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阻断 TLR4信号通路对结肠癌细胞 CT26裸鼠种植瘤生长和凋亡的影响
目的：研究阻断Toll样受体4（TLR4）信号通路对小鼠结肠癌细胞CT26裸鼠种植瘤生长和凋亡的影响。方法建立结肠癌细胞 CT26裸鼠种植瘤模型，12只鼠成瘤后随机分成实验组及对照组，分别腹腔内注射 TLR4信号通路阻断剂 CLI-095（3 mg／kg）和相同公斤体积的二甲基亚砜（DMSO），并测定种植瘤的生长曲线；种植瘤石蜡包埋切片作苏木素-伊红染色观察病理组织学改变， TUNEL 法检测瘤组织凋亡情况，蛋白免疫印迹法检测 TLR4、cleaved caspase-3等蛋白表达。结果在实验结束时，实验组瘤体体积为（2.39±0.32）cm3，对照组瘤体体积为（1.77±0.25）cm3，实验组瘤体显著大于对照组（t ＝3.817，P ＝0.004）。实验组肿瘤细胞排列较致密，仅有局部坏死；对照组肿瘤细胞密度较低、排列散乱，坏死显著。实验组癌组织凋亡指数为（9.86±2.80）％，明显低于对照组的（22.57±4.93）％，t ＝－7.091，P ＜0.001。2组癌组织 TLR4蛋白的表达无显著差异，实验组 cleaved caspase-3蛋白的表达显著低于对照组。结论阻断 TLR4信号通路，可以抑制结肠癌细胞株 CT26种植瘤细胞的凋亡，从而有利于肿瘤生长。
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NF-κB和TLR4在慢性萎缩性胃炎中的表达及意义
目的 探讨NF-κB和TLR4在慢性萎缩性胃炎中的表达及意义.方法 选取我院2015年3月至2016年3月期间收治的慢性胃炎和胃癌患者192例,分为A组(69例,慢性非萎缩性胃炎)、B组(65例,慢性萎缩性胃炎)和C组(58例,胃癌).采用免疫组化SP法分别检测三组患者胃黏膜中NF-κB和TLR4的表达水平.结果 A组和B组的NF-κB和TLR4阳性率比较差异均无统计学意义(P＞0.05),而C组的NF-κB和TLR4阳性率显著高于A组和B组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性萎缩性胃炎患者NF-κB和TLR4表达水平的提高与胃癌的发生和发展有显著相关性,在慢性萎缩性胃炎患者中定期检查NF-κB和TLR4表达水平对胃癌的早期发现具有重要临床意义.
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TLR4与肿瘤的研究进展
Toll样受体是近年来发现的Ⅰ型跨膜受体.在已发现的11种TLR中,TLR4是研究热点之一.活化的TLR4通过MyD88、丝裂原相关蛋白介导信号转导通路,诱导免疫反应的发生.TLR4在很多种肿瘤细胞中都有表达.TLR4通过不同的信号途径促进炎症和肿瘤的发生和发展,并在癌性疼痛和肿瘤免疫逃逸中起重要作用.TLR4可能成为一个潜在的肿瘤靶向治疗目标.
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乙肝病毒性肝硬化患者血清TLR4表达的实验研究
目的 探讨乙肝病毒性肝硬化患者血清TLR4表达水平.方法 收集两组病例,一组为乙肝病毒性肝硬化组,另一组为乙肝病毒携带者,收集血清分离单个核细胞后,RT-PCR检测TLR4表达水平.结果 肝硬化组PBMCs TLR4/GAPDHmRNA表达水平显著高于对照组(肝硬化组:0.984±0.245;时照组:0.675±0.201;P<0.05).肝硬化Child各组之间差异显著(Child A组:0.753±0.143;Child B组:0935±0.211;Child C组:1.247±0.452;P<0.05),且Child C>Child B >Child A.结论 可以将TLR4作为一个药物靶点,对乙肝肝硬化患者进行治疗,缓解内毒素对机体的伤害.
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清瘟败毒饮对脓毒症相关性脑病大鼠脑组织与TLR4介导的炎性因子的影响
目的:通过清瘟败毒饮干预,观察脓毒症相关性脑病(SAE)大鼠中TLR4与细胞因子、炎症介质之间的关系,阐述脓毒症相关性脑病作用机制及清瘟败毒饮的干预作用.方法:将90只健康雄性SD大鼠随机均分为3组,A组为空白组,B、C组采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立SAE模型,分别予生理盐水、清瘟败毒饮灌胃,于CLP后6h、12 h、24h等时间点分别检测各组血常规(WBC、NE)、TNF-α、IL-6和LTB4水平;采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织TLR4阳性细胞含量;CLP后12 h各组进行神经行为学评分.结果:与A组比较,B、C组神经功能评分降低(P＜0.05);B、C组各时间点WBC、NE、TNF-α、IL-6、LTB4和TLR4水平均较A组显著升高(P＜0.05),并随着炎症反应的持续呈上升趋势;而与B组比较,C组可以抑制脓毒症相关性脑病大鼠WBC、NE、TNF-α、IL-6、LTB4和TLR4(P＜0.05).结论:清瘟败毒饮对脓毒症相关性脑病大鼠的神经功能与炎性反应有一定的改善作用.
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解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白及TBIL的影响
目的:探讨解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)蛋白及总胆红素(TBIL)的影响.方法:将96只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型对照组、解毒化瘀Ⅱ方组,采用D-GalN+LPS联合制备大鼠急性肝衰竭模型,Western blot检测肝组织TLR4蛋白表达,并对TBIL含量进行测定.结果:急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4与血清中TBIL表达显著增强,解毒化瘀Ⅱ方能明显降低肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白及血清TBIL的表达,与模型对照组比较差异显著(P ＜0.05或P＜0.01).结论:解毒化瘀Ⅱ方能降低急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白表达及血清中TBIL水平,对肝细胞有一定的保护作用.
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HBV宫内感染中TLR4表达与细胞因子IFN-γ、IL-4水平研究
目的:研究Toll样受体4(TLR4)与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)的相关性在乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的意义.方法:将研究对象分为研究组[HBV表面抗原阳性(HBsAg) 孕妇]95例,对照组(正常孕妇)38例.采用流式细胞术测定孕妇外周血单核细胞上TLR4表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定孕妇外周血乙型肝炎5项指标和细胞因子IFN-γ、IL-4水平.新生儿脐血测乙型肝炎5项和HBV-DNA.结果:研究组孕妇分娩的新生儿95例有12例宫内感染,宫内感染率为12.63%.新生儿HBV宫内感染组孕妇的TLR4、IFN-γ水平显著低于HBV宫内未感染组及对照组孕妇(P<0.01),IL-4水平则显著高于HBV宫内未感染组及对照组孕妇(P<0.01).HBV宫内未感染组与对照组相比,TLR4、IFN-γ和IL-4水平差异均无统计学意义(P＞0.05).各组孕妇TLR4表达与IFN-γ水平呈高度正相关(P<0.01), TLR4和IFN-γ均与IL-4呈高度负相关(P<0.01).结论:TLR4既可增强Th1介导的细胞免疫功能,又能调节Th1和Th2细胞因子的失衡,有望成为HBV宫内感染免疫治疗的新靶位.
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TLR4基因内含子区rs12377632T/C位点多态性研究
目的:通过对TLR4(toll-like receptor 4)基因内含子区单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)基因型和等位基因的研究,旨在了解其在中国广西地区人群的频率分布及其在不同地区、种族之间分布是否存在差异.方法:使用单碱基延伸PCR技术和DNA测序方法来检测中国广西地区人群TLR4基因内含子区rs12377632T/C多态性,并比较中国广西地区人群与人类基因组计划研究的4个人群(欧洲、中国北京、日本、非洲)的SNP分型数据,以分析TLR4基因内含子区rs12377632T/C位点基因型和等位基因在不同地区、人群之间的差异.结果:中国广西地区人群的TLR4基因内含子区rs12377632T/C位点SNP分型数据在男性、女性之间分布差异无统计学意义(P＞0.05).其SNP分型数据与日本、中国北京地区人群相比较,分布差异无统计学意义(P＞0.05);而与欧洲、非洲地区人群比较,分布差异有统计学意义(P＜0.001).结论:TLR4基因内含子区rs12377632T/C位点SNP,在不同地区、种族人群之间存在明显差异.
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TLR2和TLR4在单肺通气麻醉中的表达
目的:研究Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在单肺通气麻醉过程中的表达变化并探讨其临床意义.方法:选择胸科肺癌行肺叶切除手术30例,随机分为两组,A组(n=11,双肺通气),B组(n=19,单肺通气组),收集开胸后/单肺通气后15(T1),30(T2),45(T3),90(T4)min血清,采用ELISA法检测两组血清中IL-8,TNF-α的表达；收集切除标本后的肺组织,电子显微镜观察细胞形态病理变化,采用RT-PCR检测TLR2 mRNA和TLR4 mRNA,免疫组化检测肺组织TLR2和TLR4蛋白的表达.结果:电镜检测表明:两组均发生肺细胞炎症反应,其中B组发生炎性反应明显比A组显著；两组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达比较,B组的TLR2 mRNA和TIR4 mRNA表达明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05);A、B两组中的IL-8,TNF-α浓度在各时点均有不同程度的升高,其中组内比较T4时点的IL-8,TNF-α浓度明显高于T1时点,差异有统计学意义(P＜0.05)；A、B两组间比较,在T4时点IL-8,TNF-α浓度B组明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),其余时点表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).A、B两组免疫组化比较,B组的TLR2和TLR4阳性率明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:单肺通气期间,随着时间的延长,炎症反应更为显著,TLR2、TLR4表达上调并参与炎症反应.
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外周血单个核细胞TLR4及血清IP-10在慢性乙型肝炎的表达及意义
目的:探讨外周血单个核细胞Toll样受体4 (Toll like receptor 4,TLR4)和血清中IFN-Y诱生蛋白10 (Interferon γ-in-ducible protein 10,IP-10)在慢性乙型肝炎中的作用.方法:应用流式细胞仪检测40例慢性乙型肝炎患者及正常人的血液单个核细胞表面的TLR4的表达以及采用ELISA法检测血清中IP-10水平.结果:慢性乙型肝炎HBeAg阴性患者外周血单个核细胞TLR4和IP-10表达为(30.26±2.89)%和(258.17±148.3) ng/ L,慢性乙型肝炎HBeAg阳性患者外周血单个核细胞TLR4和IP-10表达为(33.7±2.27)%和(376.25±162.25)ng/L,正常对照组TLR4和IP-10表达(12.28±2.65)%和(98.55±52.75) ng/L,患者组与正常对照组比较差异有统计学意义(P <0.05),而HBeAg阴性和HBeAg阳性组比较差异无统计学意义(P >0.05).结论:TLR4和IP-10参与了慢性乙型病毒性肝炎发病过程中的免疫反应并极有可能与免疫损伤有关.
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运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠TLR2、TLR4的影响
目的:探讨不同强度的运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)的影响.方法:选取健康SD大鼠100只,随机分成对照组20只及糖尿病动脉粥样硬化组80只,糖尿病动脉粥样硬化模型采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素(STZ)(30 mg/kg)注射建立.其中糖尿病动脉粥样硬化组又分成模型组、小运动量组、中等运动量组和大运动量组(每组20只).经过估计力竭运动时间及游泳训练后,小运动量组(12 min/次),中等运动量组(21 min/次),大运动量组(30 min/次),进行6周的运动干预,1次/d,一周6次.用PCR法测定各组大鼠主动脉组织的TLR2、TLR4mRNA的表达.结果:模型组较对照组血管组织中TLR2、TLR4水平升高;运动干预后,各运动组TLR2、TLR4水平较模型组降低,以中等运动量、大运动量组下降明显.结论:糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织中TLR2、TLR4水平升高,TLR2、TLR4水平的升高可能是糖尿病动脉粥样硬化的发病机制之一,运动能够降低TLR2、TLR4的表达.
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TLR2、TLR4在糖尿病肾病炎症状态中的作用及药物干预研究进展
在经济发达国家,终末期肾脏疾病(ESRD)的首位病因仍然是糖尿病肾病(DN).我国DN的发病率和患病率上升较快,已成为ESRD的第二位病因,严重损害到人民群众的身体健康和家庭幸福.但DN的发病关键机制尚未明了.近年来,许多研究认为DN进展的中心环节极有可能是炎症通路.
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乙型肝炎病毒对HepG2细胞表达TLR4的影响
目的 探讨乙型肝炎病毒对HepG2细胞表达Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的影响.方法 采用免疫荧光流式细胞术检测TLR4在肝癌细胞株HepC2、HepG2-X和HepG2.2.15上表达的平均荧光强度及阳性细胞率,采用荧光定量PCR检测三种细胞TLR4的mRNA水平. 姑果肝癌细胞株HepC2.2.15上TLR4表达的平均荧光强度及阳性细胞率分别为(18.24±8.18)、(17.79±9.46)%,TLR4 mRNA水平为(0.62±0.11),明显高于HepG2-X和HePG2细胞的相应值(P'＜0.001),而HepG2和HepG2-X两者之间的表达则无统计学差异(P0.05).结论 乙型肝炎病毒可直接上调细胞TLR4的表达,这种上调是通过乙型肝炎病毒非X基因或蛋白来完成的.
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TLR4在华支睾吸虫感染致小鼠肝纤维化作用的研究
目的 探讨TLR4基因在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化中的作用.方法 建立感染华支睾吸虫C3H/HeN(TLR4野生型)与C3H/HeJ(TLR4基因突变型)小鼠模型,在感染后1d、7d、2W、4W、8W、12W取小鼠肝脏,切片并进行HE和Masson染色,观察病理变化.结果 C3H/HeN小鼠肝脏大体病变从2W开始,随感染时间延长而加重;C3H/HeJ小鼠从2W开始,4W加重,至8W已明显减轻.观察HE、Masson染色肝脏切片示随感染时间的延长,C3H/HeN小鼠前期肝纤维化逐渐加重,至8W起趋于稳定;2W～12W纤维化评分均高于感染前(P＜0.01).C3H/HeJ小鼠肝纤维化评分2W升高,4W达高峰并显著高于感染前(P＜0.01),至8W明显下降.与C3H/HeN比较,感染后2W、4W、8W、12W C3H/HeJ小鼠肝纤维化程度轻(P＜0.01).感染后7d,C3H/HeN小鼠的HE染色切片上可见嗜酸性粒细胞,4W达高峰,此后明显减少.感染后2W、4W、8W,C3H/HeJ小鼠嗜酸性粒细胞较C3H/HeN小鼠少(P＜0.05).结论 TLR4基因缺失可能在华支睾吸虫感染致肝纤维化过程起一定的阻制作用,从而减缓肝纤维化的进程.
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乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达及其意义
目的 检测乙肝患者血清标本中TLR2和TLR4的含量,关注其表达特征,探讨其表达的意义.方法 本实验以130例乙肝患者的血清标本作为观察组,60例正常体检成人的血清标本作为对照组,应用酶联免疫吸附实验检测二组中TLR2和TLR4的表达,分析其在不同临床病理特征之间意义及相互关系.结果 乙肝患者血清中TLR2和TLR4的表达明显高于对照组[(85.46±15.46) ng/L vs (28.75±2.35) ng/L；(100.23±23.25) ng/L vs (64.34±4.32) ng/L],血清中TLR2和TLR4的含量与乙肝患者病情的严重程度有关,乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达呈正相关(P=0.021 4,r=0.39).结论 乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4高表达,二者可能具有协同作用.联合检测血清中TLR2和TLR4的含量可能与判断病情的严重程度有关.
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心理应激对大鼠氧化应激的影响及TLR4的作用
目的 观察心理应激对大鼠氧化应激和炎症反应的影响,探讨心理应激在动脉粥样硬化病变形成中的作用、机制.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(NC)、无应激组(NS)、生理应激组(PS)和心理应激组(ES),每组各10只,并制作心理应激模型.于末次应激结束后采集血标本,检测血清SOD活力和MDA含量、放免法测定血清TNF-α水平; HE染色观察大鼠主动脉形态学变化；免疫组化法测定主动脉TLR4表达.结果 (1)血清学指标显示ES组大鼠较其他三组出现了明显的氧化应激损伤(血清SOD活力明显下降而MDA含量明显升高,均P＜0.05)和炎症反应(血清TNF-α升高,P.＜0.05)；同时HE染色发现ES组大鼠主动脉出现早期动脉粥样硬化性改变；(2)ES组大鼠主动脉TLR4表达较其他三组明显上调(P＜0.05).结论 氧化应激有可能在AS形成的早期,通过激活TLR4释放TNF-α等炎性因子促进血管壁的炎症反应,进而导致AS形成.
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TLR4基因多态性与冠心病易感性相关性Meta分析
目的 研究TLR4(1196C/T)基因多态性与冠心病(CAD)易感性的相关性.方法 计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、VIP、Pubmed、Web of Science、Science direct以及Wiley online library等数据库,检索TLR41196C>T基因多态性与冠心病相关性的病例对照研究,检索文献均为建库至2016年9月17日.由两名评价员按照纳入与排除标准单独进行文献筛选及资料提取,采用RevMan5.0和Stata11.0软件对纳入的文献进行统计分析.结果 共纳入7篇文献累积7891例冠心病和4018例健康对照.Meta分析结果表明TLR41196C>T基因多态性与CAD风险相关性无统计学意义[等位基因模型T/C:OR=1.02,95%CI(0.77~1.34),P=0.91;显性模型CT+TT/CC:OR=1.01,95%CI(0.76~1.35),P=0.92;隐性模型CC+CT/TT:OR=1.03,95%CI(0.61~1.75),P=0.91;共显性模型CT/CC:OR=1.02,95%CI(0.76~1.36),P=0.91;共显性模型CC/TT:OR=1.05,95%CI(0.62~1.77),P=0.87].各基因模型均无发表偏倚.结论 TLR41196C>T基因多态性与CAD易感性无明显相关性,受纳入文献数量限制,上述结论尚需开展更多研究予以验证.
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基于ApoE-/-小鼠TLR4、 MCP-1、ICAM-1表达探讨首参颗粒干预动脉粥样硬化的效应机制
目的 观察首参颗粒对ApoE-/-小鼠Toll样受体4(TLR4)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响.方法 采用高脂饮食喂饲ApoE-/-小鼠复制动脉粥样硬化(AS)模型,并给予首参颗粒、阿托伐他汀干预15周,采用Western blotting法检测小鼠主动脉TLR4蛋白表达,ELISA法检测血清MCP-1、ICAM-1表达,结合血脂及组织病理学检测.结果 与正常组比较,高脂饮食喂饲ApoE-/-小鼠可致明显的AS病变,TLR4、MCP-1、ICAM-1表达上调及TC、LDL-C含量升高;经首参颗粒干预,AS斑块面积显著减小,TLR4、MCP-1、ICAM-1表达下调,TC、LDL-C含量降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 首参颗粒可通过下调ApoE-/-小鼠主动脉TLR4蛋白表达与血清MCP-1、ICAM-1水平进而有效干预治疗AS.
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清肺理痰方对急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB和Toll样受体4表达的影响
目的 研究清肺理痰方对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织NF-κB和Toll样受体4表达的影响.方法 SD大鼠72只,随机分为正常对照组、模型对照组,地塞米松组、清肺理痰方低、中、高剂量组,共6组,每组12只.各治疗组大鼠按试验剂量给予相应浓度的药液,每日1次,连续7d.末次给药1h后,模型组与各治疗组大鼠采用气管内每只注射0.2 mL mg/mL的脂多糖溶液复制急性肺损伤模.24 h后取肺组织进行HE染色观察肺组织病理变化,采用ELBA法检测大鼠血清IFN-γ浓度,用Western Blot法和qRT-PCR法测定大鼠肺组织NF-κB p65和TLR4蛋白和mRNA的表达.结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠肺组织呈现明显的肺组织损伤,血清IFN-γ浓度上升,NF-κB p65和TLR4蛋白和mRNA的表达明显升高(P＜0.01);与模型对照组比较,清肺理痰方低、中、高剂量组血清IFN-γ浓度下降,NF-κB P65和TLR4蛋白和mRNA的表达明显降低(P＜0.01),且中、高剂量组低于低剂量组.结论 清肺理痰方能改善内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺组织的损伤,对肺组织损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制肺组织NF-κB和TLR4 mRNA表达有关.
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胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤后TLR4、NF-κB及Ⅰ-κB表达的影响
目的 观察胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤后Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)及核因子-κB抑制剂(Ⅰ-κB)表达的影响.方法 选取成年雌性健康大鼠72只,从中随机选择12只为空白对照组,其余60只大鼠采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血再灌注损伤的模型.选取建模成功的36只大鼠,采用随机数字表法分为胡黄连苷Ⅱ治疗组、阳性对照组以及阴性对照组,每组12只.胡黄连苷Ⅱ治疗组大鼠给予胡黄连苷Ⅱ注射干预,阳性对照组大鼠给予丹参素钠干预,空白对照组和阴性对照组给予磷酸盐缓冲液(PBS)干预.采用TUNEL染色方法检测3组大鼠的细胞凋亡情况;采用免疫组织化学染色方法检测各组大鼠脑内TLR4、NF-κB及Ⅰ-κB表达的情况.结果 空白对照组大鼠的TUNEL阳性细胞呈散在分布、数量较少,大鼠的海马组织、纹状体、大脑皮质中TLR4、NF-κB及Ⅰ-κB的表达较微弱;阴性对照组大鼠的TUNEL阳性细胞比空白对照组大鼠的数量显著增加,海马组织、纹状体、大脑皮质中TLR4、NF-κB及Ⅰ-κB的表达较空白对照组显著增加(P＜0.05);胡黄连苷Ⅱ治疗组以及阳性对照组大鼠TUNEL阳性细胞数、不同脑组织中TLR4、NF-κB及Ⅰ-κB的表达均较阴性对照组大鼠低(P＜0.05),组间差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论 对脑缺血再灌注损伤大鼠来说,给予胡黄连苷Ⅱ治疗可以下调大鼠TLR4、NF-κB及Ⅰ-κB的表达,显著的抑制大鼠的炎症反应,抑制神经细胞的凋亡.
