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银屑病患者外周血单个核细胞Toll样受体2基因表达和血清白介素-8水平变化及相关性研究
银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病,与遗传和环境因素有关,其病因和发病机制尚未完全明确,目前多认为是一种T细胞介导的免疫异常性疾病.近年来,Toll样受体(Toll like receptor,TLR)在感染性疾病及银屑病中的作用引起国内外有关专家的广泛关注[1];已有文献认为白介素-8(IL-8)可促进银屑病的炎症浸润,介导皮损的发生和发展[2].对于银屑病患者TLR2基因的表达,国外多集中于对角质形成细胞(KC)的研究,尚未见银屑病患者外周血单个核细胞TLR2基因表达,以及关于TLR2基因表达与IL-8水平关系的相关报道.为了进一步探讨银屑病的病因和发病机制,笔者对银屑病患者外周血单个核细胞TLR2mRNA表达、血清IL-8水平变化以及二者的相关性进行研究.
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氨基酮戊酸光动力疗法对小鼠RAW264.7巨噬细胞株Toll样受体2信号转导通路的影响
目的 探讨氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对小鼠RAW264.7细胞Toll样受体(TLR)2表达、下游信号转导通路分子和细胞因子分泌的影响.方法 用灭活痤疮丙酸杆菌诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞株产生炎症模型,实验分为空白组和模型组,予不同浓度ALA孵育细胞,并予16 J/cm2红光照射.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)浓度.Western印迹检测TLR2、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化p38、JNK、ERK、IκBα蛋白表达.采用SPSS 18.0统计软件,各组间计量资料比较采用单因素方差分析或Tambane's T2检验.结果 模型组TNF-α、IL-6的浓度分别为(0.34±0.02) ng/L(P＜ 0.01)、(0.21±0.03) ng/L(P＜ 0.05),均高于空白组.与0.03 mmol/L ALA组比较,0.12 mmol/L ALA组TNF-α浓度为(0.03±0.01) ng/L,差异无统计学意义(P＞0.05),IL-6浓度为(0.07±0.01) ng/L,差异有统计学意义(F=114.813,P＜ 0.01).模型组TLR2、MyD88、p-p38、p-IκBα、p-JNK、p-ERK蛋白表达水平(A值)分别为0.90±0.14(P＜ 0.01)、1.11±0.13(P＜ 0.01)、0.84±0.04(P＜ 0.01)、1.45±0.20(P＜ 0.01)、2.56±0.06(P＜ 0.01)、3.70±0.40(P＜ 0.01),均高于空白组,差异有统计学意义,并随着ALA浓度升高而降低,呈剂量依赖性.结论 光动力治疗可减少小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞TLR2的表达,可能通过细胞信号转导通路,引起细胞因子分泌减少发挥作用.
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Toll样受体2和4在抗孢子丝菌早期免疫阶段小鼠皮肤中的表达
目的 探讨小鼠皮肤Toll样受体(TLR)2和TLR4在抗孢子丝菌早期免疫阶段的表达.方法 实 时荧光定量PCR检测BALB/c小鼠皮肤早期免疫阶段的TLR2和TLR4 mRNA表达水平,同时通过免疫组化检测两者蛋白表达水平.结果 孢子丝菌分生孢子接种小鼠皮肤后,TLR2 mRNA转录水平在6h后逐渐升高至对照组的18.8倍,24 h达高峰,为对照组的34倍;TLR4 mRNA转录水平在6h内达高峰,为对照组的56.7倍,此后逐渐下降.免疫组化结果显示,孢子丝菌处理组小鼠皮肤角质形成细胞及巨噬细胞均可表达TLR2和TLR4蛋白,对照组不表达.血清中白细胞介素12及肿瘤坏死因子α在实验组和对照组的表达差异无统计学意义.结论 TLR2和TLR4参与了小鼠皮肤角质形成细胞和巨噬细胞对孢子丝菌的识别,有助于免疫防御作用.
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孢子丝菌病患者皮损中Toll样受体2、4及髓样分化因子88的表达
目的 通过观察孢子丝菌病患者皮损中Toll样受体2、4(TLR2、TLR4)以及髓样分化因子88(MyD88)的表达情况,探讨其在孢子丝菌病免疫识别及免疫介导中的作用.方法 选择孢子丝菌病患者19例及健康人对照12例,应用免疫组化法分别检测患者组皮损及对照组皮肤组织中TLR4及MyD88的表达情况,同时应用实时荧光定量PCR技术检测TLR2及MyD88 mRNA的表达情况.所有结果数据以x±s表示,采用SPSS17.0统计软件进行数据分析,两组间比较采用独立样本t检验,P＜0.05认为差异有统计学意义.结果 免疫组化分析:孢子丝菌病患者皮损中TLR4、MyD88的表达部位主要是除角质层外的表皮全层和真皮及皮下组织中的浆细胞和淋巴细胞.对照组皮肤几乎不表达TLR4,MyD88于真皮及皮下组织呈弱表达.孢子丝菌病组TLR4表达水平(63.767±3.829)高于对照组(5.167±3.246),差异有统计学意义(f=4.82,P＜0.05);MyD88表达水平(57.236±4.744)亦高于对照组(10.588±1.640),差异有统计学意义(f=3.30,P＜ 0.05).实时荧光定量PCR分析:孢子丝菌病患者皮损TLR2 mRNA和MyD88 mRNA的相对表达水平分别为1.974±1.452和2.028±2.061,均显著高于对照组(分别为1.430±1.073和0.688±0.422),均P＜0.05.结论 孢子丝菌病发病可能与真菌通过Toll样受体途径作用于机体免疫系统有关.
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Toll样受体2、4和9在皮肤结核皮损中的表达
目的 研究Toll样受体2、4和9(TLR-2、TLR-4、TLR-9)在寻常狼疮和疣状皮肤结核皮损中的表达,探讨其在皮肤结核发病中的作用.方法 经临床与病理确诊的皮肤结核(包括寻常狼疮和疣状皮肤结核)患者皮损标本18份,斑块状银屑病皮损15份为阳性对照,色素痣边缘正常皮肤10份为阴性对照.用免疫组化法观察TLR-2、TLR-4、TLR-9的表达情况.采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,组间比较行t检验.结果 TLR-2在正常皮肤表达于除基底层外的表皮全层,而在皮肤结核和银屑病皮损表达于表皮的中上层,3组的表达强度均为高表达(A值分别为0.28±0.03、0.25±0.04和0.25±0.05),3组差异无统计学意义(P＞0.05).TLR-4在正常皮肤和银屑病呈低或无表达(A值分别为0.07±0.09和0.02±0.05),而皮肤结核(0.16±0.07)呈低表达,其表达强度高于正常皮肤(t=2.58,P＜0.05)和银屑病皮损(t=6.24,P＜ 0.01).TLR-9在正常皮肤和皮肤结核表达于表皮全层、附属器及血管壁,而皮肤结核的表达强度(A值为0.25±0.05)高于正常皮肤(0.19±0.05),两组比较,t=2.88,P＜ 0.05.结论 TLR-2、TLR-4和TLR-9在皮肤结核皮损中均存在表达,其中TLR-4和TLR-9的表达高于正常皮肤,提示其在皮肤结核的免疫应答中可能起一定的作用.
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肽聚糖对正常人表皮角质形成细胞分泌趋化因子的影响及Toll样受体2的作用
目的 研究金黄色葡萄球菌肽聚糖对正常人表皮角质形成细胞(NHEK)分泌IL-8、调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)以及巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)的影响以及Toll样受体2在其中的作用.方法 分别用不同浓度金黄色葡萄球菌肽聚糖(3、10、30、100 mg/L)处理NHEK24 h,以及100 mg/L肽聚糖处理NHEK 3、6、12、36 h后,采用ELISA检测细胞培养上清液中IL-8、RANTES以及MDC的水平.预先加用功能性Toll样受体2单克隆抗体处理培养细胞,再以100 mg/L肽聚糖处理NHEK 12 h,检测上述趋化因子的浓度.结果 NHEK可以自发地分泌IL-8和RANTES.3、10、30、100 mg/L的肽聚糖可诱导NHEK分泌IL-8(分别为209.96±10.31、250.28±9.52、285.11±10.28、359.40±6.93 ng/L),且较未处理组(135.41±14.37 ng/L)明显升高(P<0.05);10、30、100 mg/L的肽聚糖可抑制NHEK分泌RANTES(分别为110.72±8.51、90.50±2.45、49.89±13.74 ng/L),且较未处理组(149.94±18.71 ng/L)明显降低(P<0.05).Toll样受体2单克隆抗体可以明显抑制肽聚糖诱导分泌IL-8,但对其分泌RANTES无明显影响.未检测到NHEK自发性产生或肽聚糖刺激作用下产生MDC.结论 肽聚糖可能通过激活Toll样受体2途径诱导NHEK增加分泌IL-8.肽聚糖能够抑制NHEK产生RANTES.
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TLR2和TLR9在生殖器疱疹患者外周血单一核细胞的表达
目的 探讨Toll样受体TLR2和TLR9在生殖器疱疹中的作用.方法 流式细胞仪检测生殖器疱疹患者单一核细胞上TLR2和TLR9表达水平,同时采用ELISA法检测其血清IL-6、IL-10和TNF-α水平,并探讨其相关性.结果 ①生殖器疱疹患者PBMC上TLR2和TLR9表达水平明显高于正常成人(P<0.05).②生殖器疱疹患者血清IL-6和IL-10水平明显升高,TNF-α水平明显降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).③生殖器疱疹患者TLR2和TLR9表达水平与其血清IL-6,IL-10水平存在线性相关关系(P<0.01).结论 TLR2和TLR9介导生殖器疱疹血清IL-6、IL-10的产生和释放.
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抗角蛋白16抗体对角质形成细胞外皮蛋白、Toll样受体2和4的调节
目的 研究抗角蛋白16抗体对角质形成细胞分化、Toll样受体2和4的调节.方法 将抗角蛋白16抗体加入培养的角质形成细胞中,以同种型抗体作对照,研究外皮蛋白和Toll样受体2和4mRNA表达.结果 抗角蛋白16抗体作用角质形成细胞6 h、24 h、36 h后,Toll样受体2mRNA表达分别上调1.73、1.60、2.52倍;12 h和36 h后Toll样受体4 mRNA表达分别上调3.62和2.21倍;12 h、36 h后外皮蛋白mRNA表达分别上调2.33倍和2.0倍.结论 抗角蛋白16抗体可能是联系Toll样受体2和4与角质形成细胞分化的重要环节.
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Toll样受体2和4在银屑病皮损中的表达
目的 研究Toll样受体(TLR)2和4在银屑病皮损中的表达,探讨其与银屑病发病的关系.方法 选用16例滴状银屑病、13例斑块状银屑病患者及10例正常人皮肤的石蜡切片,用免疫组化的方法研究TLR2和TLR4的表达.结果 10例正常人皮肤的基底层均有较弱的TLR2表达而无TLR4表达,真皮血管内皮细胞未见TLR2及TLR4表达.所有16例滴状银屑病、13例斑块状银屑病皮损的基底细胞层均可见明显的TLR2表达,棘层也有弱表达;TLR4则呈现表皮全层的弥漫性强表达.银屑病真皮浅层血管内皮细胞可见明显的TLR2及TLR4表达.结论 TLR2、TLR4在银屑病皮损均有表达,TLR4的表达更高.提示感染相关免疫与银屑病发病关系密切.
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多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR2、TLR4表达的影响
目的:观察Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(TLR4)在多柔比星(doxorubicin,DOX) 损伤乳鼠心肌细胞中的表达,探讨多柔比星在心肌损伤中的可能发病机制.方法:体外培养乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞随机分为2组,对照组将心肌细胞悬液换用无血清培养基继续培养,未加任何药物;多柔比星组在培养液中加入多柔比星1 mg/L.作用6 h后免疫组织化学法检测心肌细胞TLR2、TLR4蛋白表达;分别作用2,6 h后用蛋白质印迹法对TLR2、TLR4在心肌细胞的表达水平进行半定量分析.结果:多柔比星组心肌细胞TLR2、TLR4的表达较对照组明显增加(P<0.01).结论:TLR2、TLR4作为模式识别受体可能介导了多柔比星心肌细胞损伤的固有免疫反应,是多柔比星心肌细胞损伤的机制之一.
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卵巢癌患者外周血单个核细胞Toll样受体2的表达及其诱导的IL-10表达
目的:观察Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)在卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcells,PBMC)中的表达及其诱导IL-10的表达水平,初步探索TLR2在卵巢癌发生发展中的作用机制.方法:收集20例卵巢癌患者、20例妇科良性疾病患者及20例同期健康体检女性EDTA抗凝外周全血,采用荧光定量PCR技术检测3组PBMC中TLR2的表达水平,并比较3组表达差异情况.TLR1、TLR2和TLR6相应配体刺激PBMC,细胞中细胞因子IL-10表达水平采用荧光定量PCR技术进行检测;流式细胞技术(FACS)检测各组IL-10分泌水平.结果:各组PBMC中TLR2均有表达;卵巢癌组PBMC中TLR2表达量显著高于良性疾病组和健康对照组(P＜0.05),良性疾病组TLR2表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的配体HKLM刺激24h后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达明显增强,分别为良性疾病组和健康对照组的2.25、2.33倍,妇科良性疾病组IL-10 mRNA表达水平与健康对照组间无显著差异;TLR6配体FSL-1刺激后,卵巢癌组IL-10mRNA表达水平分别为良性疾病组和健康对照组的1.95、2.16倍,差异具有统计学意义(P＜0.05),而良性疾病组与健康对照组间无显著差异.FACS结果显示各组PBMC经TLR1的配体Pam3CSK4刺激24 h后,卵巢癌组、良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值(M)分别为46.70、61.53、31.11 pg/ml,差异无统计学意义;经TLR2配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10分泌水平(M=150.46 pg/ml)显著高于良性疾病组(M=38.86 pg/ml)及健康对照组(M=44.93 pg/ml),差异有统计学意义(P＜0.05),良性疾病组与健康对照组间无显著性改变;TLR6配体FSL-1刺激24 h后,卵巢癌组、良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值分别为20.20、31.12、35.48 pg/ml,3组间无显著差异.结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2表达水平显著增高,经其介导的细胞因子IL-10表达水平的改变可能与卵巢癌的免疫抑制相关,在卵巢癌的肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用.
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血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病大鼠大血管Toll样受体2表达的影响
目的:研究选择性血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(缬纱坦)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠大血管Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响.方法:将31只SD大鼠随机分成正常对照组(NC组)和DM造模组,造模组给予STZ 60 mg/(kg·次)腹腔注射,再随机分为DM组和DM+缬沙坦干预组(DV组),DV组给予缬沙坦20 mg/(kg·d)灌胃.于12周时乌拉坦麻醉,取胸主动脉,用RT-PCR方法检测STZ诱导的DM大鼠大血管组织中TLR2 mRNA表达的变化,Western blot检测大血管中TLR2蛋白表达的变化.结果:与NC组相比,DM组和DV组大鼠的血糖明显升高(P＜0.01).而DM和DV组间血糖差异无显著性(P＞0.05);DM大鼠大血管组织中TLR2 mRNA和蛋白的表达明显高于NC组(均P＜0.01),而DV组大血管组织中TLR2 mRNA和蛋白的表达明显低于DM组(P＜0.01),差异均具有显著性.结论:DM大鼠大血管组织中存在TLR2表达的增加,缬纱坦可能通过降低血管组织TLR2表达而对糖尿病大血管炎性改变起防治作用.
关键词： 糖尿病 大鼠 Toll样受体2 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 -
胸腺肽α1对THP-1细胞Toll样受体2和MyD88以及TNF-α表达的影响
目的:观察人THP-1细胞与胸腺肽α1(Tα1)孵育后,予细菌脂蛋白(BLP)刺激后,Toll样受体2(TLR2)、髓系分化因子88(MyD88)蛋白的表达及细胞因子TNF-α的变化.方法:实验采用人THP-1细胞系进行细胞培养,分为4组:对照组为THP-1细胞不加任何刺激;BLP组以1 000 ng/ml BLP刺激2 h;Tα1组为THP-1细胞加1 000 ng/ml Tα1孵育24 h,不加BLP刺激;Tα1+BLP组为THP-1细胞加1 000 ng/ml Tα1孵育24 h后再加1 000 ng/ml BLP刺激2 h.以Western blot分析TLR2、MyD88蛋白含量.ELISA法测定TNF-α.结果:与对照组相比,BLP组和Tα1+BLP组的TNF-α均显著增加,而Tα1组无显著改变;在TLR2和MyD88的表达上,Tα1组和Tα1+BLP组均高于对照组和BLP组.结论:胸腺肽α1可增加THP-1细胞TLR2、MyD88蛋白的表达,其对免疫细胞的影响与BLP诱发炎症反应的途径不完全一致.
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龈下菌斑诱导的耐受对人巨噬细胞分泌TNF-α和IL-10的影响及机制
目的:观察龈下菌斑诱导的耐受对人巨噬细胞分泌炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)和抗炎因子白介素-10(inter leukin 10,IL-10)的影响,以及与Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2、TLR4的关系.方法:采集中、重度慢性牙周炎患者及健康人的龈下菌斑,分别重复刺激,诱导人巨噬细胞产生耐受.采用ELISA技术检测TNF-α和IL-10表达水平的变化,采用流式细胞技术检测TLR2、TLR4表达水平的改变.结果:2种菌斑第1次刺激巨噬细胞后,TNF-α和IL-10水平均较刺激前明显增高(P＜0.05).2种菌斑重复刺激后,TNF-α分泌水平均较第1次刺激后明显降低(P＜0.05),IL-10水平均与第1次刺激后无明显差别(P＞0.05).尽管2种菌斑第1次刺激后,TLR2、TLR4表达水平均较刺激前明显升高(P＜ 0.05),2种菌斑重复刺激后,TLR2、TLR4表达水平均与第1次刺激后无明显差别(P＞0.05).结论:龈下菌斑诱导的耐受能够抑制TNF-α的分泌,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应,但这种改变与TLR2、TLR4表达水平无关.
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Toll样受体2/4在人牙龈上皮细胞的表达研究
目的:探讨Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)的表达情况,以及上述受体在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激下表达水平的改变.方法:采用逆转录PCR技术检测TLR2、TLR4在HGECs的基因表达,采用real-time PCR技术和流式细胞技术检测1μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)、LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia col,E.coli)LPS刺激后,该细胞TLR2、TLR4表达水平的改变.结果:来自不同个体的HGECs均表达TLR2,TLR4 mRNA.1μg/ml P.gingivalis LPS刺激后,TLR2基因和蛋白表达水平均明显增高(P＜0.05)；1 μg/ml E.coli LPS刺激后,TLR4基因和蛋白表达水平明显增高(P＜0.05).结论:TLR2、TLR4在HGECs存在稳定表达,并能被LPS的刺激活化,提示上述两种受体可能参与了牙周组织的炎症和免疫反应.
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辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒肺炎的保护作用
目的 探讨辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒(MCMV)肺炎的保护作用.方法 30只雄性小鼠随机均分为三组:MCMV组和辛伐他汀组给予腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg和MCMV悬液0.8 ml;辛伐他汀组加用辛伐他汀50 mg/kg灌胃,连续7d;对照组及MCMV组分别予以同体积的生理盐水灌胃.检测肺组织病理变化、Toll样受体2(TLR2)蛋白表达、IFN-γ和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量以及MCMV DNA含量.结果 对照组肺组织肺泡结构正常;MCMV组肺泡间质水肿,内有大量炎性细胞浸润,部分肺泡腔内有蛋白渗出,符合MCMV间质性肺炎的表现;辛伐他汀组间质性炎症浸润较MCMV组减轻.与对照组比较,MCMV组TLR2蛋白表达、IFN-γ和MCP-1含量以及MCMV DNA含量增加(P＜0.05);与MCMV组比较,辛伐他汀组TLR2蛋白表达、IFN-γ和MCP-1含量以及MCMV DNA含量下降(P＜0.05).结论 辛伐他汀对MCMV肺炎有保护作用,可能通过下调TLR2的表达、减少IFN-γ和MCP-1分泌以及抑制MCMV DNA的复制来发挥作用.
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MicroRNA-19b对强毒力结核分枝杆菌诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制
目的:探讨微小RNA-19b(miR-19b)对强毒力结核分枝杆菌(H37 Rv)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响.方法:以强毒力H37Rv感染miR-19b模拟物或其抑制剂转染的大鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率;RT-PCR检测Toll样受体蛋白(TLRs)的mRNA或miR-19b水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bcl-2及TLRs蛋白的表达,应用Gel-pr04.0软件分析Western blots条带;所有数据采用独立样本t检验.结果:大鼠肺泡巨噬细胞经H37Rv感染后,miR-19b抑制剂组细胞总凋亡率[12 h为(13.55±0.45)％,24 h为(17.16±0.42)％]显著高于对照组[12 h为(9.42±0.47)％,24h为(12.29±0.37)％];转染24 h后,细胞Cleaved caspase 3相对表达(0.59±0.07)显著高于对照组(0.45±0.05),Bcl-2相对表达(0.34±0.03)显著低于对照组(0.54±0.05),且细胞Toll样受体2(TLR2)相对水平(mRNA为0.283±0.03,蛋白为0.25±0.02)显著高于对照组(mRNA为0.20±0.02,蛋白为0.18±0.01),各组间TLR4、TLR7、TLR9表达无差异;以上变化在miR-19b模拟物组中则相反.此外,高表达的TLR2经其抗体中和后,miR-19b沉默使H37Rv感染大鼠肺泡巨噬细胞的促凋亡作用受到抑制.结论:大鼠肺泡巨噬细胞中,miR-19b沉默能够通过上调TLR2水平促进强毒力结核分枝杆菌诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡.
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人Toll样受体2细胞外区基因重组腺病毒穿梭载体的构建及鉴定
目的:克隆人Toll样受体2(TLR2)细胞外区基因,并构建含有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-TLR2. 方法:应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增TLR2细胞外区基因,克隆入pUCm-T载体并转化大肠埃希菌感受态DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序分析后,用KpnⅠ和HindⅢ双酶切,将目的片段定向克隆至经相同处理的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,双酶切鉴定并测序验证. 结果:RT-PCR扩增得到约1 000bp的目的基因片段,TA克隆后测序鉴定与GenBank中的序列一致,经酶切连接成功地将目的基因插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中. 结论:成功克隆了人TLR2细胞外区基因,并构建了含目的基因的重组腺病毒穿梭载体.
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Toll样受体2和4在老年慢性左心力衰竭中的表达
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)和T0ll样受体4(TLR4)在老年慢性左心力衰竭患者外周血单核细胞表面的表达.方法 根据NYHA心功能分级和左室射血分数(LVEF)将健康对照者和慢性左心力衰竭患者分成对照组、心功能Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级组.采用流式细胞仪检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的表达.结果 左心力衰竭患者不同心功能组中TLR2和TLR4的表达均显著高于对照组(均P＜0.05),且随着心功能分级的升高而明显上升.LVEF随着心功能分级的升高而逐渐下降,且与对照组比较,均P＜0.05.结论 TLR2和TLR4可能作为一种危险因素参与老年慢性左心力衰竭的发生发展.
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桂附地黄丸对小鼠肝组织TLR2与C8α基因表达的影响
目的:桂附地黄丸是治疗肾气虚、肾阳不足的经典名方,全方温而不燥,补而不腻,因其具有良好的改善肾脏功能、增强机体免疫力、有效预防肿瘤等作用,在国内得到极为广泛的应用.为研究桂附地黄丸增强机体免疫力的分子药效学机制.方法:选取12只清洁级昆明鼠为研究对象,将其随机分为实验组与对照组2组,每组6只,实验组给予每日灌服0.1g/mL桂附地黄丸,2次/d,对照组给予同体积生理盐水作为对照,连续灌胃2周.采用Trizol抽提法提取小鼠肝脏组织总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测2组小鼠肝脏组织中Toll样受体2(TLR2)、补体C8αmRNA表达水平.结果:实验组肝组织中TLR2mRNA表达水平为2.03±0.24,明显高于对照组肝组织中TLR2mRNA表达水平0.97±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05),实验组肝组织中C8αmRNA表达水平为2.19±0.18,明显高于对照组肝组织中C8αmRNA表达水平0.96±0.21(P＜0.05).结论:本研究推测桂附地黄丸发挥增强机体免疫力作用的分子机制,可能为上调TLR2、C8α基因表达而实现的.
