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miR-144负性调节大鼠巨噬细胞TOLL样受体2的表达
目的：明确TOLL样受体2（TLR2）与microRNA144（miR-144）作用之间的关系。方法利用不同浓度的miR-144的模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitor）瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞，RT-qPCR检测miR-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏cDNA为模板，PCR获取目的片段（即含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区）；用SacⅠ、XbaⅠ双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区，构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因，并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒，即pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR；并用miR-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确miR-144与TLR2 mRNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L miR-144 mimics后，NR8383细胞中miR-144表达显著升高，而TLR2及其下游分子TNF-α表达显著下降；而100 nmol/L miR-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功；用100 nmol/L miR-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后，pmir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论 miR-144通过靶向结合TLR2 mRNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。
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马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及TNF-α分泌的影响
目的 研究马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及促炎因子TNF-α分泌的影响.方法 马尔尼菲青霉酵母相菌液与小鼠腹腔巨噬细胞共培养24 h,采用流式细胞技术检测巨噬细胞TLR-2、TLR-4及Dectin-1的平均荧光强度;共聚焦显微镜观察荧光染色的受体;ELISA法测定培养液上清中TNF-α的浓度;Real time PCR检测不同时间段TNF-α的mRNA表达.结果 马尔尼菲青霉可使巨噬细胞TLR-2、TLR-4、Dectin-1的平均荧光强度均增高,并激活巨噬细胞产生TNF-α.结论 马尔尼菲青霉上调了巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达,巨噬细胞的激活与TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达上调相关.
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Toll样受体2配体对刀豆蛋白A诱导小鼠肝脏损伤的保护作用
目的:研究Toll样受体2配体(Pam3CSK4)对刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠免疫性肝损伤的干预效果及机制.方法:尾静脉注射Con A(15mg/kg)诱导小鼠肝损伤模型,在Con A注射前24h腹腔注射Pam3CSK4.检测血清谷丙转氨酶(ALT)和γ-干扰素水平,并观察肝组织的病理改变.结果:与Con A模型组比,Pam3CSK4预处理组血清ALT水平明显降低(P<0.01),肝脏病理损伤明显减轻,血清γ-干扰素水平明显下降(P<0.01).结论:Pam3CSK4对Con A诱导小鼠肝损伤具有保护作用,该作用可能与γ-干扰素水平的下调有关.
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慢性乙肝和慢性重型乙肝患者血单核细胞Toll样受体2的变化
[目的] 探讨慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2(TLR2)的变化情况及其意义.[方法] 随机选取慢性乙型肝炎患者31例,设定为慢性乙型肝炎组,慢性重型乙型肝炎患者30例设定为慢性乙型肝炎组,健康志愿者30例为正常对照组,用流式细胞仪检测各组外周血单核细胞表面Toll样受体2的表达,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,荧光定量PCR法检测血清HBV DNA并取对数作为复制水平的指标,总胆红素(TB)和凝血酶原时间(PT)的检测按照本院常规检测.三组均数间的比较采用单因素方差分析和Scheffe检验进行两两间的比较;两组计量资料间的比较采用Mann-Whitney U秩和检验;两组数据间的相关性分析采用线性相关分析;P<0.05为有统计学意义.[结果] 正常对照组、慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR2表达强度和外周血清TNF-α水平均分别为(21.5±2.7)MFI、(39.0±4.1)MFI、(47.7±21.4)MFI和(54±38)ns/L、(164±90)ng/L、(360±140)ng/L,依次逐渐升高,且各组间比较均具有显著性差异;外周血单核细胞TLR2表达水平与血清TNF-α表达水平呈现显著的正相关.慢性重型乙型肝炎组与慢性乙型肝炎组TB,PT和血清HBV DNA对数值分别为(470±225)μmol/L与(101±131)μmol/L,(35.1±21.1)s与(15.4±2.2)s和5.9±2.0与5.4±1.6;慢性重型乙型肝炎组与慢性乙型肝炎组比较,TB、PT显著升高而血清HBV DNA对数值无显著性差异;外周血单核细胞TLR2表达水平与TB及PT呈现显著的正相关,但与血清HBV DNA对数值间无显著的相关性.[结论] TLB2可能与慢性乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发病有关.
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荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体2、4表达的影响
目的 探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆管阻塞型肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体(TLR)2、TLR4表达的影响.方法 雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、TFL小剂量组(C组)、TFL大剂量组(D组).除A组外,其余各组均采用胆总管结扎法制备肝纤维化大鼠模型.在造模后第2天开始,A、B组给予生理盐水灌胃,C、D组分别给予100、200 mg/(kg·d)的TFL灌胃,均1次/d,共4周,第4周末处死全部大鼠,留取肝脏组织.HE、Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变,免疫组化法及免疫印迹法检测TLR2、TLR4在4组大鼠肝组织内的表达.结果 与B组比较,D组肝组织肝纤维化程度明显减轻,胶原表达明显减少(P＜0.01);D组大鼠肝组织中TLR2和TLR4蛋白明显减少(P＜0.01),C组介于B组和D组之间,但与B组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR2和TLR4蛋白表达增加可能与胆总管结扎大鼠肝纤维化的发生发展有关,200 mg/(kg·d)TFL能抑制肝纤维化大鼠TLR2、TLR4的表达,并改善大鼠肝组织纤维化程度.
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Toll样受体2在人绒毛外滋养细胞和绒癌细胞中的表达及意义
目的 通过体外实验研究Toll样受体2(TLR2)在人早孕绒毛外滋养细胞株TEV-1及绒癌细胞株BeWo中的表达,初步探讨TLR2在绒癌发生发展中的作用和意义.方法 体外培养TEV-1及BeWo细胞株,RT-PCR检测其TLR2 mRNA表达水平;免疫细胞化学检测TLR2蛋白的定位和半定量表达.结果 (1)TEV-1及BeWo细胞均表达TLR2,且定位于细胞膜和细胞浆.(2)TLR2的mRNA及蛋白表达水平在BeWo细胞明显高于TEV-1细胞(P<0.05).结论 BeWo细胞明显高表达的TLR2可能与绒癌的发生、发展、转移和免疫耐受有关.
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CR3-TLR2合作体在小鼠巨噬细胞识别马尔尼菲蓝状菌中的作用
目的 探讨CR3-TLR2合作体在小鼠巨噬细胞识别马尔尼菲蓝状菌中的作用.方法 以小鼠巨噬细胞系RAW264.7为靶细胞,siRNA靶向下调巨噬细胞CR3、TLR2的表达,与马尔尼菲蓝状菌分生孢子共培养,流式细胞技术检测共培养前后巨噬细胞的吞噬率,ELISA检测共培养上清细胞因子水平.结果 siRNA靶向下调RAW264.7细胞CR3、TLR2、CR3+TLR2后,与马尔尼菲蓝状菌共培养,巨噬细胞对马尔尼菲蓝状菌分生孢子的吞噬率均下降(P＜0.05),且以干扰CR3+TLR2后下降明显(P＜0.05);同时,巨噬细胞分泌细胞因子的水平下降(P＜0.05).结论 在先天性免疫早期阶段,CR3-TLR2合作体为巨噬细胞识别、介导吞噬马尔尼菲蓝状菌的主要模式识别受体之一;IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10等Th1型和Th2型细胞因子均参与巨噬细胞抗马尔尼菲蓝状菌感染免疫.
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慢性乙型肝炎患者肝组织中Toll样受体2的表达及其临床意义——附63例报告
目的:探讨Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)中的表达及其临床意义.方法:取63份CHB患者的肝组织标本(CHB组)及9份移植肝常规留取的正常肝组织标本(对照组),采用免疫组织化学法检测2组TLR2的表达情况.结果:TLR2表达主要定位于肝细胞胞浆及部分胞膜上.CHB组中、重度患者肝组织上的TLR2的表达均比对照组明显增强,比较差异均有统计学意义(P＜0.05～P＜0.01);在CHB组中,中、重度患者肝组织上的TLR2的表达均比轻度患者明显增强,比较差异均有统计学意义(P＜0.05～P＜0.01);CHB组患者肝组织上的TLR2的表达程度与临床分度呈显著正相关(r=0.559,P＜0.001).结论:对于CHB,TLR2具有重要意义,提示调控或干扰TLR2有利于控制病情.
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Toll样受体对脓毒症中性粒细胞移行影响的研究进展
脓毒症是继发于感染的全身炎症反应综合征,是危重患者主要的患病原因.近年研究表明脓毒症中存在中性粒细胞移行障碍,这与中性粒细胞上Toll样受体(TLR)有关.然而目前对于其机制尚不完全明确,该文就其相关方面展开综述.
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TLR-2和TLR-4在不同疾病胸腔积液中的水平及临床意义
目的 探讨不同疾病胸腔积液中Toll样受体2(TLR-2)及Toll样受体4(TLR-4)的水平及其临床意义.方法 收集81例胸腔积液及其同源外周血,其中结核性胸腔积液组32例,肿瘤性胸腔积液组28例,细菌性胸腔积液组21例.应用酶联免疫吸附(ELISA)法测定胸水上清液和血清中TLR-2和TLR-4的浓度,并对结果及意义进行分析.结果 (1)胸腔积液间:结核组TLR-2浓度(22.19±2.12)ng/L分别与肿瘤性组(14.50±1.93)ng/L、细菌组(13.99±2.36)ng/L相比差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤性组、细菌组间相比差异均无统计学意义(P>0.05).而TLR-4在三组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).(2)血清中:细菌组TLR-4浓度(5.34±2.13)ng/L,分别与结核组(1.54±1.09)ng/L、肿瘤性组(0.10±0.06)ng/L相比差异均有统计学意义(P<0.05).(3)胸腔积液与血清中:TLR-2和TLR-4比较差异均有统计学意义(P<0.05).(4)结核性胸腔积液中:TLR-2和TLR-4具有相关性(P<0.05).结论 TLR-2可有助于结核性与非结核性胸腔积液的鉴别.TLR-2和TLR-4在结核性胸膜炎发病中可能具有共同作用.
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NOD样受体蛋白3、Toll样受体2在胎膜早破患者胎盘和胎膜组织中的表达及其临床意义
目的 探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)与Toll样受体2(TLR-2)在胎膜早破(PROM)患者胎盘和胎膜组织中的表达水平及其临床意义.方法 选取90例PROM患者作为观察组,根据其孕周分为观察1组(孕周≥37周)48例和观察2组(孕周28～36+6周)42例;另选取健康孕妇70例作为对照组,根据孕周不同分为对照组1组(孕周≥37周)和对照2组(孕周28～36+6周),各35例.比较对照组与观察组绒毛膜羊膜炎发生情况,采用免疫组织化学法检测各组研究对象胎盘和胎膜组织中NLRP3、TLR-2的表达情况.结果 NLRP3主要存在于胎盘合体滋养细胞、胎膜上皮细胞和间充质细胞的细胞质中,TLR-2主要存在于胎盘合体滋养细胞的细胞膜及细胞质羊膜上皮细胞和绒毛膜滋养细胞.观察组绒毛膜羊膜炎发生率高于对照组(P<0.05);观察1组患者胎膜、胎盘组织的NLRP3及TLR-2平均光密度值、阳性细胞数均高于其余3组(均P<0.05),观察2组以上指标均高于对照1组和对照2组(均P<0.05),但观察1组和观察2组TLR-2平均光密度值、阳性细胞数差异无统计学意义(均P>0.05).结论 PROM患者胎膜及胎盘组织中NLRP3、TLR-2表达水平升高,两者可能参与PROM的发生发展.
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Toll样受体2在耐多药肺结核患者外周血中性粒细胞上的水平及意义
目的 检测Toll样受体(TLR)2在耐多药肺结核患者外周血中性粒细胞(PMN)的水平,探讨其在结核分枝杆菌耐药机制中的意义.方法 在药物干预前后,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术,分别检测26例耐多药肺结核患者、30例非耐药肺结核患者和30例正常对照者外周血PMN培养上清液中TLR2的水平.结果 干预前耐药组肺结核(PTB)患者外周血PMN培养上清液中TLR2的平均浓度为(11.789 6±3.346 0)ng/mL,低于非耐药组PTB患者外周血PMN培养上清液中TLR2的平均浓度(17.878 0±1.3264)ng/mL(P=0.000).同时,耐药组TLR2水平也低于正常对照组(14.719 7±2.635 4)ng/mL(P=0.001).干预前后,耐药组TLR2水平差异无统计学意义,而非耐药组患者外周血PMN上TLR2的水平与干预前相比有降低(P=O.000).结论 TLR2可能在耐多药结核分枝杆菌对宿主产生免疫逃避上发挥了关键作用,对于其具体作用机制,仍需进一步研究.
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茶碱控释片联合β2受体激动剂治疗支气管哮喘的气道功能及炎症程度评价
目的:研究茶碱控释片联合β2受体激动剂治疗对支气管哮喘患者气道功能及炎症程度的影响.方法:选择我院收治的112例支气管哮喘患者作为研究对象,随机分为两组,观察组接受糖皮质激素抑炎、茶碱控释片联合β2受体激动剂舒张气道,对照组接受糖皮质激素抑炎、β2受体激动剂舒张气道.治疗后8周时,测定气道功能、血清中信号通路分子及细胞因子含量、外周血中免疫细胞含量.结果:治疗后8周时,观察组的潮气量(VT)、用力呼气容积(FEV1)、大呼气峰流速(PEF)水平均显著高于对照组,呼出气一氧化氮(FeNO)含量均显著低于对照组;观察组血清中Toll样受体(TLR2)、连接蛋白髓样分化蛋白88(MyD88)、c-J un氨基末端激酶(JNK)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)的含量均显著低于对照组,干扰素-γ (IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)的含量显著高于对照组;观察组外周血中CD4+ IFNγ+ Th1细胞、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞的含量显著高于对照组,CD4+ IL-4+ Th2细胞的含量显著低于对照组.结论:茶碱控释片联合β2受体激动剂治疗能够改善支气管哮喘患者的气道功能、减轻TLR2所介导的炎症反应及T淋巴细胞亚群功能紊乱.
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外周血单核细胞Toll样受体2及Toll样受体4表达与糖尿病肾病的相关性
目的 检测糖尿病慢性肾病中外周血单核细胞Toll样受体2(TLR2)及Toll样受体4(TLR4)的表达水平,探讨TLR2、TLR4与糖尿病肾病的相关性.方法 选取内分泌科住院的2型糖尿病患者152例,将患者分为单纯糖尿病组、早期糖尿病肾病组、临床糖尿病肾病组,另选取体检科健康体检者36例作为对照组.采用流式细胞仪检测TLR2和TLR4的蛋白表达.采用RT-PCR检测TLR2和TLR4 mRNA的表达,采用ELISA检测血清MCP-1、hs-CRP、TNF-α、IL-6和IL-18水平.结果 单纯糖尿病组、早期糖尿病肾病组TLR4 mRNA、TLR4蛋白、TLR2 mRNA和TLR2蛋白水平均低于临床糖尿病肾病组(P＜0.01);单纯糖尿病组、早期糖尿病肾病组MCP-1、hs-CRP、TNF-α、IL-6和IL-18水平均低于临床糖尿病肾病组(P＜0.01);TLR2水平与UAE呈正相关(Y=0.013X+1.295 6,R2 =0.895 5),TLR4水平与UAE呈正相关(Y=0.006X+1.650 0,R2=0.802 6).结论 TLR4和TLR2水平可以反映糖尿病肾病发展程度,TLR4和TLR2可作为糖尿病肾病的检测指标.
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乙型肝炎e抗原对外周血单核细胞Toll样受体2表达的影响
目的 探讨HBeAg对外周血单核细胞表面Toll样受体2(TLR2)表达的影响.方法 对68例慢性乙型肝炎(CHB)患者(其中HBeAg与HBV DNA刚性37例,HBeAg阴性、HBVDNA阳性14例,HBeAg与HBV DNA阴性17例)和16名健康人的外周血肝素抗凝,加入Pam3CSK4在37℃、5%CO2条件下刺激3 h,用特异性TLR2单克隆抗体标记,经流式细胞仪检测CD14+细胞表面TLR2表达的百分率;比较刺激前后各组之间的差异.定量检测HBV DNA和血清HBV标志物,分析TLR2表达水平与HBeAg、HBV DNA的关系.用HBeAg与健康人及HBeAg阴性CHB患者的抗凝血在37℃、5%CO2条件下共培养6 h,用流式细胞仪定量分析HBeAg刺激后CD14+细胞表面TLR2的表达水平. 结果 HBeAg阳性CHB患者外周血CD14+细胞TLR2的表达率为47.57%±21.40%,明显低于健康对照组(76.51%±7.46%)和HBeAg阴性组(HBV DNA阳性组为73.2%±14.2%、HBV DNA阴性组为75.2%±11.3%,P<0.05);TLR2的表达水平在HBeAg阴性的HBV DNA阳性或阴性CHB患者组与健康对照组的差异无统计学意义.HBeAg阳性CHB患者外周血单核细胞经Pam3CSK4刺激后,TLR2的表达率明显升高,大部分患者TLR2的表达水平能够达到健康人或HBeAg阴性患者未经配体刺激的水平.健康人或HBeAg阴性CHB患者的外周血与HBeAg共孵育6 h后,CD14+细胞表面TLR2表达水平较HBeAg刺激前明显下降(P<0.05).结论 HBeAg阳性的CHB患者外周血CD14+细胞TLR2的表达水平明显低于HBeAg阴性患者和健康人,HBeAg能够抑制CD14+细胞TLR2的表达,提示HBeAg能够引起CHB患者外周血单核细胞表面TLR2表达的下调,这可能是HBV持续感染的重要因素之一;CHB患者HBVDNA水平可能不影响单核细胞表面TLR2的表达;Pam3CSK4可以明显提高HBeAg阳性CHB患者单核细胞表面TLR2的表达水平,TLR2配体有可能成为CHB免疫治疗的一个潜在靶位.
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慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2和4的变化
目的 探讨慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的变化情况及其意义.方法 用流式细胞仪检测正常对照、慢性乙型肝炎患者和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清TNF α的水平.Student-t检验比较3组间TLR2、TLR4和TNF α表达的差异; 3组病例TLR2、TLR4的表达水平间及它们与血清TNF α水平间的相关性分析采用线性相关分析.结果 正常对照组(30例)、慢性乙型肝炎组(31例)和慢性重型乙型肝炎组(30例)外周血单核细胞TLR2和TLR4的平均免疫荧光强度(MFI)分别为21.5±2.7、39.0±4.1、47.7±21.4和2.3±1.1、3.7±2.3、6.9±4.1;外周血清TNF α(ng/L)水平分别为53.8±38.1、164.3±89.9、359.8±140.0,自正常对照组到慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR2、TLR4表达强度和外周血清TNF α水平均依次显著升高;经线性相关分析研究发现,外周血单核细胞TLR2、TLR4表达水平和血清TNF α表达水平间均呈现显著的正相关性.结论 TLR2和TLR4可能与慢性乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发病有关.
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暴发性肝衰竭中Toll样受体2表达的实验研究
目的分析D-氨基半乳糖(D-Gal)/脂多糖(LPS)诱导的暴发性肝衰竭模型中肝组织Toll样受体2(TLR2)的表达变化及与细胞因子白细胞介素-l8(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)表达的关系,探讨TLR2在启动炎性应答而致肝损伤中的作用.方法BALB/C小鼠腹内联合注射D-Gal 900 mg/kg与LPS l0 μg/kg后观察其存活率,并检测不同时间点血清转氨酶和血浆IL-1 8、TNF-α和IFN-Y含量.用半定量逆转录-聚合酶链反应和Tanon Gis2.0软件分析各时间点肝组织中TLR2 mRNA表达,并与血浆IL-18、TNF-d、IFN-Y含量进行相关分析;免疫组织化学观察肝组织TLR2蛋白的表达.结果给药后4 h,血清转氨酶明显升高(与0 h比较,P＜0.05);10 h小鼠死亡率达80%.血浆IL-18、TNF-α和IFN-γ含量逐步上升,IL-18在1 h即显著升高,之后持续高表达;TNF-α在2 h、5 h有两个分泌高峰,IFN-γ在2 h前增加不明显(F=2.57,P=0.13),但3 h及以后则显著升高(与0 h比较,P＜0.01).正常小鼠肝组织少量表达TLR2 mRNA,给药后1h表达即显著增强(与0h比较,P＜0.05);免疫组织化学也显示TLR2蛋白有类似的变化,尤其肝窦内皮细胞、库普弗细胞表达更为显著;且部分肝细胞凋亡、坏死后,残存肝组织仍有较高TLR2表达.相关分析表明,肝组织TLR2 mRNA表达与血浆IL-18、TNF-α、IFN-γ含量呈正相关(r=0.36,P=0.02;r=0.48,P=0.003;r=0.72,P＜0.001).结论TLR2可能通过启动下游的炎性应答基因表达及细胞因子释放而参与了D-Gal/LPS诱导的暴发性肝衰竭.因此,调控TLR2表达可能是感染性疾病防治的一种新策略.
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脂氧素A4受体激动剂及白介素-1β在Toll样受体2/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路对哮喘小鼠气道炎症的调控作用
目的:研究脂氧素(LX) A4受体激动剂及白介素-1β抗体在Toll样受体2(TLR2)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路中对哮喘小鼠气道炎症的调控机制.方法:以卵清蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,60只二级雄性Balb/c小鼠随机分为6组,分别给予脂氧素A4受体激动剂(BML-111)、白介素(IL)-1β抗体、BML-111载体、兔IgG治疗.末次激发后留取血清和肺组织标本,光镜下观察支气管周围炎症浸润情况;测定血清IL-1β、IL-4、IL-8、干扰素(IFN)-γ水平;检测肺组织TLR2、MyD88、NF-κB的表达.结果:OVA致敏的小鼠血清IL-1β、IL-4、IL-8水平升高,IFN-γ浓度降低;OVA致敏导致明显的支气管周围炎症细胞浸润,使支气管炎症分级指数有明显提高;BML-111或IL-1β抗体治疗均能明显阻止上述OVA介导的炎症变化(x2 =28.14,P＜0.01).OVA致敏使肺组织TLR2、MyD88表达及NF-κB活性升高,BML-111及抗IL-1β抗体可抑制由OVA引发的上述表达变化.结论:OVA可诱导产生气道炎症,这一作用可能受TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控,IL-1β在这一过程中起了至关重要的作用.BML-111和IL-1β抗体可能通过对TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的负调控而实现抑制OVA诱发的呼吸道炎症的作用.
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小檗碱对Toll样受体2信号通路和炎症因子的影响
目的:研究小檗碱(Ber)对Toll样受体2(TLR2)信号通路和炎症因子的影响.方法:100 mol·L~(-)1Ber作用于细茵脂蛋白(BLP)刺激的RAW264.7细胞,RT-PCR法检测TLR2表达;Western-blot法检测抗核因子κB抑制性蛋白(IκB)磷酸化水平;ELISA法检测炎症因子分泌情况.结果:作用6、12 h时,Bet可促进TLR2的表达、IκB的激活和促炎因子IFNγ、TNFγ的分泌:作用24、48h时,Ber可抑制TLR2的表达、IκB的激活和促炎因子IFNγ、TNFα的分泌;且Ber可能具有促进抗炎因子IL-10和IL-13分泌的作用.结论:Ber能够双向调控TLR2信号通路的激活和促进抗炎因子的分泌,从而起到抗茵消炎的作用.
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氧糖剥夺损伤诱导星形胶质细胞分泌IL-10的机制初探
目的:探讨氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤诱导星形胶质细胞分泌白细胞介素-10(intedeukin-10,IL-10)的可能机制.方法:培养并鉴定原代星形胶质细胞,体外建立OGD损伤模型,分别利用siTR2(Toll-like receptor-2,TLR2)腺病毒、NF-κB(NF-kappa B)抑制剂PDTC干预,qRT-PCR和ELISA分别检测损伤细胞IL-10的表达水平,Western blot检测损伤细胞TLR2、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平.免疫荧光检测OGD损伤细胞中NF-κB p65的亚细胞定位.结果:免疫荧光观察发现分离培养的原代星形胶质细胞纯度可达90％以上.经体外OGD损伤处理后,OGD损伤组TLR2、p-NF-κB p65的蛋白表达水平[(1.16±0.10),(1.01±0.08)]与IL-10的mRNA及蛋白表达水平[(0.00±0.00),(513.01±34.47)]较正常对照组[(0.49±0.08),(0.23±0.09),(0.00±0.00),(381.89±22.26)]均明显升高(P=0.001,P=0.000,P=0.026,P=0.005),且p65蛋白在细胞核内表达增加.siTLR2腺病毒感染组OGD损伤的星形胶质细胞中TLR2、p-NF-κB p65的蛋白表达水平[(0.36±0.13),(0.38±0.10)]与IL-10的mRNA及蛋白表达水平[(0.00±0.00),(567.05±50.57)]较对照组[(1.33±0.42),(0.92±0.28),(0.00±0.00),(703.60±12.97)]明显降低(P=0.019,P=0.034,P=0.004,P=0.011).与OGD处理组[(1.24±0.23),(0.00±0.00),(769.23±23.37)]相比,PDTC干预可有效降低p-NF-κB p65蛋白(0.26±0.07)与IL-10的mRNA及蛋白表达水平[(0.00±0.00),(598.92±42.73)](P=-0.002,P=0.000,P=-0.046),但并未影响TLR2的表达水平变化[(1.11±0.24),(1.09±0.94)](舟0.949).结论:OGD损伤可激活TLR2/NF-κB信号通路诱导星形胶质细胞分泌IL-10.
