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131I-cRGD环肽对荷黑色素瘤小鼠的靶向治疗作用
目的 用131I标记环精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(cRGD)肽-探讨131I-cRGD对荷黑色素瘤小鼠模型瘤体生长的双重抑制作用.方法 应用氯胺T法对cRGD进行131I标记.建立荷黑色素瘤B16株小鼠模型,将20只荷瘤小鼠按完全随机化法分为4组,每组5只.即实验(131I-cRGD)组、cRGD对照组、131I-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(cGGG)对照组和空白对照(PBS)组.分别经尾静脉注射相应药物,观察各组倚瘤小鼠肿瘤体积和质量的变化,利用单因素方差分析比较各组之间的差异.结果 131I-cRGD的标记率和放化纯分别达到(89.14±4.57)%及(99.14±0.72)%.治疗第2l天时.各组与PBS组肿瘤体积相比.抑瘤率分别为64.92%(131I-cRGD组)、37.70%(cRGD组)及24.78%(131I-cGGG组);治疗第28天时,处死各组小鼠,其瘤质量(含治疗第2l～28天自然死亡的4只小鼠)分别为131I-cRGD组(6.48±5.19)g、cRGD组(10.81±6.25)g、131I-cGGG组(14.21±5.91)g、PBS组(18.88±7.59)g(F=3.479,P<0.05),131I-cRGD组与PBS组之间差异有统计学意义(t=3.12,P<0.05).各组与PBS组肿瘤质量相比,抑瘤率分别为65.72%(131I-cRGD组)、42.76%(cRGD组)及24.77%(131I-cGGG组).治疗第28天时,各组小鼠净体质量(净体质量=小鼠体质量一瘤质量,含治疗第2l～28天死亡的4只小鼠)分别为(29.12±8.66)g(131I-cRGD组)、(25.89±6.49)g(cRGD组)、(24.29±2.97)g(131I-cGGG组)、(20.92±5.95)g(PBS组).差异尤统计学意义(F=1.444,P>0.05).结论 131I-cRGD能抑制荷黑色素瘤小鼠肿瘤的生长,对黑色素瘤治疗具有潜在的价值.
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N-MID、β-CTx在肿瘤骨转移中的临床价值
目的 探讨骨代谢标志物N端骨钙素(N-MID)、β-Ⅰ型胶原羧基端肽(β-CTx)在肿瘤骨转移中的诊断价值.方法 84例恶性肿瘤患者根据骨显像结果分为无骨转移组26例(0级)、骨转移组58例(1,2,3和4级分别17,12,16和13例),测定血清N-MID、β-CTx、25-羟基.维生素D(25-OH-D)、降钙素(CT)、Ca水平.结果 骨转移组β-CTx水平的中位数为0.42 μg/L,较无骨转移组(0.27 μg/L)明显升高,差异有统计学意义(Z=-0.784,P＜0.05);2组N-MID、25-OH-D、CT和Ca水平差异无统计学意义(P均＞0.05);随骨显像所示转移灶级别增加,β-CTx水平逐渐升高,分别为(0.24 4-0.17),(0.31 4-0.11),(0.56 4-0.19),(0.81 4-0.13)和(1.10 4-0.22)μg/L,除0和1级、1和2级外,其他各级两两比较差异均有统计学意义(F0,1=1.602,F1,2=3.890,P均＞0.05;F0,2=5.429,F0,3=9.625,F0,4=16.413,F1,3=8.796,F1,4=13.687,F2,3=4.167,F2,4=9.124,F3,4=5.128,P均＜0.05);N-MID水平有逐渐上升趋势,但各级间差异无统计学意义(P均＞0.05);25.OH-D、CT和Ca水平在各级间差异也无统计学意义(P均＞0.05).结论 血清B-CTx水平对骨转移的诊断和监测可能有一定价值,但尚需作进一步研究证实.
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荷瘤裸鼠整合素αv β3受体显像的实验研究
目的探讨99Tcm标记精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)小分子多肽(GY11)作为肿瘤显像剂的可能性.方法利用SnCl2直接还原法进行GY11的99Tcm标记.建立荷人黑色素瘤A375、肺癌H460和宫颈癌HeLa BALB/c裸鼠肿瘤模型,分别进行体内分布和肿瘤显像研究.结果GY11的99Tcm标记率为80%.黑色素瘤A375荷瘤裸鼠体内分布显示,99Tcm-GY11主要经肾脏快速从血液中清除,注射后2 h肿瘤摄取量为3.13%ID/g,肿瘤/血和肿瘤/骨骼肌比值随时间的推移而增加,注射后1和6 h比值分别为3.0、4.3和8.1、15.1.对于黑色素瘤A375和肺癌H460荷瘤裸鼠,99Tcm-GY11静脉注射后2 h肿瘤均能清楚显示,24 h后显像更清晰;2 h后宫颈癌HeLa肿瘤能显影,但6 h后肿瘤放射性基本清除.结论99Tcm-GY11有望成为肿瘤αvβ3受体显像剂.
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肿瘤坏死因子受体短肽配体的筛选
目的利用噬菌体六肽库筛选肿瘤坏死因子(TNF)受体的短肽配体.方法利用可溶性TNF受体Ⅰ(sTNFR Ⅰ)蛋白筛选噬菌体随机六肽库,经过4轮筛选和酶联免疫吸附测定,获得能和sTNFR相结合的噬菌体克隆.对部分阳性噬菌体克隆进行DNA测序,推算出相应的氨基酸序列,并进行保守性分析.按其中的保守序列进行多肽设计、合成,通过细胞学实验鉴定其生物活性.结果得到30个可模拟TNF的阳性克隆,对其中6个进行单链DNA测序和分析.合成和纯化短肽(八肽)WH701,体外细胞毒实验结果证实了该序列的有效性.结论获得了可模拟TNF受体亲和力的短肽配体,为研制新的TNF受体显像多肽配基提供了实验依据.
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125I-WH16制备及与HepG2人肝癌细胞结合特性研究
目的研究高比活度亲肝癌肽125I-WH16的制备及其与HepG2人肝癌细胞的体外结合特性.方法采用Iodogen法碘标记WH16,用高效液相色谱法分离纯化并鉴定标记产物.①将125I-WH16与HepG2细胞进行体外细胞量(或保温时间)-计数实验,以得到较佳的体外结合条件;②比较HepG2与正常肝细胞(L02)的125I-WH16平均结合计数,以检验其特异性;③125I-WH16与HepG2细胞进行体外饱和结合实验,研究其亲和特性.结果①125I标记率50%,125I-WH16比活度8.21×10 15Bq/mol,放化纯95%,放射性浓度6.64×108 Bp/L,-20℃保存24h后放化纯仍为95%.②125I-WH16与HepG2细胞结合具有细胞依赖性,较佳保温时间为3 h;相同条件下,125 I-WH16与HepG2细胞、L02细胞之间平均特异性结合计数有明显差异;125I-WH16与HepG2细胞结合具有可饱和性,Scatchard作图提示HepG2细胞仅含一种WH16受体,Kd为(1.42±0.28)nmol/L,Bmax为(12.15±0.63)pmol/L;Hill系数为1.03,接近于1.结论WH16的放射性标记物在肝癌显像及生物靶向治疗中可能有潜在的应用前景.
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肝癌特异性结合肽的筛选及鉴定
目的探讨利用噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合多肽或肝癌细胞优势结合多肽的可行性.方法①利用噬菌体随机十二肽库,对人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系L02进行4轮差异筛选、富集,获得与肝癌细胞亲和的噬菌体克隆.②用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定其与肝癌细胞、正常肝细胞的亲和力,进一步筛选出高度亲和肝癌细胞的特异性阳性噬菌体克隆.比较其与其他肿瘤细胞的亲和力.③提取阳性噬菌体DNA并进行DNA序列测定,获得与肝癌细胞亲和的多肽序列.④用免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示阳性多肽序列的噬菌体与肝癌细胞的结合部位.⑤根据筛选的多肽序列合成十六肽WH16,利用竞争抑制实验鉴定其与肝癌细胞的结合.结果筛选及ELISA结果示得到与肝癌细胞特异性结合并内化入肝癌细胞的噬菌体克隆,测序结果示56.67%的被检噬菌体展示相同的多肽序列FLJEPHLMDTSM,推测FLEP是肝癌细胞特异性结合肽的基序.免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体与肝癌细胞特异性结合并内化入细胞内.竞争抑制实验示WH16能有效抑制展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体克隆与肝癌细胞的结合.结论利用噬菌体随机肽库获得能与肝癌细胞特异性结合的多肽序列FLLE-PHLMDTSM,据此合成的十六肽WH16与肝癌细胞有亲和力.
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99Tcm-神经紧张肽结肠癌显像的实验研究
目的探讨99Tcm-神经紧张肽(NT)显像早期诊断结肠癌的价值.方法用99Tcm标记NT进行裸鼠结肠癌模型体内生物分布和显像研究,观察受体阻断后99Tcm-NT在裸鼠肿瘤模型体内的组织分布和显像特点.测定99Tcm-NT与结肠癌细胞的亲和力常数(Kd).结果 99Tcm-NT对结肠癌细胞Kd为0.91 nmol/L;标记率(>94%)高且稳定.体内生物分布:99Tcm-NT主要经肾脏排泄,3和12 h肿瘤/肌肉比值分别为3.25±1.02和4.15±1.46;受体阻断后3 h肿瘤/肌肉比值(1.21±0.62)明显降低,与受体未阻断结果相比差异有显著性(P<0.01).裸鼠肿瘤模型显像时间早(0.5 h开始显影),3 h肿瘤/对侧肢体比值为2.68±0.44;受体阻断后3 h肿瘤/对侧肢体比值为1.14±0.36,与受体未阻断结果相比差异有显著性(P<0.01).结论 99Tcm-NT制备方法简单,为结肠癌的早期特异性诊断提供了一种可能的新方法.
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GE11多肽对表皮生长因子受体阳性乳腺癌脑转移瘤的靶向性研究
目的 探讨GE11多肽对表皮生长因子受体(EGFR)阳性乳腺癌脑转移瘤靶向结合的可行性,为构建特异性靶向乳腺癌脑转移瘤的分子探针寻找合适的靶向基团.方法 应用Western blot及流式细胞仪检测人三阴性乳腺癌脑转移细胞株(MDA-MB-231-BR)的EGFR表达,采用细胞免疫荧光染色及流式细胞仪检测荧光标记的GE11多肽对MDA-MB231-BR细胞株的体外靶向结合特性,选择GK-13多肽为对照肽,并利用皮下荷瘤裸鼠进行活体水平靶向性验证.采用两样本t检验分析数据.结果 Western blot及流式细胞检测结果显示EGFR在MDA-MB-231-BR细胞株中表达率为88.60％,呈高表达.流式细胞检测结果显示,10μmol/L浓度GE11多肽与MDA-MB-231-BR细胞结合率为38.4％,明显高于相同浓度对照肽的结合率(0.6％;t=16.941,P<0.01);细胞荧光染色结果显示GE11多肽与细胞共温育后可检测出更强的荧光信号,且结合具有浓度及温度依赖性.活体实验结果显示GE11多肽在肿瘤部位有较强的信号,其他组织信号较弱.结论 GE11多肽与EGFR阳性的乳腺癌脑转移瘤具有特异性靶向结合特性.
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18F-AlF-NOTA-c(CGRRAGGSC)的制备和生物学评价
目的 制备18F-AlF-1,4,7-三氮环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)-c(CGRRAGGSC),并研究其对白细胞介素(IL)-11受体(IL-11R)阳性肿瘤的靶向性.方法 将c(CGRRAGGSC)偶联NOTA后采用AlF法进行标记.高效液相色谱(HPLC)测定18F-AlF-NOTA-c (CGRRAGGSC)的放化纯及稳定性.建立SKOV3荷瘤裸鼠模型,静脉注射18F-AlF-NOTA-c (CGRRAGGSC)后30 min、1h、2h行microPET显像,测定主要脏器的放射性摄取值.采用DAS2.0软件计算药代动力学参数.结果 18F-AlF-NOTA-c (CGRRAGGSC)的产率为(30.0±7.4)％,放化纯大于95％,磷酸盐缓冲液和血浆中至少稳定2h.MicroPET图像上可见该标记物在肿瘤部位的浓聚.注射后30 min、1h、2h,肿瘤/肌肉摄取比值分别为6.26±2.98、7.19±3.63、9.05±4.30.标记物进入血液后快速清除并通过肝脏和肾脏代谢,其分布半衰期为(0.38±0.14)h,消除半衰期为(2.64±0.28)h.结论 18 F-AlF-NOTA-c (CGRRAGGSC)制备过程简单,标记条件温和,产物与受体有较好的结合特性,是一种潜在的IL-11R阳性肿瘤靶向显像剂.
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新型肺癌分子探针18F-氟丙酰-Lladtthhrpwt的合成及其小动物PET显像
目的 制备18F-氟丙酰-Lladtthhrpwt(18 F-FP-ZS-6),并观察其在荷人肺腺癌NCI-H 1299裸鼠体内分布.方法 利用噬菌体随机展示肽库筛选实验得到多肽Lladtthhrpwt(ZS-6),基于氟多功能化学合成模块PET-MF-2V-IT-I合成常用辅助基团18F-2-氟丙酸对硝基苯酯(NFP),再与多肽ZS-6反应得到18F-FP-ZS-6.将纯化后的18F-FP-ZS-6通过尾静脉注入荷人肺腺癌NCI-H1299裸鼠体内,进行microPET显像.结果 成功制备18F-FP-ZS-6.其衰减校正后总产率为(5±2)％(n=3),放化纯＞95％.MicroPET显示18F-FP-ZS-6在荷瘤裸鼠肿瘤与腹部呈高摄取,在注射后5、15、25、35、45、55、65、75和85 min时,肿瘤摄取值分别为0.329、0.350、0.405、0.433、0.420、0.415、0.402、0.403、0.390 ％ID/g;在注射后35 min达高,随后缓慢减少.结论 成功制备18F-FP-ZS-6,其在荷人肺腺癌裸鼠肿瘤中有一定聚集,有可能作为人肺腺癌显像剂.
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99Tcm-3P-RGD2用于肺癌整合素αv β3表达水平检测的实验研究
目的 采用99Tcm-3聚乙二醇4-RGD2(3P-RGD2)评估小细胞肺癌和肺腺癌细胞荷瘤鼠动物模型中整合素αvβ3表达水平.方法 按试剂盒说明书制备99Tcm-3P-RGD2.选取H446人小细胞肺癌细胞进行受体竞争抑制实验,检测3P-RGD2与整合素αvβ3的特异亲和性.通过细胞摄取实验检测H446和A549人肺腺癌细胞对99Tcm-3P-RGD2的摄取情况,以流式细胞术和免疫荧光染色测定2种细胞中整合素αvβ3的表达.观察99Tcm-3P-RGD2在H446和A549肺癌荷裸鼠模型(各6只)的microSPECT/CT显像情况.显像后断颈处死裸鼠,取部分肿瘤组织制备单细胞悬液,以流式细胞术检测细胞整合素αvβ3表达;部分组织制成切片,以免疫组织化学法检测肿瘤组织整合素αvβ3的表达.采用配对t检验对实验数据进行统计学分析.结果 99Tcm-3P-RGD2标记率为(97.0±2.0)％,4h时后放化纯仍高达95％.3P-RGD2与整合素αvβ3特异性结合的半数抑制浓度(IC5o)为8.759 nmol/L.H446细胞对99Tcm-3P-RGD2的亲和性高于A549细胞,摄取率均于120 min达峰值,分别为(5.75±0.50)％和(3.35±0.28)％(t=9.324,P＜0.05).H446和A549肺癌细胞均表达整合素αvβ3,且H446高于A549[(18.01±2.83)％和(5.77±0.64)％,t=7.488,P＜0.05].免疫荧光染色示H446细胞整合素信号明显高于A549细胞.MicroSPECT/CT显像示注射99Tcm-3P-RGD2后3 h T/NT达大值,H446荷瘤鼠T/NT比值为6.39±1.29,高于A549荷瘤鼠(3.62±0.33,t=6.869,P＜0.05).H446和A549肿瘤组织经流式细胞术检测,整合素αvβ3表达水平分别为(22.89±3.63)％和(10.23±1.94)％(t=13.967,P＜0.05).免疫组织化学检测结果示H446和A549肿瘤组织和新生血管内皮细胞均有整合素αvβ3表达.结论 99Tcm-3P-RGD2可用于整合素αvβ3阳性肺癌的显像,并可无创评估不同肺癌组织整合素αvβ3的表达水平.
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99Tcm标记RGD环肽在荷肺腺癌裸鼠中的显像研究
目的 制备99Tcm标记的含RGD序列的99Tcm-联肼尼克酰胺(HYNIC)-c( RGDfK)环肽单体,评价其在整合素表达阳性的肺腺癌严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠肿瘤模型中的生物学分布,并进行显像研究.方法 (1)以HYNIC为双功能螯合剂,以三羟甲基甘氨酸(tricine)和乙二胺二乙酸为协同配体,采用二步法制备99Tcm标记HYNIC-c(RGDfK),进行细胞结合实验,测定标记物生物学活性；(2)将荷A549肺腺癌模型小鼠分为7组[第7组作为竞争性抑制组,注射显像剂前0.5h先注射HYNIC-c(CRDGfk) 100 μg],每组5只,经尾静脉注射7.4 MBq的99Tcm-HYNIC-c (RGDfK),于注射后0.5,1,2,4,8,12h处死,计算荷A549肺腺癌小鼠模型各脏器％ID/g,同时采用ROI技术研究99Tcm-HYNIC-c( RGDfK)在小鼠体内的生物学分布,计算不同时间点的T/NT比值(NT选取肌肉)；(3)取6只荷瘤裸鼠,其中3只为竞争性抑制组,经尾静脉注射7.4 MBq的99Tcm-HYNIC-c (RGDfK),于注射后0.5,1,2,4,8,12 h进行静态γ显像.结果 99Tcm-HYNIC-c (RGDfK)的标记率＞90％,放化纯＞95％.99Tcm-HYNIC-c( RGDfK)与A549肺腺癌细胞特异性结合率高为36.14％,体内分布实验显示99Tcm-HYNIC-c( RG DfK)在肾的摄取率始终高于20％ID/g,注射后0.5h肿瘤％ID/g为10.52±1.48,8h为17.26 ±2.81,12h为8.93±0.90,竞争性抑制组注射后0.5h为2.29±0.85.通过ROI技术测得T/NT在8h达6.87.注射后1h肿瘤可显影,4～8h显影更清晰.结论 99Tcm标记HYNIC-c (RGDfK)易于制备,具有良好的靶向性.
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99Tcm标记亲肿瘤三肽的实验研究
目的 进行99Tcm-精氨酸-谷氨酸-丝氨酸(RES)的亲肿瘤实验研究.方法 采用标准Fmoc固相合成法合成RES,在不同的试剂和温度(100 ℃或室温)条件下,以氯化亚锡为还原剂进行RES的99Tcm标记,优化标记条件.进行荷A549肺癌裸鼠99Tcm-RES显像并测定%ID/g,研究99TcmRES在荷瘤裸鼠体内的分布.比较兔炎性反应和肿瘤模型显像结果.结果 (1)酒石酸钠及氢氧化钠为缓冲剂,氯化亚锡为还原剂,100 ℃水浴10 min,RES放化纯高达到85%;99Tcm-RES性能稳定,室温下放置6 h,放化纯仍达75%.(2)注射后0.5 h,99Tcm-RES多分布于心、肝、肾等血供丰富脏器,2 h血液的放射性(0.36%ID/g)降幅明显,仅相当于0.5 h(2.35%ID/g)的1/7;心、肝、肺的放射性降幅稍慢,但明显快于肿瘤;注射后0.5 h肿瘤放射性摄取为2.32%ID/g,6 h为1.54%ID/g,6 h后仍有超过60%的放射性滞留.99Tcm-RES注射后6 h肿瘤/血、肿瘤/心、肿瘤/肝、肿瘤/肺、肿瘤/脾和肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为5.31,1.88,1.57,3.58,4.16和5.92.(3)荷瘤鼠显像发现肿瘤部位明显浓聚99Tcm-RES,而201Tl、99Tcm-MIBI在肿瘤部位未见明显浓聚.(4)兔炎性反应和肿瘤模型显像示肿瘤部位放射性明显浓聚,而炎性反应部位放射性无明显浓聚,注药后6 h肿瘤/炎性反应部位放射性比值为3.12.结论 用放射性组合化学文库筛选出的小分子RES是一种与肿瘤高亲和力的多肽,有望成为一种肿瘤显像剂.
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99Tcm标记新型RGD环肽在神经胶质瘤动物模型的实验研究
目的 评价引入2个聚乙二醇(PEG4)对精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)环肽二聚体(Dimer:E[c(RGDfK)]2)体外受体结合亲和力和体内药代动力学特征的影响,以及99Tcm标记2PEG4-Dimer用于整合素αvβ3阳性肿瘤显像的前景.方法 用免疫组织化学实验测定U87MG人神经胶质瘤细胞以及肿瘤组织中整合素αvβ3的表达.通过U87MG细胞受体竞争结合实验测定RGD环肽单体c(RGDyK)、联肼尼克酰胺(HYNIC)-Dimer和HYNIC-2PEG4-Dimer对125I-c(RGDyK)的半数抑制浓度(IC50).采用无亚锡一步法制备99Tcm-HYNIC-Dimer和99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer,评价"TcmHYNIC-2PEG4-Dimer在荷U87MG瘤裸鼠的生物分布并进行γ显像.采用非配对t检验法对实验数据进行分析.结果 U87MG细胞和荷瘤裸鼠肿瘤组织中高表达整合素αvβ3.HYNIC-2PEG4-Dimer比c(RGDyK)和HYNIC-Dimer有更高的整合素αvβ3亲和力(IC50分别是0.8,27和2.4 nmol/L).99Tcm-HYNIC-Dimer和99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer的99Tcm标记率均＞95%,经Sep-Pek C18柱纯化后其放化纯＞99%.生物分布实验显示,2种标记物均主要经肾排泄,在注射后2h,肿瘤对99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer的摄取为99Tcm-HYNIC-Dimer的2.7倍[(5.71±0.96)%ID/g和(2.10±0.50)%ID/g],t=4.80,P＜0.05,与体外受体竞争结合实验数据相一致.γ显像结果显示,注射99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer后0.5 h肿瘤即清晰可见,随时间延长,体内放射性本底明显减低,显像对比度增高.结论 99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer有希望用于整合素αvβ3阳性肿瘤显像.
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抗ProGRP(31-98)单克隆抗体E-B5的131I标记及体内生物分布研究
目的 研究抗胃泌素释放肽前体(ProGRP)片段ProGRP(31-98)单克隆抗体E-B5的131I标记方法 以及标记抗体在正常小鼠体内的生物分布特点.方法 利用流式细胞仪检测人小细胞肺癌NCI-H446细胞株和肺腺癌A549细胞株(对照)ProGRP表达,对人小细胞肺癌组织切片进行免疫组织化学染色分析.采用氯胺T法进行131I-E-B5标记,利用纸层析法测定其标记率、放化纯和稳定性,细胞结合分析法测定标记抗体的免疫活性.将131I-E-B5注入正常昆明小鼠体内,对药物体内分布及药物代谢动力学进行研究.对荷小细胞肺癌裸鼠模型进行131I-E-B5放射免疫显像,观察移植瘤的显影情况.采用SPSS 13.0软件处理数据.结果 流式细胞仪测得处于对数生长期的NCI-H446、A549细胞ProGRP表达率分别为89%和12%,人小细胞肺癌组织切片免疫组织化学染色见明显的E-B5阳性细胞分布,并显示ProGRP表达在肿瘤细胞的细胞质内.131I-E-B5标记率为90.8%,放化纯为99.28%,在37℃水浴箱中放置24 h后放化纯仍>70%,和健康人血清充分混合后放置24 h放化纯为68.1%,对NCI-H446和A549的免疫结合率分别为71.6%和33.2%.131I-E-B5在小鼠体内过程符合一级血药动力学二室模型,t1/2α=0.2 h,t1/2β=8.35 h,在体内主要通过肝和肾代谢.注射131I-E-B5后72和96 h小细胞肺癌裸鼠移植瘤体显影清晰.结论 NCI-H446细胞株及人小细胞肺癌组织高表达ProGRP,E-B5对小细胞肺癌有较好的靶向作用.131I-E-B5标记率及放化纯高,在体内外有很好的稳定性,标记后的E-B5仍然保持着良好的免疫活性,对小细胞肺癌放免显像和治疗有潜在的应用前景.
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99Tcm标记RGD环肽四聚体在神经胶质瘤裸鼠模型中的显像研究
目的 制备99Tcm标记的含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列的环肽四聚体99Tcm-联肼尼克酰胺(HYNIC)-E{E[c(RGDfK)]2}2,评价其在整合素αvβ3表达阳性的荷人神经胶质瘤裸鼠模型的生物分布和显像.方法 以HYNIC为双功能螫合剂,以三羟甲基甘氨酸(tricine)和三苯基膦三磺酸钠(TPfffS)为协同配体,采用两步法制备99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)2}2.通过体外受体竞争结合实验比较e(RGDyK)单体、HYNIC-E[c(RGDfK)2二聚体和HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2四聚体与整合素αvβ3亲和力.生物分布实验数据显示,99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDtK)]2}2主要经肾排泄;注射后1h,肿瘤对99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2的摄取为99Tcm-HYNIC-E[c(RG-DfK)]2的2倍,分别为(10.32±0．07)％ID／g和(5.15±O.52)％ID／g,与体外受体竞争结合实验数据相一致;注射后4h,肿瘤对99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2的摄取仍达(9.35.4±1.35)％ID／g,表明标记物在肿瘤中的滞留时间足够长.r显像结果显示,注射后1h肿瘤清晰可见.注射后4h显像效果更佳.结论 99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2具有较高的肿瘤摄取和较长的肿瘤滞留时间,可以用于整合素αvβ3表达阳性肿瘤的显像;放射性核素(如90Y)标记的RGD环肽四聚体可用于整合素(αvβ3表达阳性肿瘤的治疗.
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99Tcm-RGD环肽二聚体的制备及其体内外评价
目的 评价99Tcm标记的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)环肽二聚体E[c(RGDfK)]2的体内外特性及其用于整合素αvβ3阳性肿瘤显像的可行性.方法 以三羟甲基甘氨酸(tricine)和三苯基膦三磺酸钠(TPPTS)作为协同配体,以联肼尼克酰胺(HYNIC)作为双功能连接剂,采用无亚锡一步法制备99Tcm-HYNIC-E[c(RGDfK)]2,通过U87人神经胶质瘤细胞测定其半数抑制浓度(IC50),观察其体外与整合素αvβ3受体的结合解离动力学、细胞内化及外化,评价其在荷人神经胶质瘤裸鼠的生物分布.结果 99Tcm-HYNIC-E[c(RGDfK)]2的标记率＞95%,经Sep-Pek C18柱纯化后其放化纯＞99%.与RGD环肽单体c(RGDyK)相比,HYNIC偶联的E[c(RGDfK)]2二聚体具有更高的整合素αvβ3亲和力,IC50分别为80.O和9.07 nmol/L.细胞实验显示,99Tcm-HYNIC-E[c(RGDfK)]2与整合素αvβ3结合较快,并迅速被受体介导内化.生物分布实验显示,99Tcm-HYNIC-E[c(RGDfK)]2主要经肾脏排泄,在注射后0.5和4 h,标记物在肿瘤的每克组织百分注射剂量率(%ID/g)分别为(2.46±0.66)和(3.10±0.35)%ID/g,标记物在肿瘤中的滞留时间足够长.γ显像示注射后1-h肿瘤清晰可见,注射后4 h显像效果更佳.结论 99Tcm-HYNIC-E[c(RGDfK)]2是一种有前景的用于整合素αvβ3阳性肿瘤显像的显像剂.
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99Tcm直接标记αvβ3受体拮抗剂环形RGD多肽
目的 探讨99Tcm直接标记αvβ3受体配体--含2个二硫键的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)-九肽(RGD-4CK)的可行性和不同标记条件对标记率的影响.方法 采用预锡化法99Tcm直接标记RGD-4CK,3 MM色谱纸层析测定99Tcm-RGD-4CK的Rf值,计算标记率与比活度.研究各种标记条件对99Tcm-RGD-4CK标记率的影响.通过高效液相色谱仪(HPLC)分析,Sep-Pak C18柱层析,进行体外稳定性实验、半胱氨酸置换实验以及血清蛋白结合实验,评价99Tcm-RGD-4CK的放射化学性质.结果 99Tcm-RGD-4CK在以丙酮和V(氨水)∶y(乙醇)∶V(水)=1∶2∶5为流动相中的Rf值分别为0与0.8～0.9,标记率为(97.8±0.4)%,基础标记条件下的比活度为(11.90±0.05)TBq/mmol.在以下条件下放化纯均＞95%:(1)酒石酸亚锡为150～300 μg;(2)预锡化反应pH值为2.0～3.5,温度60℃,保温时间6 h以上;(3)99TcmO4-活度为37～185 MBq,体积在200 μl内;(4)标记温度为95℃,标记时间30 min.99Tcm-RGD-4CK HPLC的保留时间与其洗脱液的放射峰基本一致;99Tcm-RGD-4CK室温放置6 h,放化纯仍＞95%;Sep-Pak C18柱层析测定的99TcmO4-峰仅比3 MM纸层析高0.5%;标记物与300 mmol/L半胱氨酸37℃保温1 h,99TcmO4-峰仅增加1.88%;99Tcm-RGD-4CK与血清蛋白无明显结合.结论 预锡化法99Tcm直接标记RGD-4CK方法简便、标记率高,无需分离纯化即可直接应用,还可用于制备冻干品药盒.标记产物99Tcm-RGD-4CK具有良好的放射化学性质.
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99Tcm-RGD-4CK在动物体内的分布及显像
目的 探讨99Tcm-环形精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸九肽(RGD-4CK)在健康小鼠体内的生物分布及在健康家兔体内的动态显像表现.方法 采用预锡化法以99Tcm直接标记RGD-4CK,3 MM色谱纸层析测定99Tcm-RGD-4CK标记率,并计算其比活度.研究99Tcm-RGD-4CK于1、5、20、60、90、120、180和240 min在健康小鼠体内的生物分布特性;通过SPECT显像,结合感兴趣区(ROI)时间-放射性曲线分析,观察240 min内99Tcm-RGD-4CK在健康家兔体内的动态分布变化.结果 99Tcm-RGD-4CK的标记率为(97.80±0.28)%,比活度为(11.91±0.04)TBq/mmol.小鼠血液放射性清除迅速,通过肾脏排泄较快,其余组织器官放射性均随时间逐渐降低,而脑放射性水平始终低.家兔各组织器官放射性均随时间逐渐下降,与同一时间肾、心、肝相比,肺、胃、肌肉放射性呈低水平;1 min双肾即显影,5 min心、肝影开始减淡,肺放射性分布均匀,强度低于肝脏,膀胱显影;5 min后膀胱影持续增浓,20min后软组织影逐渐减淡;胆囊始终未显影,腹部放射性呈持续低水平,胃区放射性始终缺损,颈部未见明显放射性浓聚.结论 99Tcm-RGD-4CK制备方法简便,标记率高,体内稳定性好,具有比较理想并符合实际的动物体内动力学表现.
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68Ga-DOTA-cRGD的制备及对荷肺腺癌裸鼠的显像研究
目的 制备68Ga-DOTA-环RGD(cRGD),评价其在正常小鼠体内的生物分布,并进行荷肺腺癌裸鼠的靶向显像.方法 以HEPES为缓冲体系(pH值5.0),水浴合成68Ga-DOTA-cRGD.采用HPLC法测定其标记率及放化纯,观察其在正常小鼠体内的生物分布.建立荷A549肺腺癌裸鼠模型,并行68 Ga-DOTA-cRGD microPET显像,勾画ROI,计算T/NT比值.用免疫组织化学及流式细胞术检测αvβ3表达水平.结果 68Ga-DOTA-cRGD的标记率为(97.8±0.1)％,标记后2h其放化纯仍高达95％.正常小鼠体内生物分布结果显示,该标记化合物血液清除迅速,5和120 min血液放射性摄取值分别为(1.65±0.85) ％ID/g和(0.06±0.02) ％ID/g,主要经肾脏排泄,肝、胃和肠道摄取较少.荷肺腺癌裸鼠microPET显像可见肿瘤部位有放射性浓聚影,注射68Ga-DOTA-cRGD后60 min的T/NT比值高达5.93±0.43.免疫组织化学及流式细胞分析结果均提示,肺腺癌瘤组织中有αvβ3表达.结论 68 Ga-DOTA-cRGD的标记率和放化纯高,体外稳定性好,生物分布特性良好,对αvβ3阳性肺腺癌具有较好的靶向诊断性.
