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以13C-亮氨酸作为示踪剂测定兔烧伤后整体蛋白代谢水平的改变
目的:以13C-亮氨酸作为示踪剂,测定兔烫伤后整体蛋白代谢水平的改变.方法:新西兰兔20只,随机分为烧伤组和对照组.适应性喂养3 d后,烧伤组建立15%体表面积的Ⅲ度烧伤模型,对照组仅给予麻醉药和抗生素.烫伤后继续喂养7 d后行颈动静脉插管及气管切开插管,然后经颈静脉给予NaH13CO3首剂量10 μmol/kg加维持量10 μmol/(kg·h)2 h.再改为13C-亮氨酸首剂量4.2 μmol/kg加维持量4.2 μmol/(kg·h)3 h.收集不同时间点的颈动脉血样和呼气样本,分别测定其中a-酮异己酸和二氧化碳的13C丰度,后根据公式计算出整体蛋白质的分解速率、合成速率及氮平衡情况.结果:与对照组相比,烧伤组的亮氨酸总更新速率和氧化速率明显升高,分别增加92.3%和175.0%.说明机体整体蛋白分解速率增加、负氮平衡加重(P＜0.01);烧伤组整体蛋白合成速率较对照组虽有增加趋势[(4.1±1.5)g/(kg·d)比(2.7±0.9)g/(kg·d)],但无统计学意义(P=0.15).结论:①成功建立兔高分解代谢模型,烧伤后整体蛋白分解加剧、负氮平衡显著;②13C-亮氨酸示踪法是一种可行的测定整体蛋白质代谢水平的方法.
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胰腺癌组织中差异表达蛋白的筛选与鉴定
目的:筛选并鉴定胰腺癌组织中的差异表达蛋白,并探讨其临床意义.方法:应用双向凝胶电泳技术对12对胰腺癌组织和癌旁组织样品进行分析,筛选出差异表达蛋白质;应用MALDI-TOF-MS/MS技术对差异表达蛋白质进行鉴定.结果:优化的胰腺组织双向凝胶电泳技术具有良好的分辨率和可重复性;应用双向凝胶电泳技术筛选出胰腺癌组织中30个差异表达蛋白质;应用MALDI-TOF-MS/MS技术鉴定了胰石蛋白、钙囊素、热休克蛋白B6等24个蛋白质,其中15个蛋白质在胰腺癌组织中表达上调,9个蛋白质表达下调.结论:双向凝胶电泳、生物质谱等蛋白质组学技术在胰腺癌的基础研究中有重要价值和应用前景,有助于筛选蛋白标志物和阐明分子发病机制.胰腺癌组织中有多个异常表达蛋白质,这些蛋白质与胰腺癌的发生相关,可能成为胰腺癌蛋白标志物和药物治疗的靶蛋白.
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双向电泳分析精索静脉曲张不育患者精子蛋白质的表达差异
目的：比较分析正常生育男性与精索静脉曲张（varicocele, VC）不育患者差异表达的精子蛋白质。方法应用计算机辅助精子分析系统行精液分析，采取Percoll密度梯度离心法提取正常生育男性与VC不育患者精子，利用双向电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）分离精子蛋白质，建立并优化精子蛋白质2-DE图谱，利用PDQuest8.0软件分析两组蛋白质的差异表达。结果正常生育组精子活力高于VC不育组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），两组精子密度比较差异无统计学意义（P＞0.05）。获得了分辨率和重复性均较好的2-DE图谱，两组差异点共36个，VC不育组有11个蛋白位点表达上调，19个蛋白位点表达下调，2个在VC不育组特异性表达，4个在正常生育组特异性表达。结论 VC不育患者与正常生育男性的精子蛋白存在差异，这些差异蛋白质的分离为深入探讨VC导致不育的分子机制奠定了基础。
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较小剂量131Ⅰ联合中药治疗Graves病后血清sFas/sFasL变化及其与TRAb关系的探讨
目的:探讨Graves病(GD)用较小剂量131Ⅰ联合中药治疗前后血清sFas/sFasL(可溶性细胞凋亡因子-1/sFas配体)变化的规律及其与TRAb的关系.方法:31例GD患者,用较小剂量131Ⅰ(85.1～207.2MBq,平均140.6MBq)联合中药进行治疗,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GD患者治疗前及治疗后不同时期血清sFas与sFasL含量,求出sFas/sFasL,并与正常对照组对比,分析GD患者血清sFas和sFasL含量,求出sFas/sFasL,并与正常对照组对比,分析GD患者血清sFas和sFasL与TRAb的相关关系.结果:①GD患者治疗前sFas(179.8±64.2)pg/ml明显高于临床治愈期(104.2±23.5)pg/ml,P＜0.05和正常对照组(110.6±18.1)pg/ml,P＜0.05,甲低时的sFas(117.0±20.6)pg/ml与正常对照比无显著性差异.sFasL治疗前(353.8±92.8)pg/ml同样明显高于临床治愈期(261.1±85.3)pg/ml,P＜0.05和正常对照组(265.6±62.1)pg/ml,P＜0.05.甲低时的sFasL(257.1±55.3)pg/ml与正常对照比无显著性差异.②GD患者治疗前的sFas/sFasL(0.51±0.23)和甲低时(0.46±0.13)皆大于正常对照(0.41±0.16,P＜0.05).sFas和sFasL皆与TRAb呈正相关(r分别为0.52和0.49,P＜0.05).③较小剂量131Ⅰ联合中药治疗GD近期疗效良好,有效率100%(31/31),一次性治愈率74.2%(23/31),总治愈率83.9%(26/31).结论:131Ⅰ联合中药治疗后sFas与sFasL呈规律性变化,治疗前和出现甲低时sFas呈优势表达,间接提示细胞凋亡与GD的治疗转归密切相关.TRAb可作为GD诊断和疗效观察的良好指标.
关键词： Graves 病碘放射性同位素 蛋白质类 中药 促甲状腺激素受体抗体 -
多肽及蛋白质类药物肺部给药的现状与展望
肺部给药与传统的注射给药及其他一些给药途径相比,在患者顺应性和生物利用度方面具有明显的优势,目前已有数种肺部给药制剂进入临床研究阶段.多肽及蛋白质类药物的肺部给药具有诱人的发展前景.
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用鲎试剂检测蛋白质和多肽类药品细菌内毒素的国内研究概况
目的:介绍国内应用鲎试剂法检测蛋白质和多肽类药品细菌内毒素的研究情况,为同行提供参考.方法:以1998～2000年国内公开发表的论文为基础进行分析.结果:发现国内对蛋白质和多肽类药品细菌内毒素检查发展迅速,有不少药物如沙赛普肽和脑组织注射液是首次公开发表的.结论:启示药检部门应加快蛋白质和多肽类药品细菌内毒素检查的研究步伐与论证工作,为更多品种改用有效的细菌内毒素检查法创造条件.
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肥胖基因蛋白的研究进展
肥胖基因蛋白(Leptin简称Lep)是由肥胖基因(OB基因)编码并由脂肪细胞分泌的一种蛋白质,它是脂肪细胞传递大脑有关脂肪组织储存能量情况的信号,能减少能量摄取,增加能量消耗,抑制脂肪合成,从而达到减肥目的.另外,该药耐受性好,无系统或局部反应,无明显不良反应.
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马拉色菌外分泌物的研究进展
马拉色菌为人体皮肤常住菌,亦是条件致病菌.马拉色菌与花斑糠疹、马拉色菌毛囊炎、特应性皮炎、头皮屑、脂溢性皮炎及银屑病等多种皮肤病相关.马拉色菌在生长繁殖过程中会产生多种外分泌物,包括蛋白质及代谢产物等.近年研究多集中在马拉色菌外分泌蛋白中,其中脂肪酶、蛋白酶、磷脂酶、脂氧合酶、过氧化氢酶和酸性磷酸酶等酶类物质的种类、数量、活性可能与马拉色菌的致病相关.马拉色菌外分泌性代谢产物研究较少,malassezin、吲哚[3,2?b]咔唑、β咔啉生物碱等代谢产物与生物体的功能变化有直接的联系.马拉色菌外分泌物的研究,对阐明马拉色菌的致病机制具有指导意义,可能为治疗提供新思路.
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单次化疗后肿瘤99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布与Survivin、Caspase-3蛋白表达的相关性研究
目的 评价99Tcm-重组人膜联蛋白Ⅴ(rh-Annexin Ⅴ)显像检测单次化疗后肿瘤细胞凋亡的可行性,探讨其在肿瘤组织的分布与凋亡调控蛋白Survivin、Caspase-3表达的相关性.方法 采用99Tcm直接标记法标记rh-Annexin Ⅴ,作为核素凋亡显像剂.将小鼠肝癌细胞Hca-F25接种于小鼠右腋窝皮下;区组随机化分为A(对照组,9只)和B(化疗组,10只)组,肿瘤生长至直径约1 cm时,B组一次性接受环磷酰胺腹腔内注射,剂量为按体质量150 mr,/kg,A组注射同体积生理盐水;20 h后2组同时由鼠尾静脉注入99Tcm-rh-AnnexinⅤ;4 h后行SPECT显像并处死、取肿瘤组织,用井型γ闪烁计数器检测荷瘤小鼠肿瘤组织内放射性分布,以每克组织百分注射剂量率(%ID/g)表示.采用原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡;采用免疫组织化学SP法检测标本中Survivin、Caspase-3蛋白表达.采用SPSS 10.0软件对数据进行统计学处理.结果 单次化疗后B组肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布[(0.478±0.123)%ID/g]、TUNEL检测阳性细胞数[(18.030±5.600)个/视野]及caspase-3蛋白表达[(3.266±0.482)%]均明显高于A组[分别为(0.332±0.061)%ID/g,(6.744±2.325)个/视野,(2.387±0.387)%],A组Survivin蛋白表达[(4.227±0.636)%]明显高于B组[(3.407±0.519)%],差异有统计学意义(F值依次为10.502,31.507,18.971,9.560,P均＜0.01).相关性研究表明,肿瘤组织的放射性摄取(%ID/g)与TUNEL阳性细胞数呈明显正相关(r=0.858,P=0.000);肿瘤组织内Survivin蛋白表达与Caspase-3蛋白表达呈明显负相关(r=-0.818,P=0.000);肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布与Caspase-3蛋白表达呈明显正相关,与Survivin蛋白表达呈明显负相关(P＜0.01).结论 肿瘤组织内99Tcm-rh-AnnexinⅤ的分布可以反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及Survivin、Caspase-3表达水平的变化.
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S100B蛋白及其脑损伤相关指标与新生儿缺氧缺血性脑病的关系
目的 探讨新生儿血浆S100B蛋白及脑损伤相关指标肾上:腺髓质素(ADM)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脑型肌酸激酶同功酶(CK-BB)与缺氧缺血性脑病(HIE)的关系及意义.方法 选择54例临床诊断为HIE的新生儿,在出生12 h时抽血检测血浆S100B、ADM、NSE和CK.BB水平,与47例非HIE窒息新生儿和22名健康新生儿的血浆上述指标水平进行方差分析,两两比较采用成组设计资料t检验,采用Spearman线性相关分析法分析HIE新生儿血浆S100B蛋白与其他各指标间的关系.结果 出生12 h时HIE患儿血浆S100B为(0.93±0.43)μg/L,ADM为(144.12±18.55)ns/L,NSE为(32.76±18.92)μg/L,CK-BB为(52.89±21.49)U/L,高于窒息组的(0.34±0.16)μg/L,(106.48±20.62)ng/L,(11.22±3.31)μg/L和(20.87±11.55)U/L,也高于对照组的(0.27±0.10)μg/L,(96.51±20.86)ng/L,(9.96±2.41)μg/L和(20.93±11.24)U/L(F>44.740,P均<0.01);相关性分析显示HIE患儿血浆S100B水平与ADM、NSE、CK-BB呈正相关(r=0.429,0.694和0.503,P均<0.01).结论 HIE患儿出生12 h时血浆S100B、ADM、NSE和CK-BB水平能预示HIE患儿的脑部是否有缺血性损伤,且该4项指标关联度高,有助于HIE的早期诊断和预后判断.
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Graves病131I治疗后血清sFas含量变化
目的探讨Graves病(GD)131I治疗前后血清可溶性细胞凋亡相关蛋白Fas(sFas)的变化特点及其临床意义.方法用固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测61例GD患者131I治疗前及治疗后不同时期血清sFas含量,并与对照组比较.结果①GD患者sFas含量为(174.8±94.6) pg/ml,明显高于对照组[(96.6±10.2) pg/ml,P<0.01];与131I治疗前组相比,缓解期组sFas含量[(132.8±34.0) pg/ml]下降,但差异无显著性(P>0.05),临床治愈组sFas含量[(111.2±13.2) pg/ml]进一步下降,差异有显著性(P<0.05);甲状腺功能减退(甲低)组患者sFas含量[(101.8±16.3) pg/ml]低,差异有显著性(P<0.01).②sFas与GD患者甲状腺激素(TH),包括TT3、TT4、FT3和FT4及促甲状腺激素受体抗体(TRAb)呈正相关(r=0.37～0.59,P<0.05),与年龄、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺微粒体抗体(TMAb)等无明显相关关系.结论 GD患者体内存在sFas异常表达,131I治疗后不同时期内sFas含量呈规律性变化.
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头花蓼对幽门螺杆菌结构及生长代谢的影响
目的 头花蓼对幽门螺杆菌(H.pylori)国际标准测序株ATCC700392、H.pylori驯化株SS2000及临床常见耐药株均存在较好的抗菌活性.文中观察头花蓼对H.pylori ATCC700392形态结构、生长代谢相关基因hopE、fur、gyrA mRNA及蛋白表达的影响,进一步探讨头花蓼对H.pylori的抗菌机制.方法 将实验所用H.pylori分为对照组(不含头花蓼培养基培养的H.pylori ATCC700392)和实验组(含2 g/L头花蓼培养基中培养的H.pylori ATCC700392).分别运用光镜、扫描电镜及透射电镜观察头花蓼处理前后H.pylori形态结构的改变,同时采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测头花蓼作用前后H.pylori生长代谢相关基因hopE、fur、gyrA mRNA及蛋白表达差异.结果 头花蓼作用后,H.pylori球变能力减弱,菌体表面出现凹陷、打孔、断裂甚至崩解现象,细胞质分布不均匀,细胞内出现高密度物质;与对照组比较,实验组H.pylori hopE mRNA及HopE蛋白均明显升高[(1.000±0.000)vs(4.330±0.450),(1.000±0.000)vs(2.260±0.033),P<0.05],fur、gyrA mRNA表达及Fur、GyrA蛋白表达均明显降低(P<0.05).结论 头花蓼可通过减弱H.pylori的球变能力、破坏H.pylori的正常形态结构以及影响H.pylori生长代谢相关基因及蛋白的表达,发挥其抗菌作用.
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人核糖核酸酶抑制因子对小鼠B16黑素瘤的基因治疗研究
目的观察人核糖核酸酶抑制因子(RI)逆转录病毒真核表达载体(pLNCX-ri)对小鼠B16黑素瘤生长的抑制作用.方法将转染细胞PA317-pLNCX和PA317-pLNCX-ri分别置于DMEM培养基上,经G418筛选培养.用Sepharose CL-4B凝胶过滤层析纯化病毒颗粒.经G418筛选培养,在倒置相差显微镜下计数克隆细胞数.用RT-PCR方法和Western blotting方法检测被感染的NIH3T3细胞及B16黑素瘤组织中RI基因的表达.给接种B16黑素瘤细胞的C57BL/6J小鼠分别皮下注射纯化的pLNCX-ri病毒和空载体病毒,观察C57BL/6J小鼠肿瘤的生长状况,并对肿瘤组织称重.镜下观察肿瘤组织切片的血管密度.结果 RI在感染了pLNCX-ri病毒的NIH3T3细胞和B16黑素瘤组织中得到有效表达.pLNCX-ri病毒治疗组的瘤组织重量(0.60±0.26)g明显低于pLNCX病毒对照组(1.84±1.64 )g(P<0.01)和生理盐水对照组(1.77±1.13 )g(P<0.01).pLNCX病毒对照组(1.84±1.64 ) g和生理盐水对照组(1.77±1.13 ) g无显著性差异(P>0.05).与pLNCX病毒对照组和生理盐水对照组相比,pLNCX-ri病毒治疗组肿瘤组织的血管密度明显减少,而两对照组间无明显差异.结论人核糖核酸酶抑制因子(RI)对小鼠B16黑素瘤的生长有明显的抑制作用.
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胃癌组织COX-2、bcl-2和ki-67的表达及其临床意义
目的探讨环氧合酶-2(COX-2)、bcl-2和ki-67基因蛋白在胃癌及不典型增生中的表达及意义.方法采用免疫组化染色(S-P方法)检测上述基因蛋白.结果浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、早期胃癌及进行期胃癌的COX-2基因蛋白表达率分别为21.7%、25.9%、22.7%、65.4%、63.6%及56.1%,且胃癌及不典型增生的表达率显著高于前3者(P＜0.01);bcl-2基因蛋白表达率分别为21.7%、33.3%、59.1%、76.9%、72.8%及60.9%,以胃癌及不典型增生高;ki-67基因蛋白表达率分别为26.1%、55.6%、54.5%、61.5%、72.7%及80.5%,胃癌及不典型增生的ki-67表达率显著高于浅表性胃炎(P<0.05),提示它在整个胃癌演变序列中不断增强.结论 COX-2和bcl-2基因蛋白过表达在胃癌演变序列中,以不典型增生及胃癌组织高;ki-67蛋白表达率在整个胃癌演变序列中不断增强,尤其不典型增生及胃癌表达率显著增高.以上从基因表达水平提示不典型增生可能与胃癌的发生密切相关.
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雌激素调节蛋白PS2在乳腺癌组织中的表达及其应用
目的评价雌激素调节蛋白PS2在乳腺癌组织中的表达以及在各种乳腺癌中的分布以及在雌、孕激素受体的相互关系的价值.方法应用放免法检测68例原发乳腺癌中的PS2含量,同时用DCC方法检测雌、孕激素受体含量.结果68例乳腺癌组织中的PS2含量从0.6～58 ng/mg蛋白,以≥2 ng/mg蛋白为阳性,阳性率57.4%(39/68),雌激素受体,孕激素受体以≥10 fmol/mg蛋白为阳性,在50例ER(+)病人中有30例PS2(+)(60.0%),而在ER(+)PR(+)22例病人中,PS2阳性率达72.7%,但在ER(-)PR(-)病人中阳性率42.9%,两组相比差异有高度显著性(P＜0.01),PS2阳性率在乳腺癌病理类型中以及临床TNM分型中未见差异,PS2的阳性率在组织学分级中Ⅰ、Ⅱ级明显高于Ⅲ级有统计学意义.结论 PS2与雌激素受体呈正相关关系,在乳腺癌中PS2水平高则预后好,ER、PR、PS2三项指标全阳性的乳腺癌病人可以作为对内分泌治疗有效的新的亚型.
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软骨肿瘤中骨形成蛋白的原位杂交定位和定量分析
目的 探讨骨形成蛋白2,3,4,5在软骨肉瘤和软骨瘤形成中的作用.方法 运用原位杂交技术,检测软骨肉瘤和软骨瘤中BMP 2,3,4,5 mRNA的分布和定位,并采用图像分析仪对原位杂交的阳性程度进行图像分析.结果 软骨肉瘤中分化较差的梭形细胞中检测有BMP 2,3,4 mRNA的表达,而分化状态较好的圆形、卵圆形细胞中未见阳性信号.软骨基质中未见阳性信号,而软骨瘤中的瘤细胞中只检测到BMP 3 mRNA的表达.结论 BMP表达的种类与软骨肿瘤的类型密切相关,BMP 2,4在软骨肉瘤的发生和形成过程中起重要作用,而BMP 3则与软骨瘤的发生有密切关系.
关键词： 软骨肉瘤/病理生理学 软骨瘤/病理生理学 蛋白质类 原位杂交 RNA探针 -
结直肠癌肝转移机制研究现状
结直肠癌肝转移是一个多步骤、多基因参与的复杂过程,其具体的细胞和分子机制仍不清楚.为此,本文总结近年来国内外相关文献,综述结直肠癌肝转移机制及其进展.
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蛋白质组学技术与肿瘤标志物研究
肿瘤标志物一般指肿瘤组织及细胞所产生的异常表达的活性物质包括激素、酶、特异性和非特异性的糖蛋白或糖脂等,但随肿瘤分子生物学研究的进展,肿瘤标志物的范围进一步扩展.肿瘤标志物初的研究可追溯到1848年,英国医生Bencejones发现骨髓瘤患者尿中的一种球蛋白可以作为诊断此病的标志,后来将此蛋白称为本琼氏蛋白以纪念此人的贡献.但此后很长一段时间,肿瘤标志物研究几乎处于停滞的阶段.直到1975年单克隆抗体技术问世之后,研究者得以从肿瘤抗原的角度用微量抗原制备大量的抗体来寻找特异性的标志物.
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血管生成相关分子与肿瘤转移复发
肿瘤生长、转移均依赖新生血管生成,而且肿瘤诱导血管生成的能力与其侵袭能力相关,因此通过评价其分泌的血管生成相关分子可以在一定程度上判断其生物学行为.然而患者终的生存牵涉更为复杂的问题,还包括肿瘤的分期、手术是否彻底,患者术后是否还接受抗肿瘤治疗等.当然在分析生物学特性对预后的影响时,应当尽量减少手术因素和术后治疗因素的影响,也就是降低个体之间的差异,从而提高检验的效率.
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AMAP1蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 检测结直肠癌组织中Myc-binding protein-associated protein 1 (AMAP1)蛋白的表达,并探讨AMAP1与结直肠癌浸润和转移的相关性.方法 应用免疫组织化学法检测76例结直肠癌组织及癌旁正常组织中的AMAP1蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系.结果 AMAP1在结直肠癌中表达率为61.8％,与癌旁正常组织(2.6％)比较差异有统计学意义(P＜0.05).AMAP1阳性表达在肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、脉管转移、临床分期和分化程度方面差异有统计学意义(均P ＜0.05),在性别、年龄方面差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 AMAP1的表达与结直肠癌的浸润和转移密切相关.
