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TOLL样受体2、4及其介导的N F-κB信号通路参与类风湿关节炎发病的研究进展
自身免疫激活导致的炎症反应是类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)发病的关键.TOLL样受体(toll-like receptors,TLRs)中的TLR2、TLR4及其介导的NF-κΒ信号通路能诱发机体炎症反应、介导炎症因子表达,参与了RA的发病.本文对近年来关于TLR2、TLR4及其介导的NF-κB信号通路参与RA发病的研究进展进行了综述.
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溃疡性结肠炎患者Toll样受体2和转化生长因子-β水平变化及意义
目的 探讨Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)发病机制、病情进展中的作用.方法 UC患者20例,分别于急性期、缓解期行肠镜检查,急性期活检组织标本为急性期组,缓解期活检组织标本为缓解期组;同期UC伴上皮内瘤变患者30例活检组织标本为上皮内瘤变组;采用免疫组织化学法检测3组TLR2、TGF-β蛋白表达水平.结果 肠黏膜TLR2、TGF-β蛋白水平在急性期组(2.10±0.55、11.20±1.64),上皮内瘤变组(2.26±0.83、10.70±1.92)均高于缓解期组(0.55±0.51、1.65±0.59)(P＜0.05);急性期组和上皮内瘤变组TLR2、TGF-β蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05);TLR2、TGF-β蛋白在急性期组、缓解期组、上皮内瘤变组肠黏膜组织中表达均无相关性(r=0.108,P=0.652;r=0.235,P=0.319;r=0.114,P=0.550).结论 TLR2、TGF-β蛋白在UC急性期呈高表达,肠黏膜TLR2、TGF-β蛋白水平可作为判断UC病情进展的辅助参考指标.
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维生素D3对急性溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜Toll样受体2和髓样分化蛋白2及CD14表达的影响
目的 探讨维生素D3对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠肠黏膜Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)和髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein 2,MD2)及CD14表达的影响,及辅助治疗UC的可能机制.方法 30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和维生素D3干预组各10只.模型组和维生素D3干预组将质量分数5％2,4,6-三硝基苯磺酸与体积分数50％乙醇等体积混合后以0.4 mL/100 g剂量缓慢注入大鼠肠道制备UC模型,正常对照组以等量生理盐水灌肠.维生素D3干预组在造模成功后第10天起给予胆维丁乳原液1 875 u灌胃,模型组和正常对照组给予等剂量生理盐水灌胃,均1次/d,连续10 d;比较3组大鼠一般情况及维生素D3干预第10天疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分;维生素D3干预第10天处死大鼠,取结肠黏膜进行组织病理学评分(histopathological score,HPS),采用免疫组织化学法检测3组结肠黏膜组织TLR2、MD2和CD14的表达情况.结果 维生素D3干预第10天,模型组与维生素D3干预组DAI[(8.07±1.87)、(5.15±2.40)分]、HPS评分[(14.33±0.97)、(10.01±2.23)分]高于正常对照组(0、0分)(P＜0.05),维生素D3干预组低于模型组(P＜0.05);TLR2、MD2和CD14均在肠黏膜上皮细胞细胞质、细胞核中着色;结肠黏膜组织TLR2、MD2和CD14阳性表达率在模型组(90％、80％、100％),维生素D3干预组(80％、50％、50％)均高于正常对照组(0、0、0),且模型组高于维生素D3干预组(P＜0.05).结论 结肠黏膜组织中TLR2、MD2和CD14高表达可能与UC发病有关,维生素D3可通过抑制TLR2、MD2和CD14表达减轻UC大鼠的肠道炎症反应,发挥辅助治疗UC的作用.
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TOLL样受体2和IL-2,6在梅毒患者外周血中的变化及其意义
目的:观察梅毒患者外周血单核细胞Toll样受体2表达与血清中IL-2、6含量变化及其意义.方法:采用流式细胞仪检测60例显性梅毒患者外周血单核细胞表面TLR2蛋白表达水平(荧光强度)以及TLR2阳性细胞百分比,ELISA法检测血清IL-2、6水平,并以60例健康者作为对照组.结果:①显性梅毒患者外周血单核细胞TLR2的表达水平较对照组显著升高且一期低于二期梅毒患者,差异均有统计学意义(P<0.05);TLR2+CD14+细胞的阳性率低于正常对照组且一期低于二期梅毒患者,差异均有统计学意义(P<0.05).②显性梅毒患者IL-2、IL-6均高于对照组,一期患者IL-2高于二期但IL-6低于二期,所有差异有统计学意义(P<0.01).③TLR2的表达水平与TLR2+CD14+阳性率、IL-2无明显相关性,与IL-6呈显著正相关;IL-2与IL-6呈显著负相关.④显性梅毒患者外周血单核细胞TLR2的表达水平、TLR2+ CD14+阳性率、IL-2、IL-6男女之间的表达无差异.结论:梅毒感染时TLR2、IL-2、IL-6显著增高且与病程有关,但与性别无关.
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活动性结核患者外周血单核细胞Toll样受体2表达及其意义
目的 通过检测活动性结核(TB)患者外周血单核细胞Toll样受体2(TLR2)表达及其活化后单核细胞功能的变化,探讨单核细胞TLR2样受体在机体感染结核过程中的作用.方法 收集32例活动性TB患者和32例健康对照者外周血,流式细胞术检测单核细胞TLR2表达;体外分离培养健康人外周血单核细胞,通过脂阿拉伯甘露糖(LAM)活化TLR2,流式细胞术检测LAM诱导的巨噬细胞比例及细胞凋亡.结果 与对照组相比,TB患者外周血TLR2阳性细胞比例和平均荧光强度均显著上升(P＜0.05).体外分离培养健康人外周血单核细胞,与对照组相比,LAM诱导的巨噬细胞CD86阳性细胞比例和凋亡细胞比例均增加(P＜0.05),抗TLR2封闭型抗体可抑制LAM诱导的巨噬细胞分化和凋亡.结论 单核细胞TLR2在结核疾病过程中发挥重要的作用.
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B7同源体3经Toll样受体2依赖性机制增强肺炎链球菌脑膜炎小鼠的炎性反应和病理损伤
目的 探讨B7同源体3(B7 - H3)对肺炎链球菌(SP)脑膜炎大鼠的炎性反应和血脑屏障完整性的影响及其机制.方法 经小鼠侧脑室穿刺注入SP悬液,制备脑膜炎模型.野生型鼠分5组,分别为PBS组、SP组、SP+B7 -H3组、SP+同型单抗组、SP+B7 - H3阻断性单抗组.Toll样受体2基因剔除(TLR2-KO)鼠分3组:PBS组、SP组、SP+ B7 - H3蛋白组.术后6h、18h、30 h,麻醉其下眼眶采血法收集血清,取脑组织,制备脑组织匀浆.ELISA检测其血清TNF-α、IL-6、IL-1β和单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)水平以及脑组织匀浆中血清蛋白( Albumin)和IgG水平.结果 1.ELISA检测野生型鼠血清SP组、SP+ B7 - H3组注射18 h后TNF-α、IL-6和MCP-1的表达及30 h后TNF-α、IL-6、IL-1β和MCP-1的表达均较PBS组显著升高(Pa＜0.05)；SP+同型单抗组与SP组比较,各时间点各炎性因子的表达差异均无统计学意义(Pa＞0.05)；SP +B7- H3组注射18h后MCP-1的表达及30 h后TNF-α和IL-6表达均显著高于SP组[(42.010±3.883) ng·L-1vs(29.620±3.830) ng· L-1；(37.550±3.232)ng· L-1vs (24.570±2.377) ng·L-1；(66.160±5.766) ng·L-1vs (48.630±4.418) ng·L-1,Pa＜0.05]；SP+ B7 - H3阻断性单抗组注射30h后,TNF-α和IL-6的表达均显著低于SP组[(18.680±1.798) ng·L-1vs(24.570±2.377) ng·L-1；( 37.180±3.150) ng·L- 1vs (48.630±4.418) ng· L-1,Pa＜0.05].2.ELISA检测脑组织匀浆:SP组、SP+ B7 - H3组注射18h、30h后Albumin、IgG的表达较PBS组均显著升高(Pa＜0.05)；SP+同型单抗组与SP组比较,各时间点Albumin、IgG的表达差异均无统计学意义(Pa＞0.05)；SP+ B7 - H3组注射18 h、30 h后脑组织匀浆Albumin的表达及30 h后脑组织匀浆IgG的表达均显著高于SP组[(59.090±4.184) μg· g-1vs ( 35.450±4.256) μg·g-1;( 59.890±4.701)μg·g-1 vs (43.790±3.508) μg·g-1;(36.220±2.775)μg·g-1 vs(25.440±2.620)μg·g-1,Pa＜0.05].3.SP+ B7 - H3阻断性单抗组注射后18 h、30 h Albumin的表达及30 h IgG的表达显著低于SP组[(20.590±1.720) μg·g-1vs(35.450±4.256) μg·g-1；(28.650±3.063) μg· g-1vs(43.790±3.508)μg·g-1;(17.380±1.595) μg·g-1vs(25.440±2.620) μg·g-1,Pa＜0.05].3.TLR2-KO鼠血清和脑组织匀浆的ELISA检测显示:SP +B7-H3组较SP组各监测指标的表达在任何时间点的差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 B7 - H3通过TLR2依赖性机制促进SP诱导的脑膜炎小鼠的炎性反应和血脑屏障的破坏.
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麻疹患儿Toll样受体2-p38有丝分裂素激活蛋白激酶信号途径缺陷与免疫抑制的研究
目的 检测麻疹患儿外周血Toll样受体2(TLR2)、p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38 MAPK)和细胞因子的表达,探讨TLR2-p38 MAPK信号途径在麻疹急性期导致的免疫抑制中的作用.方法 选择2012年6月至2013年7月华中科技大学同济医学院附属荆州医院住院的麻疹患儿30例为麻疹组,30例健康体检儿童作为健康对照组.采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组外周血单个核细胞(PBMC) TLR2mRNA、p38 MAPK mRNA的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-β(TNF-β)、白细胞介素(IL)-12、IL-6、IL-10的水平;采用流式细胞仪(FCM)和速率散射比浊法分别检测外周血淋巴细胞亚群及免疫球蛋白水平.结果 1.麻疹组PBMC TLR2 mRNA、p38MAPK mRNA表达均明显下降,与健康对照组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).2.麻疹组血浆中IL-12、IFN-γ 、TNF-β均明显下降,与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05);IL-6、IL-10均明显升高,与健康对照组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).3.麻疹患儿组PBMC CD3+、CD4+、CD4 +/CD8+、IgG、IgA均明显下降,与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05);CD19+明显升高,与健康对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);CD8+及IgM与健康对照组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 TLR2 mRNA、p38 MAPK mRNA在急性期麻疹患儿PBMC中呈低水平表达.急性期麻疹患儿同时存在不同程度的细胞免疫抑制、体液免疫抑制及细胞因子紊乱.TLR2-p38 MAPK信号途径缺陷可能参与了麻疹免疫抑制的形成.
关键词： 麻疹 Toll样受体2 p38有丝分裂素激活蛋白激酶 免疫抑制 儿童 -
Toll样受体2调节Th细胞极化对小鼠角膜移植排斥反应发生的影响
目的 探究Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)是否通过调节辅助性T细胞(T helper cells,Th)极化影响角膜移植排斥反应的发生.方法 取30只C57BL/6小鼠和30只TLR2基因敲除小鼠为受体,BALB/c小鼠为供体,在受体小鼠右眼行同种异体角膜移植术,分别为野生组和基因敲除组;取19只C57BL/6小鼠右眼行自体角膜移植术,为自体组.术后每周两次裂隙灯下观察植片水肿程度和透明度,参照Sonoda评分标准对排斥指数(reject index,RI)进行评分;术后14 d收集角膜.分别取9只C57BL/6小鼠和TLR2基因敲除小鼠作为野生对照组和基因敲除对照组,行常规HE染色和实时荧光定量PCR检测.结果 术后随时间变化各手术组植片水肿和混浊程度不一,以野生组为严重.角膜RI评分显示术后7d、14 d、21 d,基因敲除组(0.80 ±0.83、0.90±0.55、1.35±0.99)低于野生组(1.55 ±0.94、2.25 ±0.97、2.55±1.19),差异均有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000).HE染色显示,野生组角膜基质层出现水肿和大量炎性细胞;而基因敲除组和自体组炎症反应较轻.PCR检测显示,基因敲除组角膜Th1和Th17细胞因子(IFN-γ和IL-17)mRNA表达(1.94±0.34、2.62±0.30)比野生组(4.27±0.37、3.99±0.40)低,差异均有统计学意义(P=0.000、0.001);Th2细胞因子(IL-4)三组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除TLR2可能通过抑制Th向Th1和Th17极化,降低角膜移植排斥率.
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敲除TLR2基因对同种异体小鼠角膜移植排斥反应的影响
目的 探讨敲除Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)基因后是否抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生.方法 以BALB/c为供体,各取30只C57BK/6和同背景TLR2基因敲除鼠为受体行右眼角膜移植术,设为野生组(WT)和基因敲除组(KO);取19只C57BL/6行右眼自体角膜移植术,为自体组(ISO);各取9只C57BK/6和TLR2基因敲除鼠分别设为野生对照组(WT control)和基因敲除对照组(KO control).术后每周两次观察植片并记录免疫排斥的发生时间;术后14 d,收集术眼同侧颈部淋巴结,行流式细胞术分析CD4+T细胞百分比;收集术眼角膜,行免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测角膜干扰素(interferon,IFN)-γ、TLR2和MyD88的表达.结果 WT组和KO组小鼠角膜移植术后中位生存时间KO组(35.0±3.8)d长于WT组(21.0±1.5)d(P ＜0.05).流式细胞术分析显示,WT组同侧颈部淋巴结CD4+T细胞百分比较WT control组明显增高(P＜0.05),而ISO和KO组相对于其对应的control组(WT/KO control)差异均无统计学意义(均为P＞0.05);免疫组织化学结果显示,ISO和KO组间角膜IFN-γ和MyD88分子表达无差异,但两者均低于WT组.KO组角膜几乎不表达TLR2分子,ISO组有微量表达,WT组表达明显增高;PCR检测显示,ISO和KO组角膜IFN-γ和TLR2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均为P＞0.05),但两者均低于WT组(均为P＜0.05);KO组角膜MyD88 mRNA相对表达量比ISO组高(P＜0.05),但两者均低于WT组(均为P＜0.05).结论 敲除TLR2基因可以一定程度抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生.
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TLR2单克隆抗体对大鼠角膜移植术后植片存活的保护作用
背景 Toll样受体2(TLR2)在移植免疫相关疾病中的作用越来越受到关注,阻断TLR2对心脏和肾脏移植物的保护作用已有研究报道,但TLR2是否具有抑制角膜移植排斥反应的作用尚未证实.目的 观察TLR2单克隆抗体对同种异体大鼠角膜移植术后植片存活情况的影响.方法 取24只SPF级雌性Wistar大鼠作为受体,12只SPF级SD大鼠作为供体,体质量均为180～220 g.采用同种异体角膜移植的方法在Wistar大鼠右眼实施穿透角膜移植术,制备大鼠角膜移植模型.采用随机数字表法将模型眼分为单纯模型组和TLR2单克隆抗体组,TLR2单克隆抗体组分别于术后0、2、4、6、8d球结膜下注射TLR2单克隆抗体15 μg/30μl,单纯模型组大鼠同法注射等容量生理盐水.术后每日于裂隙灯显微镜下观察各组大鼠角膜植片水肿程度、透明度和新生血管形成情况,参照Holland等的评分标准对排斥反应指数(RI)进行评分;分别于术后第9天、第15天收集各组3只大鼠角膜组织,另取3只正常Wistar大鼠眼球作为正常对照,行常规组织病理学检查.各组取6只大鼠用于生存分析观察.结果 术后1～4 d,裂隙灯显微镜下2个组角膜均轻度水肿,术后9～14d,单纯模型组大鼠角膜植片布满新生血管,可见植片水肿、混浊,而TLR2单克隆抗体组大鼠植片至术后第15天开始混浊.术后5、9、15d,单纯模型组大鼠RI评分均明显高于TLR2单克隆抗体组,差异均有统计学意义(t=4.183、4.954、13.506,均P＜0.05);TLR2单克隆抗体组角膜植存活时间为15.5d,95％可信区间(CI)为14.9～16.1,单纯模型组角膜植片存活时间为9.5d,95％ CI为8.7～10.3,2个组间差异有统计学意义(Z=12.728,P=0.001).角膜组织病理学检查显示,单纯模型组大鼠角膜基质层水肿明显,角膜组织中可见大量炎性细胞浸润和新生血管管腔形成,而在TLR2单克隆抗体组中仅见少量炎性细胞和新生血管.结论 TLR2单克隆抗体能减轻角膜移植术后的炎症反应,延长角膜植片的存活时间.
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肺炎支原体肺炎患儿血清和支气管肺泡灌洗液中肺表面活性蛋白A、肺表面活性蛋白D和Toll样受体2水平变化及临床意义
目的 探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺表面活性蛋白(SP)-A、SP-D和Toll样受体2(TLR2)水平变化及相关性.方法 选择2015年7月至2017年7月珠海市人民医院儿科收治的确诊为MPP并行支气管肺泡灌洗术患儿35例,根据疾病情况将患儿分为MPP组(n=23)和难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)组(n=12),另选择同期行支气管镜异物取出术且未合并明显肺部感染患儿10例作为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测3组患儿血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中SP-A、SP-D和TLR2的水平,并分析血清与BALF中SP-A、SP-D和TLR2的相关性.结果 RMPP组和MPP组患儿BALF和血清中SP-A、SP-D、TLR2水平均高于对照组(P＜0.05);RMPP组患儿BALF中TLR2水平高于MPP组(P＜0.05),2组患者血清和BALF中SP-A、SP-D水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05).血清与BALF中的TRI2水平呈中等相关(r=0.459,P＜0.05),而血清与BALF中的SP-A、SP-D水平无显著相关性(r=0.223、0.175,P＞0.05).结论 SP-A、SP-D和TLR2可能在MPP的发病机制中起到重要作用,MPP患儿血清与BALF中的TRL2水平呈正相关,监测MPP患儿血清TLR2水平变化可为临床诊断肺部炎症提供依据.
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Toll样受体2抑制剂C29的抗抑郁效应及其机制
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)抑制剂C29对抑郁症状的作用和机制.方法 将40只小鼠随机分为正常组、正常+抑制剂组、抑郁组和抑郁+抑制剂组,每组10只.将抑郁组和抑郁+抑制剂组小鼠采用慢性不可预见性中等强度应激+孤养的方法建立抑郁模型.正常组和抑郁组小鼠用不含C29的5g·L-1羧甲基纤维素钠溶液进行灌胃,正常+抑制剂组和抑郁+抑制剂组小鼠用含C29的5g·L-1羧甲基纤维素钠溶液进行灌胃,每2d1次,持续21 d.模型制作后观察各组小鼠强迫游泳不动时间和糖水消耗情况并进行比较;用免疫荧光染色和流式细胞仪分析小鼠大脑中神经元核抗原(NeuN)、Ki-67、CD3和F4/80阳性细胞的变化,实时定量聚合酶链式反应检测TLR2在小鼠大脑组织中的表达.结果 正常组、抑郁组、正常+抑制剂组和抑郁+抑制剂组小鼠强迫游泳不动时间分别为(71.23±17.16)、(131.76±35.15)、(76.26±26.44)和(84.48±23.73)s,抑郁组小鼠强迫游泳不动时间显著长于正常组、正常+抑制剂组和抑郁+抑制剂组(P＜0.05),正常组、正常+抑制剂组和抑郁+抑制剂组小鼠强迫游泳不动时间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05);抑郁组小鼠的糖水偏好为(45.3±13.7)％,显著低于正常组小鼠的(74.5±18.7)％(P＜0.05);应用C29后,正常+抑制剂组小鼠的糖水偏好为(77.1±17.6)％,抑郁+抑制剂组小鼠的糖水偏好为(67.9±19.5)％,均显著高于抑郁组(P＜0.05).抑郁组、抑郁+抑制剂组小鼠大脑组织中TLR2表达较正常组和正常+抑制剂组显著增加;正常组与正常+抑制剂组、抑郁组与抑郁+抑制剂组小鼠大脑组织中TLR2表达比较差异均无统计学意义(P＞0.05).流式细胞仪分析结果显示,4组小鼠大脑组织中NeuN、Ki-67阳性细胞所占比例两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05);抑郁组小鼠大脑中CD3阳性T淋巴细胞、F4/80阳性巨噬细胞的比例较正常组、正常+抑制剂组、抑郁+抑制剂组显著增加(P＜0.05),而正常组、正常+抑制剂组、抑郁+抑制剂组小鼠大脑中CD3阳性T淋巴细胞、F4/80阳性巨噬细胞的比例两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR2抑制剂C29可以通过降低大脑中活化的免疫细胞而改善抑郁症状.
关键词： Toll样受体2 Toll样受体2抑制剂 大脑 炎症 免疫细胞 -
Toll样受体在金黄色葡萄球菌所致单核-巨噬细胞功能障碍中的作用
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在金黄色葡萄球菌所致单核-巨噬细胞功能障碍中的作用.方法 利用小干扰RNA(siRNA)在单核-巨噬细胞中干预TLR2和TLR4的表达,同时设计无义序列作为对照.利用单核-巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的清除实验分析吞噬能力的变化.结果 siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的相对表达率分别为45.2％和40.7％,显著低于无义序列的100.0％(P＜0.05);金黄色葡萄球菌对siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的U937细胞黏附率分别为50.2％和47.1％,与无义序列的100.0％比较差异有统计学意义(P＜0.05);金黄色葡萄球菌在siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的U937细胞中的清除率分别为46.3％和43.5％,与无义序列的100.0％比较差异有统计学意义(P＜0.05);将金黄色葡萄球菌介质处理过的U937细胞的清除率设为100.0％,则金黄色葡萄球菌在TLR2抑制剂Pam3CSK4和TLR4抑制剂脂多糖处理过的U937细胞中的清除率分别为42.7％和40.6％,与无义序列的100.0％比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR2和TLR4的表达有利于单核-巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的清除.
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特发性胎儿生长受限中TLR2和TNF-α的表达及意义
目的:探讨特发性胎儿生长受限(IFGR)胎盘组织中Toll样受体2(TLR2)和母血、脐血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的意义.方法:选取郑州大学第三附属医院2009年10月至2010年8月剖宫产分娩的IFGR孕妇30例为实验组,同期因社会因素剖宫产分娩的正常足月孕妇30例为对照组.免疫组化法检测两组胎盘组织TLR2的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组母血、脐血TNF-α水平.结果:①TLR2在两组胎盘合体滋养细胞的表达是:实验组(144.07±9.60),对照组(120.64±10.19),两组差异有统计学意义(P＜0.05)；②实验组母血、脐血TNF-α水平(87.87±10.15,93.77±9.69)μg/L均高于对照组(72.59±9.08,78.51±9.37)μg/L,差异均有统计学意义(P＜0.05)；③实验组胎盘TLR2表达与脐血TNF-α水平呈正相关(r =0.653,P＜0.05),其余均无相关性(P＞0.05).结论:胎盘组织中TLR2和母血、脐血TNF-α水平单独或协同增高可促使IFGR发生.
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胰腺癌中Toll样受体2和血管内皮生长因子的表达及临床意义
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)和血管内皮生长因子(VEGF)在胰腺癌中的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR检测40例新鲜胰腺癌及相应癌旁组织标本中TLR2及VEGF mRNA的水平；应用免疫组化检测TLR2和VEGF蛋白在60例胰腺癌及相应癌旁组织中的表达,并分析二者与临床病理学特征之间的关系.应用Kaplan-Meier法分析TLR2和VEGF蛋白表达对患者生存期的影响.结果 胰腺癌组织中的TLR2和VEGF mRNA相对水平分别为0.75±0.16和0.82±0.21,显著高于癌旁组织的0.36 ±0.12和0.38±0.15(P均＜0.05)；胰腺癌中TLR2和VEGF蛋白表达阳性率分别为56.67％和68.33％,显著高于癌旁组织的31.67％和36.67％(P均＜0.05).TLR2、VEGF蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位及分化程度无相关性,而与肿瘤大小、淋巴结转移、神经转移及临床分期相关.TLR2、VEGF阴性组患者生存期分别为16.2个月和19.5个月,显著长于TLR2、VEGF阳性组(分别为10.4个月和12.6个月,P均＜0.05).结论 TLR2、VEGF介导了胰腺癌的发生、发展,与临床病理学特征关系密切.
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缺血预处理对缺血再灌注损伤大鼠肾组织TLR2表达的影响
目的 观察缺血预处理对缺血/再灌注损伤大鼠肾组织Tbll样受体2(TLR2)表达的影响.方法 将24只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术对照组(SHAM组)、单纯缺血再灌注组(I/R组)和缺血预处理组(IPC组),每组8只.于术后24 h留取各组大鼠血标本和肾组织.检测各组大鼠血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN),肾组织切片行HE染色后观察其病理学改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量多聚酶链反应检测肾组织TLR2mRNA表达,Western blot检测肾组织TUR2蛋白表达.结果 与SHAM组相比,I/R组大鼠SCr和BUN升高,肾组织TNF-α含量和TLR2蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与I/R组相比,IPC组大鼠SCr和BUN降低,肾组织TNF-α含量和TLR2蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 缺血预处理可能通过抑制大鼠肾组织TLR2表达及其信号通路,下调TNF-α的表达,发挥其肾脏保护作用.
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复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠toll样受体2,4基因表达的影响
[目的]观察复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠toll样受体2,4(TLR2,TLR4)基因表达的影响,探讨其治疗UC的可能作用机制.[方法]用三硝基苯磺酸(TNBS)制备UC大鼠模型,将52只SD实验大鼠随机分为正常对照(空白)组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组(500 mg/kg),复方青黛颗粒低(600 nag/kg)、中(900 mg/kg)、高(1 200 mg/kg)剂量组.从造模后第3天开始分别每天灌胃给药1次至实验结束,第14 d(灌胃10 d后),用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TLR2、TLR4的基因表达水平.[结果]模型组TLR2、TLR4基因相对表达量均明显高于空白组(P＜0.01),复方青黛颗粒中、高剂量组TLR2相对表达量及高剂量组TLR4相对表达量与SASP组比较差异均无统计学意义,但均明显低于模型组(均P＜0.05).[结论]复方青黛颗粒能有效治疗TNBS诱导的UC模型大鼠,可能与复方青黛颗粒抑制TLR2、TLR4基因表达有关.
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Toll样受体信号转导通路负性调控因子在慢性丙型肝炎患者免疫发病机制中的作用
目的:研究Toll样受体(TLRs)信号转导通路负性调控因子在慢性丙型肝炎患者免疫发病机制中的作用.方法:选择2015年1月-10月我院收治的慢性丙型肝炎患者19例为研究组,正常对照组为17例本院健康志愿者,使用荧光定量PCR检测研究组与对照组外周血单个核细胞TLRs信号通路负性调节因子A20、IRAK-M、MyD88s与TLR2基因的表达;采用ELISA法检测血浆TNF-α水平.结果:研究组TLR2表达水平(17.38±3.45),高于对照组(4.24±1.37)(P＜0.05);研究组负性调节因子A20相对表达量(10.53±1.16),高于对照组(1.36±0.21)(P＜0.05);研究组IRAK-M相对表达量(26.22±2.62),高于对照组(9.52±1.34)(P＜0.05);研究组MyD88s相对表达量(4.51±1.57),高于对照组(P＜0.05).研究组血浆TNF-α水平为(58.45±4.36) Pg/ml,明显高于对照组(20.12±2.24) Pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).研究组TLR2 mRNA和血清总胆红素(TBil)呈正相关(r =0.647,P＜0.05);研究组TLR2 mRNA和凝血酶原活动度(PTA)呈负相关(r=-0.663,P＜0.05);研究组TLR2基因表达和同组TNF-α水平呈正相关(r=0.892,P＜0.01).结论:TLRs信号通路负性调节因子参与慢性丙型肝炎的发生,A20、IRAK-M、MyD88s等负性调节因子参与了慢性丙型肝炎发病过程中的免疫损伤.
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Toll样受体2在结肠癌组织的表达及其对结肠癌细胞生长的影响
目的 观察Toll样受体2(TLR2)在结肠癌中的表达,探讨TLR2信号对结肠癌细胞生长的影响.方法 免疫组织化学染色法检测20例结肠癌组织及配对癌旁组织中TLR2蛋白表达;应用TLR2配体Pam3Cys(P3C)激活结肠癌细胞株SW480和HCT116的TLR2信号,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、划痕实验、Transwell实验观察其对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响;Western blot实验检测TLR2信号激活后结肠癌细胞磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达.结果 结肠癌组织和配对癌旁组织中TLR2蛋白表达阳性率分别为85.0％ (17/20)和40.0％(8/20),两者免疫组织化学评分差异有统计学意义(x2=8.640,P=0.003);TLR2可以促进结肠癌细胞增殖(SW480组:1.496±0.041比1.003±0.002,t =20.802,P=0.000;HCT116组:1.859±0.074比1.002±0.003,t=20.430,P=0.000),同时可以促进结肠癌细胞的迁移能力[SW480组:(72.00±11.78)％比(45.67±6.13)％,t=3.434,P=0.026;HCT116组:(64.33±15.52)％比(32.33±11.32)％,t =2.885,P=0.045]和侵袭能力(SW480组:81.3±5.3比31.3±3.7,f=13.398,P =0.000;HCT116组:58.0±5.7比19.7±3.3,t=10.072,P =0.001). TLR2信号能够激活结肠癌细胞PI3 K/Akt和NF-κB通路.结论 TLR2在结肠癌中高表达,能够通过PI3 K/Akt和NF-κB通路促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭.
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小干扰RNA沉默Toll样受体2/4基因对成骨细胞迁移和增殖的影响
目的 观察利用RNA干扰技术特异性阻断Toll样受体2/4(TLR2/TLR4)对大鼠成骨细胞迁移及增殖的影响.方法 构建TLR2/TLR4的小干扰RNA (siRNA),转染成骨细胞后采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测TLR2/TLR4的mRNA及蛋白的含量.采用Transwell小室法及噻唑蓝(MTF)法检测转染组和非转染组成骨细胞的迁移能力以及增殖能力,同时采用Western blot法检测各组细胞内核因子-κB (NF-κB)的含量.结果 针对TLR2及TLR4的siRNA可有效抑制其mRNA的表达,抑制率分别达到了94％及84％,同时也抑制了受体蛋白的表达,使其降低至对照组的48％及65％.当TLR2及TLR4表达受到抑制后成骨细胞的迁移能力下降至对照组的76％及59％,但细胞增殖比较差异无统计学意义(P＞0.05),同时细胞内NF-κB活性降低,细胞核内NF-κB p65的含量降至对照组的47％及75％.结论 siRNA能够有效沉默TLR2/TLR4基因的表达,减弱细胞内NF-κB的活化,抑制成骨细胞迁移,表明成骨细胞的迁移通过TLR2/TLR4及NF-κB途径.
