NF-KappaB SiRNA修饰树突状细胞对大鼠皮肤移植免疫耐受诱导的研究

目的:探讨NF-KappaB(NF-κB)SiRNA修饰供体树突状细胞(DC)对异基因大鼠间皮肤移植术后免疫耐受诱导的效果,从而为该基因治疗方法应用于临床皮肤移植提供依据.方法 1.PGPU6/GFP/Neo-siRNA–NF-κB 表达载体的构建.2.体外SD大鼠骨髓干细胞体外定向诱导扩增培养DC后,将 NF-κB SiRNA及阴性对照SiRNA以LipofectamineTM2000 转染入大鼠DC,行 RT- PCR 和Western blot 检测.3.NF-κB SiRNA转染的DC 2×106个/只经尾静脉注入受鼠体内,分为对照组,未修饰DC组,NF-κB SiRNA基因修饰DC组,5天后行皮肤移植,移植5天后部分受鼠移植皮肤送病理检测,其余观察皮肤存活时间,TUNEL法检测移植皮肤淋巴细胞调亡情况.结果 构建的PGPU6/GFP/N-eo-siRNA-NF-κB通过脂质体转染到DC后,能明显抑制NF-κB基因和蛋白的表达.目的基因修饰组皮肤移植存活情况明显优于其它两组.结论 PGPU6/GFP/Neo-siRNA–NF-κB表达载体成功转染DC.NF-κB SiRNA修饰的供体DC预处理受体(经尾静脉注入),可明显延长移植皮肤的存活时间.

siRNA阻断NF-κB信号通路抑制宫颈癌HeLa229细胞的增殖及侵袭

目的 通过RNA干扰阻断宫颈癌HeLa229细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药和侵袭力的关系.方法 利用RNAi技术,将HeLa229分为转染组和对照组,MTY法检测细胞增殖,Boyden chamber体外侵袭实验检测细胞体外侵袭力.结果 MTT实验表明,转染组细胞存活率比对照组明显下降,联合应用化疗药,转染组和对照组细胞的存活率均随着5-Fu浓度的增加而下降,但在同一浓度,siRNA与5-Fu联合应用可明显提高HeLa229细胞对化疗药的敏感性.体外侵袭实验结果表明,和对照组相比,转染P65 siRNA组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少(P0.05).结论 应用RNAi技术可有效阻断NF-κB信号通路,抑制宫颈癌细胞的增殖和体外侵袭力,增强对5-Fu的敏感性.因此,可将NF-κB信号通路作为宫颈癌基因治疗的靶点.

细胞存活与癌症发生中的NF-kappaB信号通路

急性大、中强度运动对大鼠骨骼肌p38MAPK、NF-kappaB活性,IL-6、MRFs mRNA的影响

目的:探索急性大、中强度运动对大鼠肌肉发生相关因子p38 MAPK、NF-kappaB、IL-6、MRFs(MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4)、MEF2c活性/mRNA影响.方法:66只雄性SD大鼠分为11组,C组(安静组)、大强度组H-0、1、6、16、24 h组(急性大强度运动后0、1、6、16、24 h组,跑台运动方案:1 h、27 m/min、倾角10%,运动30 min后休息5 min,同样强度再跑25 min),M-0、1、6、16、24 h组(急性中等强度运动后0、1、6、16、24 h组,运动方案:1 h、20 m/min、5%,运动30 min后休息5 min,同样强度再跑25 min).检测各组大鼠腓肠肌p38、Phospho-p38、p65、Phospho-p65、IL-6 mRNA、MRFs(MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4)mRNA、MEF2cmRNA水平.结果:(1)H-0、1、6 h组Phospho-p38、Phospho-p65、IL-6mRNA显著高于C组(均P<0.01).M-0、1、6 h组Phospho-p38及M-0、1h组Phospho-p65、IL-6mRNA显著高于C组(均P<0.01),但均显著低于H对应组,其中M-0、1h组IL-6 mRNA显著性水平为P<0.05,其余为P<0.01.(2)H-0、1、6 h组MEF2c mRNA显著高于C组(均P<0.01),M-0、1 h组显著高于C组(均P<0.01)但显著低于H对应组(均P<0.05).H-1、6 h组MRF4 mRNA,H-6h、M-6 h组MyoD mRNA,H-6、16 h组MyoG mRNA显著高于C组(均P<0.01).M-6 h组MyoD mRNA显著低于H对应组(P<0.05).(3)H-6 h、M-6 h组MyoDmRNA/MyoG mRNA比值显著高于C组(P<0.01),H-16 h组显著低于C组(P<0.01).大、中强度运动后,该比值分别在24、16 h恢复至C组水平(P>0.05).结论:(1)p38、NF-κB活性、IL-6 mRNA均对运动刺激敏感,急性运动后,三者变化相似,特别是大强度条件下.p38活性、NF-κB活性、IL-6 mRNA上调幅度及NF-κB活性、IL-6 mRNA上调时间与运动强度有关.(2)MEF2c、MyoD mRNA均对运动刺激敏感.MEF2c、MyoD mRNA的上调幅度、MEF2cmRNA的上调时间与运动强度有关.MRF4、MyoG mRNA仅对大强度运动刺激敏感,Myf-5基因表达对运动刺激敏感.(3)大强度运动后,肌肉表型转化趋势经历了慢-快、快-慢两个阶段,后再恢复正常水平.中等强度运动后早期,表型转化同样为慢-快,表型转化结束较早.

非小细胞肺癌中NF-kappa B的表达与凋亡的关系

目的:研究核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-kappa B)在非小细胞肺癌中的表达,探讨不同NF-kappa B表达的非小细胞的凋亡率,明确NF-kappa B在非小细胞肺癌中的临床意义.方法:应用Western blot检测了45例从2005年10月到2005年12月手术切除的非小细胞肺癌的新鲜标本,并用Tunel法测其凋亡率.结果:在45例患者中,NF-Kappa B的相对量是0.604 7±0.357 2,而且分化差的非小细胞肺癌中的NF-kappa B的表达比分化好的非小细胞肺癌高(P＜0.05);在NF-kappa B高表达中肺癌细胞的凋亡率为56.4%,而在低表达中则为76.7%(P＜0.05).结论:NF-kappa B的表达与非小细胞肺癌的分化相关,在非小细胞肺癌中,NF-kappa B抑制凋亡,并在非小细胞肺癌的形成和发展中起重要作用,或许可以作为基因治疗的靶点为非小细胞肺癌的诊治提供新的思路.

NF-κB国外新研究进展

NF-icappaB(NF-κB)在致炎性转录因子表达时无所不在,调节涉及细胞转化、存活、增殖、侵袭、血管发生、转移和炎症在内的500多个基因的表达,同时,NF-κB信号转导途径参与了炎症、细胞凋亡、免疫反应等病理过程,所以其信号通路在药物介入方面成为潜在靶向目标.

AP-1与NF-κB的活化表达与T细胞的无能

目的:探讨无能T细胞IL-2产生的缺乏与转录因子AP-1和NF-kappaB的关系.方法:通过提取活化组和无能组T细胞的核蛋白,进行凝胶电泳迁移率变动分析实验(EMSA),检测了转录因子AP-1和NF-kappaB的表达情况.结果:与活化组相比,无能T细胞中AP-1不但表达水平下降,且出现组份缺失现象;转录因子NF-kappaB在无能T细胞中的表达则高于活化组,但均有三种复合物存在.结论:无能T细胞IL-2产生减少或缺乏可能与转录因子AP-1和NF-kappaB表达紊乱(减弱或增强)以及组份的缺失有关.

NF －κB 对大肠癌发生发展的影响及其相关治疗的研究现状

NF－κB转录因子家族广泛存在于真核细胞中，调控着细胞的生存、生长和凋亡过程，参与炎症、免疫性疾病及肿瘤等疾病的发生与发展。在大肠癌的疾病进程中，NF－κB作为炎性因子介导慢性结肠炎症向癌症的转化。同时，它又能通过调控细胞周期而抑制细胞的凋亡，促进大肠癌的发生，并在化学药物治疗的过程中通过抑制凋亡而介导大肠癌细胞的多药耐药。研究发现一些中西药制剂能够直接或间接作用于NF－κB，抑制大肠癌的发生以及治疗过程中出现的多药耐药，这为大肠癌的治疗提供了新的思路与靶点。

核转录因子NF-κB在IL-1β及其他细胞因子介导的INS-1细胞损害中的作用

目的研究转录因子NF-κB在细胞因子[白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)]诱导的INS-1胰岛β细胞损害中的作用.方法构建携有NF-κB的抑制物IκBα的突变体IκBαΔN的逆转录病毒,采用免疫印迹分析、κB报告基因荧光分析、四甲基偶氮唑盐细胞活力分析等方法进行研究.结果IL-1β可诱导INS-1细胞的IκBα降解和NF-κB激活,而对感染IκBαΔN逆转录病毒的INS-1/IκBαΔN细胞则无此作用.IL-1β加IFN-γ或TNF-α加IFN-γ可致INS-1细胞活力降低,而INS-1/IκBαΔN细胞可抵抗这些细胞因子导致的细胞损害.结论IL-1β、TNF-α可导致β细胞活力降低,IFN-γ可能起促进作用,抑制NF-κB活性可能保护β细胞免于上述细胞因子介导的损害.

白细胞介素8-251位点单核苷酸多态与胃癌及癌前疾病的关系

白细胞介素-8(IL-8)是趋化因子超家族中的一员,属于CXC趋化因子家族,在多种因素(脂多糖、IL-1等)刺激下,多种细胞均可产生IL-8,如单核细胞、内皮细胞和肿瘤细胞等.IL-8启动子区包括几个转录子结合位点,包括核因子-kappaB(NF-kappaB)、CAAT/增强结合蛋白、Lef/TCF等.在这些位点中尚未找到与疾病关系密切的多态.可能与激活IL-8启动子有关的多态在转录起始部位上游-251处[1].目前的研究发现IL-8-251A等位基因的携带频率在胃癌组显著高于对照组,但是IL-8-251多态性在各种不同胃疾病中的分布情况尚无报道.

NF-kappaB p50基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立及其研究

目的 利用NF-kappaBp50基因敲除小鼠建立子宫内膜异位症模型探索NF-KappaBp50亚单位在子宫内膜异位癌发生发展中的作用.方法 利用子宫内膜移植法建立P50基因敲除小鼠及野生型对照小鼠的子宫内膜异位症动物模型,检测建模后异位病灶大小、免疫组化检测异位病灶、在位内膜以及阴道磷酸化p65 (p-p65)、PKCepsilon和TRPV1的表达.结果 p50基因敲除小鼠异位病灶明显减小,并且,p50基因敲除小鼠异位病灶,在位内膜,以及阴道的p-p65 and PKCepsilon的表达也下降.结论 NF-kappaB p50亚单位在子宫内膜异位症的发生发展中起重要作用,可能是潜在的治疗靶标.

核因子κB与肝纤维化的研究进展

肝纤维化是指各种原因所致的肝脏内纤维结缔组织增生,ECM的合成大于降解所导致肝内ECM过度沉积的病理过程.NF-κB参与调控肝细胞的凋亡和增殖,并调节局部各种介质释放引起的炎症反应,同时促发KC产生各种炎性因子扩大肝脏炎症,终使HSC活化,产生大量胶原纤维.本文简要概述肝纤维化形成过程中NF-κB对肝细胞、枯否细胞及肝星状细胞有关基因转录的调节.

NF-kappaB对ICAM-1表达的调节作用

目的:研究NF-kappaB对粘附分子ICAM-1表达的调控作用.方法:原代培养 HUVECs,用LPS(100 ng·ml-1)刺激不同时间(1、4、8、24 h)后,其中于4 h处预先用NF-κB抑制剂PDTC(1 mmol·L-1)处理15 min,再分别提取核蛋白进行凝胶电泳迁移改变分析(Electrophoretical Mobility Shift Assay EMSA)法测定NF-kappaB活性及提取总RNA进行RT-PCR检测ICAM-1mRNA表达.结果:NF-kappaB的活性变化与ICAM-1的表达有着明显的一致性.用PDTC(NF-kappaB抑制剂)处理内皮细胞,发现ICAM-1的表达随着NF-kappaB活性的降低而下调(2.40±0.11 vs 0.76±0.09,P<0.01).结论:NF-kappaB对ICAM-1基因表达起着重要的调控作用.

来氟米特对三硝基苯磺酸诱导的大鼠结肠炎模型的影响

目的 观察来氟米特(Lef)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠结肠炎的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法 以TNBS诱导大鼠结肠炎模型, 将大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性药物对照组(5-ASA 100 mg/kg,ig,qd×14 d)及Lef低剂量、中剂量和高剂量组(1.0、2.0、4.0 mg/kg,ig,qd×14 d).每天观察疾病活动指数(DAI),2周后处死大鼠,并取出结肠组织进行大体形态及组织学评分.以免疫组化方法检测结肠组织核因子NF-κBp65、TNF-α的表达,Elisa法测外周血IL-10的含量. 结果与TNBS模型组相比,Lef组大鼠的DAI、大体形态、组织学评分及肠黏膜组织内NF-κBp65和TNF-α表达显著降低(P<0.01);大鼠结肠黏膜组织NF-κBp65在模型组以胞核表达为主,相反正常对照组及治疗组NF-κBp65以胞质表达为主;外周血中IL-10含量显著增加(均P<0.01). 结论 Lef对TNBS诱导的大鼠结肠炎有抑制作用,其机制可能是通过提高抗炎细胞因子的水平,抑制NF-κB核结合活性,进而降低致炎细胞因子的表达完成.

辣椒素联合DDP对宫颈癌HeLa229细胞增殖及侵袭力的影响

目的 探讨辣椒素联合DDP对宫颈癌HeLa229细胞增殖、耐药和侵袭力的影响.方法 将HeLa229细胞分为对照组、辣椒素组、DDP组和联合用药组,MTT法检测72 h后细胞的增殖情况及辣椒紊联合应用不同浓度DDP对宫颈癌细胞增殖的影响.Boyden chamber体外侵袭实验检测辣椒素及联合DDP后细胞体外侵袭力的变化.结果 MTT实验表明,辣椒素与DDP联合应用可明显抑制HeLa229细胞的增殖.与单独使用辣椒素或DDP组相比,细胞存活率显著降低;对照组和辣椒素组细胞的存活率均随着DDP浓度的增加而下降,但在同一浓度,辣椒素与DDP联合应用可明显提高HeLa229细胞对化疗药物的敏感性.体外侵袭实验结果表明,与单独使用辣椒素或DDP组相比,辣椒素与DDP联合应用使穿越Matrigel胶的细胞数明显减少.结论 辣椒素与DDP联合应用,可以抑制宫颈癌细胞的增殖和体外侵袭力,增强宫颈癌细胞对化疗药物的敏感性,因此辣椒素有望成为宫颈癌治疗中的辅助用药.

siRNA阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、耐药的影响

目的:通过RNA干扰(RNAi)阻断食管鳞癌细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药的关系.方法:使用NF-κB p65 siRNA分别转染人食管鳞癌Eca109和EC9706细胞72 h,以未转染的Eca109和EC9706细胞为对照,采用Western blot检测p65蛋白的表达;MTT法检测转染NF-κB p65 siRNA 24 h、48 h、72 h后Eca109和EC9706细胞的增殖情况及转染同时联合应用不同质量浓度5-Fu(0 mg/L,16.35 mg/L,32.7 mg/L,327 mg/L,3 270mg/L,6 540 mg/L)对Eca109和EC9706细胞增殖的影响.结果:①NF-κB亚单位p65在Eca109和EC9706细胞质中高表达,p65 siRNA可有效阻断p65蛋白表达.②MTT实验表明,转染组细胞存活率较未转染组明显下降(P＜0.05);与化疗药5-Fu联用,转染组和未转染组细胞的增殖活性随着5-Fu浓度的增加有下降趋势,但在同一浓度,转染p65siRNA的细胞与未转染组相比,细胞增殖活性明显下降(P＜0.05).结论:应用RNAi技术可有效干扰p65的表达,抑制食管鳞癌细胞的增殖,增强对化疗药5-Fu的敏感性.因此,可将阻断NF-κB信号通路作为基因治疗的靶点.

雌激素对SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡的影响及其机制

目的 研究雌激素对系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠的脾脏细胞凋亡及其相关调控机制.方法 采用ConA活化的同系脾脏细胞诱导BALB/e小鼠SLE,同时肌注一定剂量的苯甲酸雌二醇.于第4周、第6周、第8周和第10周采用ELISA法检测血清雌二醇水平,TUNEL法检测脾脏细胞凋亡,免疫细胞化学法检测脾脏细胞Bcl-2和NFKB的表达.结果 与对照组比较,肌注雌激素的SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡率明显降低.Bcl-2和NFKB的表达均增加(P＜0.01).结论 雌激素抑制SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡,可能是通过促进Bcl-2和NFKB的表达所致.

NF-KappaB、p38 MAPK和JNK通路在运动神经损伤引起的大鼠病理性疼痛中的作用及机制

[目的]探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活的下游信号转导途径-核转录因子kappaB(NF-κB)、JNK和p38MAPK是否参与运动神经损伤引起的大鼠病理性疼痛的形成,并探讨其可能机制.[方法]采用痛行为学测试和免疫荧光组织化学方法,观察蛛网膜下腔内注射NF-κB抑制剂(PDTC)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)对腰5脊神经前根切断(L5-VRT)大鼠机械性痛过敏及腰5背根神经节(DRG)内电压门控钠通道(Nay1.3)表达的影响.[结果]①L5-vRT术前应用NF-κB抑制剂PDTC可完全抑制大鼠双侧机械性痛过敏的形成,并阻断同侧L5 DRG内Nay1.3的上调;②术前应用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125主要抑制大鼠对侧后肢的机械性痛过敏;对手术同侧DRG内Nav1.3的表达.SB203580和SP600125分别具有完全阻断和部分阻断作用;③术后7 d给予PDTC或SB203580或SP600125对已形成的大鼠机械性痛过敏均无影响.[结论]运动神经损伤可能通过NF-κB、p38 MAPK和JNK途径调控未损伤DRG神经元内Nav1.3的表达从而进一步调控L5-VRT引起的大鼠后肢机械性痛过敏.