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β-淀粉样蛋白对大鼠海马细胞内钙浓度和线粒体膜电位的影响
目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对SD大鼠脑海马细胞内Ca2+-ATPase、游离钙离子浓度和线粒体膜电位的影响,探讨Aβ25-35对大鼠神经毒性作用的机制.方法 将90只SD大鼠按体重随机分为6组,采用海马内注射染毒方式,剂量分别为Aβ10、5和1 μg/只组,设立生理盐水组、假手术组和正常对照组.分别于术后7、14和21 d处死实验大鼠,取海马检测神经细胞内Ca2+-ATP活力、细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位的改变.结果在术后7、14和21 d时,Aβ10 μg/只组海马细胞内Ca2+-ATPase分别为(0.24±0.05)、(0.14±0.01)和(0.09±0.01)U/mg,显著低于生理盐水组(P<0.01),同时具有明显的剂量-时间依赖关系;Aβ25-35可以增高细胞内Ca2+浓度,与生理盐水组相比,差异有统计学意义(P<0.01),并且具有明显的剂量-反应关系与剂量-时间关系,差异有统计学意义(P<0.01);同时,Aβ25-35染毒组实验动物细胞内线粒体膜电位随时间延长和剂量升高而降低,差异有统计学意义(P<0.01);假手术组、生理盐水组与正常对照组之间各指标检测差异无统计学意义.结论 Aβ25-35可以通过增加细胞内钙浓度,破坏线粒体功能而发挥神经毒性作用.
关键词： Aβ25-35 Ca2+-ATPase 游离钙离子 线粒体膜电位 -
39个中药材提取物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用筛选研究
目的:以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,建立β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导细胞损伤的阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)体外细胞筛选模型,并将其应用于筛选39个中药材提取物中的抗神经细胞损伤活性组分.方法:采用CCK-8法进行活性初筛,CCK-8法和Hoechst33342/PI双染色分析法复筛活性组分.结果:初筛和复筛结果一致表明,39个药材提取物中黄柏40％乙醇部位(HB40)和95％乙醇部位(HB95)有较好的抗Aβ损伤活性.结论:提示黄柏有潜在的治疗抗阿尔茨海默病的药用价值.
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复方益智颗粒对Aβ25-35致PC12细胞损伤的神经保护作用研究
目的：探讨复方益智颗粒对Aβ25-35导致PC12细胞损伤的保护作用，为进一步研究该产品改善阿尔茨海默症记忆功能障碍的作用机制奠定基础。方法：取经不同处理的PC12细胞分为正常对照组、Aβ25-35模型组、Aβ25-35＋正常血清组、Aβ25-35＋CYZG含药血清组（不同浓度）。正常对照组：DMEM培养基培养48 h，Aβ25-35模型组：DMEM培养基培养24 h后换含20μM Aβ25-35的DMEM培养基继续培养24 h，Aβ25-35＋正常血清组：正常血清预处理24 h后加入20μM Aβ25-35的DMEM培养基继续培养24 h，Aβ25-35＋CYZG含药血清组：不同浓度CYZG含药血清预处理24 h后，加入20μM Aβ25-35的DMEM培养基继续培养24 h。分别采用MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测PC12神经细胞凋亡情况。结果：Aβ25-35时间依赖性地抑制PC12细胞的生长，不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞损伤有保护作用，随着含药血清剂量的增加，细胞的存活率增加，生长抑制率减少。 Aβ25-35能显著引起PC12细胞凋亡，不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞凋亡有抑制作用。结论：复方益智颗粒对Aβ25-35引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用，其神经保护作用可能与抑制Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡有关。
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积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所致的PC12细胞损伤模型及SAMP8小鼠脑内SOD,GSH-Px的影响
目的:研究积雪草乙酸乙酯提取物对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)所致的PC12细胞损伤模型及快速老化模型小鼠(SAMP8)脑内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响.方法:细胞以1 × 104个/mL密度接种,预防实验在接种24 h后同时给予含不同质量浓度的药物培养液和终浓度为10 μmol· L-1的Aβ25-35溶液,治疗实验在接种24 h后给予终浓度为10 μ.mol· L-1的A芦25-35溶液,24 h后给予含不同质量浓度的药物培养液,作用72 h后采用MTT法检测积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所造成的PC12细胞老年性痴呆(AD)损伤模型的预防和治疗作用;Hoechst 33258荧光显微镜染色法观察积雪草乙酸乙酯提取物作用Aβ25-35片段所致PC12细胞AD损伤模型的形态学变化,SAMP8)40只随机分为模型对照组、积雪草乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组(以生药量计为40,20,10 g·kg-1)和石杉碱甲组(0.386 mg·kg-1),8只/组,连续ig给药2个月后,ELISA法测定积雪草乙酸乙酯提取物对SAMP8大脑组织SOD和GSH-Px的影响.结果:Aβ25-35片段所致的PC12细胞AD模型的预防和治疗实验中,不同浓度的积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所致PC12细胞AD损伤有不同程度的保护作用;荧光显微镜观察到用药组的凋亡细胞数少于模型对照组与MTT的结果相符;ELISA结果显示除低剂量组外,其他各组的SAMP8大脑组织的SOD均高于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01),中剂量组和石杉碱甲组SAMP8大脑组织的GSH-Px比模型对照组高(P＜0.05或P＜0.01).结论:积雪草乙酸乙酯提取物在体外对由Aβ25-35片段所致的PC12细胞损伤有较好的保护和治疗作用,并能通过提高SAMP8脑内SOD,GSH-Px水平起到抗氧化,清除体内自由基而延缓衰老的作用.
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调心方对Aβ25-35杏仁核注射大鼠脑内细胞周期相关蛋白表达的影响
目的:探讨调心方对β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)片段Aβ25-35杏仁核注射大鼠脑内细胞周期相关蛋白表达的影响.方法:用Aβ25-35多肽片段进行大鼠单侧杏仁核注射,以模拟阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)脑内Aβ对神经系统的损害.应用免疫组织化学染色和积分光密度分析检测磷酸化tau、Aβ、cyclin A、cyclin B1等蛋白水平的变化.结果:与生理盐水对照组比较,Aβ注射大鼠脑内的磷酸化tau、Aβ、cyclin A、cyclin B1等蛋白水平有不同程度的升高(P<0.05),而给予调心方的动物在一定程度上能降低这些蛋白的水平(P<0.05).结论:调心方对Aβ引起的动物脑内神经元异常表达的细胞周期相关蛋白有一定的抑制作用.
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甘草苷对原代海马神经细胞的保护和营养作用
目的:研究甘草(liquiritin,LQ)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用和营养作用.方法:采用大鼠原代海马神经元Aβ25-35损伤模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力、流式细胞术检测神经细胞凋亡、荧光探针法检测细胞内钙离子浓度,考察LQ神经保护作用;通过考察LQ诱导海马神经元轴突延长的作用和流式细胞术检测其对海马神经干细胞分化为胆碱能神经元作用观察其神经营养作用.结果:10μmol·L-Aβ25-35显著降低细胞的存活率;明显升高细胞内钙离子水平;诱导细胞凋亡发生,凋亡率达28%.预先给预0·1,1,10μmol·L-1浓度的LQ处理细胞6 h,可显著抑制Aβ25-35导致的细胞死亡,能够明显降低Aβ25-35导致的细胞内钙离子浓度升高,流式细胞检测凋亡率分别降低到10%,15%,22%,提示LQ能够拮抗Aβ25-35导致的细胞凋亡.LQ能够显著增加神经生长因子(NGF)介导的海马神经元轴突延长,特异性的促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂能够部分阻断该作用.另外,LQ可以诱导神经干细胞体外定向分化为胆碱能神经元.结论:甘草苷对Aβ25-35导致的大鼠原代神经细胞损伤具有神经保护作用,同时甘草苷对原代海马神经元有营养作用.
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通络醒脑泡腾片抗痴呆的尿液代谢组学研究
通络醒脑泡腾片(TLXNET)是源自古方芎归汤加减而来的专利处方,具有改善认知功能的作用,然而关于它对Aβ25-35海马注射痴呆模型大鼠的尿液代谢产物影响及抗痴呆作用并不明确.该实验以Aβ25-35海马注射痴呆大鼠模型为研究对象,采用代谢组学技术研究空白大鼠、Aβ:5-35海马注射痴呆模型大鼠和通络醒脑泡腾片干预大鼠尿液中代谢物组时量的轨迹变化和对应关系,确定其特征性代谢标志物,并基于此标志物的代谢轨迹变化阐明通络醒脑泡腾片的抗痴呆作用.实验结果初步确定了吲哚-5,6-醌、4-羟基苯基丙酮酸(4-HPPA)、皮质醇和3-硫代乳酸等4个特征性代谢标志物,它们主要参与体内多巴胺神经系统、糖皮质激素及能量代谢途径,且通络醒脑泡腾片对4个内源性生物标记物代谢轨迹的扰动具有明显的回调作用.该实验表明Aβ25-35海马注射痴呆大鼠模型有明确的尿液代谢特征性内源性生物标志物,通络醒脑泡腾片可以通过回调其代谢轨迹的扰动而达到抗痴呆的作用.
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2,4-二甲基反式芪改善侧脑室注射Aβ25-35诱导的高脂大鼠学习记忆功能
目的 研究2,4-二甲基反式芪(S3)对侧脑室注射Aβ25-35.引起的高脂大鼠学习记忆功能障碍的作用及初步机制.方法 雌性Wistar大鼠70只,分为正常对照组,单纯高脂组,高脂+脑室注射组和阳性药E2组[1 mg/(kg·d)]；S3高、中及S3低剂量组[50、25及12.5 mg/(kg·d)].除对照组10只大鼠外,其他组大鼠给予高脂饮食6周,测定血脂,然后给予侧脑室注射Aβ25-35,同时连续给药7天,从第3天起行Morris水迷宫及跳台实验,每天1次,连续4次,测定各组大鼠学习记忆功能；以分光光度法测定ChAT和AchE,ELISA法测定Ach浓度.结果 S3能够剂量依赖的降低侧脑室注射高脂大鼠血浆总胆固醇和LDL-C浓度(P＜0.01).高剂量组S3能够明显缩短找到平台时间、延长潜伏期并减少错误次数.同时,S3能增加海马组织ChAT活性和Ach浓度,降低AchE活性.结论 S3可能通过降低血脂浓度、增加ChAT活性、降低AchE活性而增加海马Ach浓度,从而改善模型大鼠的学习记忆功能.
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NAC对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白过度磷酸化影响的研究
目的探讨 N -乙酰基半胱氨酸（NAC）对β淀粉样蛋白片段25-35（Aβ25-35）诱导 SH - SY5Y 细胞Tau 蛋白过度磷酸化的影响。方法用凝聚态 Aβ25-35刺激 SH - SY5Y 细胞，建立 Tau 蛋白过度磷酸化的细胞模型。分为空白组、对照组和试验组。空白组为未刺激的细胞，对照组给予20μmol·L -1的 Aβ25-35作用6 h，试验组先给予10 mmol·L -1的 NAC 作用24 h，然后给予20μmol·L -1的 Aβ25-35共同作用6 h。通过蛋白免疫印迹法检测 CDK 5的两个亚基 CDK5和 P35/ P25的蛋白水平，以及 Tau 蛋白在 Thr 212和 Ser396位点的磷酸化水平；采用荧光酶标法检测氧自由基（ROS）。对三组细胞的 CDK5和 P35/ P25的蛋白水平、Thr 212和 Ser396位点的磷酸化水平和 ROS 进行比较。结果三组细胞 ROS 荧光值比较结果显示，空白组 ROS 荧光值为231±19，对照组为359±23，试验组为264±32。空白组低，对照组高，试验组 ROS 荧光值明显高于空白组（ P <0.05），但低于对照组（ P <0.05）。空白组 Tau 蛋白在T212和 S396磷酸化水平分别为1.03±0.09、1.04±0.05，对照组分别为1.63±0.54、1.72±0.34，试验组分别为1.31±0.09、1.21±0.05，空白组低，对照组高，试验组细胞明显高于空白组（ P <0.05），但低于对照组（ P <0.05）。空白组 CDK5、P35分别为1.00±0.06、1.00±0.18，对照组分别为0.75±0.14、1.12±0.13，试验组分别为0.19±0.21、0.99±0.09。空白组、对照组与试验组 CDK5、P35相比较无显著差异（ P >0.05）。空白组 P25水平为1.10±0.16、对照组为1.69±0.20，试验组为1.19±0.03，空白组低，对照组高，试验组 P25值低于对照组，P25值高于空白组，差异具有统计学意义（ P <0.05）。结论 NAC 可以降低 Aβ25-35诱导 SH - SY5Y 细胞 Tau 蛋白磷酸化水平。
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β淀粉样蛋白25-35致神经细胞损伤的机制及信号转导通路初步研究
目的探讨β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)导致神经细胞损伤的机制及在损伤过程中涉及的信号转导通路中相关酶caspase-3的变化.方法采用荧光染色法、流式细胞法、反转录PCR法研究Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的损伤机制及信号转导通路中caspase-3的变化.结果经Aβ25-35处理的SH-SY5Y细胞核中出现浓染的碎块状荧光,流式细胞法检测到凋亡特有的亚二倍体峰,对照组细胞凋亡率为(3.57±0.28)%(n=9),经10、20 μmol/L Aβ25-35处理30 h的细胞,其凋亡率分别为(17.44±1. 27)%和(38.82±2.06)%,与对照组比较差异有统计学意义(均P＜0.01).反转录PCR产物凝胶电泳的caspase-3与看家基因β-actin的比(0.92)高于对照组(0.19).结论Aβ25-35促使SH-SY5Y细胞凋亡,此过程中caspase-3转录水平增高.
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通心络对体外培养SH-SY5Y细胞Aβ25-35毒性损伤的保护作用
目的 探讨通心络对体外培养SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的保护作用.方法 采用细胞培养法,以神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系为材料制备Aβ25-35损伤的离体细胞损伤模型.采用细胞形态学观察细胞形态及以MTT法测定细胞存活率.结果 不同浓度通心络作用不同时间其MTT代谢率均高于损伤对照组(P＜0.01),高、中浓度通心络治疗组均高于低浓度治疗组(P＜0.05),而高、中浓度治疗组间差异无统计学意义;相同浓度通心络作用不同时间其MTT代谢率相比较,36、24 h组优于12 h组(P＜0.05),而24 h与36 h组间比较差异无统计学意义.结论 通心络可促进神经细胞生存,具有神经细胞保护作用.
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骨形态发生蛋白7在β淀粉样蛋白致大鼠海马神经元损害中的保护作用
目的 探讨骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)在β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)致大鼠海马神经元损害中的保护作用.方法 SD大鼠海马神经元原代培养7～10 d,培养基中添加Aβ25-35毒性片段,10 min后添加不同浓度的BMP7.采用CCK-8法检测细胞活力,TUNNEL荧光半定量法检测细胞凋亡,MAP2免疫荧光法观察神经元形态.结果 Aβ+不同浓度BMP7组细胞活力均较Aβ处理组明显增高(P<0.05),并随BMP7浓度增加其活性升高;TUNNEL荧光半定量实验显示Aβ+不同浓度BMP7组凋亡细胞较Aβ处理组明显减少(P<0.05),并随BMP7浓度增加凋亡细胞呈减少趋势;MAP2免疫荧光法观察神经元形态显示,Aβ+BMP7组较Aβ处理组海马神经锥体神经元的形态保护良好.结论 BMP7在Aβ致大鼠海马神经元损害中具有保护作用,且其保护作用具有剂量依赖趋势.
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Aβ25-35通过钙超载导致HT22神经细胞Per2异常表达
目的 探讨钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2表达变化中的作用.方法 体内研究将C57BL/6小鼠双侧海马注射Aβ25-35(300 μmol/kg)和无菌水后,利用跑轮行为学实验评估小鼠的昼夜节律.体外研究将HT22细胞分为对照组、Aβ25-35处理组、Nim+ Aβ25-35处理组.以MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per2 mRNA表达水平,Western Blotting检测PER2蛋白相对表达量,免疫荧光染色观察PER2蛋白原位表达情况,流式细胞术检测胞内钙离子浓度.结果 体内研究表明Aβ25-35导致C57BL/6小鼠在跑轮行为学实验中表现出明显的昼夜节律紊乱.离体研究发现,5、10、15、20、25、30 μmol/L Aβ25-35剂量组细胞存活率较对照组显著降低(P＜0.05).经20 μmol/L Aβ25-35处理后,per2 mRNA及PER2蛋白水平在CT16较对照组显著降低(P＜0.05).经钙离子拮抗剂尼莫地平预处理后,由Aβ25-35在CT16所致per2 mRNA及PER2蛋白水平的降低均显著升高(P＜0.05).结论 钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2异常表达中发挥重要作用.
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cAMP在Liraglutide改善Aβ25-35诱导的昼夜节律紊乱中的作用研究
目的 研究环腺苷酸(cAMP)在利拉鲁肽(Liraglutide)改善β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)引起的昼夜节律紊乱中的作用.方法 C57BLM6小鼠随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+Aβ25-35四组,利用跑轮行为学实验评估小鼠昼夜节律,ELISA法检测海马CA1区cAMP的表达水平.HT22小鼠海马神经细胞随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+ Aβ25-35,SQ22536+Liraglutide+Aβ25-35,SQ22536组,利用CCK8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per1 mRNA表达水平.结果 海马内注射Aβ25-35后小鼠出现明显昼夜节律紊乱,且cAMP节律性表达异常,Liraglutide预处理明显改善了小鼠昼夜节律紊乱现象和cAMP节律性表达异常.HT22细胞中加入Aβ25-35后,细胞存活率下降且per1基因节律性表达异常,而Liraglutide预处理提高了细胞存活率并改善了per1表达异常,但这种效应会被cAMP抑制剂SQ22536所拮抗.结论 Liraglutide可拮抗Aβ25-35所致昼夜节律紊乱及per1基因的异常表达,其机制可能是通过改变cAMP节律性表达实现的.
关键词： 昼夜节律 Liraglutide Aβ25-35 per1节律基因 cAMP -
Fx对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的:研究Fx对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的抗氧化保护作用.方法:采用Aβ25-35 诱导PC12细胞损伤模型,给予Fx化合物预处理后,采用MTT法检测细胞存活率,采用试剂盒检测细胞培养上清液中的超氧化物岐化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)活性.结果:Fx化合物的2种剂型均可显著增加Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的细胞存活率,明显增高细胞培养上清液中的SOD和T-AOC活性.结论:Fx油剂和粉剂对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有较好的抗氧化保护作用.
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骨碎补化学成分及其对PC12细胞的保护作用研究
目的 研究骨碎补 (Drynaria fortunei) 的化学成分及其对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用.方法 采用溶剂法提取,利用硅胶、Sephadex LH-20及ODS柱色谱等方法分离纯化,根据质谱 (MS),核磁共振法 (NMR) 等波谱技术鉴定化合物的结构;建立β淀粉样蛋白(Aβ)25-35诱导PC12细胞损伤体外模型,分别加入不同浓度的化合物,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT) 法检测细胞活力.结果 从骨碎补中分离并鉴定9个化合物:柚皮苷 (1)、新北美圣草苷 (2)、5,7-二羟基色原酮-7-O-α-L-鼠李糖基- (1→2) -β-D-葡萄糖基 (3)、 (E) -4-O-β-D-吡喃葡萄糖基反式咖啡酸 (4)、山柰酚 (5)、木犀草素 (6)、原儿茶酸 (7)、补骨脂素 (8) 和β-谷甾醇 (9).对化合物1～8进行了细胞实验,结果表明,化合物1～8可促进Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞增殖,细胞活力随着浓度的增加而加强,差异具有统计学意义 (P＜0.05).结论 化合物1～8对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有明显的保护作用,为中药骨碎补保护中枢神经功能的主要活性成分.
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李氏5号方对Aβ导致神经元毒性的保护作用
观察李氏5号方对人神经母细胞瘤株SY5Y的细胞生长情况和对β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)导致神经毒性的影响,从而在细胞水平上证实该中药对神经细胞的保护作用.用固相法合成Aβ25-35,高效液相纯化,李氏5号方水提液0.5 g/mL.将人神经母细胞瘤株SY5Y细胞接种后分为正常对照组、Aβ25-35 25 μmol/L损伤组和Aβ25-35 25 μmol/L加李氏5号方水提液保护组.以噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞轴突长度、胞体面积为观察指标.结果:与正常对照组相比,Aβ25-35组SY5Y细胞的轴突长度和胞体面积均较小,MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,而加入李氏5号方保护后,可使上述指标恢复或接近正常.提示:李氏5号方具有神经保护作用,可减轻Aβ导致的神经毒性.
关键词： 李氏5号方 Aβ25-35 神经营养作用 人神经母细胞瘤株SY5Y -
APP17肽对Aβ导致神经元毒性作用的影响
通过观察β-淀粉样肽(Aβ)前体蛋白(APP17)中319-335肽段(APP17肽)对Aβ引起神经毒性作用的影响,进一步证实APP17肽的神经营养作用.用固相法合成APP17肽、Aβ25-35,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ25-3510 μmol/L损伤组和Aβ25-3510 μmol/L加APP17肽10 μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝(MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT-3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙离子(Ca2+)浓度为观察指标.结果:与正常对照组相比,Aβ25-35损伤组轴突长度和胞体面积均缩小,细胞计数减少,MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,细胞内Ca2+浓度升高,而加入APP17肽保护后,可使上述指标恢复或接近正常.提示:APP17肽具有神经营养和神经保护作用,可减轻Aβ引起的神经元损伤.
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CyPA防治Aβ诱导的细胞凋亡和氧化应激损伤
目的 探讨亲环素A(CyPA)对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡及氧化应激损伤的影响.方法 先用不同浓度(0.1,1,10,100nmol/L)的CyPA预处理PC12细胞30 min,再加入10 μmol/L的Aβ25-35继续培养24h或48 h,然后提取细胞进行试验.应用碘化丙啶(PI)单染,然后流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用Western blot的方法检测caspase-3蛋白的表达,同时应用南京建成生物工程研究所的SOD试剂盒和GSH-PX试剂盒检测细胞内SOD和GSH-Px活性.结果 1,10和100nmol/L的rhCyPA预处理组与Aβ25-35单独孵育组相比,细胞的凋亡率明显下降,而caspase-3蛋白表达明显减少,10 nmol/L和100nmol/L的CyPA可以增加细胞内SOD和GSH-Px的活性,而1 nmol/L的CyPA可以增加细胞内GSH-Px的活性.与Aβ25-35诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05),且CyPA剂量越高效果越明显.结论 CyPA可以通过增加SOD和GSH-Px活性和减少caspase-3蛋白表达从而保护PC12细胞减少Aβ25-35诱导的细胞凋亡,且具有浓度依赖性.
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不同浓度Aβ25-35蛋白模拟阿尔茨海默病模型学习记忆的差异
目的 不同浓度的淀粉样蛋白Aβ25-35侧脑室注射后,观察大鼠Morris水迷宫学习记忆能力的变化,探讨制备AD模型大鼠时Aβ25-35注射的佳浓度.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组Aβ25-35注射浓度分别为2、4和8 μg/μL.参照《大鼠脑立体定位图谱》,选取右侧侧脑室注射聚集态的Aβ25-35,制备AD大鼠模型.造模成功后7 d采用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力的变化.结果 平均游泳速度比较,各组大鼠间差异无显著性(P > 0.05).逃避潜伏期结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期时间明显增加,差异有显著性(P < 0.05);模型组中,与注射2 μg/μL的大鼠比较,注射4 μg/μL与8 μg/μL后大鼠逃避潜伏期时间明显增加,差异有显著性(P < 0.05);4 μg/μL与8 μg/μL组间比较,差异无显著性(P > 0.05).目标象限的活动时间与路程显示,与假手术组比较,模型组注射不同剂量Aβ25-35的大鼠目标象限活动时间和路程均显著减少,差异有显著性(P < 0.05),但模型组不同浓度间比较差异无显著性(P > 0.05).空间探索结果显示,与假手术组比较,模型组注射不同剂量Aβ25-35的大鼠穿越平台次数均显著减少,差异有显著性(P < 0.05);模型组中,与注射2 μg/μL的大鼠比较,注射4 μg/μL和8 μg/μL后大鼠穿台次数明显减少,差异有显著性(P < 0.05).4 μg/μL与8 μg/μL组间比较,差异无显著性(P > 0.05).结论 单侧侧脑室注射Aβ25-35蛋白制备大鼠AD模型时,注射Aβ25-35的推荐浓度为4μg/μL.
