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JNK信号通路在胃泌素促进大肠癌细胞增殖中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是广泛存在于细胞内的一组丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,分为4个亚族,c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)/应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK)就是其中的一个亚族,主要功能是将细胞外的信号传导至细胞内.胃泌素属于胃肠肽,具有营养性,其主要生理功能是营养正常的胃肠道黏膜组织,使其生长,胃泌素分泌过度还会促进胃肠道肿瘤细胞的生长.本文对JNK信号通路在胃泌素促进大肠癌细胞增殖中的作用作一概述.
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激活蛋白1(AP-1)在豚鼠进展性近视巩膜重塑中与Ⅰ型胶原的表达关系研究
目的 研究近视眼巩膜重塑中激活蛋白-1(activator protein 1,AP-1)的动态表达变化以及与Ⅰ型胶原表达之间的关系.方法 选取出生1周左右的三色豚鼠75只,随机抽取50只遮盖左眼建立形觉剥夺近视组(FDM组,50眼),其右眼作为自身对照组(50眼),其余25只豚鼠双眼均未做任何处理作为空白对照组(50眼),分别测量并记录空白对照组和FDM组豚鼠在遮盖前(O周)及遮盖后2周、4周、6周及遮盖4周去遮盖1周(4/-1周)时的双眼屈光度及眼轴长度.于上述5时间点分别处死豚鼠并制备巩膜组织切片,采用免疫组织化学染色法及逆转录PCR (RT-PCR)技术检测各组豚鼠巩膜中遮盖不同时间点AP-1和Ⅰ型胶原蛋白及mRNA的表达量并分析二者之间的关系.结果 遮盖前空白对照组、自身对照组、FDM组的豚鼠屈光度均为远视,差异无统计学意义(P＞0.05),FDM组由遮盖前(O周)时的远视眼(2.09±0.31)D到遮盖2周、4周、6周及4/-1周后逐渐变成近视眼[(-1.23±0.68)D、(-4.17±0.58)D、(-7.07±0.55)D、(-2.67±0.59)D],眼轴长度由遮盖O周(5.93±0.38)mm到遮盖2周、4周、6周及4/-1周后逐渐增加[(6.62±0.37) mm、(7.30±0.35) mm、(7.99±0.31)mm、(6.97±0.32)mm],与空白对照组、自身对照组比较,遮盖后各个时间点FDM组豚鼠近视屈光度明显升高,眼轴测量值明显增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).各组巩膜组织均有AP-1和Ⅰ型胶原蛋白与mRNA表达,遮盖前空白对照组、自身对照组与FDM组豚鼠巩膜组织中AP-1和Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达量的差异均无统计学意义(均为P＞O.05),随着遮盖时间的延长,FDM组中AP-1和Ⅰ型胶原蛋白表达量均逐渐减弱(均为P＜0.05),AP-1和Ⅰ型胶原的mRNA表达也相应逐渐下调(均为P＜0.05),两者具有高度正相关性.结论 在近视巩膜重塑过程中,AP-1可能作为转化生长因子-β1的下游信号转录因子参与调控Ⅰ型胶原的合成与降解.
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清肝活血方及其拆方对脂多糖介导库普弗细胞活化ERK表达调控的研究
目的:探讨清肝活血方及其拆方对脂多糖介导库普弗细胞(Kupffer cell,KC)活化表达细胞外受体活性激酶(ERK)的影响.方法:原代分离KC,筛选LPS(脂多糖)合适剂量和作用时间;制备清肝活血方及其拆方含药血清,以ELISA、Western方法检测该方及其拆方含药血清对KC表达肿瘤坏死因子α、细胞外受体活性激酶1/2(ERK1/2)和激活蛋白1(AP-1)的影响.结果:选择LPS合适剂量为100μg/L,合适时间为2小时.清肝方通过抑制磷酸化的ERK(P-ERK)来调节核因子AP-1的表达.活血方可以下调P-ERK,抑制效应产物TNF-α的表达.清肝活血方调控磷酸化P-ERK,抑制核因子AP-1的表达.结论:清肝活血方及其拆方含药血清通过影响ERK信号通路,抑制TNF-α的产生,从而起到保护肝细胞的作用.
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p38 siRNA抑制NF-κB激活经典通路减轻大鼠肺微血管内皮细胞缺氧复氧损伤
目的 合成沉默p38基因的特异小分子干扰RNA (siRNA),通过模拟的肺移植模型,探讨p38 siRNA对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)缺氧复氧损伤的影响.方法 将p38 siRNA或非靶向siRNA转染至大鼠PMVEC并暴露于模拟的肺移植型.再灌注2h和4h,检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛水平、超氧化物歧化酶(SOD)含量和细胞凋亡;检测细胞培养上清液白细胞介素(IL)-1、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-a)含量;检测细胞核转录因子-κB(NF-κB)和激活蛋白1(AP-1)的表达.结果 与非靶向siRNA比较,p38 siRNA在再灌注2h和4h降低LDH漏出率(22.3±5.7与45.1±6.2,46.3±7.3与75.6±12.4),减少丙二醛水平(4.1±2.2与7.1±2.1,3.9±0.5与6.1±1.2),增加SOD含量(12.8±3.2与9.4±1.1,10.8±1.2与7.0±1.1),降低IL-1(288±89与592±95,380±94与775±175)和IL-6(38±5与70±12,80±20与118±17)水平,抑制细胞凋亡(2.8±0.6与4.1±1.4,3.1±1.1与5.8±1.3).p38 siRNA对TNF-d的表达无影响.p38 siRNA在再灌注2h和4h减少NF-κB p65磷酸化和NF-κB抑制剂激酶β磷酸化,增加NF-κB抑制剂α表达,但不影响AP-1的磷酸化表达.结论 通过抑制NF-κB激活经典通路,p38 siRNA减轻大鼠PMVEC氧化应激、炎症和细胞凋亡,保护细胞完整性,减轻缺氧及复氧损伤.
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蛋白激酶C和激活蛋白-1信号级联在变应性鼻炎患者T淋巴细胞IL-5表达中的调控作用
目的:探讨蛋白激酶C(PKC)和激活蛋白-1(AP-1)信号转导级联在变应性鼻炎(AR)患者外周血T淋巴细胞IL-5表达中的作用.方法:25例AR患者和23例鼻中隔偏曲(DNS)患者为研究对象,分别从每位受试者外周血中分离T淋巴细胞,并随机分为空白组、PKC激动剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)组、PMA和AP-1抑制剂姜黄素组进行培养.将培养的T淋巴细胞涂片,用免疫细胞化学染色方法检测AP-1的表达,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中的IL-5含量.结果:①加PMA AR组T淋巴细胞的AP-1活化细胞百分比和培养上清液中的IL-5与DNS空白组与AR空白组比较,均差异有统计学意义(均P＜0.01);与加PMA DNS组及加PMA和姜黄素DNS组T淋巴细胞比较,均差异有统计学意义(均P＜0.01);与加PMA和姜黄素AR组T淋巴细胞比较,差异亦有统计学意义(P＜0.01);②加PMA和姜黄素AR组T淋巴细胞AP-1活化细胞百分比、培养上清液中的IL-5含量与AR空白组、加PMA AR组、DNS空白组、加PMA DNS组、加PMA和姜黄素DNS组比较,均差异有统计学意义(均P＜0.01);③T淋巴细胞的AP-1活化与IL-5表达呈显著正相关(r=0.92,P＜0.01).结论:AR患者T淋巴细胞PKC活化后促进IL-5表达增加的生物信号可能是通过AP-1进行转导,提示T淋巴细胞PKC-AP-1信号转导级联的激活可能是AR发病机制之一.
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罗格列酮对百草枯致大鼠肺损伤的炎症抑制作用
目的：研究罗格列酮对百草枯致大鼠肺损伤过程中的炎症抑制作用机制。方法将72只SD雄性大鼠随机分成3组,每组24只。模型对照组：腹腔注射百草枯20 mg·kg-1；罗格列酮组：腹腔注射百草枯前1 h,腹腔注射罗格列酮10 mg·kg-1；空白对照组：腹腔注射0.9％氯化钠溶液1 mL。注射百草枯后4,8 h及1,3 d,收集各组大鼠血清和肺组织标本,组织切片苏木精-伊红( HE)染色进行肺损伤评分,采用酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清白细胞介素-1β( IL-1β)和肿瘤坏死因子-α( TNF-α)含量,采用免疫组化方法检测NF-κB蛋白在肺组织的表达,利用Western blot法检测肺组织核因子-κB (NF-κB)和激活蛋白(AP-1)蛋白表达水平。结果模型对照组大鼠血清炎性细胞因子IL-1β和TNF-α含量明显增加。罗格列酮组肺组织损伤程度明显降低,血清IL-1β和TNF-α含量减少,肺组织NF-κB和AP-1蛋白的表达降低。结论罗格列酮可以抑制百草枯中毒大鼠肺组织NF-κB和AP-1蛋白表达,减少IL-1β和TNF-α分泌,对百草枯所致大鼠肺损伤炎症有抑制作用。
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穿山龙总皂苷对大鼠滑膜细胞株VEGF 与 AP-1的影响
目的：观察含穿山龙总皂苷血清对大鼠滑膜细胞株 RSC-364血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA 和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响,探讨其抑制血管新生的作用机制。方法制备含穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)血清。将培养好的大鼠滑膜细胞株 RSC-364分为空白对照组、模型对照组、含雷公藤多苷血清组和含穿山龙总皂苷血清组,培养1 h,除空白对照组外,其余各组加入 IL-17和 TNF-α(均为10μg·L-1)共同孵育24 h。采用实时荧光定量 PCR方法检测各组细胞 VEGF mRNA 表达,凝胶电泳迁移率实验法(EMSA)检测各组细胞核蛋白提取物 AP-1的 DNA 结合活性。结果与空白对照组比较,模型对照组 VEGF mRNA 表达水平及 AP-1 DNA 结合活性显著增高(P<0.05,P<0.01)；与模型对照组比较,含雷公藤多苷血清组、含穿山龙总皂苷血清组 VEGF mRNA 表达水平及 AP-1 DNA 结合活性均降低(P<0.05),且两组间比较,差异无统计学意义。结论含穿山龙总皂苷血清可以抑制 VEGF mRNA 表达水平及 AP-1 DNA 结合活性,其机制可能是通过抑制转录因子 AP-1来调控血管新生关键因子 VEGF 产生,进而抑制血管新生。
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体外人巨细胞病毒感染与核转录因子AP-1活化及原癌基因c-jun表达的研究
目的研究人胚肺成纤维(HEL)细胞感染人巨细胞病毒(HCMV)后,转录激活蛋白-1(AP-1)活化和原癌基因c-jun mRNA表达的时序性变化,探讨其在HCMV感染中的作用.方法采用原位杂交法检测c-jun mRNA的表达,凝胶电泳迁移率改变试验(EMSA)检测AP-1活性.结果 HEL细胞感染HCMV后15 min,c-jun mRNA即有阳性表达,30～60 min达高峰(P<0.01),以后逐渐下降,正常对照组HEL细胞无c-jun mRNA表达.HCMV感染后AP-1亦迅速被活化,至2 h达高峰(P<0.01),其后有所下降,维持于一定水平.结论 HEL细胞感染HCMV后,c-jun mRNA表达迅速增加,AP-1活化.提示HCMV可能通过刺激原癌基因过度表达而参与细胞的信号传导,以干扰细胞增殖和分化的调控;AP-1活化为早期病毒基因有效表达所必需,并可启动一系列前炎性细胞因子的基因转录与蛋白合成.
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急性心肌损伤激活脊髓水平白细胞介素1β信号通路
目的:探讨急性心肌损伤对脊髓水平IL-1β信号通路表达的影响. 方法:采用心肌内注射5%甲醛建立急性心肌损伤模型,于术后1,3,6,24及72 h取颈部脊髓进行研究.Western 印迹检测急性心肌损伤后各个时间段脊髓水平IL-1β的蛋白表达量.免疫组织化学和原位杂交检测IL-1β的细胞定位.电泳迁移率(EMSA)试验检测急性心肌损伤对IL-1β的下游转录因子NF-κB 和 AP-1活性的影响.结果:急性心肌损伤后,脊髓水平的IL-1β的表达显著增高并且持续至心肌损伤后72 h;上调的IL-1β的蛋白和mRNA主要在脊髓灰质Ⅱ～Ⅳ层神经元中表达;急性心肌损伤后,NF-κB和AP-1的DNA结合率显著增强. 结论:急性心肌损伤导致脊髓水平IL-1β信号通路的激活,激活的中枢神经系统的细胞因子通路有可能进一步加重心肌损伤.
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辅激活因子SRC/p160家族与炎症相关转录因子的关系
SRC/p160(steroid receptor coactivator/p160)家族作为一类辅激活因子,可以辅助多种转录因子,包括炎症相关转录因子.如核转录因子kB,激活蛋白-1,过氧化物酶体增殖物激活受体-γ,糖皮质类固醇激素受体,进而在转录水平上调节多种基因的表达.SRC/p160家族的作用决定于上游的配体、信号通路和转录因子类型,并在不同的组织细胞中表现出一定的特异性及复杂性.而对SRC/p160家族与炎症相关转录因子关系的研究有利于更深入地了解机体对炎症相关基因转录的精细调节和炎症相关性疾病的可能机制.并为抗炎治疗提供新靶点.
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激活蛋白-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的相关性研究
目的探讨激活蛋白-1(AP-1)在结直肠癌及癌周组织中与 DNA探针结合活性的变化及 AP-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的关系.方法采用电泳迁移率分析方法,检测 30例结直肠癌手术切除标本及癌旁 2 cm、5 cm组织和远癌切端组织中 AP-1与 DNA探针的结合活性;采用定量逆转录聚合酶链式反应方法检测各位点血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA转录水平.结果结直肠癌组织 AP-1与 DNA探针的结合活性明显高于癌旁 5 cm组织和远癌切端组织(P< 0.01);结直肠癌组织 AP-1结合活性与肿瘤浸润程度、淋巴结转移呈明显正相关(P< 0.01),而与肿瘤组织学分型以及肿瘤分化程度无显著相关性(P >0.05).结直肠癌组织 VEGF、MMP-9 mRNA转录水平明显高于癌旁组织和癌远切端组织(P< 0.01,P< 0.05).结直肠癌组织 AP-1结合活性增强与 VEGF、MMP-9高表达显著相关(P< 0.01).结论 AP-1信号转导通路与结直肠癌浸润和转移过程密切相关;此通路的活化参与肿瘤转移过程中肿瘤新生血管生成和细胞外基质降解.
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奥曲肽对胃癌细胞转录活化蛋白-1的抑制作用
背景与目的:生长抑素是一种多功能神经肽,其本身及其类似物能抑制多种内分泌肿瘤及某些胃肠肿瘤的生长,但是否能抑制胃癌的生长并不清楚.因此,本研究拟探讨生长抑素类似物奥曲肽对胃癌细胞生长的影响及其机制.方法:不同浓度的奥曲肽作用于人胃癌SGC-7901细胞24h后,用免疫印迹法检测奥曲肽对SGC-7901细胞中c-Fos、ERK蛋白表达的影响.建立人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤模型,奥曲肽治疗8周,观察奥曲肽对胃癌生长的影响;免疫组化法检测裸鼠人胃癌组织c-Fos和ERK表达的变化.在此基础上,采用EMSA技术检测奥曲肽对胃癌细胞AP-1活化的影响.结果:1×10-5mol/L奥曲肽可明显降低胃癌细胞的3H-TdR的掺入;奥曲肽能抑制人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤的生长,抑瘤率为62.3%.SGC-7901胃癌细胞经不同浓度奥曲肽作用后,其c-Fos和ERK的表达水平均有不同程度下降;组织标本检测亦有类似变化.EMSA分析显示,胃癌细胞有基础水平的AP-1活化,20%血清能刺激AP-1的结合力,奥曲肽能抑制这种刺激作用.结论:奥曲肽通过抑制胃癌c-Fos、ERK蛋白的表达而抑制AP-1的结合活性,从而抑制胃癌的生长.
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熊果酸对肝星状细胞内AP－1、NF－κB表达的影响
目的：明确NOX对血管紧张素II（AngⅡ）诱导的HSC转录因子激活蛋白－1（AP－1）和核因子－κB（ NF－κB）的调控作用及熊果酸（ UA）干预后的影响。方法将培养激活的 HSC－T6细胞株分为： AngⅡ组，给予AngⅡ（1μmol／L）刺激细胞；空白对照组：不加任何药物；各干预组分别给予UA（50μmol／L）、NOX抑制剂DPI（20μmol／L）预处理30 min，再加入AngⅡ处理不同时间。采用活性氧检测试剂盒和荧光酶标仪检测其余各组细胞内荧光强度；用电泳迁移率（ EMSA）测定细胞内AP－1、NF－κB的活性。结果 HSC－T6经药物作用30 min后，AngⅡ组DCF荧光强度比空白对照组明显升高（ P＜0.05），分别给予UA、DPI干预后细胞内DCF荧光强度均显著低于AngⅡ组（P＜0.05），AngⅡ＋UA组与AngⅡ＋DPI组相比较DCF荧光强度无明显差异（P＞0.05）；用AngⅡ刺激HSC－T6细胞1 h后，AngⅡ组AP－1、NF－κB的活性明显高于空白对照组（ P＜0.05），分别给予UA、DPI干预后，细胞内AP－1、NF－κB的活性均显著低于AngⅡ组；AngⅡ＋UA组与AngⅡ＋DPI组相比较AP－1、NF－κB的活性无明显差异（ P＞0.05）。结论 NOX产生的ROS介导AngⅡ刺激HSC转录因子AP－1和NF－κB的活化，熊果酸通过抑制HSC内ROS的生成阻断AP－1、NF－κB的活化。
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N-乙酰半胱氨酸对H2O2刺激的支气管上皮细胞表达IL-8影响
目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞分泌白介素-8(IL-8)影响.方法:将6例人支气管上皮细胞培养传代后分为:对照组,H2O2组,NAC+ H2O2组.NAC+ H2O2组中先给予NAC预孵育4 h之后给予H2O2.通过MTT法检测NAC和H2O2对细胞作用合适浓度,通过ELISA法检测人支气管上皮细胞上清中IL-8的含量,并检测细胞中谷胱苷肽(GSH)的含量,通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)检测核转录因子-κB(NF-κB)、激活蛋白-1(AP-1)的表达.结果:(1)H2O2 组中GSH含量较对照组明显减少,NAC+ H2O2组GSH较H2O2组明显升高(P<0.01).(2)H2O2 组中IL-8含量较对照组明显增加,NAC+ H2O2组较H2O2组明显降低(P<0.01).(3) H2O2 组中转录因子NF-κB、AP-1的活性明显增强,NAC+ H2O2组NF-κB、AP-1的活性较H2O2组明显下调.结论:NAC可增强支气管上皮细胞的抗氧化能力,并通过下调NF-κB、AP-1活性而抑制IL-8的合成.
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JunB在实验性支气管哮喘中的作用
目的 探索激活蛋白-1 (Activator protein-1,AP-1)家族成员中参与构成哮喘病理生理特征的关键亚单位,为哮喘治疗提供更精确和新颖分子靶点.方法 建立大鼠哮喘模型.130只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、哮喘空白组、c-Jun反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODNs)组、JunB AS-ODNs组、JunD AS-ODNs组、c-Fos AS-ODNs组、FosB AS-ODNs组、Fra-1 AS-ODNs组、Fra-2 AS-ODNs组和无义寡核苷酸(Nonsense ODNs,NS-ODNs)组.实施基因沉默后,HE染色计数支气管肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞(Eosinophils,EOS)百分比,逆转录-聚合酶链反应检测白介素(Interleukin,IL)-5 mRNA表达.结果 JunB AS-ODNs组的EOS百分比[(13.39±3.72)%]显著低于哮喘空白组[(34.33±9.62)%],差异有统计学意义(P<0.001),但仍高于正常对照组[(5.61±1.76)%],差异有统计学意义(P<0.05).其余ODNs组的EOS百分比与哮喘空白组的差异均无统计学意义(P>0.05).与哮喘空白组比较,JunBAS-ODNs组的IL-5 mRNA表达被显著抑制[(0.554 2±0.082 9) vs (0.822 4±0.066 0),P<0.001],但亦仍高于正常对照组[(0.323 7±0.057 7),P<0.001].其余ODNs 组IL-5 mRNAs 表达与哮喘空白组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在转录因子AP-1 家族中,JunB 亚单位可能决定哮喘大鼠气道慢性炎症,可能是新颖治疗靶点.
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醛固酮对肝星状细胞激活蛋白- 1通路调控的体外研究
目的探讨醛固酮(Aldo)对肝星状细胞(HSC)激活蛋白-1(AP-1)信号转导通路的影响.方法采用HSC T6细胞株,分别予Aldo 1μmol/L处理10、30、60、120、180 min,蛋白质印迹法检测磷酸化P42/44蛋白的表达.另外,观察细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂-U0126,抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)(均先预处理60 min,再予Aldo刺激)和肿瘤坏死因子α(TNF α)对磷酸化P42/44蛋白表达的影响.Aldo在干预30、60、120、240 min后,电泳迁移率变更分析(EMSA)检测AP1 DNA结合活性的变化;予U0126和NAC干预后,EMSA检测AP-1 DNA结合活性;逆转录聚合酶链反应检测α1-1型前胶原基因的表达.结果 Aldo可诱导磷酸化P42/44的表达,并呈时间依赖性,10 min达到峰值,之后逐渐减低.U0126可抑制磷酸化P42/44的表达.Aldo可增强HSC的AP-1的DNA结合活性.U0126可以显著抑制Aldo诱导的AP-1的活化,NAC部分抑制Aldo诱导的AP-1的活化.Aldo可诱导α 1-1型前胶原mRNA的表达.U0126和NAC可显著抑制Aldo诱导的α 1-1型前胶原mRNA表达增强.结论 Aldo可经ERK通路诱导HSC AP-1结合活性增强.Aldo可经AP-1通路调控α 1-1型前胶原基因的表达.
关键词： 肾素血管紧张素-醛甾酮系统 醛固酮 肝纤维化 激活蛋白-1 -
胰岛素下调AP-1抑制血管平滑肌α肌动蛋白的表达以及对细胞增殖的影响
目的 研究胰岛素诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)转录因子激活蛋白-1(activator protein 1,AP-1)表达下调对VSMC表型转换标志蛋白α肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,SM-α)表达调控及细胞增殖的影响.方法 流式细胞术检测不同浓度(0、25、50、100、125 nmol/L)的胰岛素刺激VSMC 24 h后的细胞周期.设计AP-1表达质粒载体,转染至血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC).分为4组:空白对照组、胰岛素实验组、AP-1表达载体组、胰岛素+ AP-1表达载体组.分别采用Western blot、RT-PCR检测AP-1蛋白及SM-α蛋白的表达及mRNA水平.结果 细胞周期分布结果显示,不同浓度的胰岛素刺激VSMC 24 h后,VSMC的S期百分比升高至峰值后开始下降[(23.49±1.17)％、(28.08±0.68)％、(30.44±1.77)％、(47.47 ±0.88)％、(46.23±1.65)％,P＜0.05],100 nmol/L的胰岛素刺激VSMC 24 h后,VSMC的S期百分比达到峰值(47.47 ±0.88).RT-PCR及Western blot检测结果显示,胰岛素刺激VSMC可下调AP-1[(0.47±0.09)、(0.46 ±0.14),P＜0.05]及抑制SM-α的表达[(0.41±0.03)、(0.32±0.03),P＜0.05].结论 胰岛素能下调转录因子AP-1表达,进而抑制表型转换标志蛋白SM-α的表达,诱导VSMC发生增殖.
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糖皮质激素受体和激活蛋白-1在激素抵抗中的作用
糖皮质激素作为主要的抗炎和免疫抑制药物已在临床上广泛用于肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)的治疗.糖皮质激素(glucocorticoid,GC)是脂溶性类固醇激素,通过细胞膜扩散进入细胞质中,与糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)结合而发挥作用.
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MAPK信号通路在PM2.5致Jurkat T细胞细胞因子改变中的调控作用
目的 探讨MAPK信号通路对交通相关PM2.5引起JurkatT细胞细胞因子变化的调控作用.方法 应用Western-blot方法测定了交通相关PM2.5刺激JurkatT细胞不同时间的磷酸化JNK、P38MAPK和激活蛋白-1(AP-1)蛋白表达,ELISA方法测定了细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β (IL-1β)含量.结果 320 μg/mlPM2.5刺激JurkatT细胞24h后,p-JNK/β-actin灰度比值显著高于生理盐水组,差异有统计学意义,P＜0.05.80μg/ml、320 μg/ml PM2.5组p-p38MAPK/β-actin灰度比值均高于生理盐水组,差异均有统计学意义,P＜0.05.PM2.5染毒组分别加p-JNK拮抗剂SP600125和p-p38MAPK拮抗剂SB203580后,p-JNK/β-actin和p-p38MAPK/β-actin灰度比值均比正常染毒明显降低,以320 μg/ml PM2.5剂量组显著.80 μg/ml PM2.5刺激细胞6h和24h后,AP-1/β-actin蛋白灰度比值、细胞上清IL-1 β含量均比生理盐水组增高,差异有统计学意义(P＜0.05),80 μg/mlPM2.5刺激细胞3h、6h和24h后,细胞上清TNF-α逐渐增高,有明显的时间效应趋势,且与生理盐水组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 交通相关PM2.5可引起Jurkat T细胞炎症细胞因子TNF-α、IL-1β分泌增高,P38MAPK和JNK可通过AP-1调控TNF-α、IL-1 β的释放.
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大鼠急性肺损伤时肺组织激活蛋白-1活性变化的研究
目的探讨脂多糖(LPS)致伤大鼠后肺组织激活蛋白-1(AP-1)活性与肺组织损害及功能障碍程度的关系.方法经Wistar大鼠尾静脉注射不同剂量(2、4、6及8 mg/kg)LPS复制急性肺损伤(ALI)模型,以注射生理盐水为对照,观察致伤后不同时相点(1、2、4及6 h)大鼠的呼吸频率及死亡情况;检测动脉血氧分压(PaO2)和肺湿重/干重(W/D)值,并行组织学检查;采用凝胶迁移率分析法(EMSA)检测肺组织AP-1活性.结果LPS 2 mg/kg即可致大鼠呼吸频率增快,LPS≥6 mg/kg时出现呼吸困难或呼吸窘迫,死亡率为60%(36/60);各剂量组PaO2均较对照组低,以LPS≤6 mg/kg组降低显著(P＜0.01);肺组织W/D值从LPS 2 mg/kg、2 h时显著升高,LPS≥4 mg/kg各-时相均显著升高(P＜0.05);肺大体观察LPS剂量越大,肺水肿及炎症反应越严重;LPS致伤后肺组织AP-1活性均升高,剂量越大,AP-1活性越高,不同剂量组均在2 h点达到高峰,且以LPS≥6 mg/kg组升高显著(P＜0.01).结论①LPS≥6 mg/kg是介导大鼠发生ALI和ARDS的临界剂量;②肺组织AP-1活性升高水平与肺组织损伤和功能障碍程度密切相关.
