丁酸钠对噪声性聋的保护及基底膜乙酰化组蛋白H2B的影响

目的 观察丁酸钠对噪声性聋豚鼠内耳基底膜毛细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平的影响及对听力的保护效果.方法 成年雄性白色红目豚鼠90只随机分为对照组、噪声组和噪声+丁酸钠组,通过听性脑干反应(ABR)检测3个组豚鼠噪声前听力,噪声组及噪声+丁酸钠组给予高强度窄带噪声(122 dB SPL,3小时)暴露,于暴露后14天行ABR检测.并通过免疫荧光染色和Western blot方法检测噪声损伤后基底膜听觉细胞中乙酰化组蛋白H2B的表达水平.结果 ABR结果提示噪声+丁酸钠组在4、8、16与32 kHz ABR阈移较噪声组显著减少(P＜0.01).免疫荧光染色提示在噪声性聋豚鼠动物基底膜内外毛细胞、Hensen's细胞中乙酰化组蛋白H2B明显下调,使用丁酸钠后,乙酰化组蛋白H2B荧光强度较噪声组显著增加.Western blot结果显示噪声组基底膜中乙酰化组蛋白H2B的表达较对照组明显下调,给予丁酸钠干预后,乙酰化组蛋白H2B的表达明显增加,条带灰度H2B-AcK5/β-actin比值在对照组(0.6257±0.0280),噪声组(0.3067±0.1172),噪声+丁酸钠组(0.5010±0.1706),组间差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 噪声可导致内耳毛细胞及支持细胞组蛋白乙酰化水平降低,丁酸钠通过促进内耳毛细胞及支持细胞组蛋白乙酰化,进而对噪声性聋起一定保护作用.

新生豚鼠海马神经干细胞分化为类毛细胞的体外实验

目的 体外定向诱导新生豚鼠海马神经干细胞分化为内耳毛细胞.方法 将原代培养的新生豚鼠海马来源的神经干细胞进行体外培养,分别置入含有10%胎牛血清和5%～15%人工外淋巴液培养基使其分化,并用免疫荧光化学,蛋白免疫印迹扫描电镜对分化的细胞进行鉴定.结果 胎牛血清和人工外淋巴液均能诱导新生豚鼠海马神经干细胞分化为表达毛细胞特异抗体的细胞.结论 神经干细胞在胎牛血清和人工外淋巴液中可以存活并分化出表达毛细胞特异抗体的细胞,为神经干细胞移植内耳治疗提供理论依据.

Hath1基因转染后大鼠耳蜗毛细胞前体细胞的扫描电镜观察

目的探讨Hath1基因对大鼠耳蜗大上皮嵴(greater epithelial ridge,GER)细胞的诱导分化作用.方法取出生后第1天的大鼠耳蜗,利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出纯的GER细胞,于含1 0%血清DMEM培基中进行培养.以腺病毒为载体对GER培养物进行Hath1基因的转染,并对感染后10天的标本进行扫描电镜观察.结果扫描电镜观察显示GER细胞在含10%血清DMEM培基中呈片状贴壁生长特性,表现为典型的上皮样多角型外观.Hath1感染后10天的GER细胞培养物可见在细胞团的边缘出现了细丝状纤毛样结构,而无病毒感染对照组未见到该结构.结论GER细胞作为毛细胞前体细胞可以实现体外原代培养,在Hath1基因重表达情况下,部分细胞的表面可见不成熟的纤毛样结构,提示Hath1基因也许可以诱导离体培养下的纯的毛细胞前体细胞向毛细胞的初步分化.

豚鼠耳蜗毛细胞丝状肌动蛋白表达

目的研究正常生理状态下丝状肌动蛋白(Factin)的结构特征和分布规律.方法应用免疫细胞化学方法,采用单克隆抗体及免疫荧光标记技术,借助荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜,逐层观察耳蜗毛细胞骨架蛋白-丝状肌动蛋白的分布特点.结果在连续的光学切片上,可以看到静纤毛、表皮板和外毛细胞(outer hair cells,OHCs)的周围环都有明亮的鬼笔环肽染色.除基底转外,其余各转皮板下网络(infracuticular network,ICN)均有鬼笔环肽显色,外毛细胞侧壁着色亮度自基底转到顶转逐渐减弱.内、外柱细胞和Deiters细胞染色明亮,其中耳蜗各转外柱细胞头板的显色亮度都强于OHCs.结论豚鼠耳蜗OHCs中F-actin的结构和分布存在差异,内毛细胞(inner hair cells,IHCs)的结构和分布无差异,表明局部结构的梯度决定局部功能的差异.

胰岛素样生长因子1抑制小鼠耳蜗毛细胞凋亡

目的 利用耳蜗基底膜离体培养技术建立庆大霉素(gentamicin,GM)损伤模型,研究胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对小鼠耳蜗毛细胞(hair cell,HC)凋亡的影响及可能机制.方法 取新生小鼠耳蜗基底膜,在分别含有预先制备的培养液(A组),含有GM 0.5 mmol/L(B组),含有GM 0.5 mmol/L和IGF-1 1 ng/ml(C组),GM 0.5 mmol/L和IGF-1 10 ng/ml(D组),GM 0.5 mmol/L和IGF-1 50 ng/ml(E组),GM0.5 mmol/L和IGF-1 100 ng/ml(F组)的培养液中离体培养后制作耳蜗铺片.利用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end Iabeling,TUNEL)结合活性半胱氨酸蛋白酶-3抗体为标记物多重荧光免疫组织化学方法,激光共聚焦显微镜下观察各组耳蜗HC的凋亡情况.结果 耳蜗铺片观察显示A组各转及各组顶转未发现TUNEL染色阳性的凋亡HC.C、D、E、F各组耳蜗底转和中转HC的TUNEL染色阳性HC数较B组减少(P＜0.05),其中以D组减少为明显.活性半胱氨酸蛋白酶-3抗体标记和TUNEL染色阳性的耳蜗HC凋亡的部位不完全重合.结论 GM可诱导离体培养的小鼠耳蜗HC凋亡的发生.应用IGF-1能够通过抑制其凋亡作用,在特定浓度达到佳效果.半胱氨酸蛋白酶-3活化参与耳蜗HC凋亡过程.

顺铂引起斑马鱼侧线毛细胞凋亡的实验研究

目的：探讨顺铂引起听觉毛细胞的死亡形式。方法利用模式脊椎动物斑马鱼侧线毛细胞易于处理和观察的优势，通过毛细胞特异性抗体免疫组化、活体染料、长时程活体成像、TUNEL染色以及Caspase-3原位抗体组化方法分别观察顺铂孵育过程中毛细胞形态变化、细胞核断裂情况以及Caspase-3活化情况，为顺铂引发听觉毛细胞的凋亡提供在体实验依据。结果与对照组相比，顺铂可引起斑马鱼侧线毛细胞90%丢失。长时程成像结果显示毛细胞在死亡过程中会出现逐渐固缩的现象。TUNEL染色结果表明顺铂可引起毛细胞细胞核断裂。Caspase-3抗体原位组化结果显示顺铂可导致毛细胞Caspase-3活化。结论通过细胞形态追踪、细胞核的断裂情况以及Caspase-3活化情况可得出结论顺铂通过细胞凋亡途径导致斑马鱼侧线毛细胞丢失。

金纳多减轻顺铂耳毒性的超氧化物歧化酶检测及扫描电镜观察

目的观察银杏叶提取物一金纳多(Extract ofGinkgo Biloba Leaves Injection,EGB)对抗顺铂(Cisplatin,CDDP)耳毒性的作用.方法将24只豚鼠随机分为CDDP组、EGB+CDDP组及对照组,采用听性脑干反应(audkitory brainstem response,ABR)、血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、光镜及扫描电镜技术,观察用药前后各指标的变化.结果CDDP组动物ABR阈值较其它两组明显升高(P＜0.01),其余两组间差异亦有显著性(0.01＜P＜0.05).血清SOD活性和MDA含量检测表明,CDDP组血清SOD活性较对照组明显降低(P＜0.01),EGB+CDDP组较对照组则差异不显著(P＞0.05).血清MDA含量以CDDP组升高显著(P＜0.01),EGB+CDDP组较对照组略有升高,没有显著性差异(P＞0.05).耳蜗扫描电镜显示EGB+CDDP组较CDDP组毛细胞受损程度明显减轻.结论EGB可有效减轻CDDP的耳毒性作用.

神经生长因子对拟老化豚鼠听功能的保护

目的探讨神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)对拟老化豚鼠内耳的作用和机制.方法选择4月龄纯种豚鼠24只,双耳廓反应灵敏,随机分为3组,各8只.A组(对照组)给生理盐水2 ml/kg;B组给5%D-半乳糖300 mg/kg;C组分别给5%D-半乳糖300 mg/kg和NGF1000 U/kg.均腹腔注射,每日2次,连用4周.各组豚鼠实验前后行ABR测试,处死后分别做透射电镜和TUNEL检测.结果 C组豚鼠较B组豚鼠ABR阈值明显降低,TUNEL阳性的毛细胞、螺旋神经节细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论NGF能够有效保护拟老化豚鼠的听功能.

诱导新生大鼠耳蜗大上皮嵴细胞分化为毛细胞样细胞

目的 大鼠耳蜗大上皮嵴细胞(greater epithelial ridge,GER)转染Hath1基因,与耳蜗间质细胞共培养诱导分化为毛细胞样细胞.方法 取出生后第1天的大鼠耳蜗,利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出纯的GER细胞,与耳蜗间质细胞共培养或转染Hath1基因培养,做免疫组化和扫描电镜观察.结果 GER体外培养具有增殖能力,GER与耳蜗问质细胞共培养或转染Hath 1基因后,免疫组化MyosinⅦa阳性,扫描电镜部分细胞的表面可见不成熟的纤毛样结构,提示GER已分化为毛细胞样细胞.结论 GER细胞作为毛细胞前体细胞可以实现体外培养,与耳蜗间质细胞共培养或转染Hath1后,可分化为毛细胞样细胞.

支持细胞在哺乳动物耳蜗发育及功能中的作用

耳蜗的感觉上皮细胞有毛细胞和支持细胞两种类型.许多研究旨在探讨听力损失的基本机制,重点针对毛细胞和螺旋神经元,较少关注支持细胞.目前对支持细胞作用的了解已从单纯的结构支持扩展到耳蜗毛细胞分化发育、耳蜗离子稳态、毛细胞感音功能的调节以及突触发生发育、毛细胞损伤修复的多个方面.本文对支持细胞在哺乳动物耳蜗发育及功能中的关键作用做一综述.

褪黑激素对内耳损伤的保护作用及其机制

自然衰老、感染、过度声刺激(噪声、爆震声)、放射性损害以及耳毒性药物应用导致的内耳损伤均可引起不同程度的感音神经性听力下降.目前该机制尚不明确,可能与过度产生的氧自由基损伤耳蜗毛细胞致其凋亡有关.褪黑激素(melatonin,MLT)作为体内强的抗氧化剂,在保护内耳损伤方面具有不可忽视的作用.本文将从MLT合成、分布及代谢、MLT在内耳损伤中的保护作用、MLT保护内耳损伤的机制、MLT疗效与剂量相关性及MLT的安全性等方面进行综述,希望为更多内耳损伤的治疗提供参考.

非常规肌球蛋白6与耳聋的关系

非常规肌球蛋白为细胞内一类蛋白超家族,其中的多个蛋白基因表达失常将会导致内耳毛细胞功能障碍,进而出现感音神经性聋.非常规肌球蛋白6的主要功能涉及胞内物质锚定及转运过程.不断革新的分子结构和功能研究理论使得研究者们能够提出肌球蛋白6在内耳毛细胞中的不同作用机制.本文概括了肌球蛋白6及编码基因MYO6的研究进展及其与耳聋的关系,并阐述了其在内耳毛细胞囊泡内吞转运过程中的作用机制,以期为听力损失防治提供参考.

Notch信号和毛细胞发生

文章回顾了Notch信号系统在毛细胞发生、发育中的作用，并展望在毛细胞再生治疗中，它将为支持细胞转化为毛细胞这一可能提供理论依据。

Ca2+-ATP酶对耳蜗Ca2+平衡的调节作用

钙离子(Ca2+)做为第二信使几乎参与了细胞所有的生理活动.在耳蜗水平,钙与机械-电转换、内耳声感受的频率选择性、基底膜振动非对称性等有密切关系.毛细胞及内淋巴液的Ca2+浓度变化与感音神经性耳聋有着密切的联系,而Ca2+-ATP酶(又称钙泵)在耳蜗Ca2+稳态的调控中起了重要作用.Ca2+-ATP酶的作用及其机理已成为感音神经性耳聋发病机制和防治研究的关键之一.

150 毛细胞肌动蛋白系统

近年来，伴随着新技术新方法的重大进展，人们对毛细胞肌动蛋白结构和功能的认识愈加深刻，新的概念不断涌现。本文尽可能详细的搜集了有关新资料，将毛细胞肌动蛋白及其调节蛋白作为一个系统予以介绍，旨在加深听觉生理功能的理解。

212Notch信号途径与哺乳动物的内耳感觉上皮发育

Notch途径作为动物发育中重要的信号转导途径,参与了胚胎发育中多种细胞系定向分化的调控.近研究认为Notch信号传导途径参与哺乳动物内耳感觉前体细胞定向分化为毛细胞和支持细胞及嵌合体形成.本文就Notch信号途径在哺乳动物内耳感觉上皮发育中的研究进展进行综述.

耳蜗内毛细胞及传入神经突触损伤后的修复

缺血、缺氧、噪声等病理条件下引起的耳蜗损伤与谷氨酸的兴奋性毒性有关,可以导致耳蜗内毛细胞、传入神经纤维的水肿、变性等一系列形态学和功能学的改变.学者们观察到损伤后的内毛细胞及传入神经的修复过程.本文通过对相关文献的复习,对影响耳蜗修复过程的因素做一综述.

耳蜗支持细胞与毛细胞再生研究进展

耳蜗毛细胞损伤缺失是导致感音神经性聋的主要原因,如何激活毛细胞再生一直是研究的热点.本文就近年来内耳支持细胞在毛细胞损伤后的作用、支持细胞增殖或转分化为毛细胞的机制及影响因素的相关研究进展做一综述.

支持细胞在内耳发育及耳蜗毛细胞损伤后的作用

耳蜗毛细胞损伤后如何再生及恢复其听功能是现今耳科学研究的热点问题之一.目前国内外的研究热点为调控参与内耳毛细胞调控的基因、干细胞移植、生长因子诱导、内耳前体细胞向毛细胞分化等.对于螺旋器中支持细胞在内耳发育、耳蜗毛细胞损伤后保持听觉上皮完整以及毛细胞再生中的作用关注较少.本文就支持细胞在内耳发育、毛细胞损伤后的作用等研究做一综述.

琥珀酸脱氢酶组织化学可作为毛细胞病理改变的早期标识物