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桃核承气汤对糖尿病大鼠大血管纤维病变Toll样受体通路作用研究
[目的]通过免疫印记法检测实验性Ⅱ型糖尿病大鼠下肢股血管中Toll样受体-2(TLR-2)、Toll样受体-4(TLR-4)表达,并通过观察桃核承气汤对相关指标影响,揭示糖尿病大血管纤维化病变的发病机制,及中药桃核承气汤在糖尿病血管纤维化中的干预作用.[方法]雄性SD大鼠170只,随机分为5组:A-正常对照组(n=30),余140只造糖尿病模型模,造模成功123只,随机分为4组:B-模型对照组(n=31)、C-中药高剂量治疗组(n=30)、D-中药中剂量治疗组(n=31)、E-中药低剂量治疗组(n=31);A组不予药物干预,B组每日给予0.9%生理盐水10 mL/kg灌胃,C组每日给予桃核承气汤1.8g/kg,D组每日给予桃核承气汤0.9g/kg,E组每日给予桃核承气汤0.45g/kg.药物干预第1周、12周、20周,按计划处死大鼠,各组分别取材,保存标本,免疫印记法检测TLR-2、TLR-4沉积部位及表达情况.[结果]TLR-2、TLR-4在糖尿病大鼠股动脉中均显著表达,中药桃核承气汤干预可有效降低TLR-2及TLR-4的表达.[结论]糖尿病大血管病变可能与Toll样受体通路有关,中药组方桃核承气汤对糖尿病大血管病变有明显改善作用,可减缓纤维化进程,其干预作用于用药剂量和用药时间相关.
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Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型中的动态表达
目的:通过观察大鼠心肌组织缺血/再灌注(I/R)急性期Tol样受体2(TLR2)和4(TLR4) mRNA及蛋白质的表达,探讨TLR2和TLR4在心肌缺血/再灌注损伤中的作用.方法:雄性Wistar大鼠随机分为缺血/再灌注组(I/R组)和假手术组(sham组),建立大鼠心肌缺血/再灌注模型,按不同的再灌注时间(1、2、4、6、12、24h和7 d)处死动物(n=42).光镜下观察心肌组织形态改变.实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)定量心肌TLR2及TLR4 mRNA水平.逆转录聚合酶链式反应(rt-PCR)测定心肌白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的mRNA水平.结果:①随着再灌注时间的延长,心肌梗死面积逐渐增大,在再灌注4h时达大值,再灌注4h、6h、12 h、24h,再灌注7d已发生心室重塑.②在再灌注早期,sham组心肌组织形态未见明显改变,I/R组心肌结构有不同程度损伤,在复灌7d时可见心室重塑,左室壁厚度明显变薄,大量成纤维细胞替代原有的心肌细胞.③sham组和I/R组TLR2、TLR4、MCP-1和IL6 mRNA水平均出现不同程度上调,其中TLR2和TLR4均在再灌注4h时达高峰,随后逐渐下降,至再灌注7d时TLR4水平再次升高.IL-6在6h达到高峰后开始下降,到24h时基本降至sham组水平,再灌注7d时再次有升高趋势.MCP-1在缺血/再灌注后一直保持与sham组相当水平,在再灌注7d时才有明显升高.结论:在心肌缺血/再灌注早期,心肌组织中TLR2和TLR4基因水平迅速上调,并促进下游炎症因子的产生造成心肌早期的损伤.在再灌注后期,TLR2和TLR4的再次升高使得炎症因子的表达再一次增加,从而影响心肌重塑,损伤心肌结构及功能.
关键词： 心肌缺血/再灌注损伤 Toll样受体2 Toll样受体4 -
亚低温对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺组织TLR2/MyD88信号转导通路的影响
目的：研究亚低温对脂多糖（LPS）吸入导致的急性肺损伤（ALI）大鼠Toll样受体2/髓样分化因子88（TLR2/MyD88）通路中TLR2、MyD88、核转录因子-κBp65（NF-κBp65）及相关炎性蛋白纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）表达的影响。方法将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分成对照组（n＝18）、亚低温组（n＝24）、控温组（n＝24）、非控温组（n＝24）。用气管内滴入LPS 0.5 mL/kg方法建立ALI模型，对照组滴入等量生理盐水；1 h后取颈动脉血并予以物理降温，亚低温组、控温组分别控制肛温在32～34℃、36～37℃，对照组、非控温组体温不加干预。分别于制模前、制模后1 h及干预后1、6、12 h进行血气分析；分别于干预后1、6、12 h处死大鼠，光镜下观察肺组织病理改变并进行半定量评分；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中PAI-1蛋白表达；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TLR2 mRNA、MyD88 mRNA表达；蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肺组织NF-κBp65蛋白表达。结果滴入LPS后，各组氧合指数（PaO2/FiO2）明显降低，肺组织损伤加重，肺损伤评分、BALF中PAI-1、肺组织TLR2 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κBp65蛋白表达均明显升高。给予亚低温治疗后各指标均明显改善，亚低温疗程持续6 h时效果好，持续6～12 h可能获益。与控温组比较，亚低温组PaO2/FiO2（mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）于干预后1 h、6 h明显升高（1 h：402.49±38.61比324.36±28.93，6 h：349.72±98.20比284.35±13.68，均P＜0.01）；肺损伤评分（分）于干预后1、6、12 h明显降低（1 h：6.04±0.74比7.96±0.65，6 h：9.09±0.80比13.13±1.02，12 h：10.79±1.42比13.42±0.68，均P＜0.01）；BALF中PAI-1蛋白表达（ng/L）于干预后1、6、12 h明显下降（1 h：121.36±4.62比197.74±9.42，6 h：230.53±10.76比294.06±16.60，12 h：270.48±13.20比319.40±10.24，均P＜0.01）；TLR2、MyD88的mRNA表达（2-ΔΔCt）于干预后1、6和12 h均明显下降（TLR2 mRNA表达1 h：2.18±0.26比3.04±0.39，6 h：4.09±0.29比4.90±0.35，12 h：6.02±0.43比7.10±0.54；MyD88 mRNA表达1 h：2.25±0.41比3.04±0.30，6 h：5.67±0.55比7.01±0.76，12 h：7.14±0.60比8.87±0.54，均P＜0.01）；NF-κBp65蛋白表达（A值）于干预后6 h、12 h明显下降（6 h：0.31±0.08比0.53±0.12，12 h：1.05±0.17比1.76±0.35，均P＜0.01）。控温组与非控温组干预后各指标比较差异均无统计学意义。结论亚低温可通过下调TLR2/MyD88通路中TLR2 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κBp65及相关炎性蛋白PAI-1的表达，对LPS吸入致ALI大鼠肺组织起保护性作用。
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调控Toll样受体2/核转录因子-κB信号通路对呼吸机相关性肺损伤大鼠的影响
目的：观察Toll样受体2/核转录因子-κB（TLR2/NF-κB）信号通路预处理在呼吸机相关性肺损伤（VILI）中的作用。方法将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组，每组10只。A组：经气管导管缓慢滴入10μg/kg TLR2单克隆抗体（TLR2-mAb）200μL干预后，40 mL/kg潮气量（VT）行机械通气；B组：8 mL/kg VT行机械通气；C组：滴入10μg/kg无生物学活性的TLR2-mAb作为同型抗体干预后，40 mL/kg VT行机械通气。于通气4h计算肺湿/干质量（W/D）比值，镜下观察肺组织病理学及细胞超微结构改变；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素（IL-1β、IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TLR2、NF-κB及髓样分化因子88（MyD88）的mRNA表达。结果显微镜下观察显示：A、B组肺组织无明显病理学改变，肺泡巨噬细胞、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构无明显损伤；C组可见明显肺泡腔融合，肺间隔增宽，大量炎性细胞聚集，肺泡巨噬细胞、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞胞膜破坏，胞质大量空泡化，细胞器破坏严重，细胞核固缩，核周隙明显增宽。A、B组肺W/D比值以及血清和BALF中炎症细胞因子水平均较C组明显降低〔肺W/D比值：1.151±0.026、1.128±0.048比1.403±0.062；血清IL-1β（ng/L）：37.05±5.61、34.52±4.31比51.45±8.18，IL-6（ng/L）：53.65±5.16、55.77±5.62比89.96±7.08，TNF-α（ng/L）：71.93±13.29、67.36±11.42比96.20±11.60；BALF中 IL-1β（ng/L）：56.48±6.16、54.44±7.26比99.77±8.41，IL-6（ng/L）：172.44±21.26、163.47±18.70比216.22±23.90，TNF-α（ng/L）：235.81±42.75、231.72±40.38比374.85±69.61，均P＜0.01〕，而A组与B组上述指标差异均无统计学意义（均P＞0.05）。A、B组肺组织TLR2、MyD88和NF-κB的mRNA表达均明显低于C组〔TLR2 mRNA（2-ΔΔCt）：1.021±0.287、0.938±0.196比3.862±0.871，MyD88 mRNA（2-ΔΔCt）：1.235±0.277、1.300±0.306比3.618±1.107，NF-κB mRNA（2-ΔΔCt）：0.519±0.036、1.043±0.170比20.280±9.466，P＜0.05或P＜0.01〕，而A组与B组上述因子基因表达差异均无计学意义（均P＞0.05）。结论 TLR2-mAb预处理通过阻断TLR2/NF-κB信号通路可减轻VILI模型大鼠炎症细胞因子的释放，在一定程度上减轻VILI。
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胎膜中Toll样受体2及受体4与胎膜早破的关系
目的：探讨Toll样受体2（TLR2）和TLR4在自发性胎膜早破患者胎膜中的变化情况及其意义。方法：收集河北大学附属医院妇产科足月胎膜早破确诊病例40例（PROM1组），同期收集正常妊娠足月产40例（对照1组）；＜37周胎膜早破确诊病例40例（PROM2组），同期收集正常妊娠相应月份的计划外妊娠的正常引产病例20例（对照2组）。采用免疫组织化学法检测各组胎膜中TLR2及TLR4的表达。结果：PROM组TLR2及TLR4的表达水平均略高于对照组，但差异均无统计学意义。但胎膜早破患者中，TLR2水平亚临床绒毛膜羊膜炎组（132.64±10.53）高于非绒毛羊膜膜炎组（118.32±9.42），差异有统计学意义（t=6.374，P=0.000）。结论：感染是胎膜早破的重要因素，但并非唯一因素， TLR2与胎膜早破亚临床绒毛膜羊膜炎密切相关。
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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙龈成纤维细胞炎症刺激作用的研究
目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)刺激人牙龈成纤维细胞(HGFs)分泌炎症细胞因子的作用及其机制.方法 组织块法培养HGFs,用不同浓度(1 mg/L 、10 mg/L)的P.g LPS刺激HGFs后6 h和12 h,采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β),定量real-time PCR检测Toll 样受体(TLR)2和TLR4在HGFs中的表达.结果 与非P.g LPS刺激组相比较,P.g LPS刺激HGFs 6 h和12 h后,TLR2的表达和炎症细胞因子TNF-α、IL-1β分泌显著升高,呈浓度依赖性(P＜0.05),而且随时间的延长TNF-α、IL-1β分泌明显增加(P＜0.05).TLR4在P.g LPS刺激HGFs 6 h后的表达明显升高(P＜0.05),随着P.g LPS浓度增加其表达量升高更明显,但LPS刺激细胞12 h后,TLR4的表达与对照组无明显差别(P＞0.05).结论 P.g LPS能刺激HGFs分泌炎症细胞因子,可能是早期主要通过其表面的TLR2、TLR4来介导炎症细胞因子的分泌,随后主要通过其表面的TLR2来介导炎症反应.
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老年慢性左心衰严重程度与循环激酶插入结构阈受体阳性细胞水平变化的关系
目的 研究循环激酶插入结构阈受体阳性细胞(CD34+KDR+)、Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)水平变化与老年慢性左心衰严重程度的相关性.方法 采用流式细胞仪检测慢性老年左心衰患者循环CD34+KDR+的水平、TLR2和TLR4的表达,并分析这些测定指标与不同程度老年慢性左心衰的关系.结果 老年慢性左心衰患者循环CD34+KDR+水平呈现初期明显升高晚期显著下降的双相反应.TLR2和TLR4的表达水平随着左心衰程度的加重而显著升高.随着CD34+KDR+水平明显下降,TLR2和TLR4表达水平显著上调,左心衰程度逐渐加重.结论 CD34+KDR+水平,TLR2、TLR4表达的变化与老年慢性左心衰的严重程度密切相关.
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Toll样受体2、基质金属蛋白酶9、低氧诱导因子1α与心房颤动发生和维持的关系
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)作为免疫炎症因子与心房颤动(房颤)发生和维持的关系.方法 入选125例房颤患者,其中阵发性房颤34例,持续性房颤49例,永久性房颤42例,选择窦性心律者38例作为对照组.比较各组患者血清中TLR2、MMP-9、HIF-1α的表达水平,同时测量左心房内径及射血分数.结果 TLR2表达水平在永久房颤组和持续房颤组明显高于对照组847.3(1 047.7) ng/L、757.2(1 032.5)ng/L vs 744.8(652.3) ng/L(P＜0.05)；永久房颤组TLR2高于阵发房颤组847.3(1 047.7) ng/L vs 796.6(849.1) ng/L(P＜0.05).MMP-9表达水平在永久房颤组明显高于对照组447.1(491.9)ng/L vs 308.9(200.7) ng/L(P＜0.05)；永久性房颤组和持续房颤组MMP-9高于阵发房颤组447.1(491.9) ng/L、307.7(678.0) ng/L vs 264.2(303.3) ng/L(P＜0.05).HIF-1α表达水平在永久房颤组和持续房颤组高于对照组57.2(48.8) ng/L、61.4(46.3) ng/L vs 46.7(29.6) ng/L(P＜0.05)；永久性房颤组和持续房颤组HIF-1α高于阵发房颤组57.2(48.8) ng/L、61.4(46.3) ng/Lvs 52.5(42.8) ng/L(P＜0.05).永久房颤组和持续房颤组左心房内径较对照组和阵发性房颤组增加(45.70±6.71) mm、(42.67±6.83)mmvs (38.55±4.51)mrn、(40.82±5.45) mm(P ＜0.05).而持续房颤组左心室射血分数较对照组和阵发性房颤组明显降低(49.47±7.14)％vs(54.89±6.25)％、(53.90±8.02)％(P＜0.05)；永久性房颤组左心室射血分数较持续性房颤组明显降低(45.60±8.02)％vs(49.47±7.14)％(P＜0.05).结论 TLR2、HIF-1α、MMP-9作为免疫炎症因子水平的升高可能与房颤的发生及维持有关,提示炎症参与了房颤的发生与维持.
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TLRs及其传导通路在慢性鼻窦炎鼻息肉组织中的表达及意义
目的 观察和评价分析Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)蛋白在慢性鼻窦炎鼻息肉黏膜组织中的表达,并探讨其在鼻窦炎鼻息肉发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学技术检测60例鼻窦炎鼻息肉黏膜组织中TLR2和TLR4蛋白的表达和分布,同期选取20例正常筛窦黏膜组织进行对照.按照临床分型分期标准将其分组,比较各组间TLR2和TLR4表达程度的差异.结果 ①TLR2、TLR4主要表达在鼻腔黏膜上皮细胞、固有层炎性细胞及黏膜下层腺体的胞浆和胞膜上.②慢性鼻窦炎鼻息肉各型各期均较对照组高;并且随着分型的升高,TLR2、TLR4的表达量也随之增加,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 TLR2和TLR4在鼻窦炎鼻息肉中的表达可能与鼻窦炎鼻息肉的发病机制存在着一定的相互关联,Toll样受体(TLRs)在该机制中可能扮演重要角色.
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真菌引起支气管哮喘发展和加重的免疫学机制
支气管哮喘(简称哮喘)是常见的气道慢性炎症性疾病,多种环境因素可引起哮喘恶化加重,其中真菌感染是一个很重要的因素.有很多证据显示哮喘患者存在真菌致敏,且在真菌致敏和哮喘严重度之间存在强的相关性.近年来很多研究主要从真菌对免疫细胞和上皮细胞的影响两个方面阐释了真菌引起哮喘加重的免疫学机制.此免疫学机制的阐明对于探索治疗重症哮喘的新途径有重要的意义.
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免疫抑制剂对小鼠肺泡巨噬细胞抗曲霉感染相关受体mRNA表达的影响
目的 探讨免疫抑制剂对小鼠肺泡巨噬细胞抗曲霉感染相关受体mRNA表达的影响.方法 30只昆明小鼠随机分为2组:正常对照组(6只)和免疫抑制组(24只,环磷酰胺150 mg/kg腹腔注射).免疫抑制组小鼠注射环磷酰胺后4 h、8 h、16 h及24 h,分别随机取6只进行支气管肺泡灌洗,收集肺泡巨噬细胞.正常对照组小鼠注射生理盐水24 h后处死,收集肺泡巨噬细胞.使用逆转录-聚合酶链反应检测小鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体2(TLR2)、TLR4、树突状细胞相关C型凝集素1(Dectine-1)mRNA表达变化.结果 与正常对照组比较,腹腔注射环磷酰胺4 h后,TLR2 mRNA表达即出现显著下降(P＜0.01);在腹腔注射环磷酰胺8 h后TLR4 mRNA表达出现显著下降(P＜0.01);Dectine-1 mRNA在腹腔注射环磷酰胺后无明显变化.结论 免疫抑制剂环磷酰胺能够下调肺泡巨噬细胞抗曲霉感染相关受体TRL2和TLR4 mRNA的表达,对Dectine-1 mRNA的表达未见明显影响.
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甲基强的松龙对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清Toll样受体2表达的影响及意义
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者外周血清Toll样受体2(toll like receptor-2,TLR2)在甲基强的松龙(甲强龙)治疗前后水平变化及甲强龙在AECOPD治疗中的作用机制.方法 采用酶联免疫吸附试验法对临床上AECOPD患者(84例)及健康对照组(84名)TLR2水平测定.结果 健康对照组血清TLR2水平高于AECOPD组(P＜0.05)；AECOPD未治疗组血清TLR2水平与甲强龙40 mg/qd组、q12h组、q8b组治疗后同一时间比较差异有统计学意义(P＜0.05)；各治疗组治疗第3、5、7天血清TLR2水平与治疗前比较差异有统计学意义(P值均＜0.05).结论 AECOPD患者外周血清TLR2呈低表达,并随着AECOPD的严重程度增加表达逐渐下降；甲强龙能上调TLR2表达,在甲强龙40 mg/qd组上调血清TLR2水平较另外两组高.
关键词： 甲强龙 Toll样受体2 慢性阻塞性肺疾病急性加重期 -
TLR2对曲霉感染支气管上皮细胞时Dectin-1表达的影响
目的 探讨烟曲霉感染人支气管上皮(HBE)细胞时Toll样受体2(TLR2)对树突状细胞植物血凝素-1 (Dectin-1)表达的影响.方法 建立烟曲霉感染HBE细胞模型,通过PCR、Western blot方法分别在mRNA、蛋白水平检测Dectin-1和TLR2的表达情况;沉默TLR2,复制感染模型,应用Western blot及流式细胞技术评价Dectin-1的表达变化.结果 ①烟曲霉感染后HBE细胞TLR2表达水平虽然有所升高,并在感染18h达到峰值,但与静息状态表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05).②沉默TLR2,在烟曲霉感染HBE细胞后18 h时Dectiin1的蛋白表达受到显著抑制(P＜0.05).结论 HBE细胞静息状态下能够表达TLR2,在烟曲霉感染早期,随着时间的延长其表达有逐步增高的趋势;HBE细胞启动Dectin-1的表达可能是建立在TLR2对烟曲霉早期识别的基础上,通过下游信号通路的激活来实现的.
关键词： Dectin-1 Toll样受体2 TLR2 siRNA 烟曲霉 -
盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响
目的 探讨盐酸戊乙奎醚对内毒索性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA和Toll样受体2(TLR2)mRNA表达的影响.方法 健康SD大鼠60只,雌雄不拘,体重200～220g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=12),对照组(C组)、LPS组和低、中、高剂量盐酸戊乙奎醚组(P1组～P3组).C组腹腔注射生理盐水2ml;LPS组腹腔注射LPS 8mg/kg;P1组～P3组分别腹腔注射LPS 8 mg/kg和盐酸戊乙奎醚0.3、1.0和3.0 mg/kg.给药结束后6 h时开胸,心室取血,并取肺组织,采用ELISA法测定血清TNF-α和Ib-6的浓度,RT-PCR法测定肺组织TLR4 mRNA和TLR2 mRNA 的表达水平,并观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,LPS组、P1组～P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均升高(P<0.05);与LPS组比较,P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与P1组比较,P2组和P1组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05);P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).P2组和P3组肺组织病理学损伤程度明显轻于LPS组.结论 盐酸戊乙奎醚可通过下调肺组织TLR4 mRNA和耵JR2 mRNA的表达,降低炎性反应,从而减轻大鼠内毒素性急性肺损伤.
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异丙酚对LPS诱导中性粒细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响
目的 探讨异丙酚对内毒素(LPS)诱导中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 健康志愿者6名,年龄20～35岁,各采集外周静脉血样50 ml,加入20 U/ml肝素抗凝,分离提纯中性粒细胞,制备细胞悬液,然后随机分为6组,每组6皿:对照组(C组)不给予任何药物,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养12 h;异丙酚脂质溶剂intralipid组(I组)、异丙酚组(P组)和LPS组(L组):分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)、异丙酚(终浓度为5 μg/ml)或LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育12 h;intralipid+LPS组(IL组)和异丙酚+LPS组(PL组)先分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)或异丙酚(终浓度为5 μg/ml)后,置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育20 min,然后加入LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱孵育12 h.采用流式细胞仪测定中性粒细胞膜TLR2和TLR4的表达;采用荧光定量PGR检测中性粒细胞膜TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液TNF-α和IL-8的浓度.结果 与C组比较,I组和P组TLB2和TLR4的表达、1NF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),L组和IL组TLR2和TLR4的表达上调,L组TNF-α和IL-8L-8的浓度升高,IL组IL-8浓度升高(P<0.05);与L组比较,IL组TLR2和TLR4的表达、TNF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),PL组TLR2和TLR4的表达下调,TNF-α和IL-8L-8的浓度降低(P<0.05).各组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可下调LPS诱导的中性粒细胞TLR2和TLR4的表达,从而抑制炎性反应.
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瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时TLR2 mRNA表达的影响
目的 探讨瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时Toll样受体2(TLR2) mRNA表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法分为3组(n=18):假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(Ⅰ/R组)和瑞芬太尼组(R组).Ⅰ/R组和R组采用夹闭双侧肾动脉45min恢复再灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注损伤模型.R组于缺血前15 min至再灌注30 min经尾静脉输注瑞芬太尼1.0 μg· kg-1·min-1,S组和Ⅰ/R组输注等容量生理盐水.于缺血前15 min、再灌注6和24 h时取肾组织,光镜下观察肾组织病理学结果,采用ELISA法检测肾组织TNF-α和IL-6的含量,流式细胞术双染法测定细胞凋亡率,RT-PCR法检测TLR2 mRNA的表达水平.结果 与S组比较,Ⅰ/R组和R组再灌注6和24 h时肾组织TLR2 mRNA表达上调,TNF-α和IL-6含量及细胞凋亡率升高(P＜0.01);与Ⅰ/R组比较,R组再灌注6和24 h时肾组织TLR2 mRNA表达下调,TNF-α和IL-6含量及细胞凋亡率降低(P＜0.05或0.01).R组肾组织病理学损伤较Ⅰ/R组减轻.结论 瑞芬太尼减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制与其下调TLR2表达,降低其活性,进而抑制肾组织炎性反应和细胞凋亡有关.
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右美托咪啶对老年患者术后认知功能和围术期单核细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响
目的 探讨右美托咪啶对老年患者术后认知功能和围术期单核细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 择期手术治疗的腰椎间盘突出症和腰椎骨折患者45例,年龄≥65岁,体重53～72 kg,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=15):对照组(Ⅰ组)和不同剂量右美托咪啶组(Ⅱ组和Ⅲ组).麻醉诱导结束后静脉输注右美托咪啶负荷剂量1.0μg/kg,输注时间15 min,然后以0.5μg/·kg-1·h-1(Ⅱ组)或1.0 μg·Jg-1·h-1(Ⅲ组)的速率静脉输注至术毕,Ⅰ组给予等容量生理盐水.于麻醉诱导前(T1)、手术开始1.5 h(T2)、术毕(T3)和术后24 h(T4)时取静脉血样,检测外周血单核细胞TLR2及TLR4的表达.分别于术前1d和术后7d时采用简易精神状态量表评分和韦氏成人记忆量表及智力量表评价认知功能,记录术后认知功能障碍的发生情况.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组术后认知功能障碍发生率降低,T2～T4时单核细胞TLR2和TLR4表达下调(P＜0.05)；与Ⅱ组比较,Ⅲ组术后认知功能障碍发生率降低,T～T4时单核细胞TLR2和TLR4表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪啶可预防老年患者POCD的发生,其机制与抑制单核细胞TLR2和TLR4的表达有关.
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肝移植术病人围术期中性粒细胞Toll样受体2表达与术后SIRS的关系
目的 研究肝移植术病人围术期中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)表达与术后全身炎性反应综合征(SIRS)的关系.方法 择期行肝移植术的终末期肝病病人20例,年龄33～58岁,体重52～73 kg,心功能Ⅱ或Ⅲ级,ASAⅢ或Ⅳ级.于麻醉诱导前(T1)、无肝期25 min(T2)、新肝期3 h(T3)、新肝期24 h(T4)时,中心静脉采血样,采用流式细胞仪测定中性粒细胞TLR2表达;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-8(IL-8)浓度;按术后7 d内是否发生SIRS,分为SIRS组与非SIRS组.2组TNF-α、IL-1β和IL-8浓度和TLR2表达进行Spearman相关分析.结果 术后7 d内有10例病人发生SIRS.与T1时比较,SIRS组T4时中性粒细胞TLR2表达上调,T2-4时TNF-α浓度升高,T3,4时IL-1β浓度升高,T3时IL-8浓度升高(P＜0.05或0.01);与NSIRS组比较,SIRS组T4时中性粒细胞表达上调,血清IL-1β浓度升高,T3时血清IL-8浓度升高(P＜0.05或0.01).SIRS组TNF-α浓度与中性粒细胞TLR2表达呈正相关(r=0.607,P＜0.05).结论 肝移植术后病人发生SIRS可能与新肝期24 h中性粒细胞TLR2表达上调有关.
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右美托咪定对肺叶切除术患者围术期血液单核细胞TLR2和TLR4表达的影响
目的 评价右美托咪定对肺叶切除术患者围术期血液单核细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响.方法 择期全麻下行肺叶切除术患者50例,性别不限,年龄40 ～ 64岁,BMI20～ 24 kg/m2,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级.采用随机数字表法,将其分为2组(n=25):对照组(C组)和右美托咪定组(D组).D组于麻醉诱导前经10 min静脉输注右美托咪定1.0 μg/kg,继以0.3 μg· kg-1·h-1的速率输注至术毕前30 min;C组给予等容量的生理盐水.于入室、手术开始1.5 h、术毕、术后12h及24 h时采集血样,进行动脉血气分析,计算氧合指数,检测静脉血单核细胞TLR2和TLR4的表达.记录术后48 h内肺部并发症的发生情况.结果 与C组比较,D组静脉血单核细胞TLR2和TLR4表达下调,氧合指数升高,术后肺部并发症发生率降低(P＜0.05).结论 右美托咪定减轻肺叶切除术患者急性肺损伤的机制与下调围术期血液单核细胞TLR2和TLR4的表达有关.
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红景天苷对缺氧肾小管上皮细胞Toll受体2、IL-6表达及其凋亡的影响
目的:观察红景天苷(salidroside Sal.)对氯化钴(cobaltous chloride,CoCl2·6H20)诱导的缺氧人肾小管上皮细胞(human kidney tubular epithelia cell,HKC)Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR-2)表达、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的分泌及细胞凋亡的影响.方法:HKC细胞置于六孔板培养,随机分为正常对照组、缺氧模型组、红景天苷(salidroside Sal.)干预组(25 μg/ml、50 μg/ml、100 μml).其中缺氧模型采用300 μmol/L氯化钴处理6h得到,红景天苷干预组在此模型基础上再用不同浓度的红景天苷处理缺氧细胞24h.RT-PCR和Western blot检测TLR-2的表达,ELISA检测各组细胞上清中IL-6含量,流式细胞仪检测缺氧HKC凋亡情况.结果:氯化钴诱导HKC TLR-2蛋白(P＜0.05)及RNA表达上调(P＜0.01)、IL-6分泌增加(P＜0.01)及细胞凋亡增加(P＜0.01).25 μg/ml和50 μg/ml的红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的水平(P＜0.01),50 μg/ml红景天苷抑制作用强于25 μg/ml(P ＜0.05).与缺氧模型组比较,尽管100 μg/ml红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的绝对值水平,但差异无统计学意义(P＞0.05).25 μg/ml,50 μg/ml和100 μg/ml红景天苷均能抑制TLR-2蛋白表达(P＜0.01),且100 μg/ml较25 μg/ml红景天苷抑制作用显著(P＜0.05),但25 μg/ml与50μg/ml、50μg/l与100 μg/ml红景天苷比较,它们抑制作用的强弱差异无统计学意义(P＞0.05).三种浓度的红景天苷也能抑制缺氧HKC TLR-2的RNA表达(P＜0.0l),50 μg/ml及100 μg/ml红景天苷抑制作用强于25μg/ml红景天苷(P＜0.05),但50 μg/ml与100 μg/ml红景天苷比较,二者抑制作用差异无统计学意义(P＞0.05).50 μg/ml和100μg/ml红景天苷能抑制缺氧HKC凋亡(P＜0.01),但25 μg/ml红景天苷未表现出抑制凋亡的作用(P＞0.05),50 μml与100 μg/ml红景天苷比较,两者抑制凋亡的作用差异无统计学意义(P＞0.05).结论:红景天苷对缺氧HKC的TLR-2蛋白及RNA表达、IL-6的分泌及细胞凋亡均有抑制作用,但其抑制效应呈现非剂量依赖性.
