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金钗石斛中生物碱与多糖联合酶提工艺的优化
目的 优化金钗石斛中生物碱与多糖的联合酶提工艺.方法 以加酶量、酶解温度、酶解时间、料液比为影响因素,石斛碱、总生物碱、多糖含有量为评价指标,正交试验优化联合酶提工艺.结果 木瓜蛋白酶提取的佳条件为加酶量0.10g,酶解温度45℃,酶解时间2h,料液比1∶50,石斛碱、总生物碱、多糖含有量分别为3.495 5、4.341 8、35.898 7 mg/g;纤维素酶提取的佳条件为加酶量0.30 g,酶解温度50 ℃,酶解时间2h,料液比1∶40,3种成分含有量分别为3.514 8、4.351 3、36.331 2 mg/g;果胶酶提取的佳条件为加酶量0.45 g,酶解温度55℃,酶解时间2.5h,料液比1∶40,3种成分含有量分别为3.524 4、4.452 8、26.324 2 mg/g.结论 该方法稳定、可靠、快速,可用于联合酶提金钗石斛中生物碱与多糖.
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金钗石斛化学成分的研究
目的 研究金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.的化学成分.方法 金钗石斛95％乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到8个化合物,分别鉴定为毛兰素(1)、石斛酚(2)、拖鞋状石斛素(3)、毛兰菲(4)、4,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(5)、香豆素(6)、棕榈酸甲酯(7)、邻苯二甲酸二丁酯(8).结论 化合物1、3、5、6、7、8均为首次从该植物中分离得到.
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金钗石斛、环草石斛挥发性成分研究
目的:研究金钗石斛、环草石斛挥发性成分.方法:利用有机溶剂-水蒸汽蒸馏提取石斛挥发性成分,用GC/MS进行分离测定,结合计算机检索技术对分离化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量.结果:金钗石斛分离出109个成分,鉴定出63个化学成分,占挥发油总量的86.26%:环草石斛分离山63个成分,鉴出52个化学成分,占挥发油总量的87.48%.2种石斛挥发油成分中,含有10种相同成分.结论:首次报道利用有机溶剂-水蒸汽蒸馏法提取石斛挥发性成分,并对其进行定性定量研究.
关键词： 金钗石斛 环草石斛 有机溶剂-水蒸汽蒸馏 挥发油 气相色谱-质谱联用 -
自动电位滴定法测定金钗石斛药材中总生物碱的含量
目的:测定金钗石斛约材中总生物碱的含量.方法:药材以90%乙醇回流提取3次,醇提液浓缩至无醇味后以3%盐酸溶解,酸水溶液经强酸型阳离子交换树脂柱吸附,以去离子水洗脱至中性后,收集5%氨水50%乙醇液洗脱流份(以生物碱的检识反应判定终点)并浓缩至干,即得含量测定用供试品.供试品在冰醋酸中以高氯酸滴定液(0.1 moL/L)自动滴定,由此以石斛碱(C16H25NO2)为基准物计算金钗石斛中生物碱的含量(每1 mL高氯酸滴定液相当于石斛碱26.3mg).结果:三个批次金钗石斛药材的总生物碱含量测定结果分别为0.85%、0.63%、1.03%.结论:经方法学考察,该含量测定方法具有良好的专属性和灵敏度,检测结果稳定可靠,可用于金钗石斛药材中总生物碱的定量分析.
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金钗石斛总生物碱改善链脲佐菌素所致大鼠海马神经元损伤
目的 观察金钗石斛总生物碱(DNLA)对侧脑室内注射链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠海马神经元损伤的作用.方法 将50只雄性SD大鼠随机分为5组:空白对照组、空白给药组、模型组、低剂量组和高剂量组(每组n=10).双侧侧脑室注射STZ建立大鼠海马神经元损伤模型,空白给药组、高剂量组每日1次灌胃DNLA 40 mg·kg-1,低剂量组每日1次灌胃DNLA 20 mg·kg-1,空白对照组及模型组灌胃等体积溶媒,连续给药28 d.Nissl染色观察海马神经元存活情况,Western blot检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、Tau蛋白、蛋白磷酸酶2A-α(PP2A-α)蛋白表达以及p-Ser9-GSK-3β、pY216-GSK-3β、p-Ser 199-Tau、p-Ser396-Tau、p-Ser404-Tau、p-Ser422-Tau、p-Thr231-Tau水平.结果 模型组较空白对照组大鼠海马CA3区存活神经元数目明显减少(P＜0.01),海马p-Ser9-GSK-3β水平降低(P＜0.05),p-Ser 199-Tau、p-Ser396-Tau、p-Ser404-Tau、p-Ser422-Tau、p-Thr231-Tau水平增高(P＜0.05).高剂量组较模型组大鼠海马CA3区存活神经元数目明显增加(P＜0.01),海马p-Ser9-GSK-3β水平上调及p-Ser 199-Tau、p-Ser396-Tau、p-Ser404-Tau、p-Ser422-Tau、p-Thr231-Tau水平降低(P＜0.05).结论 DNLA明显改善STZ诱导的大鼠海马神经元的损伤和丢失,并可激活GSK-3β,抑制Tau蛋白过度磷酸化.
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金钗石斛遗传多样性研究的ISSR-PCR反应体系建立与优化
目的:对影响金钗石斛ISSR-PCR扩增效果的一些因素进行优化,为进一步研究其遗传多样性奠定基础.方法:通过筛选引物并设定影响金钗石斛ISSR反应诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立金钗石斛ISSR稳定可靠的反应体系.结果:金钗石斛较适宜的ISSR-PCR反应条件为:10μl PCR 反应体系,含5～15 ng模板DNA、2.0 mmol/L Mg2+、0.20 mmol/L dNTP、0.6～0.75 U Taq DNA聚合酶、1.0μmol/L引物.较适宜的退火温度为46～62℃.结论:Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度等对ISSR反应结果具有较大影响.所建立的金钗石斛ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可用于金钗石斛的遗传多样性研究.
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金钗石斛提取物对慢性不可预见应激模型小鼠的抗抑郁作用
为了探讨金钗石斛提取物对慢性不可预见应激模型小鼠的抗抑郁作用,将BALB/c小鼠分为6组,即正常组、模型组、阳性药组(帕罗西汀),金钗石斛低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组,灌胃给药两周后,除正常组外,其他组给予慢性不可预见性应激造模35天.造模结束后,通过糖水偏爱、新奇抑制摄食、强迫游泳实验和悬尾实验检测其行为学改变,采用LC-MS/MS测定各组小鼠应激后海马及皮层单胺类神经递质包括多巴胺(dopamine,DA)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量改变.结果显示,与正常组相比,模型组小鼠糖水偏爱指数下降(P＜0.01);与模型组比较,金钗石斛各剂量组可显著逆转模型小鼠出现的糖水偏爱指数下降(P＜0.01),其作用与阳性药帕罗西汀相当;与正常组相比,模型组小鼠新奇抑制摄食潜伏期延长(P＜ 0.01);与模型组比较,金钗石斛各剂量组均可显著缩短新奇抑制摄食潜伏期(P＜0.01);与正常组相比,模型组小鼠悬尾的不动时间明显延长(P＜0.01),与模型组比较,帕罗西汀及200 mg/kg金钗石斛均可缩短悬尾的不动时间(P＜0.05);与正常组相比,模型小鼠在强迫游泳实验中不动时间无明显延长,各给药组的不动时间也未见明显改变(P＞0.05).与正常组相比,模型组小鼠皮层和海马中的DA和5-HT含量明显减少(P＜0.05);帕罗西汀能使模型小鼠海马和皮层DA、海马5-HT含量明显增加(P＜0.05);金钗石斛低、高剂量组皮层DA含量与模型组相比显著性升高(P＜0.05),金钗石斛中、高剂量组海马DA含量与模型组相比显著性升高(P＜0.05);金钗石斛高剂量组皮层和海马5-HT含量显著高于模型组(P＜0.05),但金钗石斛中剂量组仅海马5-HT含量显著高于模型组(P＜0.01).以上结果提示,慢性不可预见应激可导致小鼠的类抑郁样行为出现,而金钗石斛提取物能有效改善慢性不可预见应激模型动物的抑郁样行为学表现,并提高小鼠脑内的DA和5-HT水平.
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金钗石斛内生菌CPU0029的诱变及其次级代谢产物的纯化
以实验室筛选得到的产生物碱的金钗石斛内生菌CPU0029为出发菌株,为了提高生物碱产量对其进行紫外及亚硝酸钠复合诱变,筛选出1株正突变菌株；运用正交实验的方法对发酵液中生物碱成分进行提取优化,后采用薄层、气相方法进行检测.结果:通过复合诱变筛选出的正突变株,生物碱产量达到6.9mg/L,比出发菌株高出63％,且其遗传性状较稳定；通过提取纯化,该生物碱纯度提高了70.6倍.
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金钗石斛对糖尿病大鼠肾组织中糖基化终产物表达的干预作用
目的 研究金钗石斛对糖尿病(DM)大鼠肾组织中肾脏糖基化终产物受体(RAGE)表达的干预作用.方法 将Wistar大鼠随机分3组,用链脲佐菌素(STZ)建立DM模型,金钗石斛水煎剂10 g/(kg·d)灌胃给药12周后,肾组织病理切片HE染色观察肾组织病理变化;生化法测定血糖、尿蛋白、肌酐浓度;荧光光谱法测定尿液和血清糖基化终产物(AGE)含量;免疫组化检测肾组织RAGE蛋白;实时荧光定量PCR检测肾组织RAGE mRNA表达.结果 金钗石斛可降低DM模型大鼠血糖,减轻肾脏损害,降低血清中AGE以及肾组织RAGE mRNA和蛋白表达水平.结论 金钗石斛干预减轻DM肾脏功能损害可能通过降低血清中AGE和下调肾组织中RAGE表达而实现.
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赤水金钗石斛rDNA ITS序列分析
目的:对赤水金钗石斛ITS序列进行序列测定与分析,探讨赤水金钗石斛在ITS片段上的遗传特征,提高道地药材赤水金钗石斛在分子水平的鉴定标准.方法:用特异引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后用双脱氧终止法(Sangerdideoxy)测序. 结果:通过与基因库登录的金钗石斛ITS对照,赤水金钗石斛ITS1与ITS2序列的起止范围分别为1～231 bp和395～636 bp.赤水金钗石斛在8位缺失碱基C,在12位缺失碱基A,在82位为碱基A;据此,以NJ法(邻接法)构建了系统树.测序结果登录基因库,序列号:EF618732.结论:金钗石斛ITS1序列基因多态性比ITS2序列更显著;该实验结果为道地药材赤水金钗石斛的物种鉴定补充了新的遗传数据.
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金钗石斛多糖的提取及部分理化性质分析
金钗石斛(Dendrobium nobile)为兰科石斛属多年生附生草本植物[1],是我国传统名贵中药,金钗石斛有益胃生津、延年益寿、抗衰老、抗肿瘤和增强机体免疫力等作用[2].
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4种药用石斛对增强小鼠免疫功能效果的比较研究
目的 比较铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛和流苏石斛4种药用石斛对增强小鼠免疫功能的效果.方法 4种石斛以0.25,0.50 g·kg-1连续给予正常小鼠30 d后,测定小鼠的T淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬率和吞噬指数;4种石斛以0.25,0.50 g·kg-1连续给予受环磷酰胺免疫抑制的小鼠30 d后,显微镜下用细胞计数法计数免疫抑制小鼠血液中的白细胞数、淋巴细胞数和中性粒细胞数.结果 4种石斛0.25,0.50 g·kg-1剂量均能显著增强T淋巴细胞增殖能力,并显著增加血液中的淋巴细胞数和巨噬细胞吞噬指数;铁皮石斛0.25,0.50 g·kg-1剂量均能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬率、血液中的白细胞数、中性粒细胞数;鼓槌石斛和流苏石斛0.50 g·kg-1剂量能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬率和血液中的白细胞数;金钗石斛0.50 g·kg-1剂量能显著升高血液中的白细胞数.结论 4种石斛均能增强小鼠免疫功能,但铁皮石斛在增强巨噬细胞吞噬能力及提高免疫抑制小鼠血液中的中性粒细胞数方面效果优于另外3种石斛.
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金钗石斛的化学成分和药理作用研究进展
目的 对金钗石斛的化学成分和药理作用进行总结分析.方法 通过查阅中国期刊全文数据库(CNKI)和万方数据库2000-2013年的相关文献,对金钗石斛已报道的化学成分和药理作用进行了研究分析,总结阶段性进展和研究热点,并分析其原因.结果 金钗石斛主要化学成分为生物碱、多糖、倍半萜类、菲类、联苄类等,石斛碱是其特征性成分,主要有抗白内障、兴奋肠管、免疫调节、降血糖、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳等作用.结论 目前金钗石斛的研究仍侧重于化学成分与药理作用的研究,将来研究的重点可能为作用机制的明确和一些保健品的研发.
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金钗石斛试管苗繁育技术操作规程(草案)
1 范围本部分规定了金钗石斛试管苗的繁育、炼苗环境、适宜条件及出瓶苗、出圃苗的质量分级.
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不同极性石斛生物碱的提取分离工艺研究
目的 提取分离不同极性的金钗石斛生物碱.方法 金钗石斛经提取、浓缩、萃取等不同过程,得到脂溶性生物碱、弱极性生物碱、低极性生物碱及水溶性生物碱.结果 确定金钗石斛生物碱提取率的佳条件为,80%乙醇提取3次,每次3 h.结论 本方法能较好地分离不同极性的石斛生物碱,为生物碱的开发利用奠定了基础.
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金钗石斛超微粉增强免疫力作用研究
目的 研究不同粒径金钗石斛超微粉细胞破壁率及增强免疫力作用,为金钗石斛资源的开发利用提供依据.方法 采用细胞计数法测定细胞破壁率;采用免疫器官重量法和碳粒廓清试验法测定小鼠免疫功能.结果 金钗石斛300目和400目超微粉的细胞破壁率分别达到93.6％和97.8％.金钗石斛200目超微粉能够显著增加小鼠的免疫器官指数,但廓清指数K和吞噬指数α与空白组之间无显著性差异;400、600、800目的金钗石斛超微粉能显著增加小鼠免疫器官指数、廓清指数K和吞噬指数α,但不同粒径超微粉之间的差异不显著.400目金钗石斛与黄芪破壁粉配合使用,低、中、高剂量组小鼠免疫能力都相应提高.结论 金钗石斛400目超微粉的破壁效果及增强免疫作用较好;金钗石斛与黄芪破壁粉配合使用能提高增强免疫力的作用.
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金钗石斛提取物抗白内障的体外实验研究
目的 研究金钗石斛总生物碱和粗多糖对白内障的抑制作用.方法 采用溶荆提取法分离提取金钗石斛总生物碱和粗多糖;DMEM低糖培养基体外培养Wistar大鼠晶状体,将晶状体分为7个组,分别在培养后6、12、18、24 h四个时段观察并记录晶状体混浊度的改变;后,检测各组晶状体水溶性蛋白、GSH的含量、及T-SOD和MDA的活性.结果 在培养的各个时段,正常对照组晶状体始终保持透明,各药物组晶状体混浊度与模型组相比明显较轻(P＜0.05),而石斛总生物碱高剂量组和阳性对照组混浊程度轻;金钗石斛总生物碱组、粗多糖组晶状体水溶性蛋白、GSH含量及T-SOD活性均升高,同时MDA的活性降低;其中总生物碱高剂量组晶状体水溶性蛋白含量显著高于阳性对照组水平(P＜0.05),其MDA活性则显著低于阳性对照组(P＜0.05).结论 金钗石斛总生物碱和粗多糖在体外均有一定的抗白内障之效,而总生物碱的效果优于粗多糖.
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5种正品石斛的鉴别
目的增补鉴别5种正品石斛方法.方法采用显微与薄层色谱法的鉴别.结果与结论更准确地对5种正品石斛提供检验依据.
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石斛多糖的含量测定
金钗石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物[1],石斛多糖是其主要活性成分,具有降血糖、抗衰老、增强机体免疫力等作用[2～4].我们对金钗石斛的多糖进行了含量测定,以此作为石斛质量评价的依据.
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金钗石斛水提物对糖尿病大鼠肾组织非酶糖基化及氧化的影响
目的 观察金钗石斛(Dendrobium nobil Lindl,DNL)水提物对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾组织非酶糖基化和氧化应激的影响,探讨DNL对糖尿病大鼠肾脏的保护作用.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导DM大鼠模型,分为正常对照组(N组),糖尿病对照组(DM组),金钗石斛低(DNLL)、中(DNLM)、高(DNLH)剂量组和氨基胍(aminoguanidine,AG)对照组(AG组),给药12周.分别检测血糖、血尿素、肌酐、糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)、尿肌酐、24 h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织总超氧化物歧化酶( superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.透射电镜观察肾组织超微结构变化.结果 DM组大鼠血糖、血尿素、24 h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织MDA含量显著高于N组(P＜0.05)；肌酐清除率、肾组织总SOD活性显著低于N组(P＜0.05)；DM组大鼠系膜扩张明显异常,基底膜明显增厚.DNL明显降低DM大鼠血糖、血尿素、24 h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织MDA含量(P＜0.05),明显增加肌酐清除率(P＜0.05)、增强肾组织总SOD活性(P＜0.05)、减轻肾系膜的扩张和基底膜的增厚.结论 DNL能降低血糖、抑制AGEs的形成、抑制氧化应激的发生,从而阻止或延缓糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发生发展.
