用免疫组化方法检测caspase-3蛋白在肺组织中的表达.结果 大鼠百草枯中毒后血清炎性细胞因子IL-1β和TNF-α含量明显增加.肺湿重/干重比以及肺损伤评分明显增加.罗格列酮预处理组可以减轻肺组织损伤程度,降低血清中IL-1β和TNF-α含量,减少肺组织中caspase-3和AP-1蛋白的表达.结论 应用PPAR-γ激动剂罗格列酮可以抑制百草枯中毒大鼠肺组织中caspase-3和AP-1蛋白表达,抑制炎症反应和凋亡,对百草枯中毒导致急性肺损伤产生保护作用.
关键词： 百草枯 急性肺损伤 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 激活蛋白-1 -
激活蛋白-1、巨噬细胞游走抑制因子与人颈动脉粥样硬化斑块的关系研究
目的 探讨激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)、巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration in-hibitory factor,MIF)在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达变化及作用机制.方法 收集60例人颈动脉粥样硬化斑块标本(试验组,A组)和30例正常人肠系膜动脉标本(对照组,B组).根据颈动脉超声检查结果将颈动脉粥样硬化斑块标本分为软斑组(A1,n=20)、混合斑块组(A2,n=20)、硬斑组(A3,n=20).分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测定标本中AP-1亚单位c-Jun mRNA及蛋白表达水平,反映AP-1的表达水平.用酶联免疫法(ELISA)测定斑块组和对照组血清中MIF水平.结果 (1)人颈动脉粥样硬化斑块中c-Jun mRNA及蛋白较对照组表达上调(P＜0.05),A1组较A3组表达显著升高(P＜0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P＞0.05).(2)斑块组比健康对照组血清中MIF的含量显著增高(P＜0.05)；A1组较A3组含量显著增高(P＜0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P＞0.05).(3)在人颈动脉粥样硬化斑块中,MIF浓度与c-Jun表达水平明显呈正相关(r=0.759,P＜0.01).结论AP-1和MIF与人颈动脉粥样硬化斑块的形成及稳定性显著相关,其可能作为预测颈动脉粥样硬化斑块病变情况及斑块稳定性的一个指标.AP-1表达量与MIF浓度越高,斑块不稳定性越高.
关键词： 激活蛋白-1 巨噬细胞游走抑制因子 人颈动脉粥样硬化斑块 -
核因子-κB和激活蛋白-1在恶唑酮诱导的小鼠实验性肠炎中的表达
目的 研究恶唑酮诱导的小鼠实验性肠炎中核因子(NF)-κB和激活蛋白(AP)-1基因表达量的变化,以探索其在发病机制中的意义.方法 7～8周龄的健康昆明小鼠24只,体重25～30 g,均分为正常组和模型组.模型组小鼠采用3%恶唑酮皮肤致敏5 d后,以0.5%恶唑酮(溶解于50%乙醇中)0.15 ml一次性灌肠造模方式建立实验性结肠炎模型.3 d后处死所有小鼠,分别提取外周血单个核细胞(PBMC)、脾脏单个核细胞(SMC)和肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC).经细胞mRNA抽提、逆转录cDNA后进行荧光定量PCR(Taqman探针法)检测NF-κB、AP-1的表达量.并进行结肠炎的组织学评分.结果 模型组NF-κB在SMC、LPMC和PBMC中的表达量均比正常组明显增高(分别为5.62±0.78比3.16±0.59、5.46±0.38比3.18±0.58、5.65±0.56比3.36±0.59,P＜0.01),AP-1亦是如此(分别为5.61±0.54比3.22±0.50、5.50±0.69比3.19±0.40、5.67±0.44比3.27±0.41,P＜0.01).结论 NF-κB、AP-1的活化可能与结肠炎的发病机制有关.
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激活蛋白-1在生殖系统研究中的进展
激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)是细胞中的一类二聚体转录因子,它广泛存在于从单细胞酵母到高等动物的各种细胞中.在哺乳动物细胞中,AP-1主要由Jun和Fos两类亚基构成.AP-1参与调控细胞增殖、分化、转化和凋亡,与生长发育、免疫应答、炎症、应激、肿瘤发生、侵袭和转移密切相关.
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肾病综合征患儿肾组织中AP-1及TGF-β1的表达与激素疗效关系的探讨
目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿肾组织激活蛋白-1(AP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达与激素耐药、肾脏病理损害的相关性,以期阐明PNS激素耐药的可能机制.方法应用非生物素免疫组化ElivisionTMplus法检测48例PNS(SSNS 8例,SRNS 20例,SDNS20例)患儿肾组织中AP-1亚基c-Jun和TGF-β1的表达水平,用计分法半定量评价肾脏的病理损害程度.结果①肾小球内和肾小管间质内AP-1和 TGF-β1的表达,均为 SRNS>SDNS>SSNS(P<0.01).② SSNS、SDNS、SRNS3组肾小球的病理损害分数分别为4.25±1.49,5.25±1.65,8.10±2.57(SRNS与SDRS比较 P<0.01,SDRS与 SSNS比较 P>0.05);SSNS、SDNS、SRNS 3组肾小管间质的病理损害分数分别为4.13±0.99,6.90±1.55,11.10±2.94(P<0.01).③肾组织中AP-1和 TGF-β1的表达与肾小球和肾小管间质病理损害的程度呈正相关(相关系数分别为:0.463,0.352;0.547,0.646,P均 <0.05).结论 SRNS患儿肾组织中AP-1和 TGF-β1的表达增强,并与肾脏病理损害程度密切相关.
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TNF-α通过JNK和AP-1途径调节乳腺癌MCF-7细胞VEGF的表达
目的: 探讨肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的机制.方法:以20 ng/ml TNF-α处理MCF-7细胞,用Western blotting检测MAPK(JNK,p38,ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平的变化以及AP-1家族(c-Jun,Jun-B,c-Fos,Fra-1,Fra-2,JunD)的蛋白表达及磷酸化水平的变化;以免疫共沉淀法检测激活后的AP-1存在形式;以RT-PCR以及Western blotting检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;以MAPK抑制剂预处理后,检测VEGF蛋白表达水平;运用ChIP的方法验证p-c-Jun结合在VEGF启动子区.结果:TNF-α通过激活JNK信号转导通路活化AP-1;被TNF-α激活后AP-1以p-c-Jun-c-Jun和p-c-Jun-JunB同源二聚体形式存在;TNF-α通过激活转录因子AP-1促进VEGF的转录,并增强VEGF的蛋白表达水平;p-c-jun通过与VEGF启动子AP-1结合参与对VEGF转录的调控.结论:在TNF-α作用下,AP-1通过p-c-jun同源二聚体结合在VEGF启动子的AP-1结合位点上,直接对VEGF转录进行调控.
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羟乙基淀粉130/0.4对内毒素诱导的大鼠血浆炎症因子表达和单个核细胞核转录因子活性的影响
目的 观察羟乙基淀粉130/0.4(HES 130/0.4)对内毒素腹腔注射大鼠炎症因子表达的影响,并通过其对单个核细胞核因子-、κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响探讨相关分子机制.方法 36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组(n=6),对照组静脉输注生理盐水30 ml/kg,LPS组腹腔注射脂多糖(LPS)5 mg/kg后静脉输注生理盐水30 ml/kg,LPS+HES组按照HES 130/0.4的剂量不同分为3个亚组,分别腹腔注射LPS 5 mg/kg,接着分别静脉输注HES 130/0.4 7.5、15、30 ml/kg,HES组静脉输注HES 130/0.4 30 ml/kg.在腹腔注射LPS 3 h后以ELISA法检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)浓度,用凝胶电迁移法检测NF-κB和AP-1的水平.结果 腹腔注射LPS后大鼠血浆TNF-α、IL-10和IFN-γ的浓度较对照组明显升高,且NF-κB和AP-1的活性明显增加(P＜0.05);HES 130/0.4静脉输注可降低血浆TNF-α和IFN-γ的浓度以及NF-κB和AP-1的活性(P＜0.05),而增加IL-10的浓度(P＜0.05),其中15 ml/kg剂量组对TNF-α、IFN-γ和NF-κB的作用强(P＜0.01),而7.5 ml/kg剂量组对IL-10和AP-1的作用强(P＜0.01).结论 HES 130/0.4可降低内毒素注射后促炎因子的表达,增强抗炎因子的表达,可能与其抑制转录因子NF-κB和AP-1的活性有关.
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激活蛋白-1与变应性疾病的研究进展
激活蛋白-1(AP-1)是指一类主要由Jun和Fos两大类蛋白质因子家族组成的转录因子,能与许多基因上AP-1位点即佛波酯反应元件结合,参与众多生长因子和细胞因子的基因转录调控,从而导致机体一系列生理和病理生理变化,近年来关于它与变应性疾病的关系日益得到重视.本文就AP-1的结构、活化及其与变应性疾病之间的关系作一综述.
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激活蛋白-1诱骗寡核苷酸对豚鼠近视眼形成的影响
目的 探讨球后注射脂质体包裹的激活蛋白-1诱骗寡核苷酸(activator protein-1 decoy oligodeoxynucleotides,AP-1 decoy ODN)对豚鼠近视眼屈光状态的影响.方法 人工合成AP-1 decoy ODN及错配的AP-1 decoy ODN的核苷酸序列.半透明眼罩遮盖单眼诱导豚鼠近视眼的形成.遮盖眼球后注射脂质体包裹的AP-1 decoy ODN或错配的AP-1 decoy ODN,检影验光测眼球屈光度,用A超(20 Hz)测眼轴长度.结果 豚鼠遮盖眼眼轴延长,形成近视.球后注射AP-1 decoy ODN+脂质体LipofectAMNETM的遮盖眼近视程度减轻,而球后注射错配AP-1 decoy ODN+脂质体LipofectAMNETM对遮盖眼的近视程度无影响.结论 球后注射脂质体包裹的AP-1 decoy ODN能有效抑制豚鼠近视眼的形成.
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心绞痛患者血清内脂素水平变化与激活蛋白-1、基质金属蛋白酶-2的关系
目的：探讨心绞痛患者血清内脂素与激活蛋白-1（AP-1）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的关系。方法选择不稳定型心绞痛患者（UAP组）75例、稳定型心绞痛患者（SAP组）65例和健康对照组60例，采用ELISA法检测其血清内脂素、磷酸化c-Jun（反映活性AP-1数量）、MMP-2及组织金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）的水平。结果 UAP组血清内脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2／TIMP-2均高于SAP组（P均＜0．01）；SAP组上述指标均高于对照组（P均＜0．01）；Pearson相关分析显示心绞痛患者血清内脂素水平与磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2／TIMP-2呈正相关（r分别为0．662、0．657、0．456、0．273，P均＜0．01）；磷酸化c-Jun与MMP-2、TIMP-2及MMP-2／TIMP-2呈正相关（r分别为0．588、0．433、0．184，P均＜0．05）。结论心绞痛患者的血清内脂素水平明显升高，其可能通过促进AP-1活化、增加MMP-2分泌而降低冠脉粥样硬化斑块的稳定性。
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IL-1β诱导肝星状细胞IL-1Ⅰ型受体及AP-1表达的研究
目的 探讨白细胞介素1β(IL-1β)对大鼠肝星状细胞(HSC)IL-1Ⅰ型受体(IL-1RⅠ)及激活蛋白-1(AP-1)表达的诱导作用.方法 应用流式细胞技术检测IL-1RⅠ蛋白表达;应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性.结果 IL-1β刺激HSC 2 min后即见IL-1RⅠ表达增强,10 min时达到高峰(P<0.01),随后有所降低,60 min时仍保持较高的活化状态(P<0.01),120 min后则基本接近初始水平;IL-1β作用HSC 1、2和4 h后,AP-1活性均较对照组明显增高(P<0.01).结论 IL-1β以时间依赖方式诱导HSC IL-1RⅠ及AP-1的表达.
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丹参酮ⅡA对中波紫外线照射HaCaT细胞中GADD45α和激活蛋白-1及信号通路分子磷酸化水平的影响
目的 探讨丹参酮ⅡA对中波紫外线照射的HaCaT细胞中生长阻滞与DNA损伤基因45α (growth arrest and DNA damage-induced 45α,GADD45α)、激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)表达和信号通路分子磷酸化水平的影响.方法 HaCaT细胞采用中波紫外线照射后分为对照组和1 mg/L丹参酮组、2 mg/L丹参酮组、4 mg/L丹参酮组,对照组加入等体积培养液,1 mg/L丹参酮组、2 mg/L丹参酮组、4 mg/L丹参酮组分别加入1、2、4 mg/L丹参酮处理48 h.采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞GADD45α、AP-1 mRNA表达情况,采用Western blot法检测4组细胞GADD45α、AP-1、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)、丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)蛋白表达情况.结果 处理48 h后,1 mg/L丹参酮组、2 mg/L丹参酮组和4 mg/L丹参酮组AP-1 mRNA(0.828±0.026、0.733±0.035、0.600±0.042)和GADD45α mRNA(0.791±0.041、0.708±0.039、0.569±0.006)表达均低于对照组(1.001±0.052、1.002±0.087)(P＜0.05),4 mg/L丹参酮组低于1 mg/L丹参酮组和2 mg/L丹参酮组,2 mg/L丹参酮组低于1 mg/L丹参酮组(P＜0.05);1 mg/L丹参酮组、2 mg/L丹参酮组和4 mg/L丹参酮组AP-1蛋白(0.889±0.149、0.599±0.044、0.435±0.078)、GADD45α蛋白(0.634±0.052、0.431±0.072、0.264±0.062)、ERK蛋白(0.457±0.068、0.380±0.041、0.306±0.025)、JNK蛋白(0.506±0.042、0.387±0.058、0.367±0.040)、p38 MAPK蛋白(0.697±0.083、0.493±0.047、0.371±0.012)和Akt蛋白(0.935±0.158、0.730±0.100、0.487±0.012)表达均低于对照组(1.019±0.158、0.706±0.039、0.662±0.063、0.589±0.051、0.704±0.052、1.086±0.100),4 mg/L丹参酮组低于1 mg/L丹参酮组和2 mg/L丹参酮组,2 mg/L丹参酮组低于1 mg/L丹参酮组(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA可抑制中波紫外线照射的HaCaT细胞表达GADD45α、AP-1和信号通路分子磷酸化水平.
