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益母草碱对缺血性脑损伤大鼠脑组织抗氧化应激及AQP4蛋白表达的影响
目的:探讨益母草碱对缺血性脑损伤大鼠脑组织抗氧化应激及水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法:成年SD大鼠随机分为假手术组,模型组,益母草碱10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg组.采用改良Longa线栓法建立脑缺血模型.造模2h后,各益母草碱治疗组分别腹腔注射10、20、40mg/kg,假手术组及模型组腹腔注射等体积的生理盐水.造模24h后比较各组脑组织伊文思蓝(EB)含量;检测脑组织中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量及抗氧化酶CAT的活性;Westem blot法检测脑组织中AQP4蛋白表达.结果:与模型组相比,各益母草碱治疗组大鼠脑组织EB、MDA、NO含量降低,CAT的活性增加,AQP4蛋白表达均较模型组显著减少(P＜0.05).结论:益母草碱对大鼠缺血性脑损伤的作用机制与提高脑组织抗氧化的能力及下调脑组织AQP4表达有关.
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益母草碱对缺血性脑损伤大鼠脑组织的保护作用
目的:探讨益母草碱对缺血性脑损伤大鼠脑组织的保护作用.方法:成年SD大鼠随机分为假手术组,模型组,10、20、40mg/kg益母草碱组.模型组和益母草碱组采用改良Longa线栓法建立脑缺血模型.造模2h后,腹腔注射不同剂量的益母草碱,模型组给予生理盐水腹腔注射.造模24h后,比较各组神经功能损伤评分、脑梗死体积比、脑组织含水量、MPO活性、TNF-α含量.结果:模型组大鼠神经功能损伤评分、脑梗死体积比、脑组织含水量、MPO活性、TNF-α含量表达均较假手术组明显提高,益母草碱各治疗组神经功能损伤评分、脑梗死体积比、脑组织含水量、MPO活性、TNF-α含量均较模型组均减少.结论:益母草碱对大鼠缺血性脑损伤有一定保护作用.
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益母草碱对慢性脑缺血大鼠白质损伤的神经保护研究
探讨益母草碱(leonurine,LN)对慢性脑缺血白质损伤的保护作用及其机制.方法:实验大鼠随机分为假手术组、模型组、益母草碱低、中、高剂量组,通过结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,腹腔注射不同剂量的LN,1次/d,连续给药30 d.利用卢卡斯快蓝染色法观察胼胝体髓鞘变化,TUNNEL法检测组织凋亡情况,免疫组织化学检测APC表达和westem blot法检测胼胝体Caspase-3蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠胼胝体髓鞘颜色变浅,髓鞘变稀疏,TUNEL染色阳性的凋亡细胞增多,少突胶质细胞数比例减少,Caspase-3表达增加.LN组大鼠髓鞘颜色加深,凋亡细胞数目明显减少,少突胶质细胞数比例增加,Caspase-3表达减弱.结论:LN可以有效减轻慢性脑缺血大鼠白质损害,其机理可能与抑制Caspase-3表达,减少细胞凋亡有关.
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益母草碱对肥大心肌细胞p38MAPK及下游基因表达的影响研究
目的:探讨益母草碱对肥大心肌细胞p38MAPK及下游基因表达的影响.方法:以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肥大心肌细胞,在此基础上给予p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580,10 μmol/L)及低、中、高浓度益母草碱(5、10、20 μmol/L)干预.分别以[3H]亮氨酸掺入量、酶联免疫吸附测定(ELISA)和硝酸还原酶法检测心肌细胞蛋白质合成速率以及细胞上清B型利钠肽(BNP)、内皮素-1(ET-1)、AngⅡ和一氧化氮(NO)含量;Real-time PCR法检测心肌细胞ET-1、p38MAPK、肌细胞增强因子2(MEF2)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、α-肌球蛋白重链(α-MHC) mRNA的表达水平.结果:与模型组比较,高剂量益母草碱组心肌细胞蛋白质合成速率、BNP、ET-1及AngⅡ含量明显降低(P＜0.05),同时ET-1、p38MAPK、MEF2、β-MHCmRNA表达水平明显下调(P＜0.05),而NO含量和α-MHC mRNA表达水平明显上调(P＜0.05).结论:高剂量益母草碱(20 μmol/L)可能通过调节p38MAPK及下游基因表达逆转心肌细胞肥大.
关键词： 益母草碱 心肌细胞肥大 p38丝裂原活化蛋白激酶 肌细胞增强因子2 -
骨髓间充质干细胞移植联合益母草碱治疗宫腔粘连
背景：大量动物实验表明骨髓间充质干细胞移植能够促进皮肤损伤、肝损伤、肺损伤的修复；益母草具有活血祛瘀、调经的功效。
目的：验证骨髓间充质干细胞移植联合益母草碱治疗兔宫腔粘连的作用并探讨其机制。
方法：采用双重损伤法建立新西兰大白兔宫腔粘连模型，实验随机分为5组：假手术组、宫腔粘连组、骨髓间充质干细胞组、益母草碱组和骨髓间充质干细胞+益母草碱组(联合组)。假手术组切开子宫后不作任何处理，生理盐水冲洗后关腹；骨髓间充质干细胞组与联合组在子宫缝合前将骨髓间充质干细胞局部移植至子宫组织内；益母草碱组与联合组分别在造模后灌胃益母草碱4 mg/kg，共14 d。苏木精-伊红染色观察子宫内膜形态学变化，免疫组织化学染色法检测组织中转化生长因子β、Smad3的蛋白表达变化，实时荧光定量PCR(qPCR)检测IFN-γ的mRNA表达变化。
结果与结论：①与宫腔粘连组相比，骨髓间充质干细胞组、益母草碱组与联合组的宫腔粘连程度减轻，其中以联合组宫腔粘连程度小；②与假手术组相比，宫腔粘连组的转化生长因子β、Smad3蛋白表达显著升高，干扰素γ的mRNA表达显著降低；与宫腔粘连组相比，骨髓间充质干细胞组、益母草碱组与联合组中转化生长因子β、Smad3蛋白表达显著降低，干扰素γ的mRNA表达显著升高，其中以联合组的变化程度大。③结果证实骨髓间充质干细胞移植联合益母草碱能够显著改善宫腔粘连；其作用可能与转化生长因子β/Smad3通路有关。 -
益母草化学成分的分离与鉴定Ⅱ
目的分离和鉴定益母草Leonurus japonicus Houtt.的水提物和醇提物化学成分.方法利用大孔树脂、硅胶柱色谱和HPLC进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定.结果得到4个化合物,分别鉴定为丁香酸(syringic acid,1)、megastigmane(2)、tiliroside(3)、益母草碱(leonurine,4).结论化合物1和2为首次从该属植物中分离得到.
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LC-MS/MS法测定复方益母草膏中有效成分的含量
目的 建立高效液相色谱-四级杆串联质谱法(LC-MS/MS)测定复方益母草膏中水苏碱和益母草碱的含量.方法 样品以甲醇超声提取后,采用色谱柱为Agilent ZORBAX C18(150 mm×4.6am,5 μ m),流动相为甲醇-体积分数为0.1％的甲酸溶液(体积比为80∶20),质谱采用ESI源正离子MRM模式下检测,流速为0.4 mL·min-1.结果 水苏碱的线性为14.0～140 μg·L-1,益母草碱的线性为1.50 ～ 15.0 μg·L-1,回收率均在92.1％～100.7％.结论 LC-MS/MS法适用于测定复方益母草膏中水苏碱和益母草碱的含量,同时为控制复方益母草膏的质量提供了依据.
关键词： 复方益母草膏 水苏碱 益母草碱 高效液相色谱-四级杆串联质谱法 -
对益母草成分及药理活性的研究
益母草为唇形科植物,中药益母草为植物新鲜或干燥的地上部分,性味苦、辛、微寒,归心、肝、膀胱经.1化学成分益母草的主要化学成分为生物碱类、黄酮类、二萜类、苯丙醇苷类、脂肪酸类、挥发油类、环型多肽等,并含有锌、铜、锰、铁、硒等多种微量元素.1.1生物碱类益母草含总生物碱,其中主要有益母草碱、水苏碱、益母草啶和益母草宁等.
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益母草叶和益母草梗中益母草碱含量的比较
目的:比较益母草叶和梗中的益母草碱的含量.方法:C18色谱柱,流动相:甲醇一缓冲液(85:15),缓冲液为醋酸/醋酸钠的pH=1.7的缓冲溶液.流速0.6mL·min-1,检测波长277nm,灵敏度0.1AUFS,柱温25℃.结果:益母草叶中益母草碱的含量为0.116%.益母草梗中益母草碱的含量为0.008%.结论:益母草的叶和梗中益母草碱的含量差别很大,且用高效液相色谱检测益母草碱,简便易行,结果准确可靠,为益母草及其制剂的质量控制奠定了基础.
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HPLC测定抗宫炎软胶囊中益母草碱的色谱条件的研究
目的:建立抗宫炎软胶囊中益母草碱含量测定方法.方法:通过实验,对三种不同色谱条件进行筛选研究.结果与结论:该方法稳定性强、重复性好、精密度高,是目前测定抗宫炎软胶囊中益母草碱含量的较好方法.
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HPLC法测定益母草药材、益母草颗粒及复方益母草膏中益母草碱的含量
目的:用HPLC测定益母草药材、益母草颗粒及复方益母草膏中的益母草碱的含量.方法:C18色谱柱,流动相:甲醇-缓冲液(85:15),缓冲液为醋酸/醋酸钠的pH=1.7的缓冲溶液.流速0.6mL·min-1,检测波长277nm,灵敏度0.1AUFS,柱温25℃.结果:益母草药材、益母草颗粒及复方益母草膏中的益母草碱的含量为0.015%、2.4%、2.1%.结论:高效液相色谱检测益母草碱,简便易行,结果准确可靠,为益母草及其制剂的质量控制奠定了基础.
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益母草碱对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响
目的 探讨益母草碱对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响.方法 大鼠随机分为假手术组,模型组,益母草碱低、高剂量组(4、8 mg/kg),通过结扎双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型.然后,进行新事物识别、Morris水迷宫实验,免疫荧光法检测胼胝体腺瘤性结肠息肉(APC)蛋白表达,Western blot法检测胼胝体受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)、炎性小体(NLRP3)蛋白表达.结果 与模型组比较,益母草碱高剂量组大鼠新事物识别能力显著上升(p＜0.05),逃避潜伏期显著降低(P＜0.05),穿越平台次数显著增加(P＜0.01).同时,益母草碱组APC表达增加,RIP3、NLRP3蛋白表达较模型组显著下降(P＜0.05).结论 益母草碱可有效改善慢性脑缺血大鼠认知功能,其机制可能调控缺血后炎症有关.
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益母草碱及其代谢物在大鼠体内的毒代动力学研究
建立了测定大鼠血浆中益母草碱(1)及其葡萄糖醛酸结合物(2)的LC-MS/MS方法.考察了大鼠单次和连续28 d灌胃给予低、中、高剂量1 (200、600和2 000 mg/kg)后1和2在体内的暴露水平,绘制药-时曲线并计算毒代动力学参数.单剂量试验表明,低、中、高剂量组1的AUC分别为(1.946±0.908)、(7.002±2.759)和(26.408±11.491)μmol·L-1·h,1在大鼠体内消除行为符合线性动力学模型.多剂量试验表明,低、中、高剂量组1的AUC分别为(2.987±1.089)、(9.083±3.140)和(20.178±7.484)μmol·L-1.h.长期大剂量灌胃给予1,1和2均未见在大鼠体内明显蓄积,且试验过程中未见大鼠有明显的毒性反应.
关键词： 益母草碱 益母草碱葡萄糖醛酸结合物 LC-MS/MS 毒代动力学 -
益母草碱在大鼠急性内毒素性葡萄膜炎模型中的保护作用
目的 建立SD大鼠急性内毒素性葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis,EIU)模型,研究益母草碱(leonurine,SCM-198)是否对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致眼部结构、功能损伤具有保护作用,并探讨其作用机制.方法 体重180～200 g正常雄性SD大鼠36只,随机分为3组.实验组:又分为4个亚组,分别以每日每千克体重10、20、40、80 mg的SCM-198生理盐水溶液灌胃,共21天;阴性对照组:每日以0.9％ NaCl溶液10 mL/kg体重灌胃;阳性对照组:以每日每千克体重0.5 mg的地塞米松(dexamethasone,DEX)磷酸钠生理盐水溶液灌胃.组间饲养无差异,每7天测体重.第18天灌胃后,全部大鼠全麻并充分暗适应后行全视网膜电图(electroretinogram,ERG)检测;第21天灌胃后以1 g/L的伤寒沙门氏菌(S.typhi)LPS生理盐水溶液0.1 mL 于全部大鼠左足底注射造模,造模后24 h行全麻下ERG检测,裂隙灯下行双眼炎症评分,取左眼房水-80℃冻存后处死动物,取右侧眼球固定后石蜡包埋切片,HE染色,光学显微镜下观察,免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色检测肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)表达水平;对留取的房水样本用BCA法测定蛋白浓度,Western blot检测房水TNF-α、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、ICAM-1水平;以SPSS 19.0软件处理所得数据,综合分析SCM-198对EIU模型大鼠的保护作用.结果 实验组、阴性对照组第21天时体重均显著高于阳性对照组(P＜0.05).实验组裂隙灯下炎症评分低于阴性对照组、高于阳性对照组;实验组病理切片炎症程度介于阴性对照组和阳性对照组之间;SCM-198 20 mg·kg-1·d-1组造模后0.01 cd下ERG a波波幅显著低于造模前(P＜0.05),亦低于其他组造模后;SCM-198 10 mg·kg-1·d-1组房水TNF-α、IL-6和IL-1β表达低于其他各组.结论 SCM-198灌胃对EIU模型大鼠具有抗炎保护作用,且常规剂量下未见明显全身不良反应;可在一定程度上保护视网膜功能,减轻炎症反应及葡萄膜结构损伤;NF-κB在其抗炎效应中地位重要.SCM-198对炎症相关性眼病治疗具有潜在价值,但佳给药方式、剂量等仍需进一步探索.
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脑脉利颗粒中芍药苷、益母草碱、黄芪甲苷及盐酸水苏碱含量测定
目的：建立脑脉利颗粒中芍药苷、益母草碱、黄芪甲苷及盐酸水苏碱的含量测定方法。方法：采用甲醇、酸水等不同的溶剂提取，并采用高效液相色谱法、液-质联用法等进行含量测定。结果：脑脉利颗粒中含有芍药苷4.241 mg·g-1，益母草碱0.173 mg·g-1，黄芪甲苷0.01 mg·g-1，盐酸水苏碱3.798 mg·g-1。结论：制剂中其他组分与所测定的各组分分离良好，不干扰测定。本法可用于脑脉利颗粒中芍药苷、益母草碱、黄芪甲苷及盐酸水苏碱的含量测定。
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益母草碱对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞线粒体分裂及其功能的影响
目的:探讨益母草碱对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)线粒体分裂及其功能的影响.方法:将HUVECs分为正常糖组、高糖组、益母草碱+高糖组、Mdivi-1+高糖组,采用罗丹明123法检测内皮细胞线粒体功能,Mitotracker染色评价线粒体分裂情况,定量PCR检测细胞基因表达情况,蛋白质印迹法检测细胞中Drp1的蛋白表达水平.结果:与正常糖组比较,高糖组细胞线粒体功能明显降低,线粒体分裂明显增加,Drp1的基因和蛋白表达水平明显增高.与高糖组比较,益母草碱+高糖组细胞线粒体功能明显增强,细胞分裂明显减少,Drp1的基因和蛋白表达水平明显降低.线粒体分裂抑制剂Mdivi-1+高糖组,效果与益母草碱+高糖组类似.结论:益母草碱可能通过调控Drp1依赖的线粒体分裂保护内皮细胞线粒体功能.
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益母草碱对多柔比星致小鼠肾损伤的保护作用
目的 益母草碱具有降脂、降低血黏度、改善微循环等生物学功能.文中探讨益母草碱对多柔比星肾病小鼠肾的保护作用机制.方法 将30只雄性Balb/C小鼠采用随机数字表法分为正常组(n=10)、模型组(n=10)和治疗组(n=10).模型组和治疗组一次性尾静脉注射多柔比星5.0 mg/kg,正常组注射等量等渗盐水.造模后第1天开始,治疗组予益母草碱50 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组予等量蒸馏水灌胃,共治疗6周后检测各组小鼠24 h尿蛋白定量、三酰甘油、血尿素、血肌酐、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平,ELISA法定量分析各组小鼠血清中转化生长因子(TGF)-β、IL-18、干扰素(IFN)-γ水平,并使用Western blot法检测SMAD2/3的磷酸化水平.结果 与正常组比较,模型组尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、三酰甘油及TGF-β、IL-18蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),SMAD3的磷酸化水平及其靶蛋白α-SMA显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,益母草碱组尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、三酰甘油水平以及MDA、TGF-β、IL-18、IFN-γ蛋白表达显著降低,SOD与GSH显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 益母草碱具有改善多柔比星引起的肾损害,其作用机制可能与其抑制多柔比星造成的肾氧化应激以及炎症有关.
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益母草碱对药物流产后大鼠子宫的作用研究
目的:研究益母草碱(leonurine)对药物流产后大鼠子宫的作用.方法:采用早孕大鼠灌服米非司酮(8.3 mg/kg)和米索前列醇(100μg/kg)造成不完全流产大鼠模型,观察益母草碱对该模型的出血量、出血时间及子宫形态的影响.用光镜观察子宫内蜕膜、绒毛的残留情况,用放免法检测血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平,用BL-420E生物技能实验系统和JH-2型肌张力传感器记录大鼠离体子宫平滑肌的收缩活动.结果:益母草碱能减少子宫出血量(P＜0.05),缩短出血时间(P＜0.01),明显减少宫内滞留物,增强子宫收缩活动;益母草碱组血清E_2水平显著高于模型组(P＜0.01).结论:益母草碱能明显抑制药物流产后大鼠子宫出血,其作用可能与血清E_2水平的显著提高及子宫收缩活动的增强有关.
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益母草碱药理作用的分子机制研究进展
益母草碱(Leonurine)是存在于中药益母草的特异生物碱.近年来,文献报道了许多关于益母草碱异于传统适应症的药理作用和机制研究,如心血管保护、中枢保护、抗糖尿病等作用,其机制可能与其抗氧化、抗细胞凋亡和调节线粒体功能和抗炎等作用有关.本文就益母草碱的这些药理作用及其作用机制作一简要综述,以促进益母草碱研究的开展及临床上更好的应用.
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基于核磁共振的益母草碱抗急性心肌缺血的代谢组学研究
目的 应用核磁共振(NMR)代谢组学技术研究急性心肌缺血以及益母草碱给药大鼠血浆中代谢物组的变化,探讨益母草碱抗心肌缺血作用的机制.方法 应用1H NMR分析假手术组、模型组、益母草碱给药组大鼠血浆代谢物组,应用模式识别多变量统计方法研究模型组与假手术组及给药组之间的代谢物组差异.结果 正交偏小二乘法-判别分析(OPLS-DA)结果显示,模型组与假手术组相比有6个代谢物(丙氨酸、赖氨酸、甘氨酸、肌酸、N-乙酰化及O-乙酰化糖蛋白)水平明显增加,而益母草碱干预治疗能明显降低模型组丙氨酸、赖氨酸、甘氨酸水平,并增加胆碱、磷酸胆碱、鲨肌醇含量.结论 益母草碱能通过纠正急性心肌缺血氨基酸代谢紊乱,上调胆碱以及肌醇代谢通路发挥心肌保护作用.该研究为评价益母草碱抗心肌缺血作用提供了有力分析手段,并为研究其作用机制提供新的思路.
