首页 > 文献资料
-
雷公藤多糖诱导胰腺干细胞成胰岛样细胞团
背景:胰岛细胞来源不足说明胰岛细胞移植治疗糖尿病不能满足临床需要.因此,体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛细胞成为研究的热点.目的:观察雷公藤多糖对小鼠胰岛来源的胰腺干细胞的诱导分化作用,从而探索中药诱导胰腺干细胞分化为胰岛β细胞的作用.方法:采用雷公藤多糖体外诱导经纯化的小鼠胰腺干细胞分化为胰岛细胞.胰岛样细胞团进行形态学观察,双硫腙染色和Western blot分析.结果与结论:①细胞形态学、细胞生长特性及免疫细胞化学染色显示,实验不仅得到了纯度高的小鼠胰腺干细胞,而且该细胞经雷公藤多糖诱导后能形成球形的胰岛样结构,有细长的蒂与培养瓶底部相连,双硫腙染色呈铁红色;②Western-blot检测显示,胰岛样细胞团中有β细胞素蛋白的表达;③结果表明,小鼠胰腺干细胞可以体外经雷公藤多糖诱导分化为含有β细胞的胰岛样细胞团.
-
β细胞素对体外培养大鼠胰岛的影响
研究β细胞素(BTC)对体外培养大鼠胰岛的作用.BTC无促胰岛急性分泌作用,但对长期培养大鼠胰岛的葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)具有一定保护效力;实时PCR及免疫荧光检测胰高血糖素、胰岛素、PDX-1、葡萄糖转运子2的表达未随培养时间延长而丰度下降,BTC可能不是通过调节上述基因的表达来维护胰岛GSIS功能的.
-
人BTC蛋白表达及生物学活性鉴定
目的 获得大量具有生物活性的人成熟β细胞素(BTC)蛋白.方法 以人胰岛细胞瘤cDNA为模板,PCR扩增BTC基因成熟蛋白编码区的全部序列,并按读框克隆入原核细胞表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-hBTC.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导及亲和层析法纯化获得融合蛋白,运用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.以不同浓度BTC连续5 d作用于NIH3T3细胞,MTT比色法检测细胞增殖能力.结果 融合蛋白以水溶性形式分泌于大肠杆菌BL-21胞浆中,其作用于NIH3T3细胞可明显促进细胞增殖.结论 人成熟BTC蛋白在pET32a(+)表达系统中得到高效表达,所纯化蛋白具有促进NIH3T3细胞体外增殖的作用.
-
β-细胞素基因多态性与糖尿病的研究进展
血糖的稳定依赖胰岛β细胞分泌的胰岛素和α细胞分泌的胰高血糖素的平衡。如果β细胞的数量和（或）功能发生改变，将对血糖的水平产生明显的影响。各种类型的糖尿病都在不同程度上有β细胞的功能损伤及数量的削减，因此，β细胞的生成、发育、分化和凋亡的调节机制成为近年来糖尿病研究的热点［1-4］。若能从源头上解决β细胞的损伤问题，将对糖尿病的临床治疗开辟新的途径，为预防和治疗糖尿病带来新的希望。目前的研究发现β细胞素（betacellulin ，BTC）基因在β细胞的新生和诱导分化上起着重要作用，同时BTC基因的多态性与糖尿病的发生及疾病进展有关。本文对BTC基因与糖尿病近几年的研究进展综述如下。
-
大鼠β细胞素蛋白的表达、纯化及生物学活性鉴定
目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性.方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)中.以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Western blot检测.采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白.结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白.目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%.表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性.结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖.
-
β细胞素对胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞团的影响
目的:探讨大鼠β细胞素在胰腺干细胞的增殖和转分化为胰岛细胞中的生物学作用.方法:分离并培养大鼠胰腺干细胞于CMRL1066和无血清DMEM/F12培养液中,不同浓度大鼠β细胞素处理后,双硫腙染色,放免法检测胰岛素分泌量.结果:在大鼠β细胞素浓度为20～30 mg/L时,大鼠胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞团的数量明显高于对照组;其胰岛素分泌量明显高于对照组(P<0.01).结论:大鼠β细胞素具有促进胰腺干细胞转分化为胰岛β细胞并增强其胰岛素分泌的作用.
-
大鼠β细胞素基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的: 获得大量重组大鼠β细胞素(BTC),为研究β细胞素的功能及制备其抗体奠定基础. 方法: 利用PCR方法从大鼠肾组织扩增出544 bp的β细胞素基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)上,得到重组质粒pET28a-rBTC,转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,IPTG诱导β细胞素蛋白表达,SDS-PAGE 和Western blot检测. 结果: 经IPTG诱导后,有明显的目的蛋白表达,分子量符合β细胞素;表达的蛋白主要以包涵体形式存在;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%;目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应原性. 结论: 大鼠β细胞素基因的克隆与表达为进一步开展β细胞素蛋白功能和胰腺干细胞的研究奠定了基础.
-
β细胞素基因多态性与2型糖尿病患者血脂异常相关性研究
目的：探讨β细胞素基因外显子1 T GC19GGC、5′非翻译区A-226G两个位点基因多态性与2型糖尿病患者血脂代谢的相关关系。方法：对130例2型糖尿病患者和96例健康对照者分别采用 RFLP-PCR、SASP-PCR 对两个位点进行基因多态性筛查。结果：①外显子1 T GC19GGC研究中，2型糖尿病组总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯在两种基因型之间无显著性差异（P＞0．05）；健康对照组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白在两种基因型之间无显著性差异（P＞0．05），高密度脂蛋白在两种基因型之间虽无显著性差异（P＞0．05），但是在 TG基因型中有降低的趋势。②5′非翻译区A-226 G研究中，2型糖尿病组总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白在两种基因型之间无显著性差异（P＞0．05）；对照组总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白两种基因型间无显著性差异（ P＞0．05），甘油三酯在GG基因型中明显升高（ P＜0．05）。结论：①BTC基因外显子1 TGC19GGC的研究中发现，在2型糖尿病组中该位点基因突变与血脂水平无明显相关性，在健康对照组中TG基因型与高密度脂蛋白水平降低有一定的相关性。②B T C基因5′非翻译区A-226G的研究中发现，在2型糖尿病组中该位点基因突变与血脂水平无明显相关性，在健康对照组中GG基因型与甘油三酯水平升高有一定相关性。
-
β细胞素与2型糖尿病相关性研究
1 β细胞素的分子生物学特征β细胞素(Betacellulin,BTC)属于表皮生长因子家族,1993年首先由Shing[1]克隆成功.β细胞素的基因位于人类染色体的4q13±q21,DNA序列包括6个外显子和5个内含子,mRNA序列有1271个碱基组成.Sasada等[2]发现前体BTC是由178个氨基酸组成的,它包括许多区域如信号肽、短的前多肽;成熟BTC是由80个氨基酸组成的糖蛋白,分子量为32kD,主要包括表皮生长因子(EGF)的共有序列、膜外区、疏水跨膜区、胞浆区;BTCe,即BTC的EGF样结构,是β细胞素消化后的EGF样结构,是成熟BTC的后50个氨基酸,其促增殖作用与全长BTC无明显差异.整个BTCe结构被3个二硫键、1个疏水核和23个氢键来稳定.
-
β细胞素在肝癌中的表达及其与肝癌侵袭能力的相关性研究
目的：检测β细胞素（BTC）在肝癌组织及癌旁组织中的表达并探讨其与肝癌侵袭能力的相关性。方法：采用免疫组织化学法检测BTC在肝癌组织和癌旁组织中的表达水平。结果：BTC在肝癌组织中的表达与癌旁组织相比存在高表达的现象，且肿瘤直径≥3cm和有包膜浸润的肝癌组织中BTC也存在高表达的现象，而且这些差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：BTC表达与肝癌的增殖、侵袭能力密切相关，可能在肝癌发生、发展过程中起着重要的作用。
-
大鼠β细胞素的基因克隆和序列分析
目的从大鼠肾组织克隆β细胞素基因的全部编码区,测定并分析其基因序列.方法利用RT-PCR方法,扩增大鼠β细胞素基因片段,将基因片段插入pMD18-T载体,限制性内切酶酶切鉴定,测定序列.结果从大鼠肾组织中成功扩增β细胞素基因,BLAST分析与GeneBank公布的β细胞素基因编码区一致.结论从肾组织中成功克隆β细胞素全部编码区的cDNA.
