首页 > 文献资料
-
附睾上皮细胞表达功能性的TLR-2和TLR-4
目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和,TLR4的表达情况.方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和,TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对附睾上皮细胞进行功能性检测.结果:TLR2和TLR4在mRNA水平、蛋白水平和细胞水平上在附睾上皮细胞均有表达,TLR2和TLR4的配体LTA和LPS均能激活附睾上皮细胞的天然免疫反应,产生炎症因子TNF-α和IL-1β,差异有统计学意义.结论:附睾上皮细胞表达功能性的TLR2和,TLR4.
-
miR-143下调肝癌细胞TLR2的表达并抑制肝癌细胞增殖和侵袭
目的 探讨肝癌组织中小RNA-143(miR-143)的表达,并通过瞬时转染肝癌细胞观察对癌细胞生物学行为的影响.方法 收集肝癌组织标本及其对应癌旁组织,实时定量PCR检测miR-143在肝癌组织与对应癌旁组织中的表达情况;人工合成寡义核苷酸miR-143mimics,体外瞬时转染HepG2肝癌细胞,MTY法检测细胞增殖变化,annexin V-F1TC/PI染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡变化,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭力变化,Western blot法检测Toll样受体2(TLR2)、核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9蛋白表达情况.结果 miR-143在肝癌组织中低表达,通过转染miR-143mimics上调miR-143水平后,可以抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞侵袭,并下调TLR2、NF-κB、MMP-2及MMP-9表达.结论 miR-143在肝癌中低表达,肝癌细胞过表达miR-143可下调TLR2、NF-κB、MMP-2及MMP-9表达.
-
大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)多克隆抗体的制备及活性鉴定
目的 制备大鼠Toll样受体2胞外段(TLR2ex,405T-573Q)的多克隆抗体并鉴定其活性.方法 用反转录PCR从大鼠肝细胞中扩增长507个碱基的TLR2部分胞外段,并构建重组表达载体pET28a-TLR2ex.在大肠杆菌BL21(DE3)中表达TLR2ex-6×His融合蛋白,该蛋白经亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.ELISA鉴定抗血清的效价,Western blot法检测抗血清的特异性.结果 成功构建了原核表达载体pET28a-TLR2ex,并成功表达纯化了TLR2ex-6×His融合蛋白,将该蛋白免疫BALB/c小鼠后获得抗血清;Western blot法结果显示该血清可以特异性地检出E3大鼠脾组织TLR2蛋白,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1∶76 800.结论 成功制备了大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)的多克隆抗体.
-
过敏性紫癜患儿PBMC中Toll样受体2,4表达与T细胞亚群的关系研究
目的 分析Toll样受体2,4(TLR2,TLR4)在过敏性紫癜(HSP)患儿外周血单个核细胞(PBMC)细胞中的表达,并探讨TLR2和TLR4水平与患儿T细胞亚群的关系.方法 选取2015年3月~2017年2月上海儿童医学中心收治的经确诊为 HSP的患儿65例为研究对象,其中单纯 HSP 49例(HSP组),伴肾脏受累的16例(HSPN组);选取同期体检健康的儿童30例为对照组.采用实时荧光定量PCR检测PBMC细胞中TLR2和TLR4的表达;采用流式细胞仪检测Th1, Th2,Th17和Treg细胞比例,以及Th1/Th2,Th17/Treg比值;采用Pearson法分析TLR2,TLR4表达与Th1/Th2,Th17/Treg比值的相关性.结果 HSPN组,HSP组和对照组 TLR2表达分别为2.13±0.36,1.64±0.27和1.05±0.12,差异有统计学意义(F=129.630,P<0.01);TLR4表达分别为2.21±0.45,1.82±0.34和1.13±0.17,差异有统计学意义(F=81.241,P<0.01).HSPN组Th1,Treg细胞比例以及Th1/Th2比值均明显低于 HSP组和对照组,差异有统计学意义(F=34.103,63.828,91.432,均P<0.01);HSPN组Th2,Th17细胞比例以及Th17/Treg比值均明显高于 HSP组和对照组,差异有统计学意义(F=48.559,48.475,34.909,均P<0.01).TLR2,TLR4与 Th1/Th2比值呈负相关(r=-0.601,-0.652,P<0.01),与Th17/Treg比值呈正相关(r=0.617,0.712,P<0.01).结论 HSP患儿PBMC细胞TLR2,TLR4表达增加,且可能与患儿Th1/Th2,Th17/Treg免疫应答失衡有关.
-
类风湿性关节炎患者外周血单核细胞TLR2的表达及意义
目的：观察类风湿性关节炎（RA ）患者外周血单核细胞 Toll样受体2（TLR2）的表达变化，探讨其在类风湿性关节炎发病中的作用。方法采用流式细胞术检测外周血单核细胞表面 TLR2所表达的平均荧光强度，应用独立样本t检验对检测结果进行统计学处理。结果 RA 患者外周血 CD14＋CD45＋细胞表面 TLR2的平均荧光强度为357.68±86.97，正常人对照外周血单核细胞表面TLR2的平均荧光强度为223.71±87.70，活动期 RA患者外周血单核细胞 TLR2的表达水平高于正常对照（t＝5.478，P＝0.005，P＜0.01）。结论活动期RA患者外周血单核细胞TLR2表达增高，提示其在 RA发病机制中可能有重要作用。
-
TLR2mRNA和TLR4mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达
目的:探讨Toll样受体2(TLR2) mRNA和Toll样受体4(TLR4) mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达水平.方法:采用原位杂交技术检测蕈样肉芽肿皮损和正常皮肤中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达.结果:蕈样肉芽肿皮损中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA主要表达于表皮基底上层,正常皮肤则表达于表皮的基底层.统计学分析表明TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在正常皮肤和蕈样肉芽肿皮损处基底层和基底上层的表达均有显著性差异(P＜0.05),且TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达均高于在正常皮肤中的表达(P＜0.05).结论:TLR2 mRNA和TLR4 mRNA可能在蕈样肉芽肿的发生与发展过程中发挥重要作用.
-
Toll样受体2mRNA在梅毒血清固定患者外周血单核细胞中的表达
目的 研究梅毒血清固定患者外周血单核细胞(PBMCs)中Toll样受体2(TLR2)mRNA的表达情况,并探讨其与梅毒血清固定的发病关系.方法 采用实时定量PCR方法检测TLR2 mRNA在观察组中40例梅毒血清固定患者PBMCs的表达水平,并以30例驱梅治疗后TRUST阴转者和30例正常人分别作为对照组.结果 观察组PBMCs中TLR2 mRNA的表达水平(1.54±0.51)明显低于两对照组(2.49±0.86)和(2.45±0.74),差异有统计学意义(P均＜0.05)；两对照组PBMCs中TLR2 mRNA的表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 梅毒血清固定患者PBMCs中TLR2 mRNA的表达水平较驱梅治疗阴转者及正常人低,表明天然免疫异常可能导致梅毒血清固定的发生.
-
银屑病患者皮损中Toll样受体2及相关因子的检测
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)、信号途径下游分子NF-κB p65以及可能的效应分子TGF-α在银屑病患者皮损中的表达及其与银屑病严重程度的关系.方法 采用EliVision免疫组化法对40例银屑病患者进行期皮损、11例非皮损区及15例正常人皮肤中TLR2,NF-κB p65,TGF-α的表达进行检测,对其在皮损中的表达进行相关性分析,并将结果与PASI评分进行相关性分析.结果 与正常人皮肤及银屑病患者非皮损区相比,银屑病患者皮损表皮中TLR2,NF-κB p65,TGF-α的表达明显上调,而非皮损区TLR2的表达也高于正常人皮肤,差异均有统计学意义(P<0.05).银屑病患者皮损表皮中TLR2,NF-κB p65的表达水平与PASI评分之间存在正相关(P<0.05).银屑病患者皮损表皮中TLR2与NF-κB p65,TLR2与TGF-α,NF-κB p65与TGF-α表达水平之间均存在正相关(P<0.05).结论 TLR2,NF-κB p65,TGF-α在银屑病中表达异常,可能共同参与了银屑病的发病过程.
-
自身免疫性慢性荨麻疹患者外周血单个核细胞TLR2的表达及意义
目的 检测自身免疫性慢性荨麻疹(AIU)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体2(TLR2)mRNA与蛋白的表达,探讨AIU的发病机制.方法 采集AIU患者30例与正常对照组30例外周血,淋巴细胞分离液分离PBMCs,提取RNA,采用实时荧光定量逆转录PCR检测TLR2 mRNA表达;采用免疫荧光染色、流式细胞仪检测PBMCs中TLR2蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,AIU患者PB-MCs中TLR2 mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05);蛋白表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AIU患者PBMCs中TLR2的表达增强,TLR2可能在AIU的发病中起作用.
关键词： 慢性荨麻疹 Toll样受体2 自身免疫性慢性荨麻疹 表达 -
内毒素对人牙周膜细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响
目的:观察内毒素(LPS)刺激后人牙周膜细胞Toll样受体2和Toll样受体4的表达,探讨牙周膜细胞作为免疫活性细胞在牙周炎局部免疫反应中的作用.方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,经来源鉴定后,取生长良好的第4代细胞用LPS进行刺激,分别于刺激0、4、8、12、24h,运用免疫细胞化学染色法检测TLR2和TLR4在牙周膜细胞中的表达；利用多功能真彩色细胞分析管理系统进行图像分析,对TLR2和TLR4进行免疫组化评分(IHS).结果:无LPS刺激的对照组(刺激Oh)TLR2和TLR4的表达均为弱阳性,加入LPS后,染色增强,且随着刺激时间的延长而增加(P＜0.05),LPS刺激后各时间点TU2和TLR4的IHS分值与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:内毒素的刺激可以使牙周膜细胞TLR2和TLR4表达增多,提示牙周膜细胞参与牙周局部免疫反应.
-
TLR2在溃疡性结肠炎患者外周血中的表达及免疫学作用研究
目的 检测溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞中Toll样受体2(TLR2)的表达及血清中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌,初步探讨TLR2在UC患者免疫损伤中的可能作用.方法 分别应用RT-qPCR、ELISA法测定37例UC患者的外周血单核细胞TLR2 mRNA表达及血清MCP-1、TNF-α浓度,同时设置健康对照组.结果 UC组TLR2 mRNA表达、血清MCP-1、TNF-α浓度均显著高于健康对照组(P＜0.05).结论 UC患者外周血单个核细胞TLR2mRNA表达上调,进而通过其下游配体启动炎性因子分泌,介导肠道免疫炎性损伤.
-
脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1对组织Toll样受体2基因表达的影响
目的探讨高迁移率族蛋白-1 (HMGB-1)对组织Toll样受体2 (TLR2)基因表达的影响及其与机体炎症反应平衡的关系. 方法采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型造成脓毒症.50只大鼠随机分为正常对照组(10只)、CLP组(20只)及HMGB-1抑制剂正丁酸钠治疗组(20只).分别检测肝、肺、肾组织HMGB-1/TLR2 mRNA表达、TNF-α/白细胞介素-10(IL-10)蛋白水平. 结果正丁酸钠治疗组CLP后 12及24 h肝、肺、肾组织TLR2 mRNA表达均较CLP组显著下调 (P<0.05～0.01),且肝、肺、肾组织HMGB-1 mRNA表达与相应组织TLR2 mRNA表达均呈显著正相关(分别为r=0.556, P=0.000; r=0.462, P=0.000; r=0.402, P=0.001).同时,CLP术后给予正丁酸钠治疗24 h肺、肾组织TNF-α蛋白表达显著降低(P<0.05～0.01),而肝、肺、肾组织IL-10水平则呈现不同程度的升高(P<0.05～0.01). 结论严重腹腔感染后组织HMGB-1可显著促进TLR2 mRNA表达,应用HMGB-1合成抑制剂干预有助于调节体内致炎/抗炎反应平衡.
-
干酪乳酸杆菌对新生大鼠Toll样受体2和甘露醇受体影响及其免疫调节作用的可能机制的探讨
目的 通过观察干酪乳酸杆菌对新生鼠Toll样受体2(TLR2)和甘露醇受体(CD206)的影响,探讨其免疫调节作用的可能机制.方法 64只新生SD大鼠随机分为对照组(32只)、干预组(32只),各组再以第1、2、3、4周为时间点分为4个亚组,干预组每天给予干酪乳酸杆菌活菌悬液(1×109CFU/只)治疗,共4周,每周取小肠进行TLR2及CD206免疫荧光染色,高倍镜下计数阳性细胞数,并进行统计分析.结果 (1)TLR2和CD206阳性细胞随日龄增加而增加;(2)干预组TLR2和CD206阳性细胞数明显高于对照组(P＜0.05).结论 新生鼠肠道中TLR2和CD206受体随周龄增加而增加,干酪乳酸杆菌能够激活肠道中TLR2及CD206细胞.
-
甘露聚糖肽对溃疡性结肠炎病人TLR-2和TLR-4表达影响
目的 了解甘露聚糖肽对溃疡性结肠炎(UC)病人Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)表达的影响.方法 UC病人200例,随机分为两组,各100例.对照组病人给予美沙拉嗪颗粒2 g冲服每天2次,9 g/L氯化钠注射液100 mL静脉滴注每天1次;观察组给予美沙拉嗪颗粒2 g冲服每天2次,甘露聚糖肽10 mg溶于9 g/L氯化钠注射液100 mL静脉滴注每天1次,15 d为1个疗程,共治疗2个疗程.分别于治疗前和治疗后,取病变显著肠黏膜组织3块,应用免疫组化方法检测TLR-2和TLR-4表达.结果 治疗前,两组TLR-2、TLR-4表达比较,差异无显著性(P＞0.05);治疗后观察组TLR-2、TLR-4表达阳性率低于对照组,差异有显著性(x 2=5.49、6,12,P＜0.05).结论 甘露聚糖肽能抑制UC病人TLR-2、TLR-4的表达.
-
银屑病病人外周血单核细胞TLR2基因表达及血清ASO和IL-8水平变化
目的 观察寻常型银屑病病人外周血单核细胞Toll样受体2(TLR2)mRNA表达及血清抗链球菌溶血素"O"(ASO)和白细胞介素-8(IL-8)水平的变化,探讨其与银屑病发病的关系.方法 采用RT-PCR方法检测银屑病病人(银屑病组)外周血单核细胞TLR2 mRNA表达,采用胶乳凝集法检测血清ASO水平,采用ELISA法检测血清IL-8水平.以我院体检健康者30例作为对照(正常对照组).结果 银屑病组TLR2 mRNA表达明显高于正常对照组(t=5.541,P＜0.01);银屑病组点滴型与斑块型TLR2 mRNA表达比较无显著性差异(t=0.318,P＞0.05).银屑病组血清ASO水平明显高于正常对照组(χ2=8.604,P＜0.01);且点滴型病人明显高于斑块型病人(χ2=9.780,P＜0.01).银屑病组血清IL-8水平显著高于正常对照组(t=28.463,P＜0.01);点滴型与斑块型病人之间比较无显著性差异(t=0.660,P＞0.05).点滴型病人ASO阳性者TLR2 mRNA表达水平高于ASO阴性者,差异有显著性(t=2.407,P＜0.05);银屑病病人外周血TLR2 mRNA表达与IL-8水平呈正相关(r=0.637,P＜0.01).结论 TLR2可能通过识别链球菌等入侵病原微生物启动机体免疫应答,介导细胞因子IL-8等的产生,参与银屑病皮损的发生和发展.
